EFEKTIFITAS HORMON 17a-METILTESTOSTERON DAN LHRH-a DALAM MENCAPAI TINGKAT KEMATANGAN GONAD SIAP MEMIJAH PADA IKAN BELIDA (Notopterus chitala)

(1)

GONAD SIAP MEMIJAH PADA IKAN BELIDA

(

Notopterus

chitala

)

OLEH :

AHMAD JAUHARI PAMUNGKAS

SEKOLAH PASCASARJANA

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(2)

Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis yang berjudul Efektifitas Hormon 17a-Metiltestosteron dan LHRH-a dalam Mencapai Tingkat Kematangan Gonad Siap Memijah Pada Ikan Belida (Notopterus chitala) adalah karya saya sendiri dan belum dipublikasikan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi dan instansi mana pun. Suber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini.

Bogor, Januari 2006

Ahmad Jauhari Pamungkas

(3)

AHMAD JAUHARI PAMUNGKAS. Efektifitas Hormon 17a-Metiltestosteron dan LHRH-a dalam Mencapai Tingkat Kematangan Gonad Siap Memijah Pada Ikan Belida (Notopterus chitala).

Ikan Belida adalah ikan asli perairan Indonesia dengan penyebaran meliputi wilayah Sumatera, Kalimantan dan sebagian Jawa. Karena penangkapan yang tidak terkendali dan rusaknya habitat ikan ini telah menyebabkan populasi di alam menurun. Oleh karena itu usaha budidaya (pembenihan) ikan tersebut harus ditingkatkan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dosis yang efektif dengan penggunaan hormon 17a-metiltestosteron dan LHRH-a terhadap kematangan gonad sampai siap memijah pada ikan belida. Percobaan menggunakan calon induk ikan belida berbobot antara 200-300 gram dan panjang 25-30 cm. Ikan diimplan dengan pelet berisi hormon 17a-metiltestosteron 0, 50, 100 dan 150 µg/kg bobot tubuh dan LHRH-a dengan dosis 25 µg/kg bobot tubuh.

Hasil percobaan menunjukkan bahwa ikan yang mendapat perlakuan implantasi hormon memiliki waktu matang gonad yang lebih cepat dibandingkan dengan kontrol (60 hari lebih cepat). Diameter telur matang dari ikan perlakuan menunjukkan indikasi lebih kecil daripada kontrol. Dosis 150 µg 17a -metiltestosteron/kg bobot tubuh memberikan pengaruh nyata pada peningkatan konsentrasi hormon testosteron dan estradiol-17ß plasma. Selain itu, dosis tersebut juga mempercepat pematangan gonad serta meningkatkan GSI.

(4)

GONAD SIAP MEMIJAH PADA IKAN BELIDA

(

Notopterus

chitala

)

AHMAD JAUHARI PAMUNGKAS

T Teessiiss S Seebbaaggaaiissaallaahhssaattuussyyaarraattmmeemmppeerroolleehhggeellaarr M MaaggiisstteerrSSaaiinnssppaaddaa P PrrooggrraammSSttuuddiiIIllmmuuPPeerraaiirraann

SEKOLAH PASCASARJANA

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(5)

Nama : Ahmad Jauhari Pamungkas

NIM : C051020091

Program Studi : Ilmu Perairan

Menyetujui, 1. Komisi Pembimbing

Dr. Ir. Agus Oman Sudrajat, M.Sc. Prof. Dr. Muhammad Zairin Jr., M.Sc. Ketua Anggota

Mengetahui,

2. Ketua Program Studi Ilmu Perairan 3. Dekan Sekolah Pascasarjana

Dr. Chairul Muluk, M.Sc. Prof. Dr. Ir. Syafrida Manuwoto, M.Sc.

(6)

Puji dan syukur penulis sampaikan kehadlirat Allah SWT atas segala karunia-Nya sehingga penulis mendapatkan kekuatan dalam menyelesaikan tesis ini. Tema yang dipilih dalam percobaan yang dilaksanakan di Balai Budidaya Air Tawar (BBAT) Sukabumi, Balai Penelitian Ternak Ciawi dan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB sejak bulan Agustus 2004 sampai Maret 2005 adalah tentang reproduksi, dengan judul "Efektivitas Hormon 17a-Metiltestosteron dan LHRH-a dalam Mencapai Tingkat Kematangan Gonad Siap Memijah pada Ikan Belida (Notopteruschitala)".

Hasil percobaan ini diharapkan dapat dijadikan informasi awal dalam pematangan gonad dan pengembangan pembenihannya. Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih jauh dari sempurna, karena itu saran dan kritik yang bersifat memperbaiki sangat penulis harapkan demi pengetahuan dan penyempurnaan tulisan ini. Semoga karya tulis ini bermanfaat untuk penulis khususnya dan umumnya untuk pembaca yang tertarik dengan ikan–ikan perairan umum.

Terima kasih penulis sampaikan kepada Bapak Dr. Ir. Agus Oman Sudrajat, M.Sc. dan Bapak Prof. Dr. Muhammad Zairin Jr., selaku pembimbing serta Bapak Dr. Ir. Odang Charman, M.Sc., sebagai dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, wawasan serta dorongan semangat dalam penulisan ini. Disamping itu, penghargaan penulis sampaikan kepada Bapak Ir. Maskur beserta staf di BBAT Sukabumi (Bu Emi, Rojali, Ciptoroso, Bu Zakki, Pak Alen), Bapak Yosef beserta staf di Balai Penelitian Ternak Ciawi dan Bapak Ranta dari Laboratorium Kesehatan Ikan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB yang telah membantu selama pelaksanaan dan analisis data percobaan. Ungkapan terima kasih juga disampaikan kepada ayah, ibu beserta keluarga atas segala doa dan kasih sayangnya.

Bogor, Januari 2006 Ahmad Jauhari Pamungkas

(7)

Penulis dilahirkan di Tasikmalaya pada tanggal 15 Juni 1969, sebagai anak terakhir dari delapan bersaudara. Ayahanda bernama H. Ahmad Hanafi dan ibunda bernama Hj. Atikah Hanifah (alm). Pada tanggal 11 Juli 1995 penulis menikah dengan Lilis Ati Nurhayati putri ketiga pasangan Tarmansyah (alm) dan Hj. Siti Sofia Praja dan dikaruniai dua orang anak yaitu Dzukran Fauzan Nur Jauhari dan Jihan Naswa Nur Jauhari.

Penulis lulus dari SMA Negeri 2 Tasikmalaya tahun 1988, kemudian melanjutkan studi di Institut Pertanian Bogor melalui program Ujian Masuk Perguruan Tinggi Negeri (UMPTN). Gelar sarjana (S-1) diperoleh dari Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Perikanan IPB pada tahun 1993. Pada tahun 1994 penulis bekerja di Balai Budidaya Air Tawar Sukabumi sampai sekarang. Pada tahun 2002 penulis masuk Program Pascasarjana IPB, Program Studi Ilmu Perairan.

(8)

Halaman

DAF TAR TABEL ………... x

DAFTAR GAMBAR ……… xi

DAFTAR LAMPIRAN ………. xii

PENDAHULUAN ………... 1

Latar Belakang ……….………..…… 1

Perumusan Masalah ….……… .………..…... 1

Tujuan dan Manfaat ….……… .………..…... 4

Hipotesis …...……… .…… ..…….. 4

TINJAUAN PUSTAKA ………... 5

Perkembangan Gonad ……….……….………….. 5

Peran Hormon dalam Reproduksi Ikan ……....……….… .…... 8

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kerja Hormon …...… ... 10

METODE PERCOBAAN ………. 14

Desain Penelitian ………..……….……….... 14

Bahan ...… …..……… .………..…. 15

Analisa Data ... 19

HASIL DAN PEMBAHASAN ……… 20

Hasil ….… ..……….………..…... 20

Pembahasan ...… ....……… ... 31

KESIMPULAN DAN SARAN ……….... 35

Kesimpulan……… ... 35

Saran …...… .……….. 35

DAFTAR PUSTAKA ………...… 36

(9)

Halaman

1. Kriteria penilaian kematanga n gonad ikan ………..…… 6

2. Perkiraan diameter telur dari beberapa jenis ikan ... 10

3. Variabel dan alat ukur yang digunakan ... 16

4. Parameter kualitas air rata-rata wadah selama percobaan ………... 17

5. Hubungan dosis implan dengan konsentrasi testosteron,estradiol dalam plasma darah, diameter telur dan IGS ... 30

(10)

