1
SKRIPSI
Oleh:
MARHAMAH NUR AZIZAH
K 100110006
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA
DARI EKSTRAK DAUN JATI BELANDA (
Guazuma ulmifolia
Lamk.) TERHADAP SEL T47D DENGAN METODE
FLOW CYTOMETRY
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
MARHAMAH NUR AZIZAH
K100110006
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh
Alhamdulillahirobbil’alamin, atas rahmat dari Allah SW yang telah
memberikan segala nikmat dan karunia-Nya kepada penulis, hanya dengan kehendak-Nya penulis mampu menyelesaikan skripsi dengan judul
“PENENTUAN POTENSI INDUKSI APOPTOSIS TILIROSIDA DARI
EKSTRAK DAUN JATI BELANDA (Guazuma ulmifolia Lamk.)
TERHADAP SEL T47D DENGAN METODE FLOW CYTOMETRY”. Tak lupa solawat serta salam penulis panjatkan kepada Nabi Muhammad SAW, sebagai rahmatan lil alamin.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan lancar tanpa adanya bantuan, dukungan dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka, penulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi UMS 2. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. dan Ibu Ika Trisharyanti D. K.,
M.Farm., Apt selaku dosen pembimbing.
3. Bapak Andi Suhendi, M.Sc., Apt, selaku pembimbing akademik.
4. Orang tua saya Bapak Bajuri dan Ibu Sri Setyaningsih serta seluruh keluarga besar Sriyana Harjana
5. Tim peneliti tilirosida daun jati belanda, Rizqi O., Risqie C.K, Fadhila D.S, Lita R.O., Faridha C.D., Drajad T.W., Ahmad Rifki K.
6. Alifah, Rani, Amin, Ela, Eva, Listya, Vina, Retno, Meda, Sinta, Sains 2011, dan Angkatan 2011 yang selalu memberikan semangat.
Semoga penelitian ini bermanfaat bagi pembaca untuk pengetahuan di bidang akademik dan kesehatan.
Wassalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh.
Surakarta, Januari 2015
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PENGAJUAN ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
DEKLARASI ... iv
KATA PENGANTAR ... v
DAFTAR ISI ... vi
DAFTAR GAMBAR ... viii
DAFTAR TABEL ... ix
DAFTAR LAMPIRAN ... x
DAFTAR SINGKATAN ... x
INTISARI ... xiv
BAB I. PENDAHULUAN ... 1
A.Latar Belakang ... 1
B.Perumusan Masalah ... 3
C.Tujuan Penelitian ... 3
D.Tinjauan Pustaka ... 3
1. Tumbuhan jati belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) ... 3
a. Klasifikasi ... 3
6. Analisis apoptosis dengan annexin V-PI... 12
E.Landasan Teori ... 13
F. Hipotesis ... 14
1. Kategori Penelitian ... 15
2. Variabel Penelitian ... 15
3. Alat dan Bahan ... 15
4. Tempat Penelitian ... 16
5. Jalannya Penelitian ... 16
a. Pengumpulan sampel ... 16
b. Sterilisasi LAF ... 16
c. Sterilisasi alat ... 16
d. Pembuatan media RPMI ... 16
e. Penumbuhan sel ... 16
f. Pemanenan sel ... 17
g. Perhitungan sel ... 17
h. Perlakuan sel ... 17
i. Pembuatan reagen flow cytometry ... 18
j. Persiapan sampel ... 18
k. Analisis dan interpretasi data ... 19
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 20
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ... 25
A. Kesimpulan ... 25
B. Saran ... 25
DAFTAR PUSTAKA ... 26
LAMPIRAN ... 32
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Struktur tilirosida... 4
Gambar 2. Sel T47D ... 6
Gambar 3. Perbedaan mekanisme sel nekrosis dan apoptosis ... 8
Gambar 4. Jalur apoptosis melalui jalur intrinsik dan ekstrinsik ... 10
Gambar 5. Skema flow cytometer ... 11
Gambar 6. Mekanisme reaksi dari reagen Annexin V-PI dan sel ... 12
Gambar 7. Hasil persebaran sel setelah induksi dengan tilirosida ¼ IC50 ... 20
Gambar 8. Hasil analisis dengan cell quest pada konsentrasi ¼ IC50 ... 21
Gambar 9. Grafik apoptosis awal, apoptosis akhir dan nekrosis pada perlakuan tilirosida ... 22
Gambar 10. Hasil percobaan kontrol sel, perlakuan dengan tilirosida dan doksorubisin ... 24
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Hasil penelitian antikanker tilirosida secara in vitro ... 13 Tabel 2. Hasil persentase induksi apoptosis pada sel T47D ... 21
