9
30 Pengantar diagnosis penyakit tanaman
tanah yang menempel (tanah rizosfer). Jika tanamannya besar, seperti pisang atau pepaya, sampel diambil di daerah akar pengumpan, yaitu I hingga 3 kaki dari pangkal tanaman, pada kedalaman 6 hingga 8 inci. Biasanya 6 hingga 8 sub-sampel diambil di sekitar tanaman dengan menggunakan garpu kebun dan s e k o p , dan dapat digabungkan untuk membuat sampel tanah komposit.
Sampel akar dapat diperoleh pada saat yang sama dengan memotong beberapa akar pengumpan halus tanaman. Sekitar 1 liter tanah (500 cc) dan segenggam akar (100 gram) merupakan sampel yang memadai. Sampel harus dimasukkan ke dalam kantong plastik berlabel dan disimpan dalam wadah yang sejuk sampai diproses.
Nematoda sangat rentan terhadap panas dan pengeringan, dan sampel harus diproses sesegera mungkin. Namun, sampel dapat disimpan selama sekitar satu minggu di dalam kulkas dengan suhu 5°C jika tidak memungkinkan untuk segera diproses.
MENGEKSTRAKSI NEMATODA DARI AKAR TANAMAN
Ada beberapa metode untuk mengekstraksi nematoda dari akar tanaman. Hanya teknik corong Baermann yang dimodifikasi yang akan dijelaskan di sini.
Mengekstrak nematoda dari
Teknik corong Baermann: akar tanaman, dengan menggunakan modifikasi a. Cuci akar untuk menghilangkan tanah.
b. Potong akar menjadi beberapa bagian dengan panjang 1 hingga 2 cm, menggunakan pisau bedah atau silet yang tajam.
C. Masukkan akar yang telah dipotong, bersama dengan 100 cc air suling steril, ke dalam blender, dan blender dengan kecepatan sedang selama 10-20 detik.
d. Tuangkan suspensi yang dihasilkan ke dalam corong Baermann yang telah dimodifikasi* dan d i a m k a n selama 24 jam.
e. Nematoda akan meninggalkan panci bagian atas alat dan terkumpul di dalam air yang terdapat di panci b a g i a n bawah.
Suspensi dituangkan ke dalam cawan petri dan diperiksa di bawah mikroskop.
(*) Corong Baermann yang dimodifikasi (atau teknik loyang pai) terdiri dari dua loyang p a i biasa berukuran 8 inci yang diletakkan d i dalam loyang lainnya. Alasnya dilepas dari l o y a n g bagian atas dan digantikan oleh jaring kawat dengan lubang berdiameter sekitar 1/8 inci. Serbet wajah diletakkan di atas jaring, dan sampel akar dituangkan di atas serbet ini. Panci bagian bawah berisi sekitar 100 cc air suling. Nematoda akan bergerak melalui saringan, meninggalkan panci bagian atas dan terkumpul dalam air jernih di panci bagian bawah.
Diagnosis masalah nematoda 31 MENODAI NEMATODA DI AKAR TANAMAN
Keberadaan nematoda pada akar tanaman merupakan teknik yang baik untuk mendiagnosis masalah nematoda. Nematoda dalam jaringan tanaman dapat diwarnai sebagai berikut:
a. Cuci tanah dari akarnya.
b. Rendam akar dalam larutan asam laktofenol-fuchsin panas*
selama 1 hingga 3 menit, tergantung pada jaringannya.
Semakin segar j a r i n g a n n y a , semakin singkat waktunya.
c. Bersihkan akar dari noda dan cuci dengan air dingin air keran.
d. Masukkan akar ke dalam laktofenol bening. Akar akan kehilangan noda, tetapi nematoda tetap mempertahankan noda dan tampak merah muda d i bawah mikroskop.
MENGEKSTRAKSI NEMATODA DARI TANAH
Ada beberapa metode untuk mengekstraksi nematoda dari tanah;
namun, teknik corong Baermann yang telah dimodifikasi yang dijelaskan di atas adalah salah satu teknik yang paling sederhana.
Sampel tanah dicampur secara menyeluruh dan alikuot (sekitar 50 cc) ditempatkan pada s a r i n g a n panci atas, yang kemudian ditempatkan di panci bawah. Nematoda dapat diambil dari panci bagian bawah setelah 24 jam.
