Efek Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.) Terhadap Kontraksi Otot Polos Ileum Marmut Jantan (Cavia Porcellus) Terisolasi

(1)

44 LAMPIRAN Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan.

(2)

(3)

46

Lampiran 3. Gambar tumbuhan belimbing wuluh dan daun belimbing wuluh

Tumbuhan BelimbingWuluh (Averrhoa bilimbi L.)

(4)

47 Pengujian kontraksi seri konsentrasi Asetilkolin terhadap otot polos ileum Pengujian efek relaksasi ekstrak etanol daun belimbing wuluh pada kontraksi otot polos ileum melalui induksi Asetilkolin Pengujian efek relaksasi Atropin Sulfat pada kontraksi otot polos ileum

melalui induksi Asetilkolin Pengujian mekanisme aksi terhadap efek relaksasi ekstrak etanol daun belimbing wuluh

pada otot polos ileum marmut

melalui penghambatan reseptor muskarinik Marmut

dislokasi tulang belakang kepala

Preparasi organ

Ekuilibrasi selama 45 menit (diganti larutan tirode setiap 15 menit)

Tahapan pengujian

(5)

48 Lampiran 5. Hasil pemeriksaan mikroskopik

(Mutmainah, 2014).

Mikroskopik serbuk daun belimbing wuluh perbesaran 10 x 40

Keterangan :

1 = Stomata tipe anisositik 2 = Fragmen pembuluh kayu 3 = Rambut penutup

4 = Hablur kalsium oksalat bentuk prisma

1

4 2

(6)

49

Karakterisasi Simplisia Hasil (%) Persyaratan menurut MMI edisi V 1989 (%)

Kadar air 4,90 < 10

Kadar sari larut air 19,78 >18 Kadar sari larut etanol 20,13 >11

Kadar abu total 4,04 <7,5

Kadar abu tidak larut asam 0,90 < 1

(Mutmainah, 2014).

Lampiran 7. Hasil skrining fitokimia simplisia daun belimbing wuluh

No Pemeriksaan Serbuk simplisia

1 Steroid/Triterpenoid +

2 Alkaloid -

3 Glikosida +

4 Flavonoid +

5 Saponin +

6 Tanin +

Keterangan: (+) : Positif (-) : Negatif

(7)

50

Lampiran 8. Data pengujian kontraksi seri konsentrasi asetilkolin terhadap otot polos ileum 1.Tabel data pengujian kontraksi seri konsentrasi asetilkolin terhadap otot polos ileum

Konsentrasi Asetilkolin (M) % Kontraksi Ileum * Rerata SEM

1 2 3

1x10-8 3,6364 8,3333 3,9216 5,2030 1,5737

3x10-8 6,1818 12,5000 5,8824 8,1881 2,1577

1x10-7 7,2727 12,5000 7,8431 9,2053 1,6555

3x10-7 10,9091 20,8333 11,7647 14,5024 3,1750

1x10-6 18,1818 41,6667 15,6863 25,1783 8,2756

3x10-6 29,0909 54,1667 19,6078 34,2885 10,3092

1x10-5 32,7273 75,0000 54,9020 54,1098 12,2079

3x10-5 76,3636 87,5000 86,2745 83,3794 3,5256

1x10-4 87,2727 93,7500 94,1176 91,7134 2,2229

3x10-4 92,7273 95,8333 96,0784 94,8797 1,0785

1x10-3 94,5455 95,8333 98,0392 96,1393 1,0200

3x10-3 100,0000 100,0000 100,0000 100,0000 100,0000

Keterangan :

* = %relaksasi dihitung dari titik kontraksi maksimal yang dicapai oleh pemberian asetilkolin

(8)

51 2. Hitungan EC80 asetilkolin

��80 =�

80− �1

�2−�1

× (�2− �1)�+�1

Keterangan:

X1 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di bawah 80%

X2 : Log. konsentrasi dengan respons tepat di atas 80%

Y1 : %respons tepat di bawah 80%

Y2 : %respons tepat di atas 80%

�.��80 =�

80−76,3636

87,2727−76,3636×�−4−(−4,5)��+ (−4,5)

��80 = −4,3333

EC80 = 4,64 x 10-5 M

�.��80 = �

80−75,0000

87,5000−75,0000×�−4,5−(−5)��+ (−5, )