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Izin Penelitian dari Lab. Parasitologi FK UGM ... 33
Lampiran 2. Ethical Clearence dari Komisi Etik FK UGM ... 34
Lampiran 3. Perhitungan Kepadatan Sel ... 35
Lampiran 4. Pembuatan Stok dan Seri Konsentrasi ... 36
Lampiran 5. Perhitungan Persentase Populasi Sel T47D ... 37
Lampiran 6. Hasil Persebaran dan Hasil Analisis dengan Program cell quest ... 38
DAFTAR SINGKATAN
µL = mikroliter
µM = mikromolar
ºC = derajat celcius
AIF = Apoptosis Inducing Factor
Apaf-1 = Apoptotic Protein Activating Factor-1 Bax = Bcl2 associated protein X
Bcl-2 = B-cell lymphoma protein-2 Bcl-XL = B cell leukemia XL Bcl-XS = B cell leukemia XS
Bfl-1 = Benign Familial Leukopenia
BPOM = Badan Pengawas Obat dan Makanan C30H26013 = Karbon 30 Hidrogen 26 Oksigen 13
Ca2+ = Calsium 2+
CCRF-CEM = Human T-lymphoblastic leukemic CO2 = karbondioksida
COX-2 = cyclooxygenase-2
Da = Dalton
DCIS = ductal carcinoma in situ
DIABLO = direct IAP Binding protein with Low pI DISC = death-inducing signaling complex DNA = deoxyribonucleic acid
DR5 = Dopamine Receptor 5
EB = Ethidium Bromida
EDTA = Ethylene Diamine Tetraacetic Acid
ER = estrogen receptor
FACSCalibour = Fluorescence Activated Cell Sorting Calibur FADD = Fas-associated death domain
Fas-L = Fas Ligand
FBS = Fetal Bovine Serum Fmol/mL = femtomole per mililiter FSC = forward-angle light scatter
G1 = Gap 1
GFP = green fluorescent protein
HepG2 = Hepatoma G2
HO33342 = Hoechst 33342
HPTE = High Profile Training Event
HtrA2 = high temperature requirement protein A IC50 = Inhibitory Concentration dalam 50% populasi
LAF = Laminar Air Flow L292 = TNF-α sensitive cell line MB435 = ductal carcinoma
MCF-7 = Michigan Cancer Foundation–7 Mcl-1 = Myeloid Cell Leukemia 1
mg = miligram
mL = mililiter
mm = milimeter
mRNA = messenger Ribonucleic Acid MTS = mitochondrial signal NAMALWA = Burkitt’s lymphoma cell
NF-κB = Nuclear Factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells
nm = nanometer
NO = Nitric Oxide
Noxa = Nitrogen and Oxygen-α
NRCS = Natural Resources Conservation Service
OH = hidroksil
p53 = protein 53
PBS = Phosphate Buffer Saline PC-3 = Prostate Cancer Cell Line PGE2 = prostaglandin E2
pH = paul Hoffman
PI = Propidium Iodida ppm = part per million
PR = progesterone receptor
PS = Phosphatidilserine
PUMA = Portland United Messenger Association rpm = rotation per minutes
S = sintesis
SF268 = Glioma/Astrocrytoma Cell Line
Smac = second mitochondria-derived activator of caspase SSC = side-angle light scatter
T47D = Human ductal breast epithelial tumor cell line TNF-α = Tumor Necrosis Factor alpha
TNFR1 = type 1 TNF receptor
TRADD = TNF receptor-associated death domain TRAIL = TNF-α-related apoptosis-inducing ligand
UV = Ultraviolet
= rata-rata
INTISARI
Jati belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) mempunyai aktivitas sitotoksik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui persentase induksi apoptosis tilirosida dari daun jati belanda terhadap sel T47D.
Induksi apoptosis dilakukan dengan metode flow cytometry dengan alat FACSCaliburTM menggunakan reagen Annexin V dan zat pewarna PI (Propidium Iodida). Konsentrasi induksi apoptosis yang digunakan berdasarkan pada uji MTT assay (IC50) tilirosida pada sel T47D, yaitu sebesar 60 µg/mL. Konsentrasi yang
dibutuhkan yakni 1 IC50, ½ IC50, dan ¼ IC50.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa induksi apoptosis awal tilirosida tertinggi yaitu 11,01 % pada konsentrasi ¼ IC50, dan apoptosis akhir tertinggi
yaitu 4,93 % pada konsentrasi ½ IC50. Jika persentase tersebut dibandingkan
dengan kontrol,persentase induksi apoptosis tilirosida lebih kecil. Jadi tilirosida tidak mampu menginduksi apoptosis sel kanker payudara T47D.
Kata kunci : Tilirosida, Guazuma ulmifolia Lamk., apoptosis, flow cytometry, sel T47D
