Lampiran 1. Data Pengamatan Persentase Terbentuknya Kalus (%)
Perlakuan Ulangan Total Rataan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 100 - 0 - - - 100 0 0 100 0 0 100 - 0 400 40,00
E1M1 0 100 - 0 100 - - 100 - 100 - - 100 - - 500 71,43
E1M2 0 100 100 100 0 100 - 0 0 - 0 100 0 - 0 500 41,67
E1M3 - - - 0 100 100 0 - - - 100 - - 300 60,00
E1M4 - 100 100 - - - 100 100 - 100 100 - - 100 100 800 100,00
E1M5 100 100 100 100 100 100 100 - 100 - 100 100 - 0 - 1000 90,91
E2M0 - 0 0 100 0 - - 0 0 100 100 0 0 0 0 300 25,00
E2M1 100 0 0 0 100 - 0 - 100 100 100 - - 100 - 600 60,00
E2M2 - - - 100 100 - - 0 100 - - - 100 400 80,00
E2M3 - 0 100 100 100 - - - 100 - 100 - - - 100 600 85,71
E2M4 - 100 - - 100 100 - - 100 100 100 - 100 - - 700 100,00
E2M5 - 100 - - - 100 100 - - 0 - 100 - 100 - 500 83,33
E3M0 100 - - 0 100 100 100 100 - - - 500 83,33
E3M1 - - 0 - 100 - - 100 - - 0 - - - 100 300 60,00
E3M2 0 - 100 100 - 100 100 - - 100 - 0 - - - 500 71,43
E3M3 100 - - 0 - - - 100 - - - 100 300 75,00
E3M4 - 100 - 100 0 - - - - 100 - - - 100 100 500 83,33
E3M5 - - 100 100 - - 100 100 - - 0 0 0 - - 400 57,14
Lampiran 2. Data Transformasi Persentase Pembentukan Kalus √x + 0,5
Perlakuan Ulangan Total Rataan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 10,0 - 0,7 - - - 10,0 0,7 0,7 10,0 0,7 0,7 10,0 - 0,7 44,3 4,4
E1M1 0,7 10,0 - 0,7 10,0 - - 10,0 - 10,0 - - 10,0 - - 51,5 7,4
E1M2 0,7 10,0 10,0 10,0 0,7 10,0 - 0,7 0,7 - 0,7 10,0 0,7 - 0,7 55,1 4,6
E1M3 - - - 0,0 10,0 10,0 0,7 - - - 10,0 - - 30,8 6,2
E1M4 - 10,0 10,0 - - - 10,0 10,0 - 10,0 10,0 - - 10,0 10,0 80,2 10,0
E1M5 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 - 10,0 - 10,0 10,0 - 0,7 - 101,0 9,2
E2M0 - 0,7 0,7 10,0 0,7 - - 0,7 0,7 10,0 10,0 0,7 0,7 0,7 0,7 36,4 3,0
E2M1 10,0 0,7 0,7 0,7 10,0 - 0,7 - 10,0 10,0 10,0 - - 10,0 - 63,0 6,3
E2M2 - - - 10,0 10,0 - - 0,7 10,0 - - - 10,0 40,8 8,2
E2M3 - 0,7 10,0 10,0 10,0 - - - 10,0 - 10,0 - - - 10,0 60,9 8,7
E2M4 - 10,0 - - 10,0 10,0 - - 10,0 10,0 10,0 - 10,0 - - 70,2 10,0
E2M5 - 10,0 - - - 10,0 10,0 - - 0,7 - 10,0 - 10,0 - 50,8 8,5
E3M0 10,0 - - 0,7 10,0 10,0 10,0 10,0 - - - 50,8 8,5
E3M1 - - 0,7 - 10,0 - - 10,0 - - 0,7 - - - 10,0 31,5 6,3
E3M2 0,7 - 10,0 10,0 - 10,0 10,0 - - 10,0 - 0,7 - - - 51,5 7,4
