BAB 3
KERANGKA TEORI, KERANGKA KONSEP DAN
HIPOTESIS PENELITIAN
4. Telah ada penyakit lain di kulit
3.2. Kerangka Konsep
Ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 25%, 50%, 75%, 85% dan 100%
Kadar Hambat Minimum (KHM) pada pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 3.2. Kerangka konsep penelitian
3.3. Hipotesis
Hipotesis untuk penelitian ini adalah ekstrak buah pinang muda dapat
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1. Jenis Penelitian
Penelitian yang telah dilakukan ini merupakan studi eksperimental
laboratorium dengan desain penelitian posttest only with control group design.
4.2. Tempat Dan Waktu Penelitian 4.2.1. Tempat Penelitian
Ekstrak buah pinang muda didapat dari Laboratorium Obat Tradisional,
Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan dan uji daya hambat
ekstrak dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran,
Universitas Sumatera Utara, Medan.
4.2.2. Waktu Penelitian
Penelitian ini berlangsung dari bulan September 2016 sampai bulan Oktober
2016. Penelitian ini dimulai dengan mendapatkan ekstrak buah pinang muda dari
Laboratorium Obat Tradisional, Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara
dan dilanjutkan dengan melakukan uji daya hambat ekstrak buah pinang muda
terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus di Laboratorium
Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sumatera Utara.
4.3. Sampel Penelitian
Sampel yang digunakan untuk penelitian ini adalah bakteri Staphylococcus
aureus yang disediakan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
4.3.1. Besar Sampel Penelitian
Pada penelitian ini jumlah sampel minimal telah diestimasi dengan
menggunakan rumus Frederer sebagai berikut:
(t-1)(r-1) ≥ 15
Keterangan:
t = banyak kelompok diperlakukan
r = jumlah sampel tiap kelompok diperlakukan
(t-1)(r-1) ≥ 15 (6-1)(r-1) ≥ 15 r ≥ 4
Penelitian ini telah dilakukan dengan menggunakan 6 sampel dan diberikan
perlakuan pengulangan sebanyak 4 kali. Jadi jumlah sampel yang telah digunakan
adalah 24 sampel.
P1 : Kontrol negatif (blanko)
P2 : Ekstrak buah pinang muda 25%
P3 : Ekstrak buah pinang muda 50%
P4 : Ekstrak buah pinang muda 75%
P5 : Ekstrak buah pinang muda 85%
4.4. Teknik Pengumpulan Data
Jenis data yang dikumpul dari penelitian ini berupa data primer, dimana
peneliti mengukur diameter zona hambat yang timbul pada pertumbuhan koloni
bakteri Staphylococcus aureus setelah diberi intervensi dengan ekstrak buah
pinang muda dengan konsentrasi yang berbeda di Laboratorium Mikrobiologi,
FK, USU, Medan.
4.5. Bahan dan Cara Kerja
4.5.1. Alat yang digunakan untuk penelitian ini adalah:
Peralatan yang digunakan adalah inkubator, paper disc, jangka sorong, pinset,
cawan petri, ose, autoclave, bunsen, pipet tetes dan tabung uji.
4.5.2. Bahan yang digunakan untuk penelitian ini adalah:
Bahan yang digunakan adalah ekstrak buah pinang muda, biakan bakteri
Staphylococcus aureus, aquabides steril, Dimethyl Sulfoxide (DMSO), kertas
label, kapas lidi steril dan Mueller-Hinton Agar (MHA).
4.5.3. Prosedur Penelitian
4.5.3.1. Ekstrak buah pinang muda
Ekstrak buah pinang muda didapatkan dari Laboratorium Obat Tradisional,
Fakultas Farmasi, USU, Medan.
4.5.3.2. Pengenceran
Pengenceran dilakukan untuk menghasilkan beberapa konsentrasi dari ekstrak buah
pinang muda yang digunakan dalam penghambatan pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus. Pengenceran yang dibuat adalah 25%, 50%, 75%, 85% dan
100%.
