Lampiran 1 Data Hasil Penelitian
Tabel Persen Degranulasi Mastosit Mencit Jantan
Perlakuan
Mencit 1 Mencit 2 Mencit 3 Mencit 4 Mencit 5
% Rata-rata Degranulasi Rata-rata jumlah sel % Deg Rata-rata jumlah sel % Deg Rata-rata jumlah sel % Deg Rata-rata jumlah sel % Deg Rata-rata jumlah sel % Deg P 3200.103 0,00 4100.103 0,00 3150.103 0,00 3350.103 0,00 3670.103 0,00 0,00 ± 0,00 P + Ag + DMSO 1% 176.10 3 94,50 223.103 94,56 236.103 92,50 236.103 91,55 283.103 93,84 93.38 ± 1.31 P + Ag + 2 µg/ml 536.10 3 83,25 656.103 84,00 593.103 81,19 530.103 84,17 683.103 81,38 82.79 ± 1.42 P + Ag + 3 µg/ml 987.10 3 69,15 996.103 75,70 912.103 71,04 903.103 73,04 1123.103 69,40 71.66 ± 2.73 P + Ag + 4µg/ml 1223.10 3 61,77 1330.103 67,56 1537.103 51,21 1443.103 56,91 1360.103 62,94 60.07 ± 6.23 P + Ag + 5 µg/ml 1843.10 3 42,40 1676.103 59,12 1863.103 40,85 1786.103 46,68 1723.103 53,05 48.42 ± 7.62 P + Ag + 6 µg/ml 2226.10 3 30,43 2340.103 42,92 2353.103 25,30 2323.103 30,65 2233.103 39,15 33.69 ± 7.16 P + Ag + Am 100 µg/ml 2573.103 19,59 2606.103 36,43 2503.103 20,53 2630.103 21,49 2600.103 29,15 25.43 ± 7.21 Keterangan : P = Suspensi Mastosit
Ag = Antigen putih telur ayam 50%
DMSO = Dimetil Sulfoksida 1%
EEDBB 2µg/ml = Ekstrak Etanol Daun Bangun – Bangun Dosis 2µg/ml
EEDBB 3µg/ml = Ekstrak Etanol Daun Bangun – Bangun Dosis 3µg/ml
EEDBB 4µg/ml = Ekstrak Etanol Daun Bangun – Bangun Dosis 4µg/ml
EEDBB 5µg/ml = Ekstrak Etanol Daun Bangun – Bangun Dosis 5µg/ml
EEDBB 6µg/ml = Ekstrak Etanol Daun Bangun – Bangun Dosis 6µg/ml
Lampiran 1 (lanjutan) Tabel Deskriptif % Degranulasi Perlakuan N Mean Std. Deviation Std. Error 95% Confidence Interval for Mean Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound % Degranulasi Normal 5 .0000 .00000 .00000 .0000 .0000 .00 .00 DMSO 1% 5 93.3860 1.31669 .58884 91.7511 95.0209 91.55 94.54 dosis 2 ug/mL 5 82.7980 1.42547 .63749 81.0280 84.5680 81.19 84.17 dosis 3 ug/mL 5 71.6660 2.73943 1.22511 68.2645 75.0675 69.15 75.70 dosis 4 ug/mL 5 60.0780 6.23923 2.79027 52.3310 67.8250 51.21 67.56 dosis 5 ug/mL 5 48.4200 7.62397 3.40954 38.9536 57.8864 40.85 59.12 dosis 6 ug/mL 5 33.6900 7.16355 3.20364 24.7953 42.5847 25.30 42.92 Aminofilin 100 ug/mL 5 25.4380 7.21937 3.22860 16.4740 34.4020 19.59 36.43 Total 40 51.9345 30.04336 4.75027 42.3262 61.5428 .00 94.54
Tabel Uji Normalitas
Perlakuan
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
% Degranulasi DMSO 1% .235 5 .200* .880 5 .308 Dosis 2 ug/ml .240 5 .200* .840 5 .165 Dosis 3 ug//ml .196 5 .200* .912 5 .479 Dosis 4 ug//ml .207 5 .200* .975 5 .907 Dosis 5 ug//ml .190 5 .200* .931 5 .604 Dosis 6 ug//ml .264 5 .200* .930 5 .595 Aminofilin 100 ug//ml .308 5 .137 .845 5 .179
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
Lampiran 1. (lanjutan)
Tabel uji ANAVA Satu Arah (One Way ANOVA) % Degranulasi
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 34354.507 7 4907.787 185.410 .000