E3M3 10,0 - - 0,7 - - - 10,0 - - - 10,0 30,8 7,7
E3M4 - 10,0 - 10,0 0,7 - - - - 10,0 - - - 10,0 10,0 50,8 8,5
E3M5 - - 10,0 10,0 - - 10,0 10,0 - - 0,7 0,7 0,7 - - 42,2 6,0
Lampiran 3. Daftar Sidik Ragam Persentase Pembentukan Kalus (%)
SK Db JK KT F.Hit 0,05 Ket
Perlakuan
E 2 6,82 3,41 0,20 3,07 tn
M 5 343,47 68,69 4,09 2,29 **
E*M
(interaksi) 10 250,29 25,03 1,49 1,91 tn
Galat 118 1983,90 16,81
Total 135 2584,47
FK= 6582,528516
Lampiran 4. Data Pengamatan Umur Munculnya Kalus (hari)
Perlakuan Ulangan Total Rataan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 7 - - - 7 - - 7 - - 8 - - 29 7,25
E1M1 - 7 - - 7 - - 7 - 7 - - 7 - - 35 7
E1M2 - 6 6 6 - 6 - - - 7 - - - 31 6,2
E1M3 - - - 6 6 - - - - 6 - - 18 6
E1M4 - 6 6 - - - 6 6 - 6 6 - - 6 6 48 6
E1M5 6 6 6 6 6 6 6 - 6 - 6 6 - - - 60 6
E2M0 - - - 9 - - - 9 9 - - - - 27 9
E2M1 8 - - - 7 - - - 7 7 7 - - 7 - 43 7,166667
E2M2 - - - 7 7 - - - 7 - - - 7 28 7
E2M3 - - 7 7 7 - - - 7 - 7 - - - 7 42 7
E2M4 - 7 - - 7 7 - - 7 7 7 - 7 - - 49 7
E2M5 - 7 - - - 7 7 - - - - 7 - 7 - 35 7
E3M0 8 - - - 8 8 9 8 - - - 41 8,2
E3M1 - - - - 7 - - 7 - - - 7 21 7
E3M2 - - 7 7 - 7 7 - - 7 - - - 35 7
E3M3 7 - - - 7 - - - 7 21 7
E3M4 - 7 - 7 - - - 7 - - - 7 7 35 7
E3M5 - - 7 7 - - 7 7 - - - 28 7
Lampiran 5. Daftar Sidik Ragam Umur Munculnya Kalus (hari)
SK db JK KT F.Hit 0,05 Ket
Perlakuan
E 2 18,15 9,07 210,94 3,12 **
M 5 23,18 4,64 107,77 2,34 **
E*M
(interaksi) 10 1,16 0,12 2,69 1,96 **
Galat 74 3,18 0,04
Total 91 45,67
Lampiran 6. Data Pengamatan Bobot Basah Kalus (gr)
Perlakuan Ulangan TOTAL RATAAN
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 0,05 - 0,00 - - - 0,02 0,00 0,00 0,02 0,00 0,00 0,00 - 0,00 0,10 0,01
E1M1 0,00 0,00 - 0,00 0,36 - - 0,18 - 0,00 - - 0,31 - - 0,85 0,12
E1M2 0,00 0,86 0,00 0,00 0,00 0,39 - 0,00 0,00 - 0,00 0,70 0,00 - 0,00 1,94 0,16
E1M3 - - - 0,00 0,45 0,75 0,00 - - - 0,57 - - 1,77 0,35
E1M4 - 0,70 0,00 - - - 0,00 0,00 - 0,68 0,00 - - 0,66 0,00 2,04 0,25
E1M5 1,29 0,00 0,00 1,25 0,00 0,00 0,00 - 0,00 - 1,14 0,00 - 0,00 - 3,68 0,33
E2M0 - 0,00 0,00 0,01 0,00 - - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,00
E2M1 0,03 0,00 0,00 0,00 0,00 - 0,00 - 0,04 0,00 0,08 - - 0,00 - 0,15 0,02
E2M2 - - - 0,08 0,00 - - 0,00 0,07 - - - 0,07 0,23 0,05
E2M3 - 0,00 0,00 0,00 1,11 - - - 1,08 - 0,44 - - - 0,00 2,63 0,38
