32
4.1 Kandungan Metabolit Sekunder Sargassum crassifolium
Sampel kering Sargassum crassifolium yang telah dihaluskan ditimbang 0,5 gram dengan menggunakan timbangan analitik untuk masing-masing 6 perlakuan uji fitokimia, yaitu uji alkaloid, uji flavonoid, uji saponin, uji tanin, uji steroid, uji triterpenoid. Hasil uji fitokimia yang telah dilakukan pada sampel rumput laut Sargassum crassifolium diperoleh hasil kandungan metabolit sekunder sebagai berikut :
4.1.1 Alkaloid
Identifikasi alkaloid pada sampel rumput laut Sargassum crassifolium menunjukkan nilai negatif, dengan kata lain Sargassum crassifolium tidak mengandung senyawa alkaloid. Pereaksi yang digunakan dalam pengujian senyawa alkaloid dalam rumput laut Sargassum crassifolium menggunakan pereaksi meyer, dan hasilnya tidak terbentuk endapan. Hasil positif uji alkaloid jika terbentuk endapan putih. Pereaksi meyer digunakan sebagai pereaksi pengendapan, artinya berdasarkan kesanggupan alkaloid untuk bergabung dengan logam yang memiliki berat atom tinggiseperti merkuri, bismuth atau iood (Sastrohamidjojo 1996 dalam Sari 2013). Kelarutan dan sifat lain alkaloid sangat berbeda, cara penjaringan umum untuk alkaloid dalam tumbuhan tidak akan berhasil mendeteksi senyawa khas. Alkaloid pada umumnya tidak ditemukan pada gymnospermae, paku-pakuan, lumut dan tumbuhan rendah (Harborne, 1987).
4.1.2 Flavonoid
Identifikasi senyawa flavonoid pada rumput laut Sargassum crassifolium dilakukan dengan menggunakan 3 pereaksi, yaitu pereaksi pertama menggunakan H2SO4 2N, pereaksi kedua menggunakan NaOH 10% dan pereaksi ketiga
menggunakan HCl+Mg. Senyawa flavonoid dapat diidentifikasi dalam suasana basa dan asam. Hasil uji flavonoid menunjukkan bahwa pada pereaksi pertama dan kedua terjadi perubahan warna, sedangkan pada pereaksi yang ketiga tidak mengalami perubahan warna. Perubahan warna yang terjadi adalah garam benzolpirilum atau garam flavilium (Achmad 1986 dalam Sari 2013). Hasil yang berbeda ditunjukkan pada pereaksi ketiga yang tidak terjadi perubahan warna. Pereaksi ketiga menggunakan campuran asam kuat dan logam, hal ini menunjukkan senyawa yang dihasilkan pada pereaksi ini merupakan senyawa kompleks yang dapat bereaksi dengan logam (Mg). Sehingga dapat dikatakan bahwa Sargassum crassifolium positif mengandung senyawa flavonoid dengan pereaksi asam dan basam.
(a) (b) (c) Gambar 11. Hasil Uji Flavonoid Pereaksi Sargassum crassifolium
Hasil positif Pereaksi H2SO4 2N (a) dan Pereaksi NaOH 10% (b), Hasil negatif
Pereaksi HCl+Mg (c)
4.1.3 Saponin
Identifikasi uji saponin pada rumput laut Sargassum crassifolium menuunjukkan nilai positif, dengan terdapat buih stabil saat pengocokan dilakukkan. Hal ini menandakan bahwa dalam Sargassum crassifolium mengandung senyawa saponin. Menurut Rusyid dan Marina dkk (1990) dalam Sari (2013) menyatakan bahwa busa yang terdapat dalam pengujian senyawa saponin menunjukkan adanya glikosida yang mampu membentuk buih dalam air,
senyawa glikosida terhidrolisis menjadi glukosa dan aglikon. Saponin sendiri merupakan senyawa glikosida yang termasuk kelompok aglikon. Glikosida saponin adalah glikosida yang aglikonnya berupa sapogenin (Cheek, 2005 dalam Sari 2013).
