IR - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA DISERTASI

(1)

DISERTASI

MEKANISME KERJA EKSTRAK ETANOL BUAH MERAH (PANDANUS CONOIDEUS LAM) PADA PERBAIKAN FOLIKULOGENESIS

OVARIUM MENCIT MODEL ENDOMETRIOSIS MELALUI ANALISIS EKSPRESI HYALURONAN, KL, c-Kit, GDF-9 DAN BMP-15

HARDYAN SAUQI

PROGRAM STUDI ILMU KEDOKTERAN JENJANG DOKTOR FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

(2)

ii

DISERTASI

HARDYAN SAUQI

SURABAYA 2021

(3)

DISERTASI

Untuk Memperoleh Gelar Doktor

dalam Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor pada Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga

telah dipertahankan di hadapan Panitia Ujian Doktor Terbuka

Pada hari : Selasa Tanggal ; 24 Nopember 2020

Pukul : 10.00 – 12.00 WIB

Oleh

HARDYAN SAUQI 011717017313

SURABAYA 2021

(4)

(5)

PENETAPAN PANITIA PENGUJI

Disertasi ini telah diuji dan dinilai oleh panitia penguji Ujian Tahap 1 (Tertutup)

pada Tanggal 3 Juni 2020

Panitia penguji :

Ketua : 1. Prof. Dr. I Ketut Sudiana, Drs., M.Si.

Anggota : 2. Prof. Dr. H. Budi Santoso, dr. Sp.OG(K) 3. Prof. Dr. Widjiati, drh., M.Si.

4. Prof. Dr. Yoes Prijatna Dahlan, dr., M.Sc., Sp.Par(K) 5. Widodo J. Pudjirahardjo, dr., MS., MPH., Ph.D. 6. Prof. Dr. Hendy Hendarto, dr. Sp.OG(K) 7. Dr. Arsana Wiyasa, IW, dr. Sp.OG(K)

Ditetapkan dengan Surat Keputusan

Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Tentang Panitia Penguji Disertasi

Nomor : 210/ UN3.1.2/HK.04/2020 Tanggal : 3 Juni 2020

(6)

vi

UCAPAN TERIMA KASIH

Alhamdulillahi Rabbil Alamin, puji syukur kehadirat Allah SWT yang Maha Pengasih lagi Maha Penyayang atas segala rahmat dan Karunia-Nya sehingga disertasi ini dapat diselesaikan. Disertasi ini dapat diselesaikan berkat dorongan, bimbingan, arahan, saran dan koreksi dari Tim Promotor, oleh karena itu dengan segala kerendahan hati, perkenankanlah saya menghaturkan terima kasih yang tulus serta penghargaan yang setinggi-tingginya kepada yang terhormat :

Prof. Dr. H. Budi Santoso, dr., Sp.OG(K), sebagai promotor yang dengan penuh pengertian, perhatian dan kesabaran telah memberikan dukungan mental, meluangkan banyak waktu dan memberikan masukan, saya ucapkan terima kasih yang tak terhingga.

Prof. Dr. Widjiati, drh., M.Si., sebagai ko-promotor yang telah memberikan bimbingan yang besar sekali manfaatnya bagi kemajuan cara berpikir ilmiah saya, memberikan arahan dan bantuan dalam proses penelitian dan penyusunan disertasi ini, saya ucapkan terima kasih yang sedalam-dalamnya dan penghargaan yang setinggi-tingginya.

Dengan selesainya disertasi ini perkenankanlah saya juga mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

Prof. Dr. Mohammad Nasih, SE., MT., Ak., CMA., selaku Rektor Universitas Airlangga atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada saya untuk mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.

Prof. Dr. H. Joewono Soeroso, dr. M.Sc, Sp.PD-KR, selaku Ketua Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga yang telah memberikan

(7)

bimbingan dan telah membantu dalam proses pendidikan sampai dengan pelaksanaan ujian kualifikasi, proposal dan disertasi.

Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, Prof . Dr. H. Budi Santoso, dr., Sp.OG(K), juga secara khusus kepada yang terhormat mantan Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Prof. Dr. Soetojo, dr., Sp.U(K) dan Direktur RSUD Ulin Banjarmasin : dr. Hj. Suciati M.Kes yang telah memberikan kesempatan kepada saya untuk mengikuti pendidikan pada Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.

Kepala Bagian Ilmu Kebidanan dan Kandungan RSUD Ulin / Fakultas Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat, Dr. H. Pribakti Budinurdjaja dr., Sp.OG(K) yang telah memberikan kesempatan dan dukungan kepada saya untuk mengikuti pendidikan pada Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.

