Pemeriksaan Penunjang Imunologi (immunoassay)

Definisi

I mmunoassay

• I mmunoassay adalah tes atau uji yang digunakan untuk mengukur adanya antigen atau antibodi pada sampel (spesimen bilogikal)

• I mmunoassay dapat digunakan mendeteksi analyte

yang ingin diukur

• Analyte  sesuatu yg diukur dengan tes

laboratorium  dapat berupa Ag atau Ab dalam serum

Prinsip

I mmunoassay

•

Prinsip immunoassay



reaksi ikatan spesifik

Ab-Ag



membentuk kompleks Ag-Ab

•

Utk deteksi Antigen : digunakan Antibodi (monoklonal ataupun polikonal ) sehingga membentuk kompleks I mun (Ag-Ab)



kompleks imun dapat diukur secara kualitatif atau

kuantitatif

•

Serology : metode utk mendeteksi dan mengukur titer antibodi dalam serum darah dengan

menambahkan Ag spesifiknya

Pembuatan Antibodi monoklonal

Sel B

Antibodi Poliklonal



J ika hewan coba diimunisasi dengan

pr ot ein X (Ag) yg memiliki banyak epit op

t er hadap ant ibodi



klon sel B

mempr oduksi

ant ibodi

t hd pr ot ein X



Ant ibodi

mungkin akan membent uk

sej umlah par at op pr ot ein yang ber beda



Campur an Ab yg dipr oduksi oleh r espon

• Sampel yang diuji dapat berasal dari : – Antigen sample

• Cairan tubuh yang mengandung mikroba

penginfeksi dan toksin mikroba (mengandung Ag) Cth : Urine, feces, blood, skin, pus, swab, cairan

amnion, mucous, etc. – Blood antiserum sample

• Antiserum/ antisera darah mengandung Ab

terhadap infeksi tertentu  jika pasien terinfeksi oleh patogen yang dicurigai maka pada serumnya akan mengandung Ab terhadap patogen tsb.

T iter

• T iter : sejumlah Ab yang terdapat pada antiserum

 Dapat digunakan untuk menentukan sejauh mana suatu penyakit mengalami peningkatan pada

infeksinya

• T es Aglutinasi Direct dapat digunakan untuk mendeteksi titer Ab pada seseorang

• Kondisi dimana seseorang tidak memiliki Ab sama sekali lalu Ab meningkat 

Komponen Penting Dalam

I mmunoassay

a. Spesifisitas Antibodi b. Valensi Antibodi

c. Aviditas Antibodi

a. Spesifisitas Antibodi

• I katan Ag-Ab  spesifik  key-lock

• Namun terkadang terjadi reaksi silang  Ab

berikatan dengan Ag lain yg memiliki struktur mirip

 terjadi jika kemurnian Ag rendah

Ab yang sangat spesifik : yang memiliki binding site

yang hanya dimiliki oleh Ag dg struktur molekul yang unik

Spesifisitas Ag-Ab dipengaruhi :

1. Spesifisitas Ab yang ditambahkan pd sampel 2. Kemurnian Ag (tidak ada Ag lain yg

b. Valensi Antibodi

•

Jumlah binding site yang potensial dari Ab terhadap Ag yg spesifik

c. Aviditas Antibodi

•

Ukuran kekuatan Ab untuk mengikat Ag

•

Ab dg Aviditas besar



kecenderungan mengikat Ag yang banyak

d. Ukuran Kuantitas Reaksi Ag-Ab

•

Derajat imunitas, kadar Antibodi atau bahan tertentu dalam serum harus dapat diukur



dinyatakan dalam suatu satuan/ unit tertentu

•

Beberapa cara penentuan :

1. Kualitatif : ada atau tidak adanya suatu

bahan, baik Ab atau Ag dalam serum (uji + atau - )