Gambar 12. Hasil Positif Saponin Sargassum crassifolium
4.1.4 Tanin
Identifikasi uji tanin pada Sargassum crassifolium menunjukan hasil positif, hal ini dibuktikan dengan adanya endapan berwarna kecoklatan.
Sargassum crassifolium memiliki senyawa tanin yang bereaksi dengan protein
yang ada dalam Sargassum crassifolium dan membentuk kopolimer yang tidak larut dalam air, dan hal ini sudah dibuktikan dalam uji tanin dengan adanya endapan yang menandakan adanya kopolimer.
Gambar 13. Hasil Positif Tanin Sargassum crassifolium
4.1.5 Triterpenoid / Steroid
Identifikasi senyawa triterpenoid/steroid pada rumput laut Sargassum
crassifolium menunjukkan nilai positif pada uji steroid dan nilai negatif pada uji
triterpenoid. Karena pada uji steroid, saat ditetesi pereaksi asam sulfat pekat terjadi perubahan warna biru kehijauan yang mengindikasi senyawa steroid dalam suatu bahan alam. Hal ini sesuai dengan pernyataan Harborne (1987) yang
menyatakan bahwa sterol lain terutama terdapat dalam tumbuhan rendah, tetapi kadang-kadang terdapat dalam tumbuhan tinggi. Misalnya fukosterol, yaitu steroid utama pada alga coklat dan kelapa.
Gambar 14. Hasil Positif Steroid Sargassum crassifolium
Tabel 4. Hasil Uji Fitokimia Sargassum crassifolium Uji Fitokimia Sampel Rumput Laut
Sargassum crassifolium Alkaloid - Flavonoid H2SO4 2N NaOH 10% HCl + Mg + + - Saponin ++ Tanin ++ Steroid + Triterpenoid - Keterangan : - = Negatif + = Positif ++ = Positif Kuat
Tujuan dilakukannya analisis fitokimia ialah untuk menentukan ciri senyawa aktif penyebab efek racun atau efek yang bermanfaat yang ditunjukkan dalam suatu bahan dengan sistem biologi (Harborne 1987).
4.2 Ekstraksi Rumput Laut Sargassum crassifolium
Ekstraksi merupakan proses pemisahan senyawa yang terkandung dalam suatu bahan dengan menggunakan pelarut sesuai dengan kepolaran senyawa yang diinginkan. Ekstraksi ini bertujuan untuk mendapatkan komponen senyawa yang terkandung di dalam suatu bahan sesuai kepolaran senyawa tersebut (Harborne 1987). Proses maserasi rumput laut Sargassum crassifolium yang dilakukan dalam penelitian ini yaitu selama 2x24 jam dengan 3 kali pengulangan, dimana pada ulangan ke-4, sampel tidak menunjukkan warna hijau. Hal ini dikarenakan senyawa yang terkandung dalam sampel sudah tidak terdapat lagi pada ulangan keempat. Proses evaporasi menghasilkan filtrat hasil ulangan tiga kali maserasi sebanyak 1,2 L pelarut. Jenis ekstraksi yang dilakukan dalam penelitian ini adalah eksraksi tunggal yaitu ekstraksi yang hanya menggunakan pelarut metanol, ini berdasarkan penelitian Sarastani (2002) dan Prabowo (2009) dalam Sari (2013) yang menunjukkan bahwa rendemen ekstrak dari hasil ekstraksi tunggal jauh lebih besar dibandingkan dengan ekstraksi bertingkat. Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi ini menggunakan pelarut polar berupa metanol. Pelarut polar dapat menarik senyawa-senyawa polar yang terkandung dalam suatu bahan. Selain itu, metanol secara umum dapat melarutkan kandungan metabolit sekunder dari bahan alam dengan berbagai kepolaran (Syahputri, 2012). Metabolit sekunder target diantaranya senyawa flavonoid penyusun senyawa aktif dalam rumput laut
Sargassum crassifolium.