Within Groups 847.035 32 26.470
Lampiran 1 (lanjutan) Tabel Uji Post Hoc Tukey
% Degranulasi Tukey HSD
Dependent Variable
(I) Perlakuan (J) Perlakuan
Mean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound % Degranulasi Normal DMSO 1% -93.38600* 3.25391 .000 -103.9264 -82.8456 dosis 2 µg/ml -82.79800* 3.25391 .000 -93.3384 -72.2576 dosis 3 µg/ml -71.66600* 3.25391 .000 -82.2064 -61.1256 dosis 4 µg/ml -60.07800* 3.25391 .000 -70.6184 -49.5376 dosis 5 µg/ml -48.42000* 3.25391 .000 -58.9604 -37.8796 dosis 6 µg/ml -33.69000* 3.25391 .000 -44.2304 -23.1496 Aminofilin 100 µg/ml -25.43800* 3.25391 .000 -35.9784 -14.8976 DMSO 1% Normal 93.38600* 3.25391 .000 82.8456 103.9264 dosis 2 µg/ml 10.58800* 3.25391 .048 .0476 21.1284 dosis 3 µg/ml 21.72000* 3.25391 .000 11.1796 32.2604 dosis 4 µg/ml 33.30800* 3.25391 .000 22.7676 43.8484 dosis 5 µg/ml 44.96600* 3.25391 .000 34.4256 55.5064 dosis 6 µg/ml 59.69600* 3.25391 .000 49.1556 70.2364 Aminofilin 100 µg/ml 67.94800* 3.25391 .000 57.4076 78.4884 Dosis 2 µg/ml Normal 82.79800* 3.25391 .000 72.2576 93.3384 DMSO 1% -10.58800* 3.25391 .048 -21.1284 -.0476 dosis 3 µg/ml 11.13200* 3.25391 .032 .5916 21.6724 dosis 4 µg/ml 22.72000* 3.25391 .000 12.1796 33.2604 dosis 5 µg/ml 34.37800* 3.25391 .000 23.8376 44.9184 dosis 6 µg/ml 49.10800* 3.25391 .000 38.5676 59.6484 Aminofilin 100 µg/ml 57.36000* 3.25391 .000 46.8196 67.9004 Dosis 3 µg/ml Normal 71.66600* 3.25391 .000 61.1256 82.2064 DMSO 1% -21.72000* 3.25391 .000 -32.2604 -11.1796 dosis 2 µg/ml -11.13200* 3.25391 .032 -21.6724 -.5916 dosis 4 µg/ml 11.58800* 3.25391 .023 1.0476 22.1284 dosis 5 µg/ml 23.24600* 3.25391 .000 12.7056 33.7864 dosis 6 µg/ml 37.97600* 3.25391 .000 27.4356 48.5164 Aminofilin 100 µg/ml 46.22800* 3.25391 .000 35.6876 56.7684
Dosis 4 µg/ml Normal 60.07800* 3.25391 .000 49.5376 70.6184 DMSO 1% -33.30800* 3.25391 .000 -43.8484 -22.7676 dosis 2 µg/ml -22.72000* 3.25391 .000 -33.2604 -12.1796 dosis 3 µg/ml -11.58800* 3.25391 .023 -22.1284 -1.0476 dosis 5 µg/ml 11.65800* 3.25391 .022 1.1176 22.1984 dosis 6 µg/ml 26.38800* 3.25391 .000 15.8476 36.9284 Aminofilin 100 µg/ml 34.64000* 3.25391 .000 24.0996 45.1804 Dosis 5 µg/ml Normal 48.42000* 3.25391 .000 37.8796 58.9604 DMSO 1% -44.96600* 3.25391 .000 -55.5064 -34.4256 dosis 2 µg/ml -34.37800* 3.25391 .000 -44.9184 -23.8376 dosis 3 µg/ml -23.24600* 3.25391 .000 -33.7864 -12.7056 dosis 4 µg/ml -11.65800* 3.25391 .022 -22.1984 -1.1176 dosis 6 µg/ml 14.73000* 3.25391 .002 4.1896 25.2704 Aminofilin 100 µg/ml 22.98200* 3.25391 .000 12.4416 33.5224 Dosis 6 µg/ml Normal 33.69000* 3.25391 .000 23.1496 44.2304 DMSO 1% -59.69600* 3.25391 .000 -70.2364 -49.1556 dosis 2 µg/ml -49.10800* 3.25391 .000 -59.6484 -38.5676 dosis 3 µg/ml -37.97600* 3.25391 .000 -48.5164 -27.4356 dosis 4 µg/ml -26.38800* 3.25391 .000 -36.9284 -15.8476 dosis 5 µg/ml -14.73000* 3.25391 .002 -25.2704 -4.1896 Aminofilin 