2. Semikuantitatif : kadar Ab atau Ag pada serum



dengan cara pengenceran serum secara progresif

•

Kuantitas Ab dinyatakan dalam titer

•

Cth : uji W idal

3. Kuantitatif : kadar Ab ditentukan dengan membuat kurva baku standar terlebih

dahulu terhadap kekeruhan (OD)



didapat nilai korelasi

Macam I mmunoassay

•

T erdapat beberapa metode yang digunakan utk mendeteksi Ag-Ab, antara lain :

•

I mmunoassay tak berlabel : a. Uji Presipitasi

b. Uji Aglutinasi

c. Uji H emaglutinasi d. Lisis I mun

•

I mmunoassay berlabel :

a. Berlabel Flouresens b. Berlabel Radioisotop

I mmunoasay tak berlabel

a. Uji presipitasi

 Bila suatu Ag terlarut bereaksi dg Abnya

 Beberapa macam cara/ uji presipitas yg sering dipakai : 1. Uji presipitasi lempeng/ slide

cth : uji VDRL mikro 2. Uji presipitasi tabung

3. Uji presipitasi tabung kapiler cth : uji CRP

4. Uji presipitasi cincin

b. Uji Aglutinasi

• Reaksi antara Ab-Ag seluler atau Ag permukaan sel

• M acam-macam uji Aglutinasi :

1. Uji Aglutinasi lempeng

cth : uji W idal Lempeng deteksi Ab thd S. Paratyphi

2. Uji Aglutinasi tabung

- Dipakai jika aglutinasi berlangsung lambat 3. Uji H ambatan Aglutinasi

 utk menentukan Ag larut yg tdk diketahui

identitasnya

Uji aglut inasi : keberadaan Staphylococcus (ant igen) direaksikan dengan IgG t hd Staphylococcus

c. Uji H emaglutinasi

• Merupakan Uji Aglutinasi dari sel darah merah

• Sel darah diaglutinasikan karena antigen yang ada pada darah

• Mendeteksi Ab thd antigen sel darah merah

• Sel darah merah yag diuji merupakan Ag pada tes agutinasi

Cth : uji penentuan golongan darah

• Jika darah memiliki Ag bergolongan A 

d. Lisis imun dan Fiksasi Komponen

Kompleks imun tidak selalu terjadi antara Abx terhadap Ag pada permukaan sel

Kompleks imun baru terbentuk jika ditambahkan anti-imunoglobulin/ Ab thd Abx

 Sebagai ganti anti-imunoglobulin yaitu komplemen  lisis sel

 Macam uji lisis imun : Uji Fiksasi Komplemen

I mmunoassay berlabel

1. Berlabel flourescent

• Uji immunoflourescent (I FA)  ikatan/ kompleks

Ag-Ab divisualisasikan dg adanya perpendaran flouresen dibawah mikroskop

• I mmunoflourecent :

1. Direct immunoflourescent :

• Ab dilabel dg marker flourescent  Ab secara

langsung diberikan pada jaringan yg diinginkan

2. I n-direct immunoflourescent

• M enggunakan Ab yg tdk berlabel thd Ag yg diuji dengan Ab sekunder yang berlabel (yang

berikatan spesifik dg Ab pertama)

ant igen

Frozen t issue sect ion

Fluorescent marker

ant ibody

Indirect immunofluorescece

2nd ant ibody w it h label

2. Berlabel radioisotop

•

uji laboratoris yg sensitif



utk penentuan kadar beberapa bahan (hormon)

•

Diperlukan sampel dg bahan yg sedikit



sudah dpt terdeteksi

•

Cth : Uji RI A (Radioimmunoassay)

•

Pelabelan dengan Radioisotop yg dipakai pada uji RI A : 3H , 14C, 57Co, 75Se, 125_{I ,} 131_I

3. Berlabel luminescent

 uji immunoluminescent (LI A) prinsip sama dg RI A dan I FA, hanya pada LI A label pada reaksi