��80 = −4,8

EC80 = 1,58 x 10-5 M

�.��80 = �

80−54,9020

86,2745−54,9020×�−4,5−(−5)��+ (−5)

��80 = −4,6

EC80 = 2,51 x 10-5 M

Rerata EC80 asetilkolin = 4,64x10-5 + 1,58x10-5 + 2,51x10-5 3

(9)

52

Lampiran 9. Data efek relaksasi ekstrak etanol daun belimbing wuluh pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 2,91x10-5 M

1. Tabel data pengujian kontraksi seri konsentrasi ekstrak eanol daun belimbing wuluh terhadap otot polos ileum

Dosis Ekstrak (mg/ml)

% Relaksasi Ileum *

Rerata SEM

1 2 3 4 5 6

0,5 14,2857 13,3333 15,6250 16,6667 10,5263 13,1579 13,9325 0,8761

1,0 38,0952 40,0000 34,3750 43,3333 26,3158 47,3684 38,2480 2,9973

1,5 57,1429 46,6667 53,1250 56,6667 63,1579 60,5263 56,2143 2,3705

2,0 71,4286 60,0000 62,5000 70,0000 84,2105 76,3158 70,7425 3,6369

2,5 80,9524 73,3333 71,9750 90,0000 105,2632 81,5789 83,8338 5,0461

3,0 90,4762 86,6667 75,0000 93,3333 107,8947 107,8947 93,5443 5,2042

3,5 100,0000 100,0000 84,3750 106,6667 110,5263 113,1579 102,4543 4,2284

4,0 104,7619 106,6667 90,6250 110,0000 113,1579 118,4211 107,2721 3,8737

Keterangan :

(10)

53

2. Hitungan EC80 ekstrak etanol daun belimbing wuluh

��80 =�

80− �1

�2−�1

× (�2− �1)�+�1

Keterangan:

�.��80 =�

80−75

84,3750−75× (0,6020−0,5440)�+ 0,5440 ��80 = 0,5749

EC80 = 3,7575 M

�.��₈₀ = � 80−73,3333

86,6667−73,3333× (−0,4771−(−0,3979)�+ (−0,3979) ��₈₀ = 0,4375

EC80 = 2,7384 M

�.��₈₀ = � 80−71,4286

80,9524−71,4286× (0,3979−0,3010)�+ 0,3010 ��80 = 0,3882

EC80 = 2,4446 M

Rerata EC80 EEDBW =

3,7575 +2,7384 + 2,4446 3

(11)

54

Lampiran 10. Data efek relaksasi atropin sulfat pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 2,91x10-5 M.

1.Tabel data pengujian relaksasi seri konsentrasi atropin sulfat terhadap otot polos ileum

Konsentrasi Atropin Sulfat (M)

% Relaksasi Ileum *

Rerata SEM

1 2 3 4 5 6

1x10-8 6,4516 5,2632 9,5238 5,9524 12,9032 10,0000 8,3490 1,2071 3x10-8 9,6774 10,5263 23,8095 7,1429 25,8065 25,0000 16,9938 3,5619 1x10-7 64,5161 57,8947 71,4286 50,0000 119,3548 120,0000 80,5324 12,7135 3x10-7 103,2258 121,0526 114,2857 105,9524 122,5806 145,0000 118,6829 6,1474 1x10-6 109,6777 121,0526 119,0476 114,2857 129,0323 145,0000 123,0160 5,1421 3x10-6 109,6774 126,3158 119,0476 114,2857 135,4839 150,0000 125,8017 6,1041 1x10-5 112,9032 126,3158 119,0476 114,2857 135,4839 150,0000 126,3394 5,8379 3x10-5 112,9032 126,3158 123,8095 114,2857 135,4839 150,0000 127,1330 5,6918

Keterangan :

(12)

55 2.Hitungan EC80atropin

��80 =�

80− �1

�2−�1

× (�2− �1)�+�1

Keterangan:

�.��80 =�

80−64,5161

103,2258−64,5161×�−7−(−6,5)��+ (−6,5)

��80 = −6,7

EC80 = 1,99 x 10-7 M

�.��80 = �

80−57,8947

121,0526−57,8947× (−7— 6,5)�+ (−6,5)

��80 = −6,67

EC80 = 2,11 x 10-7 M

�.��₈₀ = � 80−71,4286

114,2857−71,4286× (−7— 6,5)�+ (−6,5)

��80 = −6,59

EC80 = 2,51 x 10-7 M

Rerata EC80 atropin =1,99x10-7 + 2,11x10-7 + 2,51x10-7 3

(13)

56

Lampiran 11. Data hasil uji kontraksi asetilkolin 2,91x10-5 M.