4.5.3.3. Pemurnian
1. Biakan Staphylococcus aureus murni diinokulasi dalam aquabides steril.
3. Biakan murni Staphylococcus aureus diinokulasi dengan kapas lidi steril pada
permukaan lempeng agar sehingga tersebar merata.
4.5.3.4. Pengujian daya hambat ekstrak buah pinang muda terhadap Staphylococcus aureus
1. Menyiapkan empat buah cawan petri berisi MHA yang telah dioleskan dengan
bakteri Staphylococcus aureus.
2. Menyiapkan 5 paper disc untuk menguji masing-masing konsentrasi ekstrak
buah pinang muda dan 1 paper disc sebagai kontrol negatif.
3. Merendamkan 5 paper disc kedalam larutan ekstrak buah pinang muda
masing-masing konsentrasi 25%, 50%, 75%, 85% dan 100% selama 15 menit
sedangkan 1 paper disc sebagai kontrol negatif.
4. Memasukkan 5 paper disc yang telah direndam dalam ekstrak buah pinang
muda dengan konsentrasi yang berbeda dan 1 paper disc sebagai kontrol
negatif dengan bantuan pinset steril ke dalam cawan petri.
5. Mengulang langkah 2, 3 dan 4 sebanyak tiga kali lagi.
6. Semua cawan petri diinkubasi selama 18 - 24 jam dengan suhu 37°C.
4.5.3.5. Zona hambat
Pengukuran zona hambat dilakukan dengan menggunakan jangka sorong
untuk mengukur besar zona daya hambat yang terbentuk disekitar paper disc.
Jaraknya diukur mulai dari ujung disc sampai ke batas bening daya hambat
ekstrak buah pinang muda. Pengukuran dengan jangka sorong dinyatakan dalam
ukuran millimeter.
4.6. Definisi Operasional 4.6.1. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi zat-zat
aktif dari tanaman segar dengan menggunakan pelarut etanol 70%.
Cara ukur : Cara maserasi
Hasil ukur : Sediaan kental yang mengandung zat-zat aktif
Skala ukur : Nominal
4.6.2. Buah pinang muda
Buah pinang muda adalah buah yang berwarna hijau dalam ukuran 2 – 3 cm
yang didapatkan dari tanaman pinang.
Cara ukur : Observasi
Alat ukur : Penggaris
Hasil ukur : Buah pinang yang berwarna hijau dengan ukuran 2 - 3 cm
Skala ukur : Nominal
4.6.3. Konsentrasi
Konsentrasi adalah pengenceran yang dilakukan pada ekstrak buah pinang
muda untuk menentukan jumlah zat terlarut yang harus ada dalam suatu larutan.
Cara ukur : Menggunakan rumus pengenceran; V1C1=V2C2
V1 – volume ekstrak yang digunakan (ml)
C1 – konsentrasi ekstrak yang digunakan (mg/ml)
V2 – volume larutan yang akan dibuat (ml)
C2 – konsentrasi ekstrak yang akan dibuat (mg/ml)
25% V1C1 = V2C2
V1(1000 mg/ml) = (10 ml)(250 mg/ml)
V1 = 2,5 ml (DMSO 7,5 ml)
50% V1C1 = V2C2
V1(1000 mg/ml) = (10 ml)(500 mg/ml)
V1 = 5 ml (DMSO 5 ml)
75% V1C1 = V2C2
V1(1000 mg/ml) = (10 ml)(750 mg/ml)
85% V1C1 = V2C2
V1(1000 mg/ml) = (10 ml)(850 mg/ml)
V1 = 8,5 ml (DMSO 1,5 ml)
100% V1C1 = V2C2
V1(1000 mg/ml) = (10 ml)(1000 mg/ml)
V1 = 10 ml
Alat ukur : DMSO, ekstrak buah pinang muda
Hasil ukur : Larutan ekstrak dengan konsentrasi 25%, 50%, 75%, 85% dan 100%
Skala ukur : Rasio
4.6.4. Kadar Hambat Minimum (KHM)
Kadar Hambat Minimum (KHM) adalah kadar konsentrasi ekstrak buah
pinang muda minimum yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Cara ukur : Observasi
Alat ukur : Jangka sorong
Hasil ukur : Diameter zona bening yang timbul pada koloni bakteri
Skala ukur : Rasio
4.6.5. Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus
Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus adalah bakteri Staphylococcus
aureus yang bertumbuh setelah dibiakkan dalam MHA.
