BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
Disarankan untuk melakukan optimasi fermentasi pada ke empat isolat bakteri penghasil P(3HB), uji biokimia, dan identifikasi uji molekuler pada ke empat isolat bakteri tersebut.
41 DAFTAR PUSTAKA
Afiifah, R,. Novita, I,. M. Hendra,. S. Ginting, 2015. Pengaruh berat pati dan volume Plasticizer gliserol terhadap karakteristik film bioplastik pati kentang. Jurnal Teknik Kimia USU. 4 : 35-39.
Agustien, A. Dan A. D. Hakam,. 2002. Produksi bioplastik poli (3-hidroksibutirat) dari bakteri rekombinan Escherichia coli. Jurnal Kimia Andalas Volume.
8 : 38-41.
Agustien, A,. 2001. Produksi bioplastik dan bakteri isolat lokal. JUMPA Volume 10 : 22-25.
Al-Mohanna MT,. 2016. Morphology and Classification of bacteria. University of Al-Qadisiyah.
Anam C, Sirojudin, Firdausi KS,. 2007. Analisis gugus fungsi pada sampel uji bensin dan spiritus menggunakan metode spektroskopi FTIR.
Berkala Fisika Volume. 10 : 79-80.
Arikan E, B., and Ozsoy H. D., 2015. A Review: Investigation of Bioplastics, Civil Engineering and Architecture. 9 : 188-192.
Chen J, Zhang L, Chen J, Chen G,. 2007. Biosynthesis and Characterization of polyhydroalkanoate copolyvesters in Ralstonia eutropha P3HB - 4 harboring a low-substrate-specifity PHA synthase PhaC2Ps From Pseudomonas stutzeri 1317. Chin. J. Chem. Eng. 15 : 391-396.
Capuccino J.G, Sherman N,. 2014. Microbiology: A Laboratory Manual. 10th Ed. New York : Person.
Capuccino J.G, Chad Welsh,. 2017. Microbiology: A Laboratory Manual. 11th Ed. New York : Person.
Djamaan, A. dan Dewi, A. P., 2014. Metode produksi Biopolimer dari minyak kelapa sawit, Asam Oleat, dan Glukosa. Padang : Andalas University Press.
Djamaan, A,. 2015. Konsep Produksi Biopolimer P(3HB) dan (P3HB-ko-3HV) secara Fermentasi. Padang: Andalas University Press.
Daniel RA, Errington J,. 2003. Control of cell morphogenesis in bacteria : two distinct ways to make a rod-shaped cell. Cell. 6 : 767.
Gemeidiya, R,. 2016. Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Penghasil Bioplastik Poli (3–Hidroksibutirat) Dari Tanah Puncak Gunung Merapi yang Ditumbuhkan Dalam Media Minyak Kelapa Sawit-Bakto Agar. [Skripsi]. Farmasi Unand.
Padang.
42 Gill, M,. 2014. Bioplastic: A Better Alternative To Plastics, International Journal
Of Research in Applied. 2 : 115-120.
Haedar A, RB Gobel, R Umar, Ambeng,. 2013. Seleksi Bakteri dari Limbah dan Tanah Pabrik Gula Arasoe-Kab.Bone. Sebagai Penghasil Poli-B- Hidroksibutirat (Bioplastik). Bandung: Universitas Padjajaran.
Handrick, R., S. Reindart, D. Schultheiss, T. Reichart, D. Schuler, V. Jendrossek and D. Jendrossek,. 2004. Unravelling the fuction of the Rhodospirilium rubrum. Activator of Polyhydroxybutirate (PHB) Degradation: The
activator is PHB granule-bound protein (Phasin).
J. Bacteriology 186 : 2466-2475.
Harianto F,. 2011. Penapisan Bakteri Penghasil Bioplastik Poli (3-Hidroksibutirat) dari Sampel Tanah Hutan Pendidikan dan penelitian Biologi, Kampus Unand, Limau Manis, Padang. [Skripsi]. Padang. Universitas Andalas.
Irwandi, Djamaan A, Agustien A,. 2018. Produksi Bioplastik P(3HB) Dari Bahan
Dasar Minyak Kelapa Sawit dengan Isolat Bacillus sp.
Chempublish Journal, Volume 3 : 85-93.