Tabel data pengujian kontraksi terhadap otot polos ileum

Marmut Respon Kontraksi (cm)

1 3,0000

2 2,5000

3 2,6000

4 3,0000

5 2,6000

6 2,7000

Rerata 2,7333

SEM 0,0881

Lampiran 12. Data hasil uji kontraksi asetilkolin 2,91 x 10-5 M yang diinduksi EEDBW konsentrasi 3M

Tabel data pengujian kontraksi terhadap otot polos ileum marmut yang diinduksi dengan EEDBW.

1 0,6000

2 0,5000

3 0,6000

4 0,5000

5 0,4000

6 0,5000

Rerata 0,5167

(14)

57

atropin sulfat konsentrasi 3x10-7 M

Tabel data pengujian kontraksi terhadap otot polos ileum marmut yang diinduksi dengan atropin.

1 0,1000

2 0,2000

3 0,0000

4 0,1000

5 0,1000

6 0,0000

Rerata 0,0833

(15)

58

Lampiran 14. Hasil uji korelasi efek relaksasi ekstrak etanol daun belimbing wuluh pada kontraksi ileum melalui induksi asetilkolin 2,91x10-5M.

Descriptive Statistics

Mean Std. Deviation N

Dosis 4,50 2,449 8

%Relaksasi 68,734075 31,9493459 8

Correlations

dosis persenrelaksasi

Dosis Pearson Correlation 1 ,982**

Sig. (2-tailed) ,000

N 8 8

%Relaksasi Pearson Correlation ,982** 1 Sig. (2-tailed) ,000

N 8 8

**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

Model Summaryb

Model R R Square Adjusted R Square

Std. Error of the Estimate

1 ,982a ,965 ,959 ,495

a. Predictors: (Constant), %Relaksasi

(16)

59

daun belimbing wuluh 4 mg/ml dengan nilai %relaksasi atropin sulfat 3x10-7 M terhadap kontraksi otot polos ileum oleh asetilkolin 2,9x10-5 M.

Descriptives

Perlakuan Statistic Std. Error

% Relaksasi Ach+Ekstrak

Mean 107,272100 3,8737485

95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound 97,314312

Upper Bound 117,229888

5% Trimmed Mean 107,577550

Median 108,333350

Variance 90,036

Std. Deviation 9,4887073

Minimum 90,6250

Maximum 118,4211

Range 27,7961

Interquartile Range 13,2460

Skewness -1,060 ,845

Kurtosis 1,828 1,741

% Relaksasi Ach+Atropin

Mean 118,682850 6,1474120

Median 117,669150

Variance 226,744

Minimum 103,2258

Maximum 145,0000

Range 41,7742

Skewness 1,095 ,845

(17)

60

Tests of Normality

*. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction

Group Statistics

Perlakuan N Mean Std.

Deviation

Std. Error Mean

%Relaksasi

% Relaksasi

Ach+Ekstrak 6 107,272100 9,4887073 3,8737485 % Relaksasi

Ach+Atropin 6 118,682850 15,0580227 6,1474120 Perlakuan Kolmogorov-Smirnov

a

Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.

%Relaksasi

% Relaksasi

Ach+Ekstrak ,229 6 ,200 *

,936 6 ,624

% Relaksasi

Ach+Atropin ,231 6 ,200 *

(18)

61 Levene's Test for

Equality of Variances t-test for Equality of Means

F Sig. t df Sig.