Cara ukur : Observasi
Alat ukur : Cawan petri, MHA, Suspensi Bakteri Staphylococcus aureus
Hasil ukur : Koloni bakteri yang berwarna putih kekuningan
Skala ukur : Nominal
4.7. Metode Analisa Data
aureus. Selanjutnya data disajikan dalam bentuk tabel dan dilakukan tes
normalitas. Hasil tes normalitas menunjukkan data tidak berdistribusi normal.
Selanjutnya telah dilakukan uji non-parametrik, Kruskal-Wallis. Uji ini telah
dilakukan dengan menggunakan program komputer SPSS.
4.8. Alur Penelitian
Ekstrak buah pinang muda diperoleh dari Laboratorium Obat Tradisional,
Fakultas Farmasi, USU, Medan.
Pengenceran ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 25%, 50%, 75%
85% dan 100%
Paper disc direndamkan dalam larutan ekstrak buah pinang muda dalam tiap
konsentrasi
Paper disc diletakkan dalam bakteri yang telah dibiakkan dalam medium MHA
Setelah 24 jam dilakukan pengukuran zona hambat dengan menggunakan
jangka sorong
Pencatatan data
BAB 5
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
5.1. Hasil Penelitian 5.1.1. Tempat Penelitian
Pembuatan ekstrak buah pinang muda dilakukan di Laboratorium Obat Tradisional, Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan. Setelah
pembuatan ekstrak selesai, ekstrak yang diperoleh langsung dibawa ke Laboratorium
Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sumatera Utara, Medan untuk
dilakukan uji daya hambat ekstrak terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
Gambar 5.1. Ekstrak Buah Pinang Muda
5.1.2. Hasil Uji Daya Hambat
Hasil uji daya hambat ekstrak buah pinang muda terhadap bakteri
Staphylococcus aureus yang dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas
Kedokteran, USU menunjukkan ekstrak buah pinang muda dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Jumlah sampel yang digunakan dalam penelitian ini telah dihitung dengan
menggunakan rumus Frederer.
Rumus Frederer:
Tabel 5.1. Diameter Zona Hambat (mm) Hasil Uji Daya Hambat Ekstrak Buah
Penelitian ini telah dilakukan dengan menggunakan 24 sampel. Jumlah sampel
ini merupakan jumlah sampel minimal yang diperlukan untuk melakukan
penelitian ini berdasarkan hitungan dari rumus Frederer. Dalam penelitian ini
telah dilakukan pengulangan sebanyak empat kali untuk setiap kelompok sampel
mulai dari ekstrak buah pinang muda konsentrasi 25%, ekstrak buah pinang muda
konsentrasi 50%, ekstrak buah pinang muda konsentrasi 75%, ekstrak buah
pinang muda konsentrasi 85%, ekstrak buah pinang muda konsentrasi 100% and
pada sampel kelompok kontrol.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa rata-rata luas zona hambat yang
timbul untuk kelompok sampel ekstrak buah pinang muda konsentrasi 50% adalah
7 mm, untuk ekstrak buah pinang muda konsentrasi 75% adalah 10,5 mm, untuk
ekstrak buah pinang muda konsentrasi 85% adalah 12,5 mm dan untuk ekstrak
buah pinang muda konsentrasi 100% adalah 15,75 mm. Sedangkan tidak ada zona
hambat yang timbul untuk kelompok sampel ekstrak buah pinang muda
konsentrasi 25% dan pada kelompok sampel kontrol.