Teknik yang bisa digunakan apabila loyang pai tidak tersedia adalah:
a. Tempatkan sekitar 100 cc tanah yang terserang ke dalam plastik berdiameter 4 inci
penanam.
b. Kencangkan selembar kain muslin atau kain, yang telah dilapisi dengan dua lapis tisu wajah, di atas bagian atas pot.
c. Balikkan panci ke dalam mangkuk yang berisi air keran sehingga kain muslin atau kain berjarak beberapa sentimeter dari pangkal
(°) Larutan asam laktofenol-fuehain:
Fenol20 gram
Asam laktat20 ml
Gliserin30 ml Air20 ml
Tambahkan 5 cc larutan 1 gram acid-fuchsia dan 100 cc air. Biru katun (biru anilin) juga d a p a t digunakan.
32 Pengantar diagnosis penyakit tanaman
mangkuk. Pot juga dapat dibalik ke dalam air di dalam corong, yang bagian dasarnya ditutup dengan sepotong pipa karet dan penjepit. Nematoda akan keluar dari tanah dan masuk ke dalam air di dalam mangkuk atau corong. Suspensi dikumpulkan dan diperiksa d i bawah mikroskop.
MEMBUNUH DAN MEMPERBAIKI SAMPEL NEMATODA
Suspensi nematoda yang diperoleh dari loyang dapat dituangkan ke dalam gelas kimia.
Biarkan gelas kimia tetap berada pada suhu kamar selama satu (1) jam. Tuangkan bagian atas suspensi dengan hati-hati, biarkan nematoda tersuspensi dalam sekitar 5 cc air. Tambahkan 5 cc air mendidih ke dalam gelas kimia dan aduk dengan cepat. Suhu suspensi dinaikkan menjadi sekitar 70 C, dan nematoda akan mati.
Sebagai alternatif, masukkan gelas kimia ke dalam air mendidih selama 2 menit sambil terus diaduk. Jika nematoda terkena suhu yang lebih tinggi, mereka tidak dapat diidentifikasi. Tambahkan 14 cc formaldehid komersial (38%) ke dalam 86 cc air. Aduk rata dan tambahkan 10 cc campuran ini ke dalam 10 cc suspensi nematoda.
Sebagai alternatif, 10 cc campuran 14 cc formalin, 4 cc trietanolamin, dan 82 cc air (TAF) dapat digunakan. Tempatkan nematoda yang telah diawetkan ke dalam botol kaca bertutup ulir. Nematoda kemudian dapat diserahkan kepada ahli nematologi untuk diidentifikasi.
MENGIDENTIFIKASI NEMATODA PARASIT TANAMAN
Identifikasi nematoda parasit tanaman merupakan tugas yang sulit dan hanya dapat dilakukan oleh ahli nematologi yang terlatih. Namun, tanpa mengidentifikasi spesimen, biasanya dapat dibedakan antara nematoda parasit tanaman dan nematoda saprofit. Hal ini karena semua parasit tanaman memiliki stilet yang menonjol di ujung anterior tubuh; nematoda saprofit biasanya tidak memiliki stilet ini.
MENDIAGNOSIS MASALAH NEMATODA SIMPUL AKAR
Di daerah tropis, nematoda puru akar, Nleloidogyne sp. sangat umum ditemukan. Nematoda ini menyerang sejumlah besar tanaman inang dan kepadatan populasinya di dalam tanah biasanya tinggi.
Nematoda puru akar menyebabkan akar menjadi sakit, dan keberadaan puru ini merupakan indikasi yang baik dari masalah nematoda puru akar. Dalam mendiagnosis masalah, h a l - h a l berikut harus diperhatikan:
Diagnosis masalah nematoda 33 a. Galls yang disebabkan oleh nematoda simpul akar terkadang
membingungkan dengan bintil pada tanaman polongan. Nodul biasanya muncul di sisi akar dan dilekatkan oleh t a n a h g e n t i n g atau leher; g a l l s terbentuk d i sepanjang sumbu akar.
b. Galls juga dapat diinduksi pada akar oleh serangga dan nematoda tidak termasuk dalam kelompok simpul-akar.
c. Bentuk dan ukuran galls yang disebabkan oleh nematoda bintil akar bervariasi tergantung pada tanaman, varietas, dan kondisi lingkungan.
d. Keberadaan nematoda simpul akar di dalam empedu dapat ditunjukkan dengan menodai jaringan atau dengan melihat jaringan di bawah mikroskop di mana betina dewasa yang berbentuk seperti buah pir, berwarna putih, dan matang akan teramati.