E2M4 - 1,18 - - 0,00 0,00 - - 0,00 0,84 0,00 - 0,50 - - 2,51 0,36
E2M5 - 0,00 - - - 1,53 0,00 - - 0,00 - 0,06 - 0,99 - 2,58 0,43
E3M0 0,00 - - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 - - - 0,00 0,00
E3M1 - - 0,00 - 0,00 - - 0,00 - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00
E3M2 0,00 - 0,29 0,00 - 0,00 0,85 - - 0,35 - 0,00 - - - 1,49 0,21
E3M3 0,00 - - 0,00 - - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00
E3M4 - 0,00 - 0,00 0,00 - - - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00 0,00
E3M5 - - 0,75 0,00 - - 1,25 0,21 - - 0,00 0,00 0,00 - - 2,20 0,31
Lampiran 7. Data Transformasi Bobot Basah Kalus √x + 0,5
Perlakuan Ulangan Total Rataan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 0,74 - 0,71 - - - 0,72 0,71 0,71 0,72 0,71 0,71 0,71 - 0,71 7,14 0,71
E1M1 0,71 0,71 - 0,71 0,93 - - 0,83 - 0,71 - - 0,90 - - 5,48 0,78
E1M2 0,71 1,16 0,71 0,71 0,71 0,94 - 0,71 0,71 - 0,71 1,09 0,71 - 0,71 9,57 0,80
E1M3 - - - 0,71 0,98 1,12 0,71 - - - 1,04 - - 4,54 0,91
E1M4 - 1,10 0,71 - - - 0,71 0,71 - 1,09 0,71 - - 1,08 0,71 6,79 0,85
E1M5 1,34 0,71 0,71 1,32 0,71 0,71 0,71 - 0,71 - 1,28 0,71 - 0,71 - 9,60 0,87 E2M0 - 0,71 0,71 0,71 0,71 - - 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 8,49 0,71 E2M1 0,73 0,71 0,71 0,71 0,71 - 0,71 - 0,74 0,71 0,76 - - 0,71 - 7,18 0,72
E2M2 - - - 0,76 0,71 - - 0,71 0,76 - - - 0,76 3,69 0,74
E2M3 - 0,71 0,71 0,71 1,27 - - - 1,26 - 0,97 - - - 0,71 6,32 0,90
E2M4 - 1,29 - - 0,71 0,71 - - 0,71 1,16 0,71 - 1,00 - - 6,28 0,90
E2M5 - 0,71 - - - 1,42 0,71 - - 0,71 - 0,75 - 1,22 - 5,52 0,92
E3M0 0,71 - - 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 - - - 4,24 0,71
E3M1 - - 0,71 - 0,71 - - 0,71 - - 0,71 - - - 0,71 3,54 0,71
E3M2 0,71 - 0,89 0,71 - 0,71 1,16 - - 0,92 - 0,71 - - - 5,80 0,83
E3M3 0,71 - - 0,71 - - - 0,71 - - - 0,71 2,83 0,71
E3M4 - 0,71 - 0,71 0,71 - - - - 0,71 - - - 0,71 0,71 4,24 0,71
E3M5 - - 1,12 0,71 - - 1,32 0,84 - - 0,71 0,71 0,71 - - 6,11 0,87
Lampiran 8. Daftar Sidik Ragam Bobot Basah Kalus (gr)
SK db JK KT F.Hit 0,05 Ket
Perlakuan
E 2 0,05 0,03 0,86 3,07 tn
M 5 0,55 0,11 3,74 2,29 **
E*M
(interaksi) 10 0,25 0,02 0,85 1,91 tn
Galat 118 3,46 0,03
Total 135 4,31
FK= 85,366
Lampiran 9. Data Pengamatan Bobot Kering Kalus (gr)