Halama n

1. Sistem umpan balik antara oosit dan hati dalam proses vitelogenesis 8 2. Hubungan antara dosis implantasi hormon 17a-metiltestosteron

dengan kadar hormon testosteron (?g/ml) dan kadar hormon estradiol (?g/ml) di dalam darah, diameter telur (mm) dan indeks

gonad somatik (%) selama percobaan ... 21 3. Fekuensi sebaran diameter telur ( mm) rata-rata pada awal tengah dan

akhir percobaan ... 25 4. Histologi telur belida pada awal percobaan pada pembesaran 40x... 26 5. Histologi telur belida pada pertengahan percobaan pada

pembesaran 40x. ... 27 6. Histologi telur belida pada akhir percobaan pada pembesaran 40x ... 28

(11)

Halaman

1. Gambar dan Klasifikasi ikan belida (Notopterus chitala ) ... 41

2. Teknik pengambilan darah ikan belida ... 42

3. Bahan dan alat RIA ... 43

4. Cara kerja RIA ... 44

5. Pengambilan sampel telur dengan cara dibedah ... 46

6. Cara pembuatan pelet berhormon dan kolesterol ... 47

7. Teknik implantasi ikan belida ... 48

8. Kadar hormon testosteron (?g/ml), estradiol-17ß (?g/ml) rata-rata dalam plasma darah, diameter telur (mm) dan indeks gonad somatik (%) selama percobaan ... 49

9. Anova hubungan dosis dengan kadar testosteron dalam darah ... 50

10. Anova hubungan Dosis dengan kadar estradiol da lam darah ... 57

11. Model linear hubungan dosis implantasi dengan diameter telur ... 65

(12)

Latar Belakang

Ikan Belida (Notopterus chitala) adalah ikan asli perairan Indonesia dengan penyebaran meliputi wilayah Sumatera, Kalimantan dan sebagian Jawa. Ikan belida merupakan salah satu jenis ikan ekonomis tinggi. Ikan belida di beberapa daerah dimanfaatkan sebagai ikan konsumsi. Selain itu ikan ini juga bagus digunakan sebagai ikan hias, sehingga banyak diburu oleh masyarakat. Penangkapan yang tidak terkendali dan rusaknya habitat ikan belida, maka akhir-akhir ini populasinya di alam semakin menyusut. Bila hal ini terus dibiarkan maka populasinya akan semakin berkurang dan akhirnya akan punah.

Penelitian mengenai ikan belida sampai saat ini belum banyak dilakukan, sehingga informasi tentang ikan belida ini sangat minim. Informasi yang ada baru sebatas kehidupan ikan belida di alam, belum banyak yang mengarah pada pemeliharaan di dalam wadah budidaya apalagi tentang pembenihannya.

Untuk melindungi dari kepunahan, saat ini telah dirintis beberapa penelitian untuk menghasilkan benih ikan belida melalui kegiatan budidaya. Salah satu masalah dalam usaha pengembangan budidaya ikan ini adalah ketersediaan benih. Untuk itu diperlukan penelitian yang mengarah kepada produksi benih agar bisa membudidayakan ikan belida.

Perumusan Masalah

Perpindahan ikan dari habitat asli ke habitat yang baru menyebabkan hilangnya beberapa sinyal lingkungan yang berhubungan dengan reproduksi, sehingga kemungkinan tidak dapat bereproduksi secara alami di dalam sistem budidaya (Zairin, 2003). Kejadian tersebut kemungkinan karena tidak tersedia atau kurangnya hormon-hormon yang berperan dalam proses vitelogenesis dan pematangan gonad terutama hormon gonadotropin yang berperan dalam merangsang ovari untuk tumbuh dan berkembang.

(13)

Faktor-faktor yang berpengaruh pada proses vitelogenesis terdiri dari faktor internal dan faktor eksternal. Faktor eksternal seperti suhu, cahaya, curah hujan merupakan faktor yang memberikan pengaruh dengan memberikan sinyal kepada ikan untuk proses vitelogenesis. Namun demikian sinyal ini kadang tidak tersedia sepanjang tahun. Sedangkan faktor internal seperti tersedianya hormon steroid gonad yaitu testosteron sebagai prekursor estradiol-17ß yang berperan dalam mensintesis dan mensekresikan vitelogenin.

Pada banyak kasus, sinyal lingkungan untuk proses pematangan gonad dan pemijahan tidak diketahui. Kalaupun diketahui, faktor lingkungan tersebut sukar ditiru atau mahal. Manipulasi hormonal berupa suntikan dan implantasi hormon, tidak lain adalah upaya potong kompas mengganti sinyal lingkungan. Pada spesies yang tidak memijah secara spontan di dalam wadah budidaya, manipulasi homonal mutlak diperlukan (Zairin, 2003).

Untuk mengatasi ketiadaan atau kurangnya hormon gonadotropin dan steroid gonad di dalam tubuh ikan, perlu dilakukan rekayasa hormonal dengan cara memasukan hormon dari luar tubuh ikan. Pemberian hormon 17a-metiltestosteron selain dapat meningkatkan konsentrasi testosteron gonad yang diaromatasi menjadi estradiol-17ß juga dapat memberikan "feedback" positif terhadap pituitari untuk mensekresikan hormon gonadotropin. Meningkatnya kadar estradiol-17ß di dalam darah akan merangsang hati mensintesis vitelogenin (Nagahama, 1987). Vitelogenin selanjutnya dilepas ke dalam darah dan kemudian secara selektif diambil dari plasma darah untuk pengisian oosit. Konsentrasi estradiol-17ß dalam plasma darah yang meningkat selama periode pertumbuhan oosit dapat digunakan sebagai indikator vitelogenesis (Fostier et al., 1983). Supriyadi (2005) menyatakan pemberian hormon metiltestosteron, HCG dan kombinasinya efektif meningkatkan konsentrasi estradiol-17ß plasma darah ikan baung dan mampu mempercepat proses pematangan gonad dalam waktu 56-98 hari. Sementara itu, penggunaan 17α-metiltestosteron pada dosis 50 hingga 100 µg/kg bobot ikan pada ikan jambal siam (Pangasius hypopthalmus) mempunyai kecenderungan lebih baik dari dosis lainnya dalam pengaruhnya terhadap gonad Sarwoto (2001).

(14)

LHRH dapat merangsang pelepasan hormon gonadotropin (LH). Breton et al. (1997) melaporkan penyuntikan LHRH secara intravena pada ikan mas (Cyprinus carpio) menyebabkan peningkatan tajam konsentrasi LH plasma dalam waktu dua sampai enam menit setelah penyuntikan.

Selama ini pemberian hormon dilakukan dengan cara melarutkan hormon dalam larutan salin kemudian disuntikan ke dalam tubuh ikan. Cara ini kurang efisien dalam menyediakan hormon dalam tubuh ikan dalam jangka waktu yang lama karena hormon yang disuntikan bersama larutan salin akan cepat hilang dari peredaran darah dan kenaikan konsentrasinya sangat cepat namun cepat pula hilangnya. Sehingga untuk mendapatkan hormon yang terus menerus, diperlukan penyuntikan yang berulang, namun hal ini dapat menyebabkan stres pada ikan. Untuk menghindari stres yang berkelanjutan akibat penyuntikan yang berulang serta menyediakan hormon yang berkelanjutan dalam jangka waktu yang panjang maka digunakan media implantasi dengan pelet pembawa hormon dengan bahan kolesterol dan "cocoa butter": (Lee et al., 1986). Dengan sistem implantasi pelet berhormon mudah dibuat dan dengan menggunakan peralatan sederhana. Selain perkembangan awal gonad yang dirangsang dengan hormon, dalam pemeliharaan perlu diupayakan keadaan yang optimal baik dalam pemberian pakan, lingkungan tempat hidup ikan (kualitas air).

Tujuan dan Manfaat

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dosis yang efektif dalam penggunaan hormon 17a -metiltestosteron dan LHRH-a terhadap kematangan gonad ikan belida sampai siap memijah.

Manfaat dari penelitian ini adalah untuk memberikan informasi tentang perkembangan dan pamatangan gonad sampai siap memijah dalam usaha pembenihan ikan belida.