Suhu yang dipakai pada proses ekstraksi dengan menggunakan rotary
evaporator yaitu dengan suhu 400C dibawah suhu titik didih dari pelarut metanol yaitu 650C. Hal ini dimaksudkan agar pada saat ekstraksi, senyawa-senyawa yang terkandung dalam bahan alam tidak rusak akibat suhu tinggi. Hal ini sesuai dengan pernyatakan Harborne (1987) yang menyatakan bahwa yang biasa dilakukan dalam penguap putar yang akan memekatkan larutan menjadi volume
kecil tanpa terjadi percikan yaitu pada suhu antara 30 dan 400C. Setelah hasil ekstrak didapat dari ekstraksi, ekstrak ditempatkan pada botol vial kemudian dimasukkan kedalam lemari es, untuk mencegah kerusakan senyawa yang ada pada ekstrak. Sebagai tindakan pencegahan untuk kehilangan senyawa, ekstrak pekat harus disimpan dalam lemari es (Harborne 1987).
Gambar 15. Proses Pemekatan Filtrat Menggunakan Rotary Evaporator
4.2.1 Rendemen Ekstrak Rumput Laut Sargassum crassifolium
Pada penelitian ini berat sampel kering rumput laut Sargassum
crassifolium yang sudah dihaluskan berjumlah 113,3 gram sedangkan jumlah hasil
ekstrak rumput laut Sargassum crassifolium adalah 2,58 gram. Rendemen merupakan perbandingan jumlah ekstrak yang diperoleh dari suatu bahan terhadap awal berat bahan simplisia. Hal ini dimaksudkan bahwa hasil rendemen merupakan hasil senyawa bioaktif yang terkandung dalam bahan simplisia tersebut sesuai dengan berat awal simplisia yang diperoleh. Semakin tinggi hasil persentase rendemen menunjukkan semakin banyak senyawa bioaktif yang terkandung dalam suatu bahan (Rohmansyah 2011).
Berikut merupakan perhitungan nilai rendemen menurut (SNI-19-1705-2000 dalam Prabowo 2009) :
R = Berat Ekstrak
Berat Sampel 100%
R =
2,58113,3
100%
= 2,27 %
Dalam 113,3 gram sampel kering rumput laut Sargassum crassifolium terkandung sekitar 2,27% senyawa bioaktif dalam rumput laut tersebut. Hasil rendemen ekstrak rumput laut ini salah satunya dipengaruhi oleh jumlah pelarut yang digunakan dan lama waktu maserasi.
4.3 Hasil Uji LC50 Ekstrak Rumput Laut Sargassum crassifolium Selama
24 Jam Terhadap Udang Windu
Uji LC50 dilakukan untuk mengetahui batas toleransi udang windu
terhadap ekstrak rumput laut Sargassum crassifolium dapat menyebabkan 50% kematian pada hewan uji udang windu. Berikut adalah hasil uji LC50-24 Jam
ekstrak rumput laut Sargassum crassifolium terhadap larva udang windu, dimana tiap perlakuannya terdapat 5 larva udang windu dengan umur Post Larva (PL) 22 yang berada di wadah kaca (keller) dengan volume 1 liter :
Tabel 5. Hasil Uji LC50-24 Jam
Waktu Dedah Konsentrasi
( ppm ) 0 (A) 50 (B) 200 (C) 400 (D) 1 2 1 2 1 2 1 2 15 menit 30 menit 1 jam 2 jam 4 jam 6 jam 8 jam - - - - - - - - - - - - - - - - - 1 1 - - - - - 1 - - - - - 2 - 1 - - - - - 1 - - - - - 1 1 - - - - - - - 1 1 -
16 jam 24 jam - - - - - - - - - - - 1 - - - 2 Total Udang yang Mati - - 2 1 3 2 3 4
Dilihat dari hasil pengamatan LC50-24 jam, ekstrak pada konsentrasi 50
ppm memberikan 70% kelangsungan hidup udang windu. Ini merupakan konsentrasi yang paling banyak menunjukkan kelangsungan hidup udang windu yang tinggi, dikarenakan konsentrasi yang relatif rendah bagi udang windu dan tidak menjadikan konsentrasi ini menjadi toksik yang dapat mematikan lebih dari 50% hewan uji. Sehingga dapat dikatakan ekstrak rumput laut Sargassum
crassifolium dengan konsentrasi 50 ppm aman bagi kelangsungan hidup udang
windu. Pada konsentrasi 200 ppm, kelangsungan hidup udang windu memberikan nilai 50% kematian hewan uji. Hidayat (2011) juga menunjukan bahwa ekstrak rumput laut Sargassum sp. Sebesar 316,228 µg/ml masih dapat ditolerir oleh udang windu dan pada konsentrasi 10 µg/ml sampai dengan 100 µg/ml memberikan hasil kelangsungan hidup udang windu yang tinggi. Pada konsentrasi 400 ppm hasil nilai 30% untuk kelangsungan hidup udang windu. Hal ini dikarenakan pada konsentrasi lebih dari 300 ppm ekstrak rumput laut Sargassum sp dapat menjadikkan ekstrak tersebut menjadi toksik bagi udang windu karena konsentrasi yang melebihi ambang batas (Hidayat 2011).
