i
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1
Diajukan Oleh DIAN KARTIKA SARI
1008010119
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO
PURWOKERTO
2014
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan Mencapai Derajat Sarjana S-1
Diajukan Oleh DIAN KARTIKA SARI
1008010119
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO
PURWOKERTO
2014
INTISARI
DIAN KARTIKA SARI.Penentuan Aktivitas Estrogenik Ekstrak Etanol Daun dan Bunga Jeruju (Acanthus Ilicifolius) Menggunakan Yes-Assay
Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI danSUSANTI
Latar belakang: Estrogen merupakan hormon steroid yang sebagian besar diproduksi oleh wanita dan dalam jumlah yang sedikit diproduksi oleh laki- laki. Beberapa penyakit terkait dengan kurangnya estrogen dalam tubuh bisa terjadi pada setiap wanita, terutama pada wanita yang mengalami post menopause.
Tujuan Penelitian:Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas estrogenik daun dan bunga jeruju (Acanthus ilicifolius) dan EC50 dari aktivitas estrogenik yang ditentukan dengan menggunakan YES- Assay.
Metode Penelitian: Penelitian ini dilakukan secara in vitro menggunakan metode YES (Yeast Estrogen Screen). Dengan menggunakan sampel ekstrak etanol daun dan bunga jeruju (Acanthus ilicifolius) dengan konsentrasi 50,100,200,400,800,1000,1200,1600,2000μg/ml dalam DMSO.
Hasil: Ekstrak etanol daun jeruju (Acanthus ilicifolius)pada YES –
hERαmenunjukkan pengaruh pemberian ekstrak dengan banyaknya unit β-
galaktosidase. Pada konsentrasi 50 μg/ml menunjukkan aktivitas terkecil. Dan pada konsentrasi tertinggi yaitu 2000 μg/ml menunjukkan adanya aktifitas enzim β galaktosidase paling besar.EC50 sampel ekstrak etanol daun jeruju yang ditentukan dengan YES- hERα adalah sebesar 28.960 μg/ml. Hasil perlakuan dengan ekstrak etanol daun terhadap YES –hERβ menunjukkan aktivitas pembentukan β-galaktosidase terkecil pada konsentrasi 50 μg/ml dan aktivitas terbesar pada konsentrasi 2000 μg/ml. EC50 untuk sampel ekstrak etanol daun yang ditentukan dengan YES –hERβ sebesar 29.292 μg/ml. Pada penambahan ekstrak etanol bunga terhadap YES- hERα terdapat warna kuning yang dihasilkan dari oNP. Namun EC50 ekstrak etanol bunga tidak dapat dihitung berdasarkan parameter empat model log dosis – respon. Sedangkan pada YES –hER β yang diberi perlakuan dengan ekstrak etanol bunga memiliki aktivitas enzim β galaktosidase terkecil pada konsentrasi 100 μg/ml dan tertinggi pada konsentrasi 2000. Sehingga didapatkan EC50 sebesar 1,809 x 108 μg/ml.
Kesimpulan:Ekstrak etanol daun dan bunga jeruju memiliki aktivitas estrogenik yang sangat lemah yang ditentukan dengan YES –hERα dan YES –hERβ.
Kata Kunci: Yes- assay; Reseptor estrogen α(ER α); Reseptor estrogen β (ER β); fitoestrogen; Acanthus ilicifolius
v
ABSTRACT
DIAN KARTIKA SARI. Estrogenic Activity Determination ofLeaf and Flower Ethanol Extractof Jeruju (Acanthus Ilicifolius) Using Yes-Assay.
Under supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI
Background: Estrogen is a steroid hormone that is produced mostly in women and produced in small amounts in men. Some diseases associated with lack of estrogen in the body can occur in women, especially in women who experience post menopause.
Objective: This study aimed to determine the estrogenic activity of the leaves and flowers ofJeruju (Acanthus ilicifolius) and EC50 of estrogenic activity were determined using YES-assay.
Method:This study performed by in vitro using YES- assay. With series of concentration of ethanol extract from leaf and flower of jeruju (Acanthus ilicifolius) 50,100,200,400,800,1000,1200,1600,2000 μg/ml in DMSO.
