LAMPIRAN
LAMPIRAN 1. PEMBUATAN MEDIA SELEKTIF DAN REAGEN SALKOWSKI
a) Media Luria Bertani Cair (Bric et al, 1991)
Yeast extract 5 g, agar 20 g, Trypton 10 g, NaCl 0,5 g, 5 mM L-Tryptopan dilarutkan dalam 1 liter aquades dan diukur pH sampai 7,5, jika belum mencapai ditambahkan NAOH.
b) Media JNFB (James Nitrogen Free Malat Bromthymol Blue)
5,0 g asam malat, 0,6 g K2HPO4, 1,8 g KH2PO4, 0,2 g MgSO4.7H2O, 0,1 g NaCl,
0,2 g CaCl2.2H2O, 0,066 g FeEDTA, 0,02 g ekstrak khamir, 4,5 g KOH, 2 ml
BTB, 2 ml mikronutrien, pH 5,8)
c) Pembuatan Reagen Salkowski (Patten & Glick, 2002)
LAMPIRAN 2. PENENTUAN KURVA STANDART IAA (Indole Acetic Acid)
Gambar 7: Persamaan garis kurva standart IAA
Tabel 8. Nilai Persamaan Garis Regresi Kurva Standart IAA
x y x2 y2 xy 2 0.027 4 0.000729 0.054 4 0.073 16 0.005329 0.292 6 0.112 36 0.012544 0.672 8 0.150 64 0.022500 1.200 10 0.189 100 0.035721 1.890 ∑𝒙𝒙 = 𝟑𝟑𝟑𝟑 𝒙𝒙� = 𝟔𝟔 ∑𝒚𝒚 = 𝟑𝟑. 𝟓𝟓𝟓𝟓𝟓𝟓 𝒚𝒚� = 𝟑𝟑. 𝟓𝟓𝟓𝟓𝟑𝟑𝟏𝟏 ∑𝒙𝒙𝟏𝟏= 𝟏𝟏𝟏𝟏𝟑𝟑 ∑𝒚𝒚𝟏𝟏 = 𝟑𝟑. 𝟑𝟑𝟎𝟎𝟔𝟔𝟎𝟎𝟏𝟏𝟑𝟑 ∑𝒙𝒙𝒚𝒚 = 𝟒𝟒. 𝟓𝟓𝟑𝟑𝟎𝟎
Untuk mencari persamaan garis regresi kurva maka nilai absorban (y) dari setiap konsentrasi IAA (x) dimasukkan ke dalam rumus:
𝑟𝑟 = ∑𝑥𝑥𝑥𝑥 − (∑𝑥𝑥) − (∑𝑥𝑥)𝑛𝑛 ���∑𝑥𝑥2− (∑𝑥𝑥)2 𝑛𝑛 � �∑𝑥𝑥2− (∑𝑥𝑥) 2 𝑛𝑛 �� = 4108 − (30) − (0.551)5 ���220 − (30)5 � �0.076823 −2 (0.551)5 2�� 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2 2 4 6 8 10 A bs or ban si Konsentrasi IAA (ppm) KURVA STANDAR IAA
𝑥𝑥 = 0.02005𝑥𝑥 − 0.0101 𝑟𝑟2= 0.999
= 4108 − 3306 �(220 − 180)(0.076823 − 0.0607202) = 0.802 √0.64412 =0.802565890.802 = 0.999 𝑏𝑏 =𝑛𝑛(∑𝑥𝑥𝑥𝑥) − (∑𝑥𝑥)(∑𝑥𝑥)𝑛𝑛(∑𝑥𝑥2) − (∑𝑥𝑥)2 =5(4108) − (30)(0.551)5(220) − (30)2 =20.54 − 16.531100 − 900 =4.01200 = 0.02005 𝑎𝑎 = 𝑥𝑥� − 𝑏𝑏𝑥𝑥̅ = 0.1102 − 0.1203 = −0.0101 𝑥𝑥 = 𝑎𝑎 + 𝑏𝑏𝑥𝑥 𝑥𝑥 = 𝑏𝑏𝑥𝑥 − 𝑎𝑎 𝑥𝑥 = 0.02005𝑥𝑥 − 0.0101
Sehingga diperoleh persamaan garis kurva standart adalah 𝑥𝑥 = 0.02005𝑥𝑥 − 0.0101 Untuk mencari konsentrasi sampel, substitusikan nilai absorban dari setiap sampel ke persamaan garis kurva standart diatas.