Berikut merupakan hasil analisis LC50 menggunakan program EPA Probit
1.5 dengan konsentrasi 50 ppm, 200 ppm dan 400 ppm dengan 2 kali pengulangan dan terdapat 5 udang windu untuk tiap perlakuan.
Tabel 6. Hasil Analisis EPA Probit 1.5 Ekstrak Rumput Laut
Sargassum crassifolium Terhadap Larva Udang Windu
Estimated LC/EC Values and Confidence Limits Exposure
Point Conc. LC/EC 1.00 3.570 LC/EC 5.00 11.827
LC/EC 10.00 22.401 LC/EC 15.00 34.473 LC/EC 50.00 213.201 LC/EC 85.00 1318.550 LC/EC 90.00 2029.134 LC/EC 95.00 3843.223 LC/EC 99.00 12733.703
Data hasil analisis EPA Probit, menunjukkan bahwa hasil LC50
memberikan nilai sebesar 213,201 ppm, yaitu ekstrak rumput laut Sargassum
crassifolium yang dapat menyebabkan kematian udang windu sebesar 50% yaitu
pada konsentrasi 213 ppm dan dibulatkan menjadi 200 ppm. Berdasarkan konsentrasi tersebut, maka konsentrasi yang digunakan dalam media pemeliharaan udang windu adalah perlakuan A = 50 ppm (25% dari 200 ppm), perlakuan B = 100 ppm (50% dari 200 ppm), perlakuan C = 150 ppm (75% dari 200 ppm), perlakuan D = 200 ppm (100% dari 200 ppm).
4.4 Kelangsungan Hidup Udang Windu Selama Masa Perlakuan Penambahan Campuran Ekstrak dan Pakan
Tingkat kelangsungan hidup merupakan total organisme yang mampu bertahan hidup hingga waktu yang ditentukan dalam suatu penelitian atau percobaan. Tingkat kelangsungan hidup organisme dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor, yaitu faktor internal dan faktor eksternal. Faktor internal merupakan faktor yang berhubungan dengan organisme itu sendiri seperti umur dan genetika yang meliputi keturunan, kemampuan untuk memanfaatkan makanan dan ketahanan terhadap penyakit. Faktor eksternal merupakan faktor yang berkaitan dengan lingkungan tempat hidup yang meliputi sifat fisika dan kimia air, ruang gerak dan ketersediaan makanan dari segi kualitas dan kuantitas (Mudjiman, 1998 dalam Rohman 2013).