100 µg/ml 8.25200 3.25391 .217 -2.2884 18.7924 Aminofilin 100 µg/ml (kontrol positif) Normal 25.43800* 3.25391 .000 14.8976 35.9784 DMSO 1% -67.94800* 3.25391 .000 -78.4884 -57.4076 dosis 2 µg/ml -57.36000* 3.25391 .000 -67.9004 -46.8196 dosis 3 µg/ml -46.22800* 3.25391 .000 -56.7684 -35.6876 dosis 4 µg/ml -34.64000* 3.25391 .000 -45.1804 -24.0996 dosis 5 µg/ml -22.98200* 3.25391 .000 -33.5224 -12.4416 dosis 6 µg/ml -8.25200 3.25391 .217 -18.7924 2.2884
Lampiran 1 (lanjutan) Tabel homogenous
% Degranulasi Mastosit
Tukey HSDa
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5 6 7 Normal 5 .0000 Aminofilin 100 µg/ml 5 25.4380 Dosis 6 µg/ml 5 33.6900 Dosis 5 µg/ml 5 48.4200 Dosis 4 µg/ml 5 60.0780 Dosis 3 µg/ml 5 71.6660 Dosis 2 µg/ml 5 82.7980 DMSO 1% 5 93.3860 Sig. 1.000 .217 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.
Lampiran 3 Bagan kerja penelitian
Dicuci dari pengotor sampai bersih Ditiriskan
Ditimbang berat basahnya
Pemeriksaan organoleptis
Dikeringkan mengunakan lemari pengering
Ditimbang berat keringnya
Dihaluskan dengan blender
Disimpan dalam wadah yang tertutup rapat sebelum digunakan
Dimasukkan ke dalam wadah Ditambahkan etanol 96% hingga serbuk terendam
Dibiarkan selama 5 Hari terlindung dari cahaya,
sambil sesekali diaduk Disaring
Diremaserasi menggunakan etanol 96%
Dibiarkan selama 2 hari terlindung dari cahaya
Disaring
Dipekatkan dengan rotary evaporator
Dibuat larutan uji Diuji aktivitas penghambatan degranulasi mastosit pada mencit jantan secara in vitro
Daun Bangun-Bangun
Daun Bangun-Bangun
Simplisia
Karakterisasi Skrining Fitokimia 700 g serbuk simplisia
kadar abu total
kadar abu tidak larut dalam asam kadar air
kadar sari larut dalam air kadar sari larut dalam etanol
Senyawa golongan: Alkaloid Glikosida Flavonoid Steroid Saponin Tanin Ampas Maserat I Maserat II Ekstrak kental (55,16 g) Hasil kadar air
kadar sari larut dalam air kadar sari larut dalam etanol
Karakterisasi Skrining Fitokimia
Senyawa golongan: Alkaloid Glikosida Flavonoid Steroid Saponin Tanin Persen penurunan jumlah degranulasi mastosit
Lampiran 4. Gambar tumbuhan bangun–bangun (Plectranthus amboinicus
(Lour.) Spreng)
Gambar tumbuhan bangun–bangun (Plectranthus amboinicus, (Lour.) Spreng)
Lampiran 4 (lanjutan)
Gambar simplisia daun bangun–bangun (Plectranthi folium)
Lampiran 5 Gambar Alat-alat
Hemositometer (Improved Neubauer-Marienfield)
Lampiran 5 (Lanjutan)
Pipet mikro 5-50 μL (SOCOREX)
Lampiran 6 Gambar Hewan Percobaan
Lampiran 7 Gambar Isolasi Mastosit dari Peritoneal Mencit dan Pengukuran
Mastosit pada Hemositemeter
Lampiran 7 (Lanjutan)
Uji Ketahanan Sel (Cell Viability Test) dengan metode trypan blue exclusion Persen Ketahanan Sel (90,476%)
Keterangan : A = Sel mastosit yang tidak terdegranulasi (tidak berwarna)
B = Sel mastosit yang terdegranulasi (berwarna biru)
Mastosit mencit normal berjumlah 1 x 104 sel/ml dengan pembesaran 10 x 40.