Results: The ethanol extract of leaves of Jeruju (Acanthus ilicifolius) on YES - hERα showed that the treatment by extract was proportional to amount of units β- galactosidase. At a concentration of 50 ug / ml showed the lowest activity. And at highest concentration 2000 ug / ml showed the highest β galactosidase enzyme activity. EC50 leaf of ethanol extract from jeruju samples determined byYES- hERα was 28.960 μg / ml. While the results from ethanol extract of the leaves YES - hERβ showed the lowest β-galactosidase activity in the smallest concentration (50 ug / ml), and the largest activity at a concentration of 2000 ug / ml. EC50 for ethanol extract of leaf samples determined by YES - hERβ was 29.292 ug / ml. In addition, the ethanol extract of flowers determined byYES-hERα exhibited the yelow colours from oNP. However, EC50 ethanol extract of flowers could not be calculated based on the parameters of the four models of log dose - response. While on YES - HERβ treated by ethanol extract of flowers exhibited β-galactosidase enzyme activity at concentration of 100 ug / ml and the highest concentration of 2000ug / ml. So the EC50 obtained for 1,809 x 108 ug / ml.
Conclusion: The ethanol extract of leaves and flowers weeds exhibited very weak estrogenic activity as determined by YES-hERα and YES-hERβ.
Keywords: Yes- assay; Estrogen receptor α (ER α); Estrogen receptor β (ER β); phytoestrogens; Acanthus ilicifolius
vi
PRAKATA
Puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi dengan
judul “PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK EKSTRAK ETANOL
DAUN DAN BUNGA JERUJU (Acanthus Ilicifolius)MENGGUNAKAN YES - ASSAY”. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan dan masukan yang diterima dari berbagai pihak.Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih dan penghargaan sebesar-besarnya kepada semua pihak yang telah memberikan bantuan saran, dukungan moril maupun kritik dalam penyelesaian skripsi ini, terutama kepada:
1. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
2. Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt. dan Susanti, M.Phil., Apt. selaku pembimbing skripsi yang telah memberikan bimbingan, saran, dan petunjuk dalam penyusunan skripsi.
3. Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt. selaku Pembimbing Akademik yang telah memberikan bimbingan dan motivasi.
4. Seluruh Dosen, Laboran, dan Staf Karyawan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
5. Semua pihak yang telah membantu selama penulis melaksanakan penelitian dan penyusunan skripsi ini hingga selesai yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan demi penyempurnaannya. Semoga penelitian ini dapat bermanfaat bagi penulis khususnya dan pembaca umumnya.
vii
MOTTO
“ Ijhad wa laa taksal wa laa takun ghoofilan fa nadaamatul „uqba liman yatakaasal”
“Adduafaau yatafawwakuuna ala al adzkiyaai jiddan watawakkulan”
“Inna ma al usri yusro”
-Al- Insyirah 6 -
viii
HALAMAN PERSEMBAHAN
Alhamdulillah puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah memberikan anugrah, rahmat serta hidayah sehingga skripsi ini bisa
terselesaikan
Kupersembahkan skripsi ini kepada orang-orang yang sangat aku sayangi
Terimakasih untuk Abah dan Ibu atas untaian doa yang selalu dipanjatkan disetiap sujudnya
Untuk adikku Suci AfiatiYunge terimakasih telah memberikan semangat dan motivasi serta doa ^^
Untuk Aa‟ Aan Kurnia Wardiyan yang setiap waktu memberikan
doa, semangat dan motivasi menghadapi keluh kesah
Saudaraku Luluk, Om Beny, Bulik Ummu sukron kastiron doa nya
Keluarga Acanthus, Dina, Ergia, Meisty, Jo, Desi, sungguh luar biasa ngelab bersama kalian. Teteh Nurul yang selalu menemani dan
ikut memotivasi. Personil baru, Ii, Icha dan Titi selamat
bergabung di Yes Assay, trima kasih kerja sama nya.
