1
Deskripsi
IMUNOGLOBULIN YOLK (IgY) ANTI Canine parvovirus MURNI UNTUK 5
TERAPI INFEKSI VIRUS PARVO PADA ANJING
Bidang Teknik Invensi
Invensi ini berhubungan dengan penggunaan imunoglobulin Y 10
(IgY) murni dosis 10.000 PD50 untuk menetralisasi virus parvo yang menginfeksi anjing. Lebih khusus Invensi penggunaan IgY murni anti parvovirus secara intravena pada anjing yang terinfeksi canine parvovirus .
15
Latar Belakang Invensi
Terapi menggunakan antibodi (IgY spesifik) sangat mungkin dilakukan untuk berbagai penyakit, terutama untuk infeksi virus yang tidak dapat diterapi menggunakan antibiotik. 20
Salah satunya adalah infeksi virus parvo pada anjing. Kendala utama produksi antibodi adalah biaya produksinya yang sangat mahal dan melanggar asas Animal welfare. Salah satu alternatif yang sangat memungkinkan adalah dengan menggunakan ayam sebagai pabrik biologis penghasil 25
antibodi. Produksi antibodi dapat dilakukan pada ayam dengan menyuntikkan antigen tertentu. Tubuh ayam akan membentuk antibodi spesifik terhadap antigen yang disuntikkan. Antibodi yang beredar dalam darah induk ayam selanjutnya terakumulasi di dalam kuning telur dalam jumlah 30
yang cukup banyak. Proses imunisasi pada ayam mudah dilakukan dan produksi telur yang mengandung IgY anti parvovirus dapat dilakukan secara masal dan produksinya dapat dikontrol. Sa Van Nguyen et al,2006 dalam The
FKH - Universitas Udayana E-mail: gaa.suartini@gmail.com Tlf : 081282797188
Canadian Journal of Veterinary Research dengan judul “Passive protection of dogs against clinical disease due to Canine parvovirus-2 by specific antibody from chicken egg yolk” menyimpulkan bahwa IgY anti CPV yang diaplikasikan secara oral mampu menekan gejala klinis anjing setelah 5
infeksi CPV, mampu menekan ekskresi virus dan anjing sembuh setelah diterapi. Kelemahan hasil penelitian tersebut adalah virus yang digunakan untuk uji tantang memiliki virulensi yang rendah sehingga gejala klinis yang timbul tidak separah jika diinfeksi dengan virus dengan virulensi 10
tinggi. Gejala klinis anjing yang terinfeksi CPV adalah muntah, sehingga jika terapi diaplikasikan secara oral tidak memberi efek yang maksimal. Pada invensi ini akan digunakan virus parvo yang sangat virulen, ditunjukkan dengan adanya efek sitopatik pada biakan sel feline kidney 15
setelah inkubasi selama 5-7 hari. Berdasarkan uji invitro, dosis infeksius virus pada kultur sel (TCID50) adalah pada pengenceran 102,76. Hasil ini membuktikan bahwa isolat yang digunakan adalah CPV yang ganas dengan dosis yang tepat. Keunggulan invensi ini adalah menggunakan IgY berdasarkan 20
dosis protektif pada biakan jaringan, sehingga IgY yang digunakan memiliki aktivitas biologi yang utuh dan aktif. Nomor paten CN103570830 A dengan judul Preparation method of anti-canine parvovirus protein VP2 specific IgY mengklaim bahwa IgY anti protein VP2 dapat menetralisasi virus parvo. 25
Invensi tersebut efektif sebagai agen terapi namun biaya produksi protein VP2 dari virus parvo sangat mahal. Netralisasi virus tidak cukup hanya pada satu jenis antigen site, semakin banyak jumlah antigen binding site yang bisa dinetralisasi maka aktivitas antibody tersebut senmakin 30
baik. IgY anti CPV dosis 10000 PD50 efektif untuk terapi
anjing yang sudah menunjukkan gejala klinis diare berdarah. Hal ini dibuktikan dari sintasan hidup anjing mencapai 100% setelah terapi. Penurunan titer ekskresi virus signifikan
lebih rendah dibandingkan dengan terapi 1000 PD50 yang
terjadi sejak awal terapi. Terapi IgY anti CPV dosis 10000 PD50 secara intravena efektif menetralisasi virus yang
sedang beredar di plasma, menekan replikasi dan ekskresi virus dan jumlah virus yang mencapai organ target. Antibodi 5