Perlakuan Ulangan TOTAL RATAAN
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 0,01 - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 - 0,00 0,02 0,00
E1M1 0,00 0,00 - 0,00 0,18 - - 0,05 - 0,00 - - 0,13 - - 0,36 0,05
E1M2 0,00 0,59 0,00 0,00 0,00 0,23 - 0,00 0,00 - 0,00 0,39 0,00 - 0,00 1,21 0,10
E1M3 - - - 0,00 0,17 0,53 0,00 - - - 0,33 - - 1,04 0,21
E1M4 - 0,29 0,00 - - - 0,00 0,00 - 0,39 0,00 - - 0,35 0,00 1,02 0,13
E1M5 1,10 0,00 0,00 0,82 0,00 0,00 0,00 - 0,00 - 0,96 0,00 - 0,00 - 2,88 0,26
E2M0 - 0,00 0,00 0,00 0,00 - - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
E2M1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 - 0,00 - 0,01 0,00 0,01 - - 0,00 - 0,02 0,00
E2M2 - - - 0,02 0,00 - - 0,00 0,00 - - - 0,01 0,03 0,01
E2M3 - 0,00 0,00 0,00 0,39 - - - 0,55 - 0,50 - - - 0,00 1,44 0,21
E2M4 - 0,54 - - 0,00 0,00 - - 0,00 0,63 0,00 - 0,19 - - 1,36 0,19
E2M5 - 0,00 - - - 0,80 0,00 - - 0,00 - 0,04 - 0,80 - 1,65 0,27
E3M0 0,00 - - 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 - - - 0,00 0,00
E3M1 - - 0,00 - 0,00 - - 0,00 - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00
E3M2 0,00 - 0,13 0,00 - 0,00 0,28 - - 0,25 - 0,00 - - - 0,65 0,09
E3M3 0,00 - - 0,00 - - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00
E3M4 - 0,00 - 0,00 0,00 - - - - 0,00 - - - 0,00 0,00 0,00 0,00
E3M5 - - 0,43 0,00 - - 0,57 0,14 - - 0,00 0,00 0,00 - - 1,15 0,16
Lampiran 10. Data Transformasi Bobot Kering Kalus √x + 0,5
Perlakuan Ulangan Total Rataan
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E1M0 0,71 - 0,71 - - - 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 - 0,71 7,08 0,71
E1M1 0,71 0,71 - 0,71 0,82 - - 0,74 - 0,71 - - 0,79 - - 5,19 0,74
E1M2 0,71 1,05 0,71 0,71 0,71 0,85 - 0,71 0,71 - 0,71 0,94 0,71 - 0,71 9,21 0,77
E1M3 - - - 0,71 0,82 1,01 0,71 - - - 0,91 - - 4,16 0,83
E1M4 - 0,89 0,71 - - - 0,71 0,71 - 0,94 0,71 - - 0,92 0,71 6,28 0,79
E1M5 1,26 0,71 0,71 1,15 0,71 0,71 0,71 - 0,71 - 1,21 0,71 - 0,71 - 9,28 0,84 E2M0 - 0,71 0,71 0,71 0,71 - - 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 8,49 0,71 E2M1 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 - 0,71 - 0,71 0,71 0,71 - - 0,71 - 7,09 0,71
E2M2 - - - 0,72 0,71 - - 0,71 0,71 - - - 0,71 3,56 0,71
