Skripsi
NI MADE CHINTYA ADE WIPUTRI
1208505052
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Ida Sang Hyang Widhi Wasa,
Tuhan Yang Maha Esa, karena berkat rahmat dan karunia Beliau-lah penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Pengembangan Metode KLT
Spektrofotodensitometri untuk Penetapan Kadar Andrografolid dalam
Serum Darah Tikus”.
Penyusunan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari dukungan, bimbingan dan
bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini dengan segala
kerendahan hati penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada semua pihak
yang telah memberikan bantuan baik secara langsung maupun tidak langsung,
yaitu kepada:
1. Luh Putu Mirah Kusuma Dewi, S. F., M. Sc., Apt. selaku dosen pembimbing
I dengan penuh perhatian telah memberikan bimbingan, semangat, motivasi,
saran, dan arahan kepada penulis selama penyusunan skripsi ini.
2. Bapak Dr. rer. nat I Made Agus Gelgel Wirasuta, M. Si., Apt. selaku dosen
pembimbing II yang telah memberikan bimbingan, saran, semangat, dan
motivasi kepada penulis selama penyusunan skripsi ini.
3. Bapak Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4. Bapak Dr. rer. nat I Made Agus Gelgel Wirasuta, M. Si., Apt. selaku Ketua
Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Forensik-iv
Lembaga Forensik Sains dan Kriminologi yang selalu memberi bimbingan
dan motivasi kepada penulis.
5. Ibu Rasmaya Niruri, S.Si., M.Farm., Klin., Apt. selaku dosen Pembimbing
Akademik. Terimakasih atas bimbingan, arahan, dan saran yang telah
diberikan kepada penulis.
6. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi F.MIPA Universitas
Udayana. Terima kasih atas bantuan dan kerjasamanya.
7. Orang tua penulis yaitu I Made Sudiana dan Ni Wayan Suarmini serta kakak
I Gede Eddy Wiputra, S. Ti., atas doa, perhatian dan dukungan yang
diberikan baik moral maupun material kepada penulis.
8. Sahabat penulis yaitu Putri, Chandra, Dwi, Mita, Gian, Giselda, Inggrid, Putri
Andiani, Febri, Prima, Sulys, Rai, atas perhatian dan dukungan kepada
penulis. Yang terkasih, I Gusti Agung Made Agestiawan, S. Farm., Apt. atas
doa, bantuan, semangat, dukungan serta senyuman yang diberikan selama ini.
9. Teman-teman mahasiswa Farmasi Udayana angkatan 2012 (Dioscuri Hygeia)
dan Analisis 2012 (Vanadium Spectra), terima kasih atas semangat dan
dorongan yang diberikan kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi
v
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna.
Untuk itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi
perbaikan penyusunan skripsi ini selanjutnya. Harapan penulis, semoga skripsi ini
tidak disalahgunakan dan dapat bermanfaat bagi yang membutuhkan.
Bukit Jimbaran, Juni 2016
vi
2.1 Tinjauan Penggunaan Sambiloto ... 6
2.2 Tinjauan Senyawa Andrografolid ... 6
2.3 Penyiapan Sampel Analisis dengan Metode Pengendapan Protein 8 2.4 Analisis Andrografolid dengan KLT (Kromatografi Lapis Tipis)-Spektrofotodensitometri ... 9
2.4.1 KLT (Kromatografi Lapis Tipis) ... 9
2.4.2 Standar Internal ... 10
2.4.3 Spektrofotodensitometri ... 11
2.5 Validasi Metode Analisis... 12
2.5.1 Kecermatan (Accuracy) ... 13
2.5.3 Keseksamaan (Precision) ... 14
2.5.4 Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantification (LOQ) ... 15
vii
BAB III METODOLOGI PENELITIAN... 18
3.1 Rancangan Penelitian ... 18
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian... 18
3.3 Alat dan Bahan Penelitian ... 18
3.3.1 Alat Penelitian ... 18
3.3.2 Bahan Penelitian ... 19
3.4 Prosedur Penelitian... 19
3.4.1 Perlakuan Terhadap Tikus ... 19
3.4.2 Penyiapan Larutan ... 20
3.4.3 Optimasi Pemilihan Standar Internal ... 22
3.4.4 Uji Presisi ... 22
3.4.5 Penentuan Rentang Linieritas, LOD, dan LOQ ... 22
3.4.6 Optimasi Pemilihan Pelarut untuk Pengendapan Protein ... 23
3.4.7 Preparasi Sampel ... 23
3.4.8 Penyiapan Sistem KLT Spektrofotodensitometri... 24
3.4.9 Pemisahan dan Pendeteksian... 24
3.4.10 Uji Perolehan Kembali (Akurasi)... 25
3.4.11 Uji Keseksamaan (Presisi) ... 25
3.5 Alur Penelitian ... 26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 27
4.1 Optimasi Pemilihan Standar Internal ... 27
4.2 Uji Presisi ... 29
4.3 Linieritas dan Rentang ... 39
4.4 Penentuan LOD dan LOQ ... 30
4.5 Optimasi Pemilihan Pelarut untuk Pengendapan Protein... 30
4.6 Penetapan Andrografolid dalam Isolat ... 32
4.7 Penetapan Kadar Andrografolid dalam Serum Darah Tikus... 32
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 34
5.1 Kesimpulan ... 34
5.2 Saran ... 35
viii
ix
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Struktur Kimia Andrografolid ... 7
Gambar 2.2 Spektrum UV Andrografolid ... 7
x
DAFTAR SINGKATAN
AUC : Area Under Curve
HPLC : High Performance Liquid Chromatography
GC : Gas Chromatography
KV : Koefisien Variasi
LOD : Limit of Detection
LOQ : Limit of Quantitation
Rf : Retardation factor
RSD : Relative Standard Deviation
SD : Standard Deviasi
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
UV-Vis : Ultraviolet visible
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
xii
ABSTRAK
Andrografolid merupakan konstituen mayor dari tanaman sambiloto yang telah terbukti memiliki efek farmakologi dalam pengobatan. Dalam pengembangan suatu obat diperlukan suatu data studi farmakokinetika, sehingga untuk memperoleh data tersebut penetapan kadar andrografolid dalam serum menjadi hal penting. Serum dipilih sebagai sampel karena sebesar 61,2% senyawa andrografolid terikat pada protein serum. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan metode penetapan kadar andrografolid dalam serum darah tikus dengan KLT Spektrofotodensitometri yang tervalidasi. Pada penelitian ini dilakukan optimasi pemilihan standar internal dan metode ekstraksi..
Parasetamol merupakan senyawa terbaik sebagai standar internal dalam penetapan kadar andrografolid dalam serum. Nilai LOD dan LOQ andrografolid berturut-turut 22,78 ng dan 64,59 ng pernoda dan dengan perolehan kembali berkisar 80-110 %.
xiii
ABSTRACT
Andrographolide is a major constituent of bitter plant that has been shown to have a pharmacological effect. In the development of a drug required a pharmacokinetic study, so to obtain data on the assay of andrographolide in serum becomes important. Serum selected as the sample for 61.2% of andrographolide compound is bound to serum proteins. This study aims to develop a method of
assay andrographolide in the blood serum of rat with TLC
Spectrophotodensitometry. On this study has been carried out the internal standard choising (paracetamol, dextrometorphane, sulfamethoxazole, and papaverine) and the optimation recovery extraction from serum.
Paracetamole was the suitable substance for the internal standard extraction of andrographolide from serum. The LOD and LOQ value of andrographolide were 22.78 and 64.59 ng/spott, respectively and the recovery arranged between 80-110%.