Luas zona hambat yang terkecil dapat ditemukan pada kelompok sampel
ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 50% dengan rata-rata luas zona
hambat sebesar 7 mm. Kadar konsentrasi ini merupakan kadar konsentrasi terendah
yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Kadar ini
dapat disebut sebagai Kadar Hambat Minimum (KHM) ekstrak buah pinang muda
untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Luas zona hambat
yang terbesar dapat ditemukan pada kelompok sampel ekstrak buah pinang muda
Gambar 5.2. Hasil Uji Daya Hambat ulangan pertama
Gambar 5.3. Hasil Uji Daya Hambat ulangan kedua
Gambar 5.5. Hasil Uji Daya Hambat ulangan keempat
Setelah diperoleh data-data diatas, telah dilakukan uji normalitas. Daripada
hasil uji normalitas yang dilakukan, Shapiro-Wilk, diperoleh nilai p:0,003
(p<0,05), pada data seluruh kelompok perlakuan dan kontrol. Hal ini
menunjukkan bahwa data tidak berdistribusi normal. Dengan demikian, uji non
parametrik, Kruskal-Wallis, dapat digunakan dalam penelitian ini. Hasil uji
Kruskal-Wallis menunjukkan nilai p<0,0001 (p<0,05). Hal ini menunjukkan
bahwa terdapat perbedaan luas zona hambat yang signifikan antara kelompok
ekstrak buah pinang muda konsentrasi 25%, ekstrak buah pinang muda
konsentrasi 50%, ekstrak buah pinang muda konsentrasi 75%, ekstrak buah
pinang muda konsentrasi 85%, ekstrak buah pinang muda konsentrasi 100% dan
blanko yang digunakan sebagai kelompok kontrol.
5.2. Pembahasan
Penelitian ini merupakan penelitian studi eksperimental laboratorium dengan
desain penelitian posttest only with control group design yang dilakukan untuk
mengetahui pengaruh ekstrak buah pinang muda terhadap penghambatan
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
5.2.1. Uji Daya Hambat
Pada penelitian ini, ekstrak buah pinang muda yang didapatkan dari
konsentrasi yang berbeda yaitu 25%, 50%, 75%, 85% dan 100%. Pada penelitian
ini ditemukan bahwa ekstrak buah pinang muda dapat menghambat pertumbuhan
bakteri dengan konsentrasi 50%, 75%, 85% dan 100%. Ekstrak buah pinang muda
dengan konsentrasi 50% menunjukkan luas zona hambat yang terkecil, yaitu
dengan rata-rata 7 mm sedangkan luas zona hambat yang terbesar dapat
ditemukan pada ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 100%, yaitu
dengan rata-rata 15,75 mm.
Senyawa kimia yang terdapat dalam tumbuhan boleh berperan sebagai obat
lokal untuk penyembuhan penyakit. Selain itu, senyawa kimia pada tumbuhan
juga memiliki beberapa peran yang amat penting untuk memastikan tumbuhan
tersebut dapat bertahan hidup dari kondisi lingkungan yang kurang
menguntungkan seperti suhu, iklim, gangguan hama dan penyakit tumbuhan.26
Antara senyawa kimia yang terdapat dalam buah pinang muda adalah tanin,
flavonoid dan alkaloid.27
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Yang WQ pada tahun 2012, buah
pinang muda mengandung senyawa kimia flavonoid.28 Senyawa kimia ini dapat
bekerja sebagai antibakteri dengan mendenaturasi protein pada sel bakteri dan
merusakkan sitoplasma. Apabila sitoplasma bakteri dirusak, metabolit penting
yang ada pada bakteri akan keluar dan sistem enzim pada bakteri akan terhambat.
Keadaan ini dapat menyebabkan pertumbuhan sel bakteri terganggu.27
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Wang CK pada tahun 1997, buah
pinang muda juga mengandung senyawa kimia tanin dan alkaloid.