A A
B
Lampiran 7 (Lanjutan)
Penghambatan Degranulasi Mastosit oleh EEDBB 2 µg/ml dengan pembesaran 10 x 40. Dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin, tanda
panah menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Penghambatan Degranulasi Mastosit oleh EEDBB 3 µg/ml dengan pembesaran 10 x 40. Dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin, tanda
panah menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Lampiran 7 (Lanjutan)
Penghambatan Degranulasi Mastosit oleh EEDBB 4 µg/ml dengan pembesaran 10 x 40. Dengan mengunakan pewarnaan biru toluidin, tanda
panah menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Lampiran 7 (Lanjutan)
Penghambatan Degranulasi Mastosit oleh EEDBB 6 µg/ml dengan pembesaran 10 x 40. Dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin, tanda panah
menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Penghambatan degranulasi mastosit oleh aminofilin 100 µg/ml dengan pembesaran 10 x 40. Dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin, tanda
panah menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Lampiran 7 (Lanjutan)
Penghambatan Degranulasi Mastosit oleh DMSO 1% dengan pembesaran10 x 40. Dengan menggunakan pewarnaan biru toluidin, tanda
panah menunjukan sel mastosit yang tidak terdegranulasi akan terlihat berwarna ungu.
Lampiran 8 Rumus Thompson
Dosis maksimal = 6 μg/ml (didapatkan dari uji pendahuluan dan uji viabilitas) Dosis minimum = 2 μg/ml (didapatkan dari uji pendahuluan merupakan dosis
terkecil yang masih memberikan efek penghambatan degranulasi mastosit)
Banyaknya variasi dosis yang digunakan = 5 dosis
F =
1min
nD
Dmaks
F =
42
6
F = 1,316 = 1
Dimana :F = Faktor peningkatan dosis
n = Banyaknya variasis dosis
Dmaks = Dosis maksimum Dmin = Dosis minimum
Dari perhitungan tersebut, didapatkan nilai F adalah 1. Maka, dosis yang digunakan adalah 2 μg/ml, 3 μg/ml, 4 μg/ml, 5 μg/ml, dan 6 μg/ml.
Lampiran 9 Perhitungan Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Ekstrak Etanol
Daun Bangun-Bangun (EEDBB).
1. Timbang 100 mg (EEDBB) ad 1 ml DMSO 1% C = 100 mg/ml
2. Pipet 0.1 ml dari C = 100 mg/ml ad 1 ml DMSO 1% C1 x V1 = C2 x V2
100 mg/ml x 0.1 ml = C2 x 1 ml
10 mg/ml = C2
10.000 µg/ml = C2
3. Pipet 0.1 ml dari C = 10.000 µg/ml ad 1 ml DMSO 1% C1 x V1 = C2 x V2
10.000 µg/ml x 0.1 ml = C2 x 1 ml
1000 µg/ml = C2
4. Pipet 0.1 ml dari C = 1000 µg/ml ad 1 ml DMSO 1% C1 x V1 = C2 x V2 1000 µg/ml x 0.1 ml = C2 x 1 ml 100 µg/ml = C2 5. Konsentrasi 6 µg/ml C1 x V1 = C2 x V2 100 µg/ml x V1 = 6 µg/ml x 6 ml V1= µg/ml 100 µg 36 V1= 0,36 ml
Pipet 0.36 ml dari C = 100 µg/ml ad 6 ml DMSO 1% 6. Konsentrasi 5 µg/ml C1 x V1 = C2 x V2 6 µg/ml x V1 = 5 µg/ml x 6 ml V1= µg/ml 6 µg 30 V1= 5 ml
Pipet 5 ml dari C = 6 µg/ml ad 6 ml DMSO 1% 7. Konsentrasi 4 µg/ml C1 x V1 = C2 x V2 5 µg/ml x V1 = 4 µg/ml x 5 ml V1= µg/ml 5 µg 20
8. Konsentrasi 3 µg/ml C1 x V1 = C2 x V2 4 µg/ml x V1 = 3 µg/ml x 4 ml V1= µg/ml 4 µg 12 V1= 3 ml
Pipet 3 ml dari C = 4 µg/ ml ad 4 ml DMSO 1% 9. Konsentrasi 2 µg/ml C1 x V1 = C2 x V2 3 µg/ml x V1 = 2 µg/ml x 3 ml V1= µg/ml 3 µg 6 V1= 2 ml
Lampiran 10 Perhitungan konsentrasi larutan uji aminopilin 100 µg/ml dan
antigen putuh telur ayam 50%.
