Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol dan Fraksi n-Heksana serta Etil Asetat Teripang Jenis Holothuria atra Jaeger Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

(1)

48

Lampiran 1. Hasil identifikasi teripang Holothuria atra Jaeger

(2)

Lampiran 2. Bagan penelitian

dicuci hingga bersih

ditiriskan hingga tidak ada lagi air

ditimbang

dikeringkan di lemari pengering

dihaluskan dan ditimbang beratnya Teripang segar

Teripang bersih

Pembuatan ekstrak etanol secara perkolasi

Ekstraksi Cair-cair

Uji toksisitas dari ekstrak etanol dan fraksi teripang Holothuria atra

(3)

50

Lampiran 3. Gambar teripang segar dan yang telah dibersihkan

Gambar teripang segar

Gambar teripang yang telah dibersihkan

(4)

Lampiran 4. Gambar simplisia dan serbuk teripang

Gambar simplisia teripang

(5)

52

Lampiran 5. Mikroskopik teripang Holothuria atra Jaeger pada pembesaran 10x40

Keterangan :

1. Spikula tipe pseudo-button 2. Spikula tipe rod

3. Spikula tipe rosettes

3 2 1

(6)

Lampiran 6. Perhitungan pemeriksaan kadar air dari serbuk simplisia hewan teripang Holothuria atra Jaeger

% Kadar air simplisia =Volume air (ml)

Berat sampel (g) x 100 %

No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)

1. 5.0025 1.50 2.00

3. 5.0004 2.00 2.50

1. Kadar air = 2,00– 1,50

5,0025 x 100%= 9,99%

2. Kadar air = 2,50 – 2,00

5,0004 x 100% = 9,99 % % Rata-rata kadar air = 9,99% + 9,99%

(7)

54

Lampiran 7. Bagan pembuatan ekstrak etanol simplisia hewan teripang

dimasukkan ke dalam bejana tertutup

dimaserasi dengan etanol 96% selama 3 jam, sambil sesekali diaduk

dimasukkan ke dalam perkolator

ditambahkan pelarut etanol 96% secukupnya sampai terdapat selapis peyari diatas simplisia

didiamkan selama 24 jam

dijalankan perkolator dengan kecepatan 1 ml/menit

dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 40 - 60° C ditimbang

Ekstrak kental

(45,6635 g) Serbuk simplisia

(350 g)

Perkolat

(8)

Lampiran 8. Bagan fraksinasi ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger

Fraksi n-heksana pekat (0,6424 g) Ekstrak etanol teripang (10 g)

Fraksi n-heksana Fraksi air

Fraksi air

Dikumpulkan

Dipekatkan dengan rotary evaporator

Fraksi air pekat (4,8440 g)

Dikumpulkan Dipekatkan dengan rotary evaporator Fraksi etil asetat

Fraksi etil asetat pekat (0,2296 g)

Dihomogenkan

Dimasukkan dalam corong pisah Diekstraksi dengan 50 ml n-heksana sebanyak 3 kali

Dikocok dan didiamkan sampai terbentuk dua lapisan dan dipisahkan

Diekstraksi dengan 50 ml

etil asetat sebanyak 3 kali Dikumpulkan

Dipekatkan dengan rotary evaporator

(9)

56

Lampiran 9. Wadah penetasan telur Artemia salina Leach

Keterangan:

1. Bagian besar 2. Lubang sekat 3. Bagian kecil

1 2 3

(10)

Lampiran 10. Perhitungan LC50 ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat

dan fraksi air

Tabel hasil pengujian BSLT ekstrak etanol

Ekstrak

Kons. (µg/

ml)

Jumlah hidup awal Jumlah mati _Rata -rata

*Keterangan: Kons. = Konsentrasi U = Uji

Rumus % kematian :

% kematian = uji-kontrol

total

x 100%

Tes = Jumlah kematian nauplii pada larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii pada kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

• % kematian (10 µg/ml) = 7,4−0

Tabel nilai probit dari % kematian nauplii

% Kematian Nilai Probit dari % kematian

74 5,64

94 6,55

(11)

58 Lampiran 10. (Lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan regresi untuk memperoleh LC50 dari ektrak etanol

teripang Holothuria atra Jaeger

a = (ΣXY) - (ΣX)(ΣY)/n

Jadi, persamaan regresi yang diperoleh adalah: Y= ax + b

Y = 1,225x + 4,31

Karena yang dicari adalah LC50, maka respon yang diinginkan adalah kematian

50% dari total nauplii. Dalam tabel probit untuk respon 50% adalah 5, maka untuk memperoleh LC50, y=5

Y = 1,225X + 4,31 5 = 1,225X + 4,31 1,225 X = 0,69 X = 0,5633

Konsentrasi LC50 = antilog 0,5633

(12)

Lampiran 10. (Lanjutan)

Tabel Hasil pengujian BSLT fraksi n-heksana

Ekstrak

Kons. (µg/

ml)

Jumlah hidup awal Jumlah mati

Rata

Rumus % kematian :

% kematian = uji−kontrol

total x 100%

• % kematian (10 µg/ml) = 5−0 Tabel nilai probit dari % kematian nauplii

50 5,00

78 5,77

(13)

Tabel Perhitungan persamaan regresi untuk memperoleh LC50 dari fraksi

n-heksana teripang Holothuria atra Jaeger

Y = 1,545x + 3,196

Y = 1,545X + 3,196 5 = 1,545X + 3,196 1,545X = 1,804 X = 1,1676

= 14,7096 µg/ml X (Log konsentrasi) Y (Nilai

(14)

Tabel Hasil pengujian BSLT fraksi etil asetat

Ekstrak

Kons. (µg/

ml)

Jumlah hidup awal Jumlah mati Rata -rata

Rumus % kematian :

% kematian = uji−kontrol

total x 100%

• % kematian (10 µg/ml) = 5,8−0 Tabel nilai probit dari % kematian nauplii

58 5,02

84 5,99

(15)

Tabel Perhitungan persamaan regresi untuk memperoleh LC50 dari fraksi etil

asetat teripang Holothuria atra Jaeger]

Y = 1,535x + 3,296

Y = 1,535X + 3,296 5 = 1,535X + 3,296 1,535X = 1,704 X = 1,1101

(16)

Tabel Hasil pengujian BSLT fraksi air

Ekstrak

Kons. (µg/

ml)

Jumlah hidup awal Jumlah mati Rata -rata

Rumus % kematian :

% kematian = uji-kontrol

total x 100%

Tes = Jumlah kematian nauplii pada larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii pada control Total = Jumlah nauplii yang digunakan

• % kematian (10 µg/ml) = 6,2−0 Tabel nilai probit dari % kematian nauplii

62 5,31

88 6,18

(17)

Tabel perhitungan persamaan regresi untuk memperoleh LC50 dari fraksi air

teripang Holothuria atra Jaeger

Y = 1,390x + 3,746

Y = 1,390X + 3,746 5 = 1,390X + 3,746 1,390X = 1,254 X = 0,9022

= 7,9836 µg/ml X (Log konsentrasi) Y (Nilai