Hal yang
sama terjadi pada penelitian ini di mana ekstrak buah pinang muda yang
mempunyai senyawa kimia flavonoid menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
9
Senyawa-senyawa kimia ini dapat bekerja sebagai antibakteri. Senyawa kimia tanin ini
dapat merusak dinding sel bakteri sementara senyawa kimia alkaloid dapat
mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan
dinding sel tidak terbentuk secara utuh. Hal ini dapat menyebabkan dinding sel
bakteri mudah mengalami kerusakan. Kerusakan ini akan mengakibatkan sifat
ke luar sel akan terganggu. Apabila sel bakteri mengalami gangguan hantaran zat
seperti air dan nutrisi ke dalam dan ke luar sel, metabolisme sel akan terhambat
sehingga kadar pembentukan ATP yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri
akan menurun. Keadaan ini dapat menyebabkan pertumbuhan sel bakteri
terhambat dan boleh menyebabkan kematian pada sel bakteri.27 Hal yang sama
terjadi pada penelitian ini di mana ekstrak buah pinang muda yang mengandung
senyawa kimia tanin dan alkaloid menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
Selain itu, berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Puspawati N. tentang
uji aktivitas antibakteri ekstrak etanolik biji pinang (Areca catechu L.) terhadap
Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa menunjukkan bahwa
ekstrak etanolik biji pinang dapat mematikan bakteri Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas aeruginosa. Kadar konsentrasi yang paling baik untuk mematikan
bakteri Staphylococcus aureus adalah pada konsentrasi 1,57% dan untuk
Pseudomonas aeruginosa adalah pada konsentrasi 25%.12
Penelitian tentang pengaruh ekstrak buah pinang muda sebagai antibakteri
belum pernah dilakukan sebelum ini. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan
untuk mengetahui pengaruh ekstrak buah pinang muda sebagai antibakteri,
khususnya untuk bakteri Staphylococcus aureus. Hasil penelitian yang diperoleh
ini menunjukkan buah pinang muda mempunyai kemampuan untuk menghambat
pertumbuhan bakteri, khususnya pada pertumbuhan bakteri Staphylococcus
aureus.
Sedangkan penelitian
tentang ekstrak buah pinang muda ini menunjukkan ekstrak buah pinang muda
dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan
konsentrasi ekstrak 50%.
Hasil penelitian ini menunjukkan ekstrak buah pinang muda dengan kadar
konsentrasi 25% tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus
aureus. Hal ini karena senyawa kimia yang bersifat antibakteri di ekstrak buah
pinang muda yaitu flavonoid, tanin dan alkaloid berada pada kadar yang rendah
sehingga ekstrak buah pinang muda tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri
BAB 6
KESIMPULAN DAN SARAN
6.1. Kesimpulan
Berdasarkan tujuan dan hasil penelitian, maka dapat ditarik
kesimpulan-kesimpulan sebagai berikut:
1. Ekstrak buah pinang muda dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
2. Ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 50%, 75%, 85% dan 100%
dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus sedangkan
ekstrak buah pinang muda dengan konsentrasi 25% tidak dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
3. Kadar konsentrasi ekstrak buah pinang muda yang minimum diperlukan untuk
menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus adalah 50%.
4. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak buah pinang muda, semakin luas zona
hambat yang timbul pada koloni bakteri Staphylococcus aureus.
6.2. Saran
Berdasarkan hasil penelitian, dapat dibuat saran-saran sebagai berikut:
1. Kepada pelayanan kesehatan, menggunakan informasi penelitian ini untuk
menggobati pasien dengan infeksi bakteri Staphylococcus aureus.
2. Kepada masyarakat, menggunakan pengobatan yang berasal dari alami supaya
dapat mengelakan efek samping dari penggunaan antibiotik sintetik.
3. Kepada peneliti lain, menggunakan data penelitian ini untuk melakukan
penelitian lebih lanjut untuk mengetahui Kadar Bunuh Minimum (KBM)
ekstrak buah pinang muda terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
4. Kepada peneliti lain, melakukan penelitian tentang ekstrak buah pinang muda
dengan menggunakan bakteri lain untuk mengetahui pengaruh ekstrak buah