Hipotesis

Jika pemberian hormon 17a-metiltestosteron dan LHRH-a efektif meningkatkan kadar estradiol-17ß darah maka proses vitelogenesis meningkat secara

(15)

berkelanjutan sehingga dapat mempercepat proses pertumbuhan dan pematangan gonad.

(16)

Perkembangan Gonad

Dalam proses reproduksi, sebelum terjadi pemijahan sebagian besar hasil metabolisme tertuju pada perkembangan gonad. Bobot gonad ikan akan mencapai maksimum sesaat ikan akan memijah, kemudian akan menurun dengan cepat selama pemijahan berlangsung sampai selesai. Umumnya peningkatan bobot gonad ikan betina pada saat matang gonad dapat mencapai 10-25% dari bobot tubuh dan 5–10% pada ikan jantan. Semakin besar tingkat kematangan gonad, diameter telur yang ada dalam gonad semakin membesar (Effendie, 1997).

Perkembangan gonad ikan dapat dibagi menjadi dua tahapan yaitu pertumbuhan gonad ikan sampai menjadi dewasa kelamin “sexually mature” dan selanjutnya adalah pematangan gamet. Tahap pertama berlangsung mulai larva hingga mencapai dewasa kelamin dan tahap kedua dimulai setelah ikan mencapai dewasa, kemudian terus berkembang selama fungsi reproduksi berjalan normal Lagler et al. (1997); Harvey dan Carolsfeld (1993). Kematangan gonad pada ikan tertentu dipengaruhi oleh dua faktor yaitu faktor luar dan faktor dalam. Faktor luar yang berpengaruh adalah suhu, arus, adanya lawan jenis dan lain- lain. Faktor dalam antara lain adalah perbedaan spesies, umur, serta sifat-sifat fisiologis lainnya Lagler et al., (1997). Ikan belida (N notopterus) di Thailand pertama kali matang kelamin pada ukuran 20 cm. Ikan N chitala matang kelamin pada berat 4 kg (Ondara & Dharyani, 1995). Ikan belida berkembang biak secara alami di perairan umum pada awal musim penghujan. Telur-telur diletakan pada tonggak pada kedalaman 1-2 m (Widyastuti, 1993). Jumlah telur yang dikeluarkan untuk satu kali pemijahan berkisar antara 5000–10.000 butir. Masa pengeraman sebelum menetas 5–6 hari pada suhu 33 °C (Ondara dan Dharyani, 1995). Ikan belida di India dan Thailand, jantan menjaga telur dan betina diperkirakan memijah tiga kali dalam musim- musim April-Juli, menghasilkan 10.000 butir telur (Lowe-McConnel, 1975 dalam Madang, 1999).

(17)

Perkembangan gonad ikan (ovarium), dapat dievaluasi berdasarkan atas pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis. Pengelompokan berdasarkan morfologi telah dilaporkan oleh Cassie dalam Efendie, 1985 seperti pada Tabel 1.

Tabel 1. Kriteria penilaian kematangan gonad ikan (Cassie dalam Effendie, 1985)

TKG Ovari Testis

I Ovari kecil memanjang seperti benang, warna jernih dan permukaan licin

Testis kecil memanjang warna jernih

II Ukuran ovari lebih besar, warna lebih gelap, kekuningan. Telur belum terlihat dengan mata telanjang

Ukuran testis jauh lebih besar, warna putih seperti susu, bentuk lebih jelas daripada tingkat satu

III Ovari berwarna kuning, butir-butir telur mulai kelihatan dengan mata telanjang

Permukaan testis bagian ventral tampak berlekuk, warna semakin putih dan ukuran semakin besar. IV Butir-butir telur besar berwarna

kuning, mengisi setengah sampai duapertiga bagian rongga perut.

Seperti pada tingkat tiga tampak lebih jelas. Testis semakin pejal. V Ovari berkerut, dinding tebal, butir

telur sisa terdapat didekat pelepasan. Banyak telur seperti pada tingkat II

Testis bagian belakang kosong dan dibagian dekat pelepasan masih berisi sperma

Pada tahap perkembangan awal oogonia terlihat sangat kecil, berbentuk bulat dengan inti sel yang sangat besar dibandingkan dengan sitoplasmanya. Oogonia terlihat bekelompok, tapi kadang-kadang ada juga yang berbentuk tunggal. Sementara itu oogonia terus memperbanyak diri dengan cara mitosis. Pada ikan yang mempunyai siklus reproduksi tahunan atau tengah tahunan akan terlihat adanya puncak-puncak pembelahan oogonia. Pada ikan yang berpijah sepanjang tahun, perbanyakan oogonia akan terjadi teus menerus sepanjang tahun. Transformasi oogonia menjadi oosit primer pada tahap pertumbuhan kedua dikenal dengan munculnya kromosom. Segera setelah itu folikel berubah bentuk dari semula berbentuk skuamosa menjadi bentuk kapsul oosit. Inti sel terletak pada bagian sentral dibungkus oleh lapisan sitoplasma yang sangat tipis. Pada perkembangan selanjutnya oosit membentuk lapisan chorion, granulosa, membran dan teka. Oosit dike lilingi oleh lapisan sel-sel folikel yang membentuk dua lapisan yaitu lapisan granulosa di

(18)

sebelah dalam yang menempel dengan oosit dan lapisan teka di sebelah luarnya. Juga butir-butir lemak mulai terlihat ditumpuk pada sitoplasma dan bersama dengan itu muncul alveoli codical. Butir-butir lemak ini selanjutnya akan bertambah besar pada proses vitelogenesis yang diawali dengan pembentukan vakuola-vakuola kemudian diikuti dengan munculnua globul- globul kuning telur karena adanya rangsangan vitelogenin dan hati (Hoar & Nagahama 1978; Ernawati 1999).

Menurut Mommsen & Walsh (1988) pembentukan vitelogenin di hati terjadi pada bagian retikulum endoplasma, dikumpulkan pada aparatus golgi dan disekresikan ke dalam aliran darah. Selanjutnya akan terikat dengan protein reseptor spesifik yang terdapat pada membran oosit kemudian diserap melalui mikropinosis dan dipindahkan ke microvesicular body. Sebelum penimbunan akhir dalam kuning telur vitelogenin dipecah menjadi omponen-komponen lipovitelin dan phosvitin (Gambar 1.). Proses pembentukan vitelogenin ini terus berlangsung di dalam tubuh ikan yang dinamakan proses vitelogenesis (Nagahama 1987; Yaron 1995; Cerda et al. 1996). Selama terjadinya proses ini menyebabkan meningkatnya volume granula kuning telur yang sekaligus menyebabkan meningkatnya ukuran oosit serta nilai indeks gonado somatik (IGS) dan indeks hepatosomaik (IHS) ikan (Cerda et al. 1996).

Prosentase komposisi tingkat kematangan pada setiap saat dapat dipakai untuk menduga terjadinya pemijahan. Ikan yang mempunyai satu musim pemijahan yang pendek dalam satu tahun atau saat pemijahannya panjang, akan ditandai dengan peningkatan prosentase tingkat kematangan gonad yang tinggi pada setiap akan mendekati musim pemijahan. Bagi ikan yang mempunyai musim pemijahan sepanjang tahun, pada pengambilan contoh setiap saat akan didapatkan komposisi tingkat kematangan gonad terdiri dari berbagai tingkat dengan prosentase yang tidak sama. Prosentase tinggi dari tingkat kematangan gonad yang besar merupakan puncak pemijahan walaupun pemijahan sepanjang tahun. Jadi dari komposisi tingkat kematangan gonad ini dapat diperoleh keterangan waktu mulai dan berakhirnya kejadian pemijahan dengan puncaknya (Efendie, 2002).

(19)

Gambar 1. Sistem umpan balik antara oosit dan hati dalam proses vitelogenesis (Mommsen & Walsh 1988)

Peran Hormon dalam Reproduksi Ikan

Seperti pada hewan bertulang belakang lain, proses reproduksi pada ikan dikontrol oleh ritme biologi dalam seperti isyarat lingkungan (Munro, 1990 dalam Patino, 1997). Isyarat lingkungan penting untuk terjadinya reproduksi sebagai faktor penentu (kualitas air, ketersediaan pakan, pemangsaan), di dalam konteks evolusi, sudah ditentukan ketika dan di mana pemijahan terjadi, dan isyarat penyelaras (potoperiod dan temperature dan perubahan langsung, keberadaan tempat pemijahan, peromon) .