Teman – teman FKK :Firly, Yana, Rizka, 2 Twin, Arumi, Vita, Tyas
dan semua teman – teman Farmasi angkatan 2010 terimakasih atas
kebersamaannya :^)
ix
RIWAYAT HIDUP
Nama : Dian Kartika Sari
TTL : Blora, 16 Februari 1990
Alamat : Jalan Mahoni 003/005 Kridosono – Blora Orang Tua : Djaka Prijana (Ayah), Ratna Puji Astuti (Ibu)
Pendidikan :
- TK : TK Tunas Rimba Blora1995-1996 - SD : SDN Tempelan 1 Blora 1996 - 2002 - SMP : SMPN 1 Blora 2002-2005
- SMA : Pondok Modern Darussalam Gontor Putri 1 2005 – 2009 - S1 : Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Keanggotaan Organisasi :
- Anggota Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto 2010- 2011
- Anggota Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto 2011 -2012
Pengalaman :
- Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP 2011- 2012
- Asisten Praktikum Farmakognosi Fakultas Farmasi UMP 2012 - 2013 - Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP 2012 -
2013
- Asisten Praktikum Fitokimia Fakultas Farmasi UMP 2012 - 2013 - Asisten Praktikum Farmakognosi Fakultas Farmasi UMP 2013 - 2014 - Asisten Praktikum Analisis Farmasi Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014 - Asisten Praktikum Biofarmasetika Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014 - Asisten Praktikum Farmakoterapi 2 Fakultas Farmasi UMP 2013 – 2014 - Asisten Praktikum Mikrobiologi dan Virologi Fakultas Farmasi UMP
2013-2014
x
DAFTAR ISI
A. Tumbuhan Acanthus ilicifolius ... 5
B. Estrogen ... 6
C. Fitoestrogen ... 7
D. Uji Hayati Penentuan Aktivitas Estrogenik ... 8
E. Metode Perhitungan Jumlah Sel Yeast ... 9
BAB III METODE PENELITIAN ... 11
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 11
B. Variabel Penelitian ... 11
C. Definisi Variabel Operasional ... 11
D. Waktu dan Tempat Penelitian ... 12
xi
E. Alat dan Bahan ... 12
F. Cara Penelitian ... 13
G. Analisis Statistik ... 15
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 16
A. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun dan Bunga Jeruju ... 16
B. Penyiapan Kultur Yeast ... 17
C. Perhitungan Jumlah Sel Yeast dengan haemocytometer ... 18
D. Penentuan Aktivitas Estrogenik... 22
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 27
A. Kesimpulan ... 27
B. Saran ... 27 DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Strain Saccharomyces cerevisiae Y190 ... 13 Tabel 2. Jumlah Bobot Ekstrak Etanol Daun dan Bunga Jeruju ... 17
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur estradiol... ... 7
Gambar 2. Struktur genistein ... 8
Gambar 3. Prinsip Metode YES ... 9
Gambar 4. Haemocytometer... 10
Gambar 5. Area Perhitungan Koloni Secara Mikroskopis dengan Haemocytometer ... 10
Gambar 6. a. Hasil streaking YES-hERα∆pdr5snq2∆yor1 ... 17
Gambar 6. b. Hasil streaking YES-hERβ∆pdr5snq2∆yor1 ... 17
Gambar 7. Grafik pertumbuhan sel YES - hERαsebelum dan sesudah perlakuan ekstrak etanol daun dan bunga jeruju ... 19
Gambar 8. Grafik pertumbuhan YES - hERα sebelum dan sesudah perlakuan estradiol dan genistein. ... 20
Gambar 9.Grafik pertumbuhan sel YES – hERβ sebelum dan sesudah perlakuan ekstrak etanol bunga dan daun jeruju (Acanthus ilicifolius). ... 21
Gambar 10.Grafik pertumbuhan sel YES –hERβ sebelum dan sesudah perlakuan Estradiol dan genistein sebagai kontrol positif ... 21
Gambar 11.Grafik hubungan antara log konsentrasi ekstrak etanol daun dan bunga jeruju dengan unit β-galaktosidase yang ditentukan pada YES – hERα dan YES – hERβ. ... 23
Gambar 12.Grafik hubungan antara log konsentrasi Estradiol dengan Miller Unit terhadap YES – hERα dan YES – hERβ. ... 25
Gambar 13.Grafik hubungan antara log konsentrasi Genistein dengan Miller Unit terhadap YES – hERα dan YES – hERβ. ... 25
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Foto perhitungan sel yeast menggunakan haemocytometer .... 34
Lampiran 2. Hasil absorbansi pada ELISA reader ... 41
Lampiran 3. Data absorbansi dan perhitungan miller unit ... 42
Lampiran 4. Analisis hasil pada Grap padPrisma ... 50
Lampiran 5. Gambar Proses Penelitian ... 53
Lampiran 6. Perhitungan pembuatan buffer fosfat ... 55
Lampiran 7. Perhitungan pembuatan Z-buffer ... 56
Lampiran 8. Perhitungan pembuatan Na2CO3 ... 57
Lampiran 9. Perhitungan pembuatan larutan stok estradiol ... 58
Lampiran 10. Perhitungan pembuatan larutan stok genistein ... 60
Lampiran 11. Perhitungan pembuatan larutan stok ekstrak etanol daun dan bunga jeruju ... 62
xv