a. Aminofilin injeksi dengan konsentrasi dosis 24 mg/ml diencerkan menjadi konsentrasi 100 µg/ml. C1 x V1 = C2 x V2 24 mg/ml x V1 = 100 µg/ml x 5 ml 24000 µg/ml x V1 = 100 µg/ml x 5 ml V1= µg/ml 24000 ml 5 x µg/ml 100 V1= 0,0208 ml V1= 20,8 µl V1= 21 µl
Ambil larutan aminopilin konsentrasi 24 mg/ml sebanyak 21 µl masukkan kedalam labu tentukur 5 ml, tambahkan larutan DMSO hingga 5 ml.
b. Antigen putih telur ayam diambil sebanyak 5 ml, kemudian ditambah kan 5 ml larutan NaCl fisiologis 0,9%.
- Larutan induk.
Larutan antigen putih telur ayam diambil 5 ml kemudian ditambahkan 5 ml larutan NaCl fisiologis 0,9% (konsentrasi 100%).
- Kemudian dilakukan pengenceran sehingga diperoleh konsentrasi 50%. C1 x V1 = C2 x V2 100% x 5 ml = C2 x 10 ml 500% = C2 x 10 C2 = 10 500% C2 = 50%
Lampiran 11 Perhitungan Uji Ketahanan Sel (Cell Viability Test) Digunakan
Rumus Sebagai Berikut:
% Vs = x100% Nsm Nsh Nsh Dimana:
% Vs = Persen viable sel
Nsh = Jumlah sel berwarna bening
Nsm = Jumlah sel biru Ketahanan sel 6µg/ml Sel berwarna bening : 380
Sel berwarna biru : 40
Total jumlah sel : 420
% Vs = 100% 380 40 380 x % Vs = 90,476%
Lampiran 12 Perhitungan Jumlah Sel Pada Hemositometer Dengan
Menggunakan Rumus Sebagai Berikut:
Hemositometer terdiri dari 4 kamar hitung (A, B, C, dan D), setiap kamar hitung terdiri dari 16 kotak, hitung sel pada 4 kamar hemositometer dengan mengunankan mikroskop.
Dimana:
= Jumlah sel/ml
= Jumlah pada kamar A
= Jumlah pada kamar B
= Jumlah pada kamar C
= Jumlah pada kamar D
Sebagai contoh perhitugan, data yang digunakan dari jumlah sel pada kelompok 1 (normal) dan kelompok 4 (dosis EEDBB 2 µg/ml) mencit pertama. dimana setiap perlakuan diulang sebanyak 3 kali untuk memperkecil kesalahan. Jumlah sel mast sebelum perlakuan (normal)
1. A = 308 B = 321 C = 322 D = 325 319 x /ml 2. A = 309 B = 322 C = 328 D = 329
3. A = 308 B = 301 C = 336 D = 331 319 x /ml Rata-rata 320 3200
Dosis EEDBB 2 µg/ml (mencit pertama) 4. A = 58 B = 62 C = 64 D = 60 61 x /ml 5. A = 48 B = 63 C = 51 D = 54 54 x /ml
6. A = 47 B = 39 C = 57 D = 41 46 x /ml Rata-rata 53,6 536
Maka persen degranulasi dapat dihitung dengan mengunakan rumus sebagai berikut:
% Degranulasi = x 100 %
Dimana:
P = Jumlah mastosit sebelum perlakuan
S = Jumlah mastosit setelah perlakuan
% Degranulasi = x 100%
= x 100%