Tabel 9. Nilai Rata-rata Konsentrasi IAA Secara In-vitro
Isolat Konsentrasi IAA (ppm)
Hari ke-2 Hari ke-4 Hari ke-6
I1 15.35 19.65 20.45
I2 13.10 18.30 15.15
I3 24.10 32.80 33.3
I4 10.50 19.80 17.55
LAMPIRAN 3. DATA PENGAMATAN NILAI ABSORBAN SETIAP ISOLAT
Tabel 10. Pengukuran Nilai Absorban Setiap Isolat
Isolat Absorbansi hari ke-2 Absorbansi hari ke-4 Absorbansi hari ke-6
U1 U2 Rata-rata U1 U2 Rata-rata U1 U2 Rata-rata
I1 0,3204 0,2731 0,297 0,3973 0,3684 0,383 0,4833 0,3156 0,399
I2 0,2185 0,2849 0,252 0,3657 0,3461 0,356 0,2581 0,3312 0,295
I3 0,4799 0,4644 0,472 0,6136 0,6783 0,646 0,6613 0,6511 0,656
I4 0,2017 0,1975 0,200 0,4105 0,3607 0,386 0,3734 0.3086 0,341
LAMPIRAN 4. DATA PENGAMATAN TERHADAP PERTUMBUHAN TANAMAN KEDELAI (Glycine max L.)
Tabel 11. Hasil Pengukuran Tinggi Tanaman dan Jumlah Daun
Perlakuan Ulangan tinggi tanaman minggui ke- Jumlah Jumlah daun minggu ke- Jumlah
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Tanah kuning U1 28.2 30.5 36 42.5 57 79 81 81 86 86.8 60.80 2 3 4 5 5 4 4 2 3 0 3.20 U2 28.5 38.3 49.4 59.4 72.5 73 75 75 75 79.6 62.57 2 3 5 6 5 6 4 4 6 6 4.70 U3 28.9 28.9 37 49 57 59 60 60 62 67.7 50.95 2 3 5 5 4 2 3 2 2 2 3.00 U4 28.7 30.8 34.5 45.2 52 57 57 57 52.5 59.4 47.41 2 3 4 4 5 5 4 3 3 1 3.40 U5 28 28 35 50.2 56 59 62 63 65 68.2 51.44 2 3 5 5 4 4 3 3 3 3 3.50 Rata-rata 54.63 Rata-rata 3.56 Tanah hitam U1 26 32.3 38 43.3 54 61 61 61 60.5 61 49.81 2 3 4 5 5 6 6 5 5 5 4.60 U2 26.2 37.5 40 42 51 59 59 60 60 60 49.47 2 3 4 5 5 6 6 6 8 9 5.40 U3 26.5 35 37 40.1 47.5 54.2 56 58 59 57.5 47.08 2 3 4 4 4 6 5 5 10 9 5.20 U4 26 38 41 43.8 59 64 65 68 68 68 54.08 2 3 4 4 4 5 5 5 5 6 4.30 U5 26.5 36 37.5 40 46.5 51 52 53 53 55 45.05 2 3 4 4 3 4 5 6 6 6 4.30 Rata-rata 49.10 Rata-rata 4.76 I3 U1 27.5 36 36.3 49 52 52 52.2 55 59 60.6 47.96 2 3 5 5 3 3 4 6 9 11 5.10 U2 27.8 34.2 40.1 54 54.5 56 58 62.5 63 63 51.31 2 3 4 5 4 5 3 3 2 0 3.10 U3 27 33.5 39.4 57.2 68 70 72 73 73 73 58.61 2 3 4 5 4 6 5 4 2 1 3.60 U4 28 32 37.4 54 66 68 77.4 82 82 82.3 60.91 2 3 4 5 5 4 6 7 9 10 5.50 U5 27 34.2 43 62.5 79 85 103 105 106 104.1 74.88 2 3 5 5 5 4 3 3 3 0 3.30 Rata-rata 58.73 Rata-rata 4.12 N3 U1 27.6 34.5 41.3 55 55 56 57 58 57 57 49.84 2 4 5 6 3 3 4 4 4 4 3.90 U2 27 33.9 35 43 43 45 51 57 58 54 44.69 2 3 4 5 5 5 4 4 3 4 3.90 U3 27.1 29 32 32 25 26 27 29.5 30 31 28.86 2 3 4 7 6 7 7 7 5 3 5.10 U4 27 33.8 44 54 66.9 75 75 81 83 84 62.37 2 3 5 6 6 7 6 4 2 0 4.10 U5 27.5 30.6 38 51 59 47 53 57 58 49 47.01 2 3 4 5 3 4 4 3 4 6 3.80 Rata-rata 46.55 Rata-rata 4.16 N3I3 U1 27.1 37.2 48.3 70 80.6 90 95.8 96 97.4 93 73.54 2 3 5 6 7 8 9 9 8 4 6.10 U2 27.3 32.4 42.1 59.2 70.1 74 82 83 84.5 83.4 63.80 2 3 5 5 5 7 10 10 11 11 6.90 U3 27.5 35 45 62.5 70 78 79.4 82 85.5 91 65.59 2 4 5 5 4 1 3 4 5 6 3.90 U4 26.8 39.5 42 53.2 63.5 67 68 69 72.8 70 57.18 2 3 4 5 6 6 6 6 7 0 4.50 U5 27.2 32 36.7 54.3 67 68 68.5 71.6 79 72.5 57.68 2 3 5 6 5 5 6 6 6 1 4.50 Rata-rata 63.56 Rata-rata 5.18
Tabel 12. Hasil Perhitungan Jumlah Bunga dan Buah Tanaman Kedelai (Glycine max L.)