Jaya, D,. 2017. Dewatering of Coal from Jorong Kalimantan Selatan using Residu of Cooking Oil and Kerosene. Eksergi. 14 : 35.
Kismiyati, Subekti S, Yusuf RWN, Kusdarwaty S,. 2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Gram Negatif pada Luka Ikan Maskoki (carassius auratus) Akibat Infestasi Ektoparasit argulus sp Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan 1: 2.
Kusuma, F., Haedar, N. dan Abdullah A,. 2014. Optimalisasi Produksi Poli-𝜷- Hidroksi Butirat (PHB) Dari Berbagai Sumber Karbon Oleh Isolat Bakteri Dari Limbah Pabrik Gula Takalar. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin. Makassar.
Lee AJ, Dawes EA,. 1990. Occurence, metabolism, metabolic role, and industrial uses of bacterial of polyhydroxyalkanoates. Microbiol. Rev. 54 : 450-472.
Misnanadiarly, AS, Husjain Djajaningrat,. 2014. Mikrobiologi Untuk Klinik Dan Laboratorium. PT Rineka Cipta, Jakarta.
Nureleana H, Sarudu, Onni S, Selaman, Rubiyah Baini, and Nor Azalina Rosli,.
2015. Evaluation on factors affecting bacteria growth in collected rainwater. Journal of Faculty of Engineering. 6 : 11-17.
Ostle, G. A and Holt, J. G,. 1982. Nile Blue A as a flourescent stain for poly-β- hidroxybutyrate. Appl environ microbial. 44 : 23-241.
43 Rakesh P, Charmi P,. 2014.Quantitative Analytical applications of FTIR
Spectroscopy in Pharmaceutical and Allied Areas; J. Adv. Pharm. Edu. &
Res. 4 : 145-57.
Rohman, A,. 2012. A Review : Applications Of Fourier Transform Infrared Spectroscopy For Quality Control Of Pharmaceutical Products. 23 : 1-8.
Seon-Won Kim, Pil Kim, Jung H. Kim,. 1999. Production of Poly (3- hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) from Methylobacterium organophilum by potassium-limited feed-batch culture. Enzyme and Microbial Technology. 24 : 555-560.
Samsul, A, Bungaran, S, Elvi, K,. 2017. Studi pembuatan bahan alternatif plastik biodegradable dari pati ubi jalar dengan plasticizer gliserol dengan metode
melt intercalation. Jurnal Teknik Mesin Universitas Bhayangkara.
06 : 79-84.
Scott, G,. 1994. Enviromental Biodegradation of hydrocarbon polymers, in Biodegradable Plastic and polymers, (Eds. Doi. Y and K. Fukuda), Amsterdam: Elsevier sciene. B. V. 79-105.
Suardi M, Hamdani AS, Ariyati B, Suci RP, Djamaan A,. 2018. Utilization of Rice Straw (Oryza sativa Linn) Agricultural Waste as Substrate for Poly (3- Hydroxybutarate) Production Using Pseudomonas aeruginosa. Journal of Pure and Applied Microbiology. 12 : 3.
Susanti, M,. 2010. Produksi Bioplastik Poli (3-Hidroksibutirat) (P(3HB)) Secara Proses fermentasi Menggunakan Bakteri Bacillus brevis FACC-20801 dari Minyak Kelapa Sawit Sebagai Sumber Karbon. [Skripsi]. Padang. Stifarm.
Swift, YA,. 1996. Bacteriacal Polyhidroxyalkanoates. Biotechnology.
Bioenginering. 49 : 1-14.
Tarigan, J,. 2008. Penghantar Mikrobiologi. Depdiknas. Jakarta.
Valappil, S.P, Misra, S.K, Boccaccini, A, R., Keshavarz, T, Bucke, C. Dan Roy, I,. 2007. Large scale production and efficient recovery of phb with desirable material properties, from the newly characterised Baccilus cereus SPV.
Journal of Biotechnology. 132 : 251-258.
Van Der Zee M, E Pras, J Van Haveren, R Van Tuil,. 2001. Recent Advencement in The Development of Material and Products from Renewble Resources.
ATO, Business Unit Renewble Resources. Department Polymer Composites and Additives Wageningen. Netherland.
Vinod PS, Kulkarni DS, Sulochana MB,. 2018. Production and Characteriization of Polyhyroxybutirate from Halophilic Bacteria. Volume 4 : 44-52.