Waktu yang digunakan dalam masa perlakuan pemberian pakan dan ekstrak terhadap udang windu adalah 20 hari. Hal ini berdasarkan masa pertumbuhan udang yang lebih kurang membutuhkan waktu 20 hari dalam masa pergantian dari fase mysis ke fase postlarva, dimana pada fase ini sistem imun
udang windu sedang berkembang menghasilkan hemosit yang memiliki peranan penting dalam sistem pertahanan udang. Hemosit bekerja aktif mengeluarkan partikel asing dalam hemocoel melalui fagositosis (Rodriguez dan Lee Moullac 2000 dalam Rohman 2013). Hal ini sesuai dengan penelitian Citarasu dkk (2006) yang menyatakan bahwa pemberian ekstrak lima jenis tanaman obat (Cyanodon
dactylon, Eagle marmelos, Tinospora corditolia, Picrorizha kuroa dan Eclipta alba) selama 25 hari pemberian pakan yang ditambahkan ekstrak sebanyak
800mg/kg pakan secara signifikan mampu meningkatkan kelangsungan hidup udang windu hingga 74%. Pemberian campuran ekstrak dan pakan dimaksudkan dapat efektif dalam meningkatkan ketahanan tubuh udang windu sebelum diinfeksikan bakteri Vibrio harveyi. Pada perlakuan pemberian pakan udang windu yang dicampur dengan ekstrak rumput laut Sargassum crassifolium, ditemukan tiap perlakuannya jumlah udang windu berkurang, diduga udang windu mengalami kanibalisme, sebab tidak ditemukan tubuh udang windu yang mati tetapi jumlahnya berkurang. Hal ini disebabkan luas penampang yang tidak terlalu luas yaitu dalam keller, kurangnya jumlah shelter dalam tiap perlakuan dan kurangnya frekuensi pemberian pakan selama 20 hari masa perlakuan. Selama penelitian, frekuensi pemberian pakan dilakukan pada rentang pukul 10.00-12.00 dan 15.00-17.00 ini tidak sesuai dengan frekuensi pemberian pakan terhadap udang yang idealnya dilakukan pada rentang empat jam sekali dan dilakukan pemberian pakan pada malam hari. Karena pada malam hari udang lebih agresif dibanding siang hari.
Pada perlakuan kontrol dengan pemberian pakan tidak dicampur ekstrak, kelangsungan hidup pada masa perlakuan sebesar 86,6%. Perlakuan A dengan konsentrasi 50 ppm dalam media pemeliharaan udang windu, memberikan kelangsungan hidup sebesar 83,33%. Perlakuan B dengan konsentrasi 100 ppm, memberikan kelangsungan hidup sebesar 83,3%. Perlakuan C dengan 150 ppm, memberikan kelangsungan hidup sebesar 80%. Pada perlakuan D dengan 200 ppm, memberikan kelangsungan hidup sebesar 76,6%. Hal ini dipengaruhi oleh kondisi lingkungan hidup udang windu selama masa perlakuan, sifat kanibalisme udang windu itu sendiri dan kurangnya frekuensi pemberian pakan terhadap
udang windu, memicu terjadinya kanibalisme dalam 20 hari masa perlakuan. Sifat kanibalisme pada udang disebabkan karena lingkungan hidup udang windu yang tidak sesuai dengan keadaan alamnya (tambak). Selama masa perlakuan, terdapat stok yang perlakuannya sama dengan penambahan pakan dengan konsentrasi ekstrak yang berbeda-beda. Keberadaan stok ini berguna mengganti udang windu yang kurang dalam tiap perlakuan, sebelum masa kohabitasi atau penginfeksian bakteri Vibrio harveyi. Sehingga jumlah udang windu yang nantinya di uji in vivo jumlahnya sama dengan jumlah awal masa perlakuan.
Tabel 7. Mortalitas Udang Windu Selama Perlakuan Pemberian Campuran Ekstrak dan Pakan
Perlakuan Total Mortalitas Selama Perlakuan
A (50 ppm) 5
B (100 ppm) 5
C (150 ppm) 6
D (200 ppm) 7
Kontrol 4
Gambar 16. Grafik Mortalitas Udang Windu Selama Perlakuan Pemberian Campuran Pakan dan Ekstrak
0 1 2 3 4 5 6 7 8 A B C D K M o rtali tas Perlakuan
Total Mortalitas Udang Windu
4.5 Gejala Klinis Udang Windu Selama Masa Perlakuan
Pada masa uji in vivo udang windu yang diamati memiliki perubahan gejala klinis jika dibandingkan dengan masa perlakuan pemberian campuran pakan dan ekstrak. Perubahan gejala klinis tersebut meliputi perubahan respon udang terhadap pakan, perubahan fisik dan pergerakan udang windu. Terjadi penurunan respon udang windu terhadap pakan. Hal ini dibuktikan dengan pergerakan udang windu yang tidak agresif pada saat pemberian pakan. Jika dibandingkan dengan sebelum uji in vivo, respon udang windu terhadap pakan yang dicampur ekstrak sangat baik. Respon makan yang baik terlihat saat pemberian pakan, udang windu bergerak untuk berenang ke atas mengambil pakan yang belum tenggelam atau pakan yang masih berada dipermukaan air. Perubahan juga terjadi pada perubahan fisik udang windu. Udang windu yang diamati pada saat uji in vivo berenang lambat dan selalu berada di dasar air. Hal ini berbeda pada saat perlakuan pemberian pakan, udang windu lebih agresif dengan seringnya berenang ke atas permukaan air dan mengelilingi keller.