(2-tailed)

Mean Difference

Std. Error Difference

95% Confidence Interval of the Difference

Lower Upper

%Relaksasi

Equal variances

assumed ,890 ,368 -1,570 10 ,147 -11,4107500 7,2661270 -27,6006900 4,7791900

Equal variances

(19)

62

Lampiran 16. Hasil uji independent sample T-test kekuatan kontraksi EEDBW 3M dan kekuatan kontraksi atropin sulfat 3x10-7 M pada otot polos ileum dengan pemberian asetilkolin 2,91x10-5 M.

Descriptives

perlakuan Statistic Std. Error

Kekuatan kontraksi Ekstrak+Ach

Mean 18,618600 1,1074517

Median 18,018000

Variance 7,359

Minimum 14,4144

Maximum 21,6216

Range 7,2072

Skewness -,313 ,845

Kurtosis -,104 1,741

Kekuatan kontraksi Atropin+Ach

Mean 3,003000 1,1074517

Lower Bound ,156205

Median 3,603600

Variance 7,359

Minimum ,0000

Maximum 7,2072

Range 7,2072

Skewness ,313 ,845

(20)

63

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

%Kontraksi Ekstrak+Ach ,254 6 ,200

*

,866 6 ,212

Atropin+Ach ,254 6 ,200* ,866 6 ,212

Group Statistics

Perlakuan N Mean Std. Deviation Std. Error Mean

%Kontraksi Ekstrak+Ach 6 18,618600 2,7126915 1,1074517

(21)

64

Independent Samples Test Levene's Test

for Equality of Variances

t-test for Equality of Means

F Sig. T df Sig.

(2-tailed)

Mean Difference

Lower Upper

%Kontraksi

Equal variances

assumed ,000 1,000 9,971 10 ,000 15,6156000 1,5661732 12,1259487 19,1052513

Equal variances

(22)

65

asetilkolin 2,91x10 M yang diinkubasi dengan EEDBW 3M dan kekuatan kontraksi asetilkolin 2,91x10-5 M tanpa inkubasi.

Descriptives

Perlakuan Std.

Error

Kekuatan Kontraksi Ekstrak+Ach

Mean ,516667 ,0307318

Lower Bound ,437668

Upper Bound ,595665

5% Trimmed Mean ,518519

Median ,500000

Variance ,006

Std. Deviation ,0752773

Minimum ,4000

Maximum ,6000

Range ,2000

Interquartile Range ,1250

Skewness -,313 ,845

Kurtosis -,104 1,741

Kekuatan Kontraksi Ach

Mean 2,733333 ,0881917

Median 2,650000

Variance ,047

Std. Deviation ,2160247

Minimum 2,5000

Maximum 3,0000

Range ,5000

Interquartile Range ,4250

Skewness ,608 ,845

(23)

66

Tests of Normality

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic Df Sig.

Kekuatan Kontraksi

Ekstrak+Ach ,254 6 ,200* ,866 6 ,212

Ach ,231 6 ,200* ,840 6 ,129

Group Statistics

Perlakuan N Mean Std. Deviation

Std. Error Mean

Kekuatan Kontraksi

Ekstrak+Ach 6 ,516667 ,0752773 ,0307318

(24)

67 Levene's Test for

Equality of Variances

t-test for Equality of Means

F Sig. t Df Sig.

(2-tailed)

Mean Difference

Lower Upper

Kekuatan Kontraksi

Equal variances

assumed

8,374 ,016 -23,735 10 ,000 -2,2166667 ,0933928 -2,4247589 -2,0085745

Equal variances not

assumed

(25)

68

Lampiran 18. Gambar preparasi organ ileum marmut

A B

C D

Keterangan:

A = pemotongan abdomen marmut B = organ ileum marmut

C & D = proses pengikatan organ ileum marmut terisolasi

ileum

batang penahan jaringan

benang pengikat

ileum

(26)

69 A A

A

(27)

70 Lampiran 19. (Lanjutan)

C

D Keterangan:

A = empat set organ bath volume 50,0 ml C = transduser isometrik

(28)

71

dikontraksi dengan pemberian seri konsentrasi asetilkolin (10-8 – 3x10-3 M).

(29)

72

Lampiran 22. Gambar pola relaksasi setelah pemberian seri konsentrasi atropin sulfat pada otot polos ileum terisolasi yang diinduksi dengan asetilkolin 2,91 x 10-5 M.

.

(30)

73

diinduksi dengan atropin sulfat 3x10 M