Sistem reproduksi ikan betina dikontrol oleh poros hipothalamus–pituitari– gonad. Sebagai respon terhadap perubahan lingkungan, hipothalamus melepaskan GnRH yang merangsang sekresi gonadotropin oleh kelenjar pituitari menuju organ sasaran yaitu gonad. Dibawah pengaruh gonadotropin folikel ovari memproduksi androgen terutama testosteron yang selanjutnya diubah menjadi estradiol-17β dengan bantuan enzim aromatase. Hormon estradiol-17β kemudian merangsang proses vitelogenesis. Menurut Tyleret al. (1991) vitelogenesis adalah proses induksi dan sintesis vitelogenin di hati sebagai respon dari hormon estradiol-17β dan selanjutnya

OOSIT DARAH HATI

Reseptor Nukleus Vitelogenin mRNA Estrogen(E) Reseptor Vitelogenin Reseptor vitelogenin Sel Folikel Yolk Phosvitin Lipovitelin Vitelogenin Aparatus golgi DNA E – R- Complex Microvesicular Body

(20)

(21)

(22)

Lampiran 4. Cara kerja RIA

Prosedur pengukuran konsentrasi hormo n estradiol 17ß dan testosteron plasma berdasarkan manual dari Diagnostic Product Corporation (DPC).

1. Persiapan zat-zat pereaksi atau reagens :

a. Estradiol mempunyai tendensi kuatmenyerap permukaan wadah plastik yang tidak diberi perlakuan. Oleh sebab itu penggunaan wadah atau penutup yang terbuat dari bahan platik haru dihindari.

b. Tabung estradiol dan testosteron total yang sudh dilapisi antibodi, disimpan dalam refrigerator dn jauh dari tempat lembab atau berair. Bila sgelnya sudah dibuka, tabung dapat disimpan pada suhu 2 – 8 °C sampai waktu kadaluwarsa yang tertera pada kantung pembungkusnya.

c. Botol yang berisi105 ml estradiol 125I atau testosteron total yang sudah teriodisasi dalam bentuk cair, disimpan dalam refrigerator pada suhu 2 – 8 °C untuk 30 hari setelah segel dibuka atau sampai waktu kadaluwarsa yang tertera pada vial.

d. Kalibrator estradiol dan testosteron total terdiri dari tujuh kalibrator yaitu tabung A (kalibrator nol, 0 ?g/ml) berisi 5 ml dan sisanya tabung B (20 ?g/ml), C (50 ?g/ml), D (150 ?g/ml), E (500 ?g/ml), F (1800 ?g/ml) dan G (3600 ?g/ml) berisi masing-masing 2 ml. Tabung-tabung yang sudah dibuka segelnya disimpan dalam refrigerator pada suhu 2 – 8 °C maksimal 30 hari setelah dibuka. Untuk penyimpanan lebih lama 9sampai 6 bulan), tabung dapat disimpan dalam feezer bersuhu minus 20 °C.

e. Persiapan tabung reaksi di dalam rak dan masukan ke dalamnya unsur-unsur antibodi (Ab), antigen radioaktif (Ag*), sampel plasma atau standar:

Untuk analisis Estradiol 17 da testosteron

a. Label 4 tabung polipropilen polos (plain tube), untuk jumlah total binding dan (NSB, son spesifik binding) ukuran 12 x 5 mm dalam duplo.

b. Label 14 tabung kalibrator sudah dilapisi antibodi estradiol masing-masing taung A untuk ikatan maksimum (konsentrasi 0 ?g/ml), B (20 ?g/ml), C (50

(23)

?g/ml), D (150 ?g/ml), E (500 ?g/ml), F (1800 ?g/ml) dan G (3600 ?g/ml) dalam duplo.

c. Label tabung tambahan yang sudah dilapisi antiobodi estradiol atau testosteron dalam duplo untuk smpel plasma standar.

d. Pipet 100 µl kalibrator nl A untuk analisis estradiol ke dalam tabung NSB dan tabung A, dan 100 µl kalibrator B, C, D, E, F, dan G (untuk analisis estradiol) ke dalam tabung yang sudah dilabel.

e. Pipet 100 µl iap-tiap sampel plasma (untuk analisis estradiol) ke dalam tabung yang sudah disiapkan. Pipet diletakkan langsung sampai dasar tabung.

f. Tambahkan 1 ml total estradiol 125I ke setiap tabung dan diaduk selama 10 menit.

g. Inkubasikan selama 3 jam pada suhu ruangan.

h. Ikatan Ag*-Ab dari Ag8 bebas dipisah dengan metode penuangan.

2. Perhitungan hasil ; konsentrasi estradiol tau testosteron total dihitung berdasrkan kurva kalibrasi logit-log dengan menentukan ;

a. jumlah rata-rata ikatan per menit untuk setiap pasang tabung NSB dengan rumus :

Jumlah bersih = CPM (countper menit) – rata-rata NSB CPM

b. Menetukan ikatan setiap pasangan tabung sebagai persen ikatan maksimum (MB), dengan jumlah NSB tabung A sebagai 00%.

Dengan kertas gambar logit-log, plot sumbu vertikal (sumbu y) untuk konsentrasi hormon dan sumbu horizontal (sumbu x) untuk setiap kalibrator B sampai G dan Gambar garis lurus mendekati bagian titik tersebut. Konsentrasi estradiol atau testosteron total untuk sampel kemudian diperkirakan dari garis dengan interpolasi.

(24)

(25)

Lampiran 6. Cara pembuatan pelet ber hormon dan kolesterol (Cholik et al 1990). 1. Ambil sedikit cocoa butter (6 tetes) dalam test tube, masukan dalam beaker

glass 50 ml yang berisi air dan panaskan dengan alat pemanas. 2. Timbang sejumlah 190 mg cholesterol powdr masukan dalam mortal. 3. Dengan pipet ependorof ambil 0,2 ml larutan alkohol dan campur dengan

hormon 17a - metiltestosteron, masukan dalm mortal berisi kolesterol, larutkan dan lumatkan.

4. Inkubasikan selama satu jam atau lebih pada suhu 37 °C.

5. Dengan sendok logam (spatula) keruk campuran tersebut dan satukan. 6. Tambahkan satu tetes cocoa butter dan aduk berkali-kali hingga homogen. 7. Diamkan satu malam (24 jam) dalam refrigerator.

8. Cetak dengan alat yang sudah dibuat dan pres dengan paku dan pukul hingga padat betul.

9. Berdasarkan pengalaman dari satu resep dapat dibuat pelet ukura diameter 1 mm dan panjng 3 mm sebanyak 29 pelet.

(26)

(27)

Lampiran 8. Kadar hormon testosteron (?g/ml), estradiol (?g/ml) rata-rata dalam plasma darah, diameter telur (mm) dan indeks gonad somatik (%) selama percobaan.

Kadar testosteron (?g/ml) dalam darah Hari ke

Implantasi testosteron µg/kg 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 0 0,560 0,750 0,850 0,550 0,380 0,225 0,115 0,140 0,375 0,240 0,160 0,185 0,205 50 0,970 1,355 1,250 1,405 0,500 0,375 0,115 0,275 0,320 0,465 0,180 0,360 0,465 100 0,180 0,260 0,385 0,420 0,450 0,190 0,215 0,405 0,210 0,240 0,140 0,345 0,405 150 0,665 1,830 1,715 1,840 1,355 0,280 0,785 0,405 0,200 0,725 0,385 0,240 0,395

Kadar estradiol ?g/ml Hari ke

Implantasi testosteron µg/kg 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 0 17736,0 698,0 650,0 560,0 310,5 133,0 201,0 220,0 135,5 344,5 152,5 111,0 176,0 50 399,0 372,0 898,0 35,0 411,0 93,5 464,0 304,0 183,5 72,0 168,5 50,7 115,5 100 289,0 163,5 133,0 214,0 222,0 145,0 586,0 166,0 117,5 311,5 174,0 188,0 112,5 150 10624,0 2731,0 1047,0 176,0 525,0 324,5 750,0 550,0 256,5 407,5 23,0 127,0 289,0 Hari ke Implantasi testosteron µg/kg 0 60 120 0 0,83 0,36 50 0,50 0,44 100 0,81 0,57 150 0,63 0,63 0,68 IGS hari ke Implantasi testosteron µg/kg 0 60 120 0 1.37 0.65 50 0,68 0.95 100 1,28 1.03 150 0,99 1,01 1.61