Informasi dari petambak udang windu, menyatakan bahwa indikasi udang windu yang tidak sehat diantaranya adalah terdapat udang yang terlihat menempel pada tempat wadah (keller/akuarium) itu menandakan udang yang stres. Hal ini disebabkan pengaruh kondisi lingkungan udang yang tidak sesuai dengan kondisi alaminya (tambak). Tetapi pada penelitian ini, tidak terdapat udang yang menempel di pinggir tempat wadah pada saat perlakuan pemberian penambahan pakan dan ekstrak. Sehingga dapat dikatakan bahwa pada perlakuan pemberian pakan dan ekstrak tidak memberikan pengaruh buruk dari penambahan ekstrak. Penambahan ekstrak tidak bersifat toksik terhadap udang windu. Hal ini dibuktikan dengan tidak ditemukannya udang mati pada saat perlakuan.
Gambar 17. Udang windu mati karena Vibrio harveyi
4.6 Kelangsungan Hidup Udang Windu Pada Uji In Vivo
Pada uji in vivo atau uji tantang yaitu penginfeksian terhadap udang windu dengan kepadatan bakteri Vibrio harveyi sebesar 104 cfu/ml kelangsungan hidup
udang windu mencapai 100% pada semua perlakuan (konsentrasi ekstrak dalam media pemeliharaan, yaitu 50, 100, 150 dan 200 ppm) kecuali perlakuan kontrol yaitu perlakuan pemberian pakan tanpa ekstrak, dengan kelangsungan hidup mencapai 93,3%. Hal ini diduga penginfeksian dengan kepadatan bakteri 104 cfu/ml tidak bersifat patogen terhadap udang windu. Penelitian ini tidak sesuai dengan pernyataan Roza dan Zafran (1993) dalam Noiborhu (2002) yang menyatakan bahwa kepadatan bakteri Vibrio harveyi dalam air yang mencapai 8.35 x 104 cfu/ml bersifat patogen bagi larva udang windu. Hal ini juga diduga pada penelitian ini konsentrasi ekstrak yang digunakan dalam campuran pakan cukup tinggi, yaitu pada perlakuan A (50 ppm dalam media pemeliharaan) konsentrasi ekstrak yang digunakan pada percampuran pakan sebesar 49,98 ppm/10gr pakan. Perlakuan B (100 ppm dalam media pemeliharaan) sebesar 99,86 ppm/10gr pakan. Perlakuan C (150 ppm dalam media pemeliharaan) sebesar 149,97 ppm/10 gr pakan. Perlakuan D (200 ppm dalam media pemeliharaan) sebesar 199,98 ppm/10 gr pakan.
Pada penelitian ini dilakukan penginfeksian kembali dengan peningkatan konsentrasi Vibrio harveyi mencapai 107 cfu/ml. Hal ini diperkuat dengan pernyataan Anonim (2007) dalam Azis (2011) yang menyatakan bahwa informasi dosis infeksi bakteri terhadap udang windu sangat dibutuhkan bagi pembudidaya udang windu. Dalam proses budidaya udang windu kriteria air tambak yang baik
adalah dengan jumlah bakteri Vibrio tidak melebihi 102 cfu/ml pada saat penebaran dan 104 cfu/ml pada pertengahan dan akhir pemeliharaan. Pada penginfeksian ini, umur udang windu yang digunakan sudah mencapai PL 35, sehingga dapat dikatakan bahwa sistem imun dari udang windu sendiri sudah semakin kompleks dengan seiring bertambahnya umur udang windu, karena pada fase ini udang windu mulai beralih dari fase postlarva menuju pada fase juvenil yaitu awal fase udang dewasa. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa Sargassum
crassifolium mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin dan steroid.