E2M3 - 0,71 0,71 0,71 0,94 - - - 1,02 - 1,00 - - - 0,71 5,80 0,83
E2M4 - 1,02 - - 0,71 0,71 - - 0,71 1,06 0,71 - 0,83 - - 5,74 0,82
E2M5 - 0,71 - - - 1,14 0,71 - - 0,71 - 0,73 - 1,14 - 5,14 0,86
E3M0 0,71 - - 0,71 0,71 0,71 0,71 0,71 - - - 4,24 0,71
E3M1 - - 0,71 - 0,71 - - 0,71 - - 0,71 - - - 0,71 3,54 0,71
E3M2 0,71 - 0,79 0,71 - 0,71 0,88 - - 0,87 - 0,71 - - - 5,37 0,77
E3M3 0,71 - - 0,71 - - - 0,71 - - - 0,71 2,83 0,71
E3M4 - 0,71 - 0,71 0,71 - - - - 0,71 - - - 0,71 0,71 4,24 0,71
E3M5 - - 0,97 0,71 - - 1,04 0,80 - - 0,71 0,71 0,71 - - 5,63 0,80
Lampiran 11. Daftar Sidik Ragam Bobot Kering Kalus (gr)
SK Db JK KT F.Hit 0,05 Ket
Perlakuan
E 2 0,03 0,02 1,21 3,07 tn
M 5 0,28 0,06 4,24 2,29 **
E*M (interaksi) 10 0,08 0,01 0,64 1,91 tn
Galat 118 1,56 0,01
Total 135 1,96
FK= 78,3763
Lampiran 12. Hasil Absorban Spektrofotometer Genesys 20 dan Total Antosianin
Persiapan larutan sampel (Abeda et al.,2014).
Untuk membuat pelarut digunakan Trifluoride acid (TFA) sebanyak 1 ml dan etanol 999 ml. Selanjutnya timbang kalus kering sebanyak 50 mg kedalam erlenmeyer 100 ml dan tambahkan 10 ml pelarut, kemudian di simpan pada suhu 4oC selama ± 24 jam.
Pembuatan buffer pH 1
Untuk membuat buffer pH 1 digunakan KCl sebanyak 7,4551g dicampur dengan 980 ml akuades dan diatur hingga mencapai pH 1 dengan menggunakan HCl pekat. Selanjutnya larutan dipindahkan ke dalam labu ukur 1 L dan ditambahkan akuades sampai tanda batas.
Pembuatan buffer pH 4,5
Untuk membuat buffer pH 4,50 digunakan CH3CO2Na. 3H2O sebanyak
13,6 g dicampur dengan 950 ml akuades. Kemudian pH diukur dan diatur dengan asam asetat pekat hingga diperoleh larutan dengan pH 4,5. Selanjutnya larutan dipindahkan ke dalam labu ukur 1000 ml dan diencerkan dengan akuades sampai volume mencapai 1000 ml.
Pengukuran dan perhitungan total antosianin
Absorbansi (A) dari sampel yang telah di larutkan ditentukan dengan rumus : A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5.
Kandungan pigmen antosianin pada sampel dihitung dengan rumus : Total Antosianin =
x 1000 Keterangan :
BM = Berat molekul = 449,20 (dinyatakan sebagai sianidin-3-glikosida) FP = Faktor pengencer
VE = Volume ekstrak BKK = Berat Kering Kalus (g)
ε = Koefisien absorbsivitas molar = 26900 (dinyatakan sebagai sianidin-3-glikosida).