(28)

Lampiran 9. Anova hubungan Dosis dengan kadar testosteron dalam darah

General Linear Model: Testosteron Hari ke 0 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari ke 0, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 0.6379 0.6379 0.2126 1.48 0.347 Error 4 0.5753 0.5753 0.1438

Total 7 1.2132

S = 0.379226 R-Sq = 52.58% R-Sq(adj) = 17.02%

General Linear Model: Testosteron Hari ke10 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari ke10, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 2.8310 2.8310 0.9437 2.20 0.231 Error 4 1.7155 1.7155 0.4289

Total 7 4.5465

S = 0.654876 R-Sq = 62.27% R-Sq(adj) = 33.97%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 1.9289 1.9289 0.6430 2.54 0.195 Error 4 1.0131 1.0131 0.2533

Total 7 2.9420

(29)

General Linear Model: Hari ke 30 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 2.7939 2.7939 0.9313 3.73 0.118 Error 4 0.9979 0.9979 0.2495

Total 7 3.7918

S = 0.499462 R-Sq = 73.68% R-Sq(adj) = 53.95%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 1.2612 1.2612 0.4204 3.92 0.110 Error 4 0.4287 0.4287 0.1072

Total 7 1.6899

S = 0.327357 R-Sq = 74.63% R-Sq(adj) = 55.61%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.03905 0.03905 0.01302 0.51 0.698 Error 4 0.10250 0.10250 0.02563

Total 7 0.14155

(30)

General Linear Model: Testosteron Hari 60 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari 60, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 0.62135 0.62135 0.20712 51.14 0.001 Error 4 0.01620 0.01620 0.00405

Total 7 0.63755

S = 0.0636396 R-Sq = 97.46% R-Sq(adj) = 95.55%

Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari 60

All Pairwise Comparisons among Levels of Dosis Dosis = 0 subtracted from:

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+--- 50 -0.2592 -0.000000 0.2592 ( ---*---)

100 -0.1592 0.100000 0.3592 (---* ---)

150 0.4108 0.670000 0.9292 (---*---) ---+---+---+--- 0.00 0.35 0.70

Dosis = 50 subtracted from:

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+--- 100 -0.1592 0.1000 0.3592 ( ---*---)

150 0.4108 0.6700 0.9292 (---*---) ---+---+---+--- 0.00 0.35 0.70

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+--- 150 0.3108 0.5700 0.8292 (---*---) ---+---+---+--- 0.00 0.35 0.70

Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hari 60

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 -0.000000 0.06364 -0.0000 1.0000 100 0.100000 0.06364 1.5713 0.4815 150 0.670000 0.06364 10.5280 0.0016 Dosis = 50 subtracted from:

(31)

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 100 0.1000 0.06364 1.571 0.4815 150 0.6700 0.06364 10.528 0.0016 Dosis = 100 subtracted from:

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 150 0.5700 0.06364 8.957 0.0030

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.11705 0.11705 0.03902 0.47 0.717 Error 4 0.32950 0.32950 0.08238

Total 7 0.44655

S = 0.287010 R-Sq = 26.21% R-Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.04374 0.04374 0.01458 0.34 0.802 Error 4 0.17385 0.17385 0.04346

Total 7 0.21759

S = 0.208477 R-Sq = 20.10% R-Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.31965 0.31965 0.10655 9.29 0.028 Error 4 0.04590 0.04590 0.01148

(32)

S = 0.107121 R-Sq = 87.44% R-Sq(adj) = 78.03% Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari ke 90

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 50 -0.2113 0.225000 0.6613 (---*---)

100 -0.4363 -0.000000 0.4363 ( ---*---)

150 0.0487 0.485000 0.9213 (---*---) ---+---+---+---+--- - 0.50 0.00 0.50 1.00

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 100 -0.6613 -0.2250 0.2113 (--- *---)

150 -0.1763 0.2600 0.6963 (--- *---)

---+---+---+---+--- -0.50 0.00 0.50 1.00

Dosis Lower Center Upper ---+ ---+ ---+---+--- 150 0.04870 0.4850 0.9213 (---*---) ---+ ---+ ---+---+--- -0.50 0.00 0.50 1.00

Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hari ke 90

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 0.225000 0.1071 2.10042 0.2922 100 -0.000000 0.1071 -0.00000 1.0000 150 0.485000 0.1071 4.52757 0.0353

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 100 -0.2250 0.1071 -2.100 0.2922 150 0.2600 0.1071 2.427 0.2132

(33)

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari k e 100, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 0.07754 0.07754 0.02585 0.51 0.699 Error 4 0.20445 0.20445 0.05111

Total 7 0.28199

S = 0.226081 R-Sq = 27.50% R-Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.04245 0.04245 0.01415 0.63 0.631 Error 4 0.08930 0.08930 0.02233

Total 7 0.13175

S = 0.149416 R-Sq = 32.22% R-Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 0.076150 0.076150 0.025383 11.28 0.020 Error 4 0.009000 0.009000 0.002250

Total 7 0.085150

S = 0.0474342 R-Sq = 89.43% R-Sq(adj) = 81.50%

Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari ke 120

(34)

Dosis Lower Center Upper -- -+---+---+---+--- 50 0.066804 0.2600 0.4532 ( ---*---) 100 0.006804 0.2000 0.3932 (---*---) 150 -0.003196 0.1900 0.3832 (---*---) ---+---+---+---+--- -0.20 0.00 0.20 0.40

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 100 -0.2532 -0.06000 0.1332 ( ---*---)

150 -0.2632 -0.07000 0.1232 ( ---*---)

---+---+---+---+--- -0.20 0.00 0.20 0.40

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 150 -0.2032 -0.01000 0.1832 (---*---)

---+---+---+---+--- -0.20 0.00 0.20 0.40

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Val ue 50 0.2600 0.04743 5.481 0.0183 100 0.2000 0.04743 4.216 0.0446 150 0.1900 0.04743 4.006 0.0527

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 100 -0.06000 0.04743 -1.265 0.6256 150 -0.07000 0.04743 -1.476 0.5242

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 150 -0.01000 0.04743 -0.2108 0.9962

(35)

Lampiran 10. Anova hubungan Dosis dengan kadar estradiol dalam darah

General Linear Model: Estradiol Hari ke 0 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Estradiol Hari ke 0, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 433455493 433455493 144485164 2.54 0.195 Error 4 227967838 227967838 56991959

Total 7 661423331

S = 7549.30 R-Sq = 65.53% R -Sq(adj) = 39.68%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Estradiol Hari ke 10, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 8359253 8359253 2786418 8.86 0.031 Error 4 1257949 1257949 314487

Total 7 9617202

S = 560.792 R-Sq = 86.92% R -Sq(adj) = 77.11%

Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari ke10

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 50 -2610 -326.0 1958 (---*--- )

100 -2819 -534.5 1750 (---*---)

150 -252 2032.5 4317 (--- *---)

-+---+---+---+--- -2500 0 2500 5000

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 100 -2493 -208.5 2076 (---*--- )

150 74 2358.5 4643 (---*---) -+---+---+---+--- -2500 0 2500 5000 Dosis = 100 subtracted from:

(36)

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 150 282.9 2567 4851 (---*---) -+---+---+---+--- -2500 0 2500 5000

Tukey Simultaneous Tests Response Variable Hari ke10

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 -326.0 560.8 -0.5813 0.9327 100 -534.5 560.8 -0.9531 0.7815 150 2032.5 560.8 3.6243 0.0719

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 150 2567 560.8 4.577 0.0340

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 964911 964911 321637 1.04 0.465 Error 4 1236391 1236391 309098

Total 7 2201302

S = 555.966 R-Sq = 43.83% R -Sq(adj) = 1.71%

(37)

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 298146 298146 99382 4.72 0.084 Error 4 84233 84233 21058

Total 7 382379

S = 145.114 R-Sq = 77.97% R -Sq(adj) = 61.45%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 102955 102955 34318 1.09 0.451 Error 4 126465 126465 31616 Total 7 229420 S = 177.810 R-Sq = 44.88% R -Sq(adj) = 3.53%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 63305 63305 21102 10.66 0.022 Error 4 7915 7915 1979