Senyawa flavonoid merupakan salah satu senyawa yang dikategorikan senyawa yang memiliki aktivitas imunomodulator (Collegate 1993 dalam Syarifah 2006). Pada penelitian senyawa flavonoid yang terkandung dalam Sargassum
crassifolium yang dicampur dengan pakan, memiliki aktivitas imunomodulator
pada udang windu. Pada penelitian ini udang windu yang sudah diberi perlakuan pemberian penambahan campuran ekstrak Sargassum crassifolium dan pakan selama 20 hari dapat mentoleransi bakteri Vibrio harveyi dengan kepadatan 104 cfu/ml. Sehingga perlunya penginfeksian lanjutan dengan kepadatan melebihi 104 cfu/ml untuk melihat toleransi imunomodulasi udang windu dari ekstrak
Sargassum crassifolium terhadap ketahanan udang windu.
Tabel 8. Mortalitas Udang Windu Pada Penginfeksian Vibrio harveyi Kepadatan 104 cfu/ml
Perlakuan Total Mortalitas Selama Perlakuan
A (50 ppm) -
B (100 ppm) -
C (150 ppm) -
D (200 ppm) -
Gambar 18. Grafik Kelangsungan Hidup Udang Windu Pada Penginfeksian
Vibrio harveyi Kepadatan 104 cfu/ml
4.6.1 Uji In vivo dengan Penginfeksian Peningkatan Konsentrasi Vibrio harveyi Kepadatan 107 cfu/ml
Penginfeksian udang windu dengan kepadatan bakteri Vibrio harveyi 107 cfu/ml menghasilkan kelangsungan hidup mencapai 100% baik perlakuan kontrol tanpa penambahan ekstrak Sargassum crassifolium maupun perlakuan yang diberi penambahan ekstrak. Hal ini diduga karena konsentrasi ekstrak Sargassum
crassifolium yang terkandung dalam pakan udang windu yang digunakan cukup
tinggi yaitu 49,98 ppm/10 gr pakan, 99,86 ppm/10 gr pakan, 149,97 ppm/10 gr pakan, 199,98 ppm/10 gr pakan dan campuran ekstrak pakan ini memiliki aktivitas sebagai imunomodulator pada tubuh udang windu dibuktikan dengan kelangsungan hidup udang windu pada masa perlakuan. Selama uji in vivo udang windu tetap diberi campuran ekstrak dan pakan sehingga diduga campuran ekstrak
Sargassum crassifolium pada pakan juga memiliki aktivitas antibakteri sebagai
probiotik alami dalam lingkungan perairan udang windu. Hasil positif senyawa saponin dan tanin pada Sargassum crassifolium, memperkuat dugaan bahwa ekstrak yang terkandung dalam campuran ekstrak memiliki aktivitas antibakteri.
Hal ini dibuktikan dengan uji TPC bakteri Vibrio harveyi, yaitu perhitungan jumlah koloni bakteri dalam cawan petri. Perbandingan hasil TPC
88% 90% 92% 94% 96% 98% 100% 102% A B C D K Per sen tase SR Perlakuan
Survival Rate Udang Windu
bakteri Vibrio harveyi sebelum direndam dengan campuran ekstrak pakan dan hasil TPC bakteri yang sudah direndam selama 24 jam, menghasilkan TPC yang sebelum direndam 344 koloni, dan yang sudah direndam 237 koloni (Lampiran 17). Hal ini menunjukkan bahwa terjadi penurunan jumlah bakteri Vibrio harveyi pada saat perendaman dengan campuran ekstrak dan pakan. Pernyataan ini diperkuat dengan Penelitian Hidayat (2012) menunjukan bahwa Ekstrak
Sargassum sp. pada konsentrasi 237,102 µg/ml efektif menghambat pertumbuhan
bakteri Vibrio harveyi kepadatan 107 cfu/ml. Pada penginfeksian ini, umur udang windu yang digunakan sudah mencapai PL 38, artinya udang windu mulai beralih dari fase post larva (PL) ke fase juvenil.