Diketahui :
Absorban dari pelarut (TFA : aquades : etanol) pH 1 : A521 nm = 0,038
A700 nm = 0,034 pH 4,5 : A521 nm = 0,037
A700 nm = 0,035 FP = 3,33
VE = 10 ml = 0,01 L BKK = 0,05 gr 1. E1M1 :
pH 1 : A521 nm = 0,040 A700 nm = 0,034 pH 4,5 : A521nm = 0,038
A700 nm = 0,036
A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5
A = [(0,040-0,038)-(0,034-0,034) pH1 – (0,038-0,037)-(0,036-0,035)pH4,5] A = (0,02-0) pH1 – (0,001-0,001) pH 4,5
A = 0,001
Total antosianin =
2. E1M2 :
A = [(0,042-0,038)-(0,035-0,034) pH1 – (0,039-0,037)-(0,035-0,035) pH4,5] A = (0,004-0,001) pH1 – (0,002-0) pH 4,5
A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5
A = [(0,063-0,038)-(0,047-0,034) pH1 – (0,053-0,037)-(0,042-0,035) pH4,5] A = (0,025-0,013) pH1 – (0,016-0,007) pH 4,5
A = 0,003
Total antosianin =
x 1000 =
x 1000 = 0,03 mg/g
5. E1M5 :
pH 1 : A521 nm = 0,057 A700 nm = 0,044 pH 4,5 : A521nm = 0,049
A700 nm = 0,040
A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5
A = [(0,057-0,038)-(0,044-0,034) pH1 – (0,049-0,037)-(0,040-0,035)pH4,5] A = (0,019-0,01) pH1 – (0,012-0,005) pH 4,5
A = 0,002
Total antosianin =
x 1000 =
x 1000 = 0,02 mg/g
6. E2M3 :
pH 1 : A521 nm = 0,054 A700 nm = 0,043 pH 4,5 : A521nm = 0,041
A = 0,004
A = [(0,068-0,038)-(0,044-0,034) pH1 – (0,057-0,037)-(0,042-0,035)pH4,5] A = (0,03-0,01) pH1 – (0,02-0,007) pH 4,5
A = [(0,051-0,038)-(0,041-0,034) pH1 – (0,038-0,037)-(0,035-0,035)pH4,5] A = (0,013-0,007) pH1 – (0,001-0) pH 4,5
A = 0,005
Total antosianin =
=
x 1000 = 0,06 mg/g
9. E3M2 :
pH 1 : A521 nm = 0,058 A700 nm = 0,046 pH 4,5 : A521nm = 0,047
A700 nm = 0,038
A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5
A = [(0,058-0,038)-(0,046-0,034) pH1 – (0,047-0,037)-(0,038-0,035)pH4,5] A = (0,02-0,012) pH1 – (0,01-0,003) pH 4,5
A = 0,001
Total antosianin =
x 1000 =
x 1000 = 0,01 mg/g
10. E3M5 :
pH 1 : A521 nm = 0,053 A700 nm = 0,043 pH 4,5 : A521nm = 0,038
A700 nm = 0,035
A = (A521-A700)pH 1 – (A521-A700)pH 4,5
A = [(0,053-0,038)-(0,043-0,034) pH1 – (0,038-0,037)-(0,035-0,035)pH4,5] A = (0,015-0,009) pH1 – (0,001-0) pH 4,5
A = 0,005
Total antosianin =
Lampiran 13. Kadar Antosianin Kalus Tanaman Rosella Perlakuan Kadar Antosianin (mg/g )
E1M0 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis)
E1M1 0,01
E1M2 0,01
E1M3 0,14
E1M4 0,03
E1M5 0,02
E2M0 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis) E2M1 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis) E2M2 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis)
E2M3 0,04
E2M4 0,08
E2M5 0,06
E3M0 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis) E3M1 - tidak ada (biomassa kalus tidak mencukupi untuk dianalis)
E3M2 0,01
E3M3
- tidak ada (kalus mengalami kontaminasi pada 3 MST subkultur)
E3M4
- tidak ada (kalus mengalami kontaminasi pada 3 MST subkultur)
E3M5 0,06
Lampiran 14. Gambar Kalus
E1M0 E1M1 E1M2 E1M3 E1M4 E1M5
Lampiran 15.Komposisi Media Murashige dan Skoog (MS)
(Sumber: Murashige and Skoog, 1962)
Bahan Kimia Konsentrasi Media (ppm)
Lampiran 16. Kegiatan Penelitian
Jenis Kegiatan Minggu ke –