Para dosen saya yang saya hormati Prof. Dr. Suhartono Taat Putra, dr., MS; Prof. Dr. I Ketut Sudiana, Drs., MS; Dr. Gondo Mastutik, drh., M.Kes; Prof. Dr. Harjanto JM, dr., AIFM; Widodo JP, dr., MS., MPH., Ph.D; Prof. Dr. M. Zainuddin, Apt.; Dr. Florentina Sustini, dr., MS; Dr. Sunarjo, dr., MS., MSc; Dr. Susilowati Andayani, dr., MS; Dr. H. Budi Utomo, dr., M.Kes; Prof. Dr. Indri Safitri Mukono, dr., MS; Prof. Purnomo Suryohudoyo, dr., Sp.BK; Prof. Dr. Yoes Prijatna Dachlan, dr., MSc, Sp.ParK; Prof. Dr. Hendy Hendarto, dr., Sp.OG(K); Dr. Hari Basuki Notobroto dr., M.Kes yang telah memberikan bimbingan, saran dan koreksi yang sangat berharga sejak kegiatan penyusunan proposal hingga penyusunan naskah disertasi ini.

Semua Staf Pengajar dan semua Tim Penguji pada Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga yang telah memberikan ilmu dasar dan ilmu

(8)

viii

terapan yang sangat bermanfaat serta kritik, saran dan perbaikan pada proposal penelitian untuk penulisan disertasi saya.

Terima kasih kepada semua pihak yang telah memberikan dukungan dan bantuannya pada proses pendidikan dan penelitian untuk penulisan disertasi saya. Penulisan disertasi ini tidak mungkin dapat diselesaikan tanpa bantuan dari semua staf Bagian Ilmu Kebidanan dan Kandungan RSUD Ulin / Fakultas Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat.

Seluruh rekan pada Program Studi Ilmu Kedokteran Jenjang Doktor Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga dan sahabat MAGENTA WJP Study Club yang telah bekerja sama dan saling memberi motivasi untuk menyelesaikan pendidikan ini.

Akhirnya dalam kesempatan ini saya sampaikan rasa hormat dan kasih sayang saya kepada:

Orang tua saya ayahanda H. Syahbani Aris S.sos MM dan Ibunda Hj. Faridawaty yang telah mengasuh, mendidik, mengayomi, menafkahi, memberi tauladan yang baik dengan penuh kasih sayang hingga saat ini.

Kedua saudara kandung saya Hj. Maulina Risda Sary beserta suami Rizal Assidiqi, Taufiq Syahrial beserta istri Yosi yang selalu membantu dalam menjalani kehidupan dan pendidikan.

Istri saya Ucha Fadillah yang telah mendampingi saya menjalani kehidupan dan proses pendidikan. Juga kepada putra terkasih Radha Syafa Ardya Muharram (Alm), Muhammad Erfi Mohtesar dan putri tercinta Shua Azizah yang selalu menjadi sumber kebahagiaan kami.

Terima kasih saya sampaikan kepada semua pihak yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu, yang telah memotivasi, mendukung dan membantu hingga disertasi ini dapat disusun.

(9)

Semoga hasil penelitian ini bermanfaat bagi umat manusia pada umumnya dan ilmu kedokteran pada khususnya. Semoga Allah Subhana wa Ta'alla melimpahkan taufik serta hidayah-Nya kepada semua pihak yang telah membantu penyelesaian disertasi ini. Amin.

(10)

x

RINGKASAN

Mekanisme Kerja Ekstrak Etanol Buah Merah (Pandanus Conoideus Lam) pada Perbaikan Folikulogenesis Ovarium Mencit Model Endometriosis

Melalui Analisis Ekspresi Hyaluronan, KL, c-Kit, GDF-9 dan BMP-15

Endometriosis masih merupakan masalah bagi kesehatan reproduksi wanita. Endometriosis merupakan penyakit kronik yang diderita oleh 1 dari 7 wanita usia reproduktif. Walaupun penyakit ini tidak mengancam jiwa tetapi dapat menyebabkan keluhan nyeri yang berat termasuk dispareni, dismenore, nyeri pelvis serta masalah infertilitas. Gangguan folikulogenesis menyebabkan menurunnya kualitas oosit pada pasien infertil dengan endometriosis.

Tujuan Penelitian adalah untuk menjelaskan pengaruh dan mekanisme pemberian ekstrak etanol buah merah (Pandanus Conoideus Lam.) terhadap perubahan kadar SOD, ekspresi TNF-α, NF-κβ, Hyaluronan, Kit Ligand, c-Kit, GDF-9 dan BMP-15 pada mencit model endometriosis.

Jenis penelitian adalah eksperimental dengan design penelitian pre post test design with different sample. Penelitian dilakukan di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Sampel penelitian ini adalah mencit coba (Mus musculus) unit hewan coba laboratorium. Pengambilan sampel pada penelitian ini dilakukan secara randomisasi. Mencit coba dibagi menjadi 3 kelompok, kelompok mencit model endometriosis yang diberikan ekstrak etanol buah merah, kelompok mencit normal tanpa perlakuan dan kelompok mencit model endometriosis tanpa perlakuan. Selanjutnya dilakukan pembedahan perut mencit dan melakukan pemeriksaan ELISA untuk mengetahui kadar SOD dan melakukan pengecatan imunohistokimia untuk menghitung ekspresi TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit dan BMP-15.