yang beredar di darah diduga secara langsung dapat memutus rantai infeksi CPV sehingga kerusakan organ-organ limfoid terutama limfonodus mesenterika dan Peyer’s patches dapat dihambat. Efektivitas terapi ini ditunjukkan dengan sembuhnya keempat ekor anjing. Imunoterapi dengan IgY anti 10
CPV memiliki prospek yang lebih baik dibandingkan menggunakan imunserum. Anjing terhindar dari kemungkinan terkontaminasi virus parvo dan virus anjing lainnya yang terbawa di dalam serum. IgY murni yang diisolasi dari kuning telur dan diaplikasikan secra intravena. Terapi IgY 15
murni secara intravena sangat memungkinkan untuk dilakukan karena IgY memiliki sifat tidak mengaktivasi komplemen yang ada dalam sirkulasi sehingga diharapkan tidak akan mengaktivasi reaksi alergi. Terapi dengan IgY murni juga tidak semahal jika antibody diisolasi dari serum mamalia. 20
Invensi ini menggunakan IgY murni dengan dosis 10.000 PD50. Dosis tersebut telah terbukti dapat menyembuhkan anjing yang terinfeksi CPV. Dosis tersebut juga terbukti dapat menetralisasi virus secara invitro, yaitu uji tantang virus terhadap sel feline kidney. Terbukti IgY dosis 10.000PD50 25
mampu melindungi sel FK dari virus parvo sehingga sel FK tidak mengalami efek sitopatik (Suartini et al.2014).
Prinsip dari imunoterapi adalah adanya reaksi antara antigen dan antibodi yang spesifik terhadap antigen tersebut. Antibodi akan menetralisasi virus dengan berbagai 30
cara diantaranya: mencegah perlekatan virus pada reseptornya di permukaan sel inang, mencegah pelepasan envelope, koagulasi, presipitasi virus, dan menurup reseptorvirus yang ada di permukaan makrofag. Infeksi CVP
menyebabkan kerusakan saluran pencernaan pada anjing sehingga jika di terapi secara oral diduga penyerapan IgY di dalam usus akan terganggu. Gejala klinis muntah pada anjing terinfeksi CPV juga menyulikan terapi secara oral. Oleh karena itu alternatif imunoterapi yang lebih tepat 5
yaitu melalui terapi intravena. Diharapkan terapi intravena lebih efisien karena kemungkinan IgY untuk berikatan dengan virus parvo di darah lebih besar dibandingkan jika diaplikasikan secara oral. Terapi IgY melalui intravena diharapkan dapat memutus rantai infeksi CPV lebih lanjut 10
karena IgY spesifik akan menetralisasi virus yang sedang beredar di darah sehingga mengurangi kesempatan virus untuk merusak organ-organ limfoid maupun saluran pencernaan. Terapi ini memungkinkan untuk dilakukan karena keunggulan IgY yang dimurnikan dari kuning telur ayam tidak 15
mengaktivasi komplemen yang ada di plasma darah.
Uraian singkat Invensi
Invensi yang diusulkan ini pada prinsipnya adalah 20
penggunaan antibodi (IgY) anti CPV murni yang diisolasi dari kuning telur ayam yang telah diimunisasi dengan Canine parvovirus. Dosis terapi yang digunakan adalah 10.000 PD50. Antibodi dosis tersebut selanjutnya diaplikasikan pada anjing yang terinfeksi virus parvo secara intravena. 25
Antibodi terhadap virus parvo diproduksi dengan cara imunisasi lima ekor ayam petelur dengan virus parvo yang diisolasi dari anjing yang terinfeksi virus parvo secara alami. Selanjutnya kuning telur dikoleksi, IgY anti CPV diisolasi menggunakan kit pemurnian protein, 30
dikarakterisasi dengan SDS-PAGE, titer antibodi dihitung dengan uji Hambatan Hemaglutinasi, aktivitas biologi diuji dengan ELISA, aktivitas netralisasi virus secara in vitro diuji dengan metode Serum Netralisasi. Uji tantang secara
in vivo dilakukan pada anjing yang sebelumnya diinfeksi dengan virus parvo. Dosis virus untuk uji tantang digunakan 100 TCID50. Setelah anjing menunjukkan gejala klinis infeksi parvo selanjutnya diterapi dengan IgY murni dosis 10.000PD50 secara intravena.