Ag-Ab menggunakan luminescent

 luminescent : a. bioluminescent : kunang2 b. chemiluninescent

4. Berlabel enzim

 pemberian label enzim pada Ag (ELI SA)

• Menggunakan enzim (ligan) yang membuat produk reaksi berwarna (chromogen) – intensitas warna

ELISA

• Enzyme Linked I mmunosorbent Assay

• Prinsip menggunakan reaksi perubahan warna (Colorimetric assay)

• Enzim yg ditambahkan akan bereaksi dengan substrat  memproduksi produk yg berubah warna

• Direct

- cth. Pada test kehamilan / test pack (hormon hCG)

• I ndirect

ELISA

Micro-plate reader

Positive result

I munohistokimia

• I mmunohistochemistry (I H C) mengkombinasikan teknik histologi, imunologi dan biokimia 

identifikasi komponen jaringan tertentu dg reaksi spesifik Ag atau Ab yang dapat divisualisasikan dg penempelan label

• Label : flourescent, enzym, hapten, radioaktif

• Ab mengikat Ag secara spesifik

• Menunjukkan lokasi tertentu sel atau protein pada jaringan/ organ di preparat/ slide

Human ovarian Tumor, HE staining

Apoptotic cell Sediaan t umor ovarium

pada obyek glass

Pada sediaan, ingin dilihat sel yg apopt osis

Pada sel yg apopt osis t rdpt prot ein Fas L

(sebagai Ag)

Di inkubasi dengan ant i prot ein FasL (sebagai Ab)

label

Aplikasi

immunoassay

1. Det eksi hormon polipept ida ; ct h : insulin and glucagon, hCG

2. Det eksi hormon st eroid

3. Det eksi agen t herapeut ic  pada pemant auan t erapi obat ; dan penyalahgunaan obat

4. Pengukuran enzim , prot ein dan komponen

t erlarut dalam darah lainnya; ct h : pengukuran prot ein plasma, komplemen

Keunt ungan menggunakan imunoasay :

• sensit if unt uk jumlah sampel yg rendah (ug/ L (ppb)

• pemeriksaan cepat

• pemeriksaan relat if mudah dilakukan

• Pemeriksaan dapat dilakukan dimana saja (dg alat penunjang)

Kelemahan menggunakan imunoasay :

• reaksi silang / cross react ion – Ab mungkin dapat berikat an silang dg st rukt ur Ag yg serupa

Vaksinasi

• Vaksinasi adalah aplikasi dari pirinsip imunoassay yang

populer  mengandung ant igen dari suat u

mikroorganism (pat ogen)

• Adanya paparan 1st Ag menginduksi sel B dan Sel T : respon adapt if

• Paparan 2nd Ag  menimbulkan respon yg lebih efekt if dan cepat dibanding respon primer

•

Jika indvidu belum pernah t erpapar Ag dari pat ogen X lalu diberikan vaksin (X)



t erjadi ekspansi sel memory dan peningkat an Ab

spesifik t hd pat ogen X



mampu melindungi dari bahaya Ag serupa (X) pada paparan

berikut nya

•

Vaksin : berisi organisme hidup/ organisme yg t elah mat i



sama2 bersifat ant igenik

•

Ant igen pd vaksin dapat dibuat secara sint et ik at au kloning gen dr organisme t erkait

Treatment of the disease by Inducing, Enhancing or Suppressing the Immune System.

Active Immunotherapy:

-It stimulates the body’s own immune system to fight the disease.

Passive Immunotherapy:

-It does not rely on the body to attack the disease, instead they use the immune system

components ( such as

antibodies) created outside the body.

Pustaka

•

Baratawijaya, 2



9, I munologi dasar, edisi 9, UI Press.

•

Bush, RK., Diagnostic T est and Allergy-Chapter 1

•

H andojo, I ., 2003, Pengantar I munoasai Dasar, Airlangga University Press, Surabaya