Perlakuan Ulangan JUMLAH BUNGA
Rata-rata JUMLAH BUAH
Rata-rata 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Tanah kuning UI 0 0 0 0 0 2 2 0 2 0 2.00 0 0 0 0 0 0 1 1 2 1 1.25 U2 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 2.00 0 0 0 0 0 1 2 2 2 2 1.80 U3 0 0 0 0 0 1 2 0 2 0 1.67 0 0 0 0 0 0 0 2 2 1 1.67 U4 0 0 0 0 2 0 0 1 0 0 1.50 0 0 0 0 0 2 2 2 1 1 1.60 U5 0 0 0 0 0 1 2 0 1 0 1.33 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 Rata-rata 1.70 Rata-rata 1.46 Tanah hitam U1 0 0 0 0 1 2 2 0 1 3 1.50 0 0 0 0 0 1 2 2 2 2 1.80 U2 0 0 0 0 0 5 3 1 4 12 5.00 0 0 0 0 0 0 0 1 3 9 4.33 U3 0 0 0 0 0 1 1 0 3 6 2.75 0 0 0 0 0 0 0 1 2 2 1.67 U4 0 0 0 0 0 5 3 0 0 0 4.00 0 0 0 0 0 0 0 1 2 2 1.67 U5 0 0 0 0 0 4 3 3 0 0 3.33 0 0 0 0 0 2 3 5 4 3 3.40 Rata-rata 3.32 Rata-rata 2.57 I3 U1 0 0 0 0 0 1 2 3 4 0 2.50 0 0 0 0 0 0 1 2 2 6 2.75 U2 0 0 0 0 0 1 3 1 0 0 1.67 0 0 0 0 0 0 2 2 1 1 1.50 U3 0 0 0 0 0 2 3 2 0 0 2.33 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 U4 0 0 0 0 0 2 4 6 4 0 4.00 0 0 0 0 0 1 2 4 6 6 3.80 U5 0 0 0 0 0 2 3 3 1 0 2.25 0 0 0 0 0 0 2 2 2 1 1.75 Rata-rata 2.55 Rata-rata 2.16 N3 U1 0 0 0 0 0 6 7 6 2 0 5.25 0 0 0 0 0 0 1 2 2 2 1.75 U2 0 0 0 0 2 1 1 2 0 0 1.50 0 0 0 0 0 2 2 1 1 1 1.40 U3 0 0 0 0 0 2 2 7 3 0 3.50 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1.00 U4 0 0 0 0 1 2 2 5 0 0 2.50 0 0 0 0 0 2 2 2 2 1 1.80 U5 0 0 0 0 0 4 3 1 0 0 2.67 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1.00 Rata-rata 3.08 Rata-rata 1.39 N3I3 U1 0 0 0 0 3 3 5 4 4 0 3.80 0 0 0 0 0 2 3 5 5 4 3.80 U2 0 0 0 0 0 2 7 5 8 0 5.50 0 0 0 0 0 0 0 4 5 5 4.67 U3 0 0 0 0 0 3 3 4 2 0 3.00 0 0 0 0 0 0 1 2 3 3 2.25 U4 0 0 0 0 0 2 4 4 2 0 3.00 0 0 0 0 0 0 1 3 3 3 2.50 U5 0 0 0 0 0 0 2 2 1 0 1.67 0 0 0 0 0 2 2 2 2 2 2.00
Tabel 13. Hasil Perhitungan Berat Basah, Berat kering Tanaman, Volume Akar, Berat Buah dan Jumlah Polong
Perlakuan Ulangan Berat
Basah Berat Kering Volume akar Jumlah polong Berat Polong Tanah kuning UI 1.9 0.8 0.2 2 0.3 U2 3.5 1.4 0.2 4 1.3 U3 1.7 0.6 0.2 1 0.2 U4 1.5 0.8 0.2 2 0.5 U5 2.2 1 0.2 2 0.5 Rata-rata 2.16 0.92 0.2 2.2 0.56 Tanah hitam U1 3.4 1.2 0.2 3 1 U2 6.6 1.9 0.4 2 2.1 U3 4.9 1.5 0.4 4 1.3 U4 4.5 1.3 0.3 4 1.4 U5 4.3 1.2 0.2 6 1.7 Rata-rata 4.74 1.42 0.3 3.8 1.5 I3 U1 5.1 2 0.2 12 1.2 U2 1.9 0.8 0.2 2 0.4 U3 1.4 0.7 0.2 1 0.2 U4 5.8 2.3 0.3 11 2.7 U5 1.7 1 0.2 2 0.4 Rata-rata 3.18 1.36 0.22 5.6 0.98 N3 U1 1.7 0.2 4 1.1 U2 1.9 0.5 0.2 1 0.5 U3 1.9 0.8 0.2 2 0.3 U4 1.4 1.1 0.2 2 0.4 U5 2.6 1.1 0.2 2 0.6 Rata-rata 1.9 0.7 0.2 2.2 0.58 N3I3 U1 6.6 2.6 0.2 6 3 U2 7.2 3.1 0.6 9 3.2 U3 4 1.7 0.4 6 1.7 U4 2.5 1.1 0.3 5 1.4 U5 2.65 1.4 0.4 4 1.7 Rata-rata 4.59 1.98 0.38 6 2.2
LAMPIRAN 5. DATA UJI STATISTIK RANCANGAN ACAK LENGKAP TERHADAP PARAMETER PERTUMBUHAN TANAMAN KEDELAI (Glyzine max L.)