5
Uraian Lengkap Invensi
Imunoglobulin Y merupakan modalitas baru untuk terapi berbagai penyakit infeksius pada manusia dan hewan. Salah 10
satunya adalah terapi infeksi pavovirus sangat infeksius dan bersifat fatal pada anjing. IgY diproduksi dengan cara imunisasi ayam menggunakan virus parvo yang diperbanyak pada sel kultur dan diinaktivasi dengan formaldehyde. Vaksinasi ulang dilakukan 2 dan 4 minggu setelah imunisasi 15
pertama. Kuning telur ayam dikoleksi, selanjutnya dilakukan isolasi dan pemurnian IgY menggunakan kit standar untuk pemurnian protein. Kemurnian IgY dideteksi dengan SDS-PAGE. Penentuan protektif dose 50 (PD50) dan tissue culture infectious dose (TCID50) dilakukan pada sel kultur 20
feline kidney (FK). Imunoglobulin yolk tersusun dari 2 pita protein dengan berat molekul berturut-turut 68 kDa dan 24 kDa. Pengenceran teringgi IgY yang mampu melindungi sel feline kidney dari efek sitopatik sebanyak 50% adalah pada pengenceran 10-8. Pengenceran virus parvo yang mampu 25
menginfeksi 50% sel FK adalah pada pengenceran 102,76. Efektivitas terapi IgY anti CPV diuji menggunakan haemaglutinasi Inhibition (HI) dan haemaglutinasi test (HA). Imunoterapi secara intravena dilakukan pada kelompok anjing setelah ditantang dengan CPV patogenik (100 TCID50) 30
secara oral dan telah menunjukkan gejala klinis terinfeksi virus parvo. Hasil menunjukkan bahwa sintasan hidup anjing mencapai 100% setelah di imunoterapi dengan IgY anti CPV. Terapi IgY anti CPV dosis 10.000 PD50 efektif menekan
ekskresi virus, menaikkan sintasan hidup anjing dan anjing sembuh dari infeksi. Disimpulkan bahwa terapi IgY anti CPV secara intravena dosis 10.000 PD50 efektif untuk terapi
infeksi CPV di anjing. 5 10 15 20 25 30
Klaim
1. Penggunaan immunoglobulin yolk (IgY) anti canine 5
parvovirus murni yang diisolasi dari kuning telur ayam untuk terapi infeksi virus parvo pada anjing, dimana aplikasinya dilakukan secara intravena sebagai antibodi yang dapat menetralisir virus yang sedang beredar di dalam darah anjing yang terinfeksi virus 10
parvo
2. Penggunaan immunoglobulin yolk sesuai klaim 1 diberikan dengan dosis 10.000 PD50.
15
Abstrak
IMUNOGLOBULIN YOLK (IgY) ANTI Canine parvovirus MURNI UNTUK TERAPI INFEKSI VIRUS PARVO PADA ANJING
5
Invensi ini berhubungan dengan antibody murni spesifik terhadap Canine parvovirus yang diisolasi dari kuning telur ayam yang telah diimunisasi dengan virus parvo isolate local. Antibodi (IgY) murni spesifik CPV selanjutnya diuji efek netralisasinya secara invitro menggunakan sel FK. Efek 10
terapi antibody dibuktikan dengan uji tantang pada anjing yang diinfeksi dengan virus parvo dosis 100TCID secara oral. Setelah timbul gejala klinis sakit anjing diterapi dengan antibody (IgY) murni spesifik CPV dengan dosis 10.000PD50 secara intravena. Terapi IgY anti CPV dosis 15
10000 PD50 efektif menekan ekskresi virus, menaikkan
sintasan hidup anjing dan anjing sembuh dari infeksi. Invensi ini menunjukkan bahwa antibody (IgY) murni spesifik terhadap CPV dengan dosis 10.000 PD50 yang diaplikasikan secara intravena dapat digunakan untuk menyembuhkan anjing 20
yang terinfeksi virus parvo dan telah menunjukkan gejala klinis.
25