Total 7 71220

S = 44.4831 R-Sq = 88.89% R -Sq(adj) = 80.55% Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari ke 50

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 50 -220.7 -39.50 141.7 (---*---)

100 -169.2 12.00 193.2 ( ---*---)

150 10.3 191.50 372.7 (---*---) -+---+---+---+--- - 200 0 200 400

(38)

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 100 -129.7 51.50 232.7 (---*---)

150 49.8 231.00 412.2 ( ---*---) -+---+---+---+--- - 200 0 200 400

Dosis Lower Center Upper -+---+---+---+--- 150 -1.677 179.5 360.7 ( ---*---)

-+---+---+---+--- - 200 0 200 400

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 -39.50 44.48 -0.8880 0.8124 100 12.00 44.48 0.2698 0.9921 150 191.50 44.48 4.3050 0.0417

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 100 51.50 44.48 1.158 0.6794 150 231.00 44.48 5.193 0.0221

General Linear Model: Estradiol Hari 60 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari 60, using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 321087 321087 107029 3.64 0.122 Error 4 117717 117717 29429

Total 7 438804

(39)

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 172932 172932 57644 9.60 0.027 Error 4 24009 24009 6002

Total 7 196941

S = 77.4734 R-Sq = 87.81% R -Sq(adj) = 78.67%

Tukey 95.0% Simultaneous Confidence Intervals Response Variable Hari ke 70

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 50 -231.0 84.50 400.0 (---* ---)

100 -369.5 -54.00 261.5 (---*---)

150 14.5 330.00 645.5 ( ---*---) ---+---+---+---+--- - 350 0 350 700

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 100 -454.0 -138.5 177.0 ( ---*---)

150 -70.0 245.5 561.0 (---* ---)

---+---+---+---+--- - 350 0 350 700

Dosis Lower Center Upper ---+---+---+---+--- 150 68.46 384.0 699.5 (---*---) ---+---+---+---+--- -350 0 350 700

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 84.50 77.47 1.0907 0.7133 100 -54.00 77.47 -0.6970 0.8934 150 330.00 77.47 4.2595 0.0432

(40)

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 23138 23138 7713 1.22 0.410 Error 4 25186 25186 6296

Total 7 48324

S = 79.3505 R-Sq = 47.88% R -Sq(adj) = 8.79%

General Linear Model: Estradiol Hari ke 90 versus D osis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 19725 19725 6575 0.82 0.548 Error 4 32222 32222 8055

Total 7 51947

S = 89.7517 R-Sq = 37.97% R -Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Hari ke 100 , using Adjusted SS for Tests Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Dosis 3 5545 5545 1848 0.21 0.883 Error 4 34715 34715 8679

Total 7 40260

(41)

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 19237 19237 6412 0.78 0.564 Error 4 32935 32935 8234

Total 7 52172

S = 90.7395 R-Sq = 36.87% R -Sq(adj) = 0.00%

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Dosis 3 40626 40626 13542 0.84 0.538 Error 4 64418 64418 16105

Total 7 105044

(42)

Lampiran 11. Model linear hubungan dosis implantasi dengan diameter telur

General Linear Model: Diameter Telur Hari ke 60 versus Dosis_T Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Diameter Telur Hari ke 60, using Adjusted SS for Tests

Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Dosis_T 3 6.6293 6.6293 2.2098 31.74 0.000 Error 358 24.9270 24.9270 0.0696

Total 361 31.5563

S = 0.263872 R-Sq = 21.01% R-Sq(adj) = 20.35%

Least Squares Means for Diameter Telur Hari ke 60 Dosis Mean SE Mean

0 0.8305 0.02781 50 0.5037 0.02781 100 0.8121 0.02781 150 0.6251 0.02751 Tukey Simultaneous Tests

Response Variable Diameter Telur Hari ke 60 All Pairwise Comparisons among Levels of Dosis_T Dosis = 0 subtracted from:

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 50 -0.3268 0.03934 -8.309 0.0000 100 -0.0184 0.03934 -0.467 0.9662 150 -0.2054 0.03912 -5.251 0.0000

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 100 0.3084 0.03934 7.841 0.0000 150 0.1214 0.03912 3.103 0.0103

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T-Value P-Value 150 -0.1871 0.03912 -4.781 0.0000

(43)

General Linear Model: Diameter Telur Hari ke 120 versus Dosis Factor Type Levels Values

Dosis fixed 4 0, 50, 100, 150

Analysis of Variance for Diameter Telur Hari ke 120, using Adjusted SS for Tests

Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Dosis 3 5.4742 5.4742 1.8247 16.10 0.000 Error 353 40.0035 40.0035 0.1133

Total 356 45.4776

S = 0.336637 R-Sq = 12.04% R-Sq(adj) = 11.29%

Least Squares Means for Diameter Telur Hari ke 120 Dosis Mean SE Mean

0 0.3561 0.03589 50 0.4440 0.03529 100 0.5742 0.03568 150 0.6820 0.03568

Tukey Simultaneous Tests

Response Variable Diameter Telur Hari ke 120 All Pairwise Comparisons among Levels of Dosis Dosis = 0 subtracted from:

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T - Value P- Value 50 0.08782 0.05033 1.745 0.3004 100 0.21802 0.05061 4.308 0.0001 150 0.32589 0.05061 6.440 0.0000

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T - Value P- Value 100 0.1302 0.05019 2.594 0.0467 150 0.2381 0.05019 4.744 0.0000

Difference SE of Adjusted Dosis of Means Difference T - Value P- Value 150 0.1079 0.05046 2.137 0.1413

(44)

Regression Analysis: Diam_60 versus Dosis The regression equation is

Diam_60 = 0.736 - 0.00058 Dosis

Predictor Coef SE Coef T P Constant 0.7360 0.1559 4.72 0.042 Dosis -0.000580 0.001667 -0.35 0.761 S = 0.186373 R-Sq = 5.7% R- Sq(adj) = 0.0% Analysis of Variance Source DF SS MS F P Regression 1 0.00420 0.00420 0.12 0.761 Residual Error 2 0.06947 0.03474 Total 3 0.07368

Regression Analysis: Diam_120 versus Dosis The regression equation is

Diam_120 = 0.349 + 0.00218 Dosis

Predictor Coef SE Coef T P Constant 0.34900 0.01283 27.21 0.001 Dosis 0.0021800 0.0001371 15.90 0.004 S = 0.0153297 R-Sq = 99.2% R-Sq(adj) = 98.8% Analysis of Variance Source DF SS MS F P Regression 1 0.059405 0.059405 252.79 0.004 Residual Error 2 0.000470 0.000235 Total 3 0.059875

(45)

Lampiran 12. Anova dan analisis regresi hubungan IGS dengan dosis implantasi

Regression Analysis: GSI_60 versus Dosis The regression equation is

GSI_60 = 1.16 - 0.00096 Dosis

Predictor Coef SE Coef T P Constant 1.1570 0.3116 3.71 0.065 Dosis -0.000960 0.003331 -0.29 0.800 S = 0.372411 R-Sq = 4.0% R- Sq(adj) = 0.0% Analysis of Variance Source DF SS MS F P Regression 1 0.0115 0.0115 0.08 0.800 Residual Error 2 0.2774 0.1387 Total 3 0.2889

Regression Analysis: GSI_120 versus Dosis The regression equation is

GSI_120 = 0.616 + 0.00592 Dosis

Predictor Coef SE Coef T P Constant 0.6160 0.1262 4.88 0.040 Dosis 0.005920 0.001349 4.39 0.048 S = 0.150864 R-Sq = 90.6% R -Sq(adj) = 85.9% Analysis of Variance Source DF SS MS F P Regression 1 0.43808 0.43808 19.25 0.048 Residual Error 2 0.04552 0.02276 Total 3 0.48360

(46)

vitelogenin yang diproduksi hati dilepaskan ke dalam sistem peredaran darah yang secara selektif diserap oleh oosit untuk ditimbun menjadi bakal kuning telur dalam bentuk lipovitelin dan phosvitin.

Hormon gonadotropin yang dikeluarkan oleh kelenjar adenohipofisis adalah hormon utama yang merangsang berbagai aktivitas ovari. Dua jenis gonadotropin yang diproduksi tersebut adalah FSH dan LH. Peranan kedua jenis hormon tersebut berbeda selama proses perkembangan reproduksi. FSH adalah hormon gonadotropin yang lebih berperan dalam proses vitelogenesis, sedangkan LH lebih dominan pada saat pematangan akhir oosit (Swanson, 1991).