Rancangan penelitian disusun untuk membuktikan bahwa terdapat perbedaan kadar SOD, ekspresi TNF-α, NF-κβ, Hyaluronan, Kit Ligand, c-Kit, GDF-9 dan BMP-15 pada ketiga kelompok mencit coba. Uji beda dari data hasil penelitian dianalisis dengan Anova dan dilakukan uji lebih lanjut dengan menggunakan LSD test. Sedangkan uji regresi dilakukan untuk menilai pengaruh perubahan pada kadar SOD, ekspresi TNF-α, NF-κβ, Hyaluronan, Kit Ligand, c-Kit, GDF-9 dan BMP-15.

Hasil penelitian menunjukkan perbedaan bermakna kadar SOD dan ekspresi Tα, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit dan BMP-15 pada ketiga kelompok (p<0.05) dan korelasi yang bermakna antara pemberian ekstrak buah merah terhadap peningkatan kadar SOD, penurunan ekspresi TNF-α dan penurunan NF-κβ (p<0.05), korelasi bermakna antara peningkatan kadar SOD dan penurunan ekspresi TNF-α terhadap penurunan ekspresi NF-κβ (p<0.05), korelasi bermakna antara penurunan ekspresi NF-κβ terhadap penurunan ekspresi c-Kit, Kit Ligand, Hyaluronan dan peningkatan ekspresi GDF-9 (p<0.05), korelasi bermakna antara penurunan ekspresi c-Kit dan Kit Ligand terhadap peningkatan ekspresi BMP-15 (p<0.05).

(11)

Kesimpulan penelitian ini adalah ada mekanisme kerja ekstrak buah merah terhadap perbaikan folikulogenesis melalui perubahan kadar SOD dan ekspresi TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit dan BMP-15.

Penelitian ini merupakan penelitian pertama yang mengeksplorasi kadar SOD dan ekspresi

TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit dan BMP-15 secara menyeluruh. Diperlukan penelitian lanjutan untuk mengetahui mekanisme ekstrak etanol buah merah dalam meningkatkan keberhasilan fertilisasi pada kasus endometriosis serta pengembangan dalam pemanfaatan Stem Cell Factor / c-Kit dalam memperbaiki gangguan folikulogenesis pada kasus-kasus infertilitas.

(12)

xii

SUMMARY

The Mechanism of Red Fruit’s Ethanol Extract (Pandanus Conoideus Lam) in Improving Ovarian Folliculogenesis on Endometriosis Modelled Mice Through Hyaluronan, KL,

c-Kit, GDF-9 and BMP-15 Expression Analysis

Endometriosis still be a problem for women’s reproductive health. Endometriosis is chronic disease that was suffered 1 of 7 reproductive aged women. Although this disease is not life threatening, this disease causing severe pain symptoms included dyspareunia, dysmenorrhea, pelvic pain and infertility. Folliculogenesis disturbance also decrease the quality of oocyte in infertile patient with endometriosis.

The purpose of this study was to explain the effect and mechanism of administration red fruit’s ethanol extract to alter the SOD level, TNF-α, NF-κβ, Hyaluronan, Kit Ligand, c-Kit, GDF-9 and BMP-15 expression in endometriosis mice model.

The design of this study was an experimental with pre and post test examination with different sample. This study was conducted in Faculty of Veterinary Medicine Airlangga University. Sample of this study was experimental mice (Mus musculus) laboratory experimental animal unit. Sampling method of this study was randomized sampling method. Experimental mice was divided to 3 groups, endometriosis mice model groups that was given fed fruit’s ethanol extract, normal experimental mice group without intervention and endometriosis mice model groups without intervention. Furthermore, abdominal surgery was performed and was continued with ELISA examination to measure SOD level and immunohistochemical staining to measure expression of TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15.

The purpose of this study is to prove the difference SOD level, expression TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15 among 3 study groups. Comparative test from study results data was analysed with anova and was continued with LSD test. Regression test has been performed to assess effect of alteration SOD level, TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15 expression.

The result of this experiment are significant difference of SOD level, TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15 expression among 3 groups (p<0.05). There were significant correlations between red fruit’s ethanol extract administration and increasing SOD level, decreasing of TNF-α expression and decreasing of NF-κβ (p<0.05), increasing SOD level and decreasing of TNF-α expression to decreasing of NF-κβ (p<0.05), decreasing of NF-κβ and decreasing of c-Kit, Kit Ligand, Hyaluronan expression and increasing DGF-9 expression (p<0.05), and decreasing of c-Kit and Kit Ligand to increasing BMP 15 expression (p<0.05)

As a conclusion, red fruit’s extract had an effect on improving folliculogenesis through alteration SOD level and TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15 expression. This is the first study that explore SOD level and TNF-α, NF-κβ, GDF-9, hyaluronan, KL, c-Kit and BMP-15 expression generally. A further study is required to explore the mechanism of red fruit’s extract for improving success rate of fertilization on endometriosis case and development of stem cell factor/c-Kit utilization for improving folliculogenesis in infertility cases.