Tabel 9. Mortalitas Udang Windu Pada Penginfeksian Vibrio Harveyi Kepadatan 107 cfu/ml
Perlakuan Total Mortalitas Selama Perlakuan
A (50 ppm) -
B (100 ppm) -
C (150 ppm) -
D (200 ppm) -
Kontrol -
Gambar 19. Grafik Kelangsungan Hidup Udang Windu Pada Penginfeksian
Vibrio Harveyi Kepadatan 107 cfu/ml
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% A B C D K Per sen tase SR Perlakuan
Kelangsungan Hidup Udang Windu
4.7 Parameter Kualitas Air 4.7.1 Salinitas
Salinitas atau kadar garam air selama penelitian, dikategorikan baik atau sesuai dengan masa hidup udang windu di tambak. Hal ini dikarenakan air yang dipakai selama proses penelitian merupakan air laut, bukan air tawar yang ditambahkan garam krosok. Selama proses penelitian ditemukan perubahan salinitas yang signifikan, dimana stok akuarium yang diberi pengatur suhu (Heater) dengan pengaturan suhu 30-320C mempengaruhi nilai salinitas. Semakin tinggi suhu dalam penelitian, semakin tinggi nilai salinitasnya. Nilai salinitas dalam penelitian adalah 30-38 ppt. Udang windu dapat hidup dengan salinitas 5-40 ppt dan kisaran optimumnya adalah 30 ppt. Hal ini diperkuat dengan pernyataan Rakhmatun dan Mudjiman (2003) yang menyatakan bahwa udang windu tumbuh paling baik pada kadar garam 15-35 ppt.
4.7.2 Suhu
Suhu selama penelitian berkisar 25-280C dan masih berada dalam kelayakan pemeliharaan udang windu. Suhu dalam perlakuan dikategorikan cukup rendah, hal ini dikarenakan tiap perlakuan tidak menggunakan pengatur suhu. Tetapi dalam pelaksanaan penelitian, terdapat stok air laut dalam akuarium yang diaerasi dan diberi pengatur suhu (Heater). Sehingga dalam pelaksanaan penelitian, setelah proses sipon yaitu pembersihan tempat pemeliharaan udang windu. Pengganti air buangan sipon adalah stok air laut yang di akuarium tersebut. Sehingga suhunya masih terjaga. suhu optimum udang windu adalah 28-320C. Hal ini diperkuat dengan pernyataan Suyatno (2001) yang menyatakan
bahwa kisaran suhu yang baik di kawasan tambak budidaya udang windu adalah kisaran 280 – 320 C.
4.7.3 DO (Oksigen Terlarut)
Kandungan oksigen terlarut selama penelitian berkisar 6,5 – 8,3 mg/L. Nilai tersebut masih dikategorikan layak untuk kelangsungan hidup udang windu. Dimana kisaran yang aman untuk kelangsungan hidup udang windu adalah dengan nilai DO diatas 3. Dan oksigen terlarut yang optimum pada udang windu adalah 4-8 mg/L. Hal ini sesuai dengan pernyataan Suyanto (2004) bahwa kisaran oksigen terlarut yang baik untuk budidaya udang windu adalah 4-8 mg/L.
4.7.4 pH
Derajat keasaman atau pH selama penelitian berkisar antara 6,90 – 7,14. Nilai pH ini masih layak bagi kelangsungan hidup udang windu. Walaupun bukan dikategorikan pH yang optimum bagi kehidupan udang windu. pH yang optimum bagi kehidupan udang windu adalah dengan kisaran 7 – 8. Hal ini diperkuat dengan pernyataan Ghufron (1997) bahwa pH yang optimal bagi kehidupan dan pertumbuhan udang windu adalah 6,8 - 8,7 .