Hormon gonadotropin FSH yang dihasilkan oleh hipofisis akan merangsang gonad untuk menghasilkan hormon testosteron dan estradiol-17ß. Pada sel teka, FSH mendorong sekresi testosteron yang selanjutnya oleh enzim aromatase pada sel granulosa akan dirubah menjadi hormon estradiol-17ß (Yaron, 1995). Hormon estradiol-17ß dilepas oleh gonad dan mengikuti aliran darah menuju hati. Selanjutnya ditangkap oleh reseptor khusus di hati dan membentuk vitelogenin yang merupakan bahan pembentuk kuning telur (Mommsen & Walsh, 1988).

Rottman et al. 1991 menyatakan bahwa indikator yang umum dalam menentukan perkembangan gonad adalah diameter telur. Tabel 2 memperlihatkan perkiraan diameter telur beberapa spesies ikan saat matang telur. Selanjutnya Rottman et al. (1991) menyatakan keberadaan inti di dalam telur juga menunjukan tingkat perkembangan telur. Telur dengan inti di tengah menunjukan telur pada fase istirahat. Sedangka n telur dengan inti yang berada di tepi (animal pore) menandakan bahwa telur dalam keadaan matang.

Implantasi GnRh analog dan testosterone mempercepat perkembangan seksual pada ikan trout pelangi ( Crim dan Evans 1983 dalamPatino, 1997) dan ikan belanak (Mugil cephalus) (Tamaru et al. 1989dalamPatino, 1997). Sedangkan LHRH dapat digunakan selain sebagai sumber hormon gonadotropin juga dapat digunakan dalam pematangan akhir oosit. Mugnier et al., (2000) menyatakan implantasi GnRH-a sebanyak 25 µg/kg berat induk dapat mensinkronkan oogenesis, menurunkan penundaan ovulasi pada ikan turbot (Scophthalmus maximus L.).

(47)

Tabel 2. Perkiraan diameter telur dari beberapa spesies ikan (Rottman et al., 1991)

Spesies Diameter (mm)

Bighead carp (Hypothalmichtys nobilis) 0,9-1,2 Channel catfish (Ictalurus punctatus) 2,3-2,9

Common carp (Cyprinus carpio) 0,9-1,2

Grass carp (Ctenopharyngodon idella) 0,9-1,2

Gray Mollet (Mugil cephalus) 0,6-0,9

Red tailed black shark (Labeo bicolor) 1,0-1,4

Snook (Centropomus sp.) 0,6-0,7

Striped bass (Moronesaxatilis) 1,0-1,2

Sturgeon (Acipenser sp.) 3,5-4,0

White bass (Morone chrysoos) 0,6-0,7

Mengigat pentingnya hormon testosteron sebagai media dalam perkembangan gonad dan LHRH dalam pematangan akhir, maka perlu diberikan secara berkesinambungan untuk menjaga keberadaan dalam tubuh ikan.

Faktor-faktor yang Mempengaruh i dalam Kerja Hormon

Selain ketersediaan hormon yang berkesinambungan dalam jumlah yang cukup dalam tubuh ikan yang dimasukkan dari luar, pakan yang berkualitas juga berperan dalam menyumbangkan ketersedian hormon dalam tubuh ikan.

Ukuran ikan saat pertama kali matang gonad tidak selalu sama. Perbedaan ukuran tersebut akibat adanya perbedaan kondisi ekologis perairan (Blay & Eyeson, 1980). Ukuran maksimum tubuh N chitala lebih besar daripada N notopterus. N notopterus mempunyai ukuran maksimum 60 cm (Roberts, 1992).

Crim & Evans dalam Lee et al. (1986) menyatakan bahwa hormone 17α -metiltestosteron dapat memberikan umpan balik posistif terhadap hipofisis dalam menghasilkan gonadotropin. Marte et al. (1988) menegaskan bahwa penggunaan hormon testosteron dapat mempercepat kematangan gonad ikan bandeng. Tridjoko et

(48)

al. (1997) penggunaan 17α-metiltestosteron pada dosis 50 µg/kg/bulan mempercepat kematangan go nad kerapu bebek (Cromileptes altivelis). Zanuy et al. (1999) implan hormon testosteron berdosis 100 µg/kg pada ikan kakap (Dicentrarchus labrax) memberikan umpan balik positif terhadap hipotalamus atau hipofisis yang ditunjukan oleh adanya perkembangan gonad dan spermatogenesis. Sedangkan Sarwoto (2001) penggunaan 17α-metiltestosteron pada dosis 50 hingga 100 µg/kg bobot ikan mempunyai kecenderungan lebih baik dari dosis lainnya dalam pengaruhnya terhadap gonad ikan jambal siam. Supriyadi (2005) menyatakan pemberian hormon metiltestosteron, HCG dan kombinasinya efektif meningkatkan konsentrasi estradiol- 17ß plasma darah ikan baung dan mampu mempercepat proses pematangan gonad dalam waktu 56-98 hari. Selanjutnya kombinasi hormon HCG 400 IU dan MT 200 µg/kg bobot tubuh merupakan perlakuan terbaik untuk tujuan pematangan gonad ikan baung karena mampu memberikan pengaruh tertinggi terhadap perkembangan diameter telur rata-rata dan tingkat kematangan telur. Pemberian hormon MT dosis 200 µg/kg bobot tubuh mampu meningkatkan konsentrasi estradiol-17ß maksimum plasma darah ikan baung. Hao-Ran et al. (1998) implantasi 8 butir 17a -metiltestosteron atau androstenedion 50 µg/kg berat badan/15 hari menstimulasi pematangan ovari pada belut betina, IGS meningkat secara signinfikan 38-49%.

Crim et al. (1988) bahwa implantasi dengan pelet kolesterol yang mengandung LHRH-a (25 dan 125 µg/pelet) pada ikan rainbow trout dapat meningkatkan pelepasan gonadotropin plasma hingga periode dua minggu dan mulai menurun pada periode empat minggu. Lee et al. (1986) menyatakan bahwaLHRH-a yang diko mbinasikan dengan 17a - metiltestosteron merupakan terapi hormon yang efektif dalam meningka tkan pematangan gonad ikan bandeng (Chanos chanos). Sebanyak 50% ikan ditemukan dalam keadaan matang gonad satu bulan setelah implantasi dan 90% pada tiga bulan setelah implantasi. Ernawati (1999) menunjuk kan bahwa implantasi LHRH-a dan 17a-metiltestosteron yang diberikan secara tunggal atau dikombinasikan dapat secara efisien mempercepat proses kematangan gonad pada ikan jambal siam. Pemberian LHRH-a (400 µg/kg) yang dilanjutkan dengan 17a- metiltestosteron (250 µg/kg) merupakan kombinasi terbaik

(49)

yang mampu meningkatkan kematangan telur, daya fertilitas telur (93%) dan daya tetas telur (91%).

Agar hormon testosteron dan LHRH dalam tubuh ikan tersedia secara berkesinambungan maka perlu dilakukan pemasukan dari luar tubuh ikan. Beberapa cara dalam mengiduksikan hormon ke dalam tubuh ikan yaitu penyuntikan larutan encer yang mempunyai kelemahan sering tidak mencukupi untuk merangsang pematangan gonad karena hormon dengan cepat dimetabolisme dan menghilang dari sistem peredaran darah. Selain itu penyuntikan berulang dapat menyebabkan stress pada ikan akibat penanganan yang berlebihan. Untuk mengatasi masalah yang berkaitan dengan penyuntikan berula ng yaitu dengan menggunakan pelet berhormon yang dapat melepaskan sejumlah tertentu “pesan “ kimia untuk periode yang panjang (Crim, 1985 dalam Crim et al., 1988). Pelet yang dapat melepaskan hormon sedikit demi sedikit adalah pelet yang berkaitan dengan LH-RH atau LH-RH dalam bentuk matrik kolesterol. Pelet ini dirancang oleh Kent et al. (1980) yang dikutip Lee et al. (1986), dibuat untuk mengendalikan pelepasan senyawa neuropeptida ke dalam tubuh hewan.