Tabel 14. Daftar Sidik Ragam Parameter Tinggi Tanaman Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 961,5593 4 240,3898 3,394833161* 2,87 4,43 Galat 1416,21 20 70,8105 Total 2377,769 24
Tabel 15. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Daun Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 1218,188 4 304,5469 2,399197996 2,87 4,43 Galat 2538,739 20 126,937 Total 3756,927 24
Tabel 16. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Bunga Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 9,859304 4 2,464826 1,891178583 2,87 4,43 Galat 26,06656 20 1,303328 Total 35,92586 24
Tabel 17. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Buah Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 10,12262 4 2,530654 2,933248179* 2,87 4,43 Galat 17,25496 20 0,862748 Total 27,37758 24
Tabel 18. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Basah Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 35,0536 4 8,7634 3,834850341* 2,87 4,43 Galat 45,704 20 2,2852 Total 80,7576 24
Tabel 19. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Kering Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 4,1816 4 1,0454 3,491649967* 2,87 4,43 Galat 5,988 20 0,2994 Total 10,1696 24
Tabel 20. Daftar Sidik Ragam Parameter Volume Akar Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 0,124 4 0,031 4,558823529** 2,87 4,43 Galat 0,136 20 0,0068 Total 0,26 24
Tabel 21. Daftar Sidik Ragam Parameter Jumlah Polong Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 65,36 4 16,34 2,184491979 2,87 4,43 Galat 149,6 20 7,48 Total 214,96 24
Tabel 22. Daftar Sidik Ragam Parameter Berat Buah Sumber keragaman Jumlah kuadrat Derajat Bebas Kuadrat tengah F hitung F tabel 5 % 1 % Perlakuan 9,6296 4 2,4074 5,405029187** 2,87 4,43 Galat 8,908 20 0,4454 Total 18,5376 24
Ket: * = Berbeda nyata
LAMPIRAN 6. DOKUMENTASI PENELITIAN
a b
Gambar 8: (a) biakan murni I3 pada media LB + L-Triptofan, (b) Biakan murni N3 pada media JNFB
a b
Gambar 9: (a) Isolat awal bakteri rizosfer dari perkebunan Tanjung Selamat, (b) Uji sinergisme bakteri IAA dan bakteri penambat nitrogen
a
Gambar 10: (a) Uji Standart Plate Count bakteri IAA pada media PCA
I3
a b
Gambar 11: (a) IAA murni, (b) Supernatan bakteri IAA yang diberi reagen Salkowsky, terlihat isolat I3 memiliki warna yang lebih pekat
a b
Gambar 12: (a) Uji biokimia TSIA, perubahan warna pada slant dan butt menunjukkan kemampuan bakteri memfermentasikan gula (b) Uji SSA, perubahan warna media dari hijau ke biru menunjukkan bakteri mampu menggunakan Na-sitrat dan NH4
a b
Gambar 13: (a) Uji biokimia Katalase, (b) Pembentukan pelikel pada medium JNFB semipadat oleh bakteri penambat nitrogen yang diinkubasi selama 10 hari pada suhu 35-36 oC
I1 slant I2 I 3 I4 I5 pelikel butt