Implantasi dengan pelet kolesterol yang mengandung LHRH-a mempunyai sifat pelepasan yang perlahan dan dalam jangka panjang. Sebaliknya, injeksi dengan 20 µg/kg LHRH-a hanya efektif untuk jangka pendek dan dapat terdeteksi dalam plasma darah hanya beberapa jam (tidak lebih dari 48 jam) dengan tingkat plasma GtH tertinggi pada beberapa jam pertama (lima jam) sesudah penyuntikan Crim et al. (1988). Implantasi GnRH-a pada ikan kakap putih (Morone chryops dan M. saxatilis) menyebakan peningkatan periode konsentrasi plasma GnRH dari periode beberapa hari menjadi beberapa minggu (Sato et al. 1997). Peningkatan estradiol-17ß tertinggi pada ikan Salmo gairdneri terjadi pada hari ke-28 setelah implantasi dan setelah hari ke-56 konsentrasinya menurun menjadi setengahnya Flett dan Leatherland (1989).

Proses vitelogenesis dalam tubuh ikan akan berlangsung bila kondisi lain optimal. Faktor tersebut adalah pakan, dengan pakan yang optimal maka proses vitelogenesis dalam tubuh ikan akan berjalan dengan baik. Peran pakan dalam perkembangan gonad penting untuk fungsi endokrin yang normal. Tingkatan pakan

(50)

akan mempengaruhi sintesis maupun pelepasan hormon dan kelenjar endokrin. Pertumbuhan dan perkembangan organ reproduksi dihambat oleh kekurangan pakan tanpa membedakan apakah nilai gizi pakan itu rendah energi, protein, mineral atau vitamin. Pengurangan laju makan (feeding rate) menyebabkan penghambatan pematangan gonad pada beberapa spesies ikan seperti seabass Eropa (Dicentracus labrax) dan salmon Atlantik (Salmo salar). Pada ikan betina seabass, pengaruh yang merugikan dari pembatasan pakan adalah berhubungan dengan penurunan estradiol plasma (Cerda et al. 1996). Pakan merupakan komponen penting dalam proses pematangan gonad khususnya ovarium, karena proses vitelogenesis pada dasarnya adalah proses akumulasi nutrient dalam sel telur. Bahkan pada akhirnya fekunditas dan kualitas telur sangat ditentukan oleh kualitas pakan yang diberikan. Pertumbuhan gonad tejadi jika terdapat kelebihan energi untuk pemeliharaan tubuh, sedangkan kekurangan gizi dapat meningkatkan atresia oosit (Mayumnar, 1996). Kematangan gonad ikan sa ngat berhubungan dengan keseimbangan komposisi nutrisi pakan terutama komposis i protein yang sangat dibutuhkan untuk perkembangan gonad. Lipida adalah komponen kedua setelah protein yang penting karena pakan induk yang kekurangan asam lemak esensial akan menghasilkan laju pematangan gonad yang rendah Watanabe et al. (1984).

Lingkungan tempat mencapai kematangan akhir.hidup ikan (kualitas air) harus optimal untuk mendukung proses vitelogenesis. Kriteria kualitas air yang digunakan untuk ikan belida berdasarkan kriteria yang ideal adalah : pH 6,2 – 7,0, suhu 84°F .

(51)

Desain Penelitian Perlakuan

Penelitian yang dilakukan menggunakan metode eksperimental. Percobaan dirancang menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 6 ulangan. Jenis hormon yang digunakan adalah 17a- metiltestosteron dengan empat level dosis yang diinjeksikan dengan cara implant. Adapun dosis yang digunakan yaitu 50, 100, dan 150 µg/kg bobot tubuh ikan dan hormon LHRH-a sebanyak 25 µg/kg bobot tubuh ikan, serta satu perlakuan dengan pelet tanpa hormon sebagai kontrol (placebo), dengan perlakuan sebagai berikut :.

Perlakuan I : dosis 17a- metiltestosteron 0 µg + LHRH-a 0 µg (kontrol) Perlakuan II : dosis 17a- metiltestosteron 50 µg + LHRH-a 25 µg Perlakuan III : dosis 17a- metiltestosteron 100 µg + LHRH-a 25 µg Perlakuan IV : dosis 17a- metiltestosteron 150 µg + LHRH-a 25 µg

Sampel

Ikan yang digunakan dalam penelitian ini adalah calon induk ikan belida (Notopterus chitala) berukuran antara 0,2-0,3 kg dengan panjang antara 20-35 cm (Lampiran 1) yang berasal dari petani pengumpul d i daerah Depok, Jawa Barat. Jumlah ikan yang digunakan sebanyak 26 ekor. Untuk melihat kondisi awal telur ikan maka dilakukan dengan cara dibedah.

Waktu

Implantasi dilakukan setiap 1 bulan sekali dengan dosis adalah dosis perlakuan dalam satu bulan. Untuk mengetahui respons dari masing- masing perlakuan terhadap konsentrasi hormon estradiol-17β dan testosteron dalam plasma darah maka dilakukan pengambilan sampel setiap 10 hari selama empat bulan.

Variabel yang D itera

Bobot ikan, diameter telur, kandungan testosteron serta estradiol-17ß dalam plasma darah.

(52)

PertumbuhanGonadik

Untuk mengetahui perubahan yang terjadi pada gonad secara kuantitatif dilakukan pengukuran indeks gonad somatik (IGS). IGS ditentukan dengan rumus yang dikemukakan oleh Effendie (1997), yaitu ;

Wt

IGS = --- x 100% W

dengan :

IGS = indeks gonad somatik (%) Wt = bobot gonad (g)

W = bobot ikan (g)

Bahan Ikan Uji

Ikan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah calon induk ikan belida betina mempunya i ukuran berat 0,2 – 0,3 kg sebanyak 26 ekor.

Pelet Implant

Hormon yang digunakan dalam penelitian ini adalah 17a- metiltestosteron, produksi Argent Chemical Company St. Louis, USA. Hormon analog Luteinizing Hormon Releasing Hormon (LHRH-a) buatan Argent Laboratories Inc. Philipine. Kedua hormon tersebut kemudian dibuat dalam bentuk pelet atau butiran berdiameter 1 mm dan panjang 3 mm dengan menggunakan campuran bahan-bahan kimia yang terdiri atas tepung kolesterol, larutan alkohol 50% dan mentega coklat.

Pakan

Pakan yang akan digunakan adalah ikan segar dan ikan hidup denga n pemberian secara ad libitum. Pemberian pakan dilakukan pada pagi dan sore hari.

Parameter yang Diamati

Parameter yang diamati serta metode pengukuran yang akan digunakan dalam penelitian ini disajikan dalam Tabel 3.

(53)

Tabel 3. Variabel dan alat ukur yang digunakan

No Parameter Alat/cara pengukuran

1 Profil hormon Radioimunoassay (RIA)

2 Diameter telur Mikroskop dengan micrometer

3 O2 terlarut DO meter

4 Suhu Termometer

5 pH pH meter

6 Amoniak Spektrofotometer

7 Alkalinitas Titrasi jingga metal

8 Bobot ikan Timbangan

Pengukuran Konsentrasi Hormon dalam Darah

Prosedur pengukuran konsentrasi hormon estradiol-17ß dan testosteron dalam darah dilakukan denga n cara sebagai berikut :

Pengambilan sampel darah dilakukan pada bagian pangkal ekor sebanyak 1 ml (Lampiran 2) dengan menggunakan spuit yang berheparin, kemud ian dimasukkan ke dalam tabung polietilen dan disentrifuse selama 5 menit pada kecepatan 10.000 rpm. Selanjutnya plasma darah diambil dan dimasukkan ke dalam tabung polietilen baru. Kandungan hormon estradiol-17β dan testosteron pada plasma diukur dengan mempergunakan Radio Immuno Assay. Alat dan cara kerja radio immuno assay seperti pada Lampiran 3 dan 4.

Persiapan Ikan Uji

Ikan uji yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah calon induk ikan belida yang dibeli dari petani dan telah diadaptasikan. Berat rata-rata calon induk ikan belida adalah antara 0,2 – 0,3 kg sebanyak 26 ekor. Ikan yang telah diseleksi kemudian dimasukan ke dalam akuarium pemeliharaan. Masing-masing akuarium diisi satu ekor ikan yang mewakili satu unit percobaan. Pakan yang diberikan adalah ikan segar dan ikan hidup.