44 Watson D G,. 2010. Analisis Farmasi, Buku Ajar untuk Mahasiswa Farmasi dan
Praktisi Kimia Farmasi edisi 2. Jakarta: EGC.
Yogesh C, Bhavana P, Fulekar,. 2012. PHA production Application and its Bioremidiation in environment. I. Res. J.Environment Sci Volume 1 : 46 -52.
Yuniarti L.I, Hutomo Gatot S, dan Abdul Rahim,. 2014. Sintesis dan karakterisasi bioplastik berbasis pati Sagu (metroxylon sp). Agrotekbis, 21 : 38-46.
Yuwono, S, S,. Waziiroh E,. 2017. Teknologi Pengolahan Pangan Hasil Perkebunan. Malang: UB Press. 103-104.
45 Sampel Tanah Tambang
Lampiran 1. Skema Kerja
Isolasi Bakteri Penghasil Biopolimer P(3HB)
Pengenceran bertingkat 10-4
Inkubasi pada suhu 35-37°C
selama 24-48 jam
Inkubasi pada suhu 35-37°C
selama 24-48 jam panjang gelombang
Uv 365
Suspensi Tanah
Media Bakto Agar +CPO
Media Bakto Agar + CPO Media Bakto Agar + CPO
Koloni Terpisah Koloni Terpisah
Dipilih Bakteri yang
menunjukan positif P(3HB) Fluorensensi jingga
Stok Agar Miring Bakteri positif P(3HB)
46 Fermentasi Bakteri Penghasil Biopolimer P(3HB)
Ditambah (CPO), Shaker 200 rpm selama 24 jam Suhu 30°C
Sentrifus Cairan
Dikeringkan suhu 70°C 24 jam, di timbang
Stok Bakteri
Agar Miring
Suspensi Bakteri Isolat Bakteri
Inokulum Bakteri Uji Biokimia
Uji Mikroskopis Uji Makroskopis
PH
Hitung Jumlah Biomassa
Kultur Bakteri
Supernatan Endapan
Sel kering dilarutkan dalam kloroform
FTIR Pengamatan Warna,
bentuk, Pinggir, Permukaan, Elevasi.
Pengamatan, Bentuk Sel, Pewarnaan Gram, Pewarnaan Endospora
Uji Katalase Uji Motilitas
47 Lampiran 2. Isolasi Tanah Tambang Menggunakan Media CPO Bakto Agar
Titik Pengambilan Sampel Jumlah Koloni Bakteri Positif P(3HB) / Kode Sampel
Titik 1 2 koloni -
Titik 2 2 koloni -
Titik 3 2 koloni -
Titik 4 2 koloni 8
Titik 5 2 koloni -
Titik 6 2 koloni -
Titik 7 6 koloni 15
Titik 8 8 koloni 20
Titik 9 2 koloni -
Titik 10 2 koloni 29
Jumlah 30 koloni 4 isolat
Lampiran 3. Pengamatan Makroskopik Isolat Bakteri Kode Isolat
Bakteri
Bentuk Warna Permukaan Elevasi Pinggir
ITB 4.2 Bulat Putih Kasar Timbul Bergelombang
ITB 7.3.1 Bulat Putih Kasar Timbul Bergelombang
ITB 8.1.2 Bulat Putih Licin Timbul Bergelombang
ITB 10.1 Bulat Putih Licin Timbul Rata
Lampiran 4. Pengamatan Uji Mikroskopik Kode Isolat
Bakteri
Pewarnaan Gram (+/-)
Bentuk Sel Bakteri Pewarnaan Endospora (+/-)
ITB 4.2 + Basil +
ITB 7.3.1 + Basil +
ITB 8.1.2 + Basil +
ITB 10.1 + Basil +
Lampiran 5. Pengamatan Uji Biokimia
No Pengamatan Isolat Bakteri
ITB 4.2 ITB 7.3.1 ITB 8.1.2 ITB 10.1
1. Aerob/Anaerob Aerob Aerob Aerob Aerob
2. Uji Katalase + + + +
3. Uji Motilitas + + + +
48 Lampiran 6. Jumlah Biomasaa Bakteri Penghasil P(3HB)
No Kode Isolat Biomassa (mg/100 mL) pH
1 ITB 4.2 0,542 g 5,72
2 ITB 7.3.1 0,542 g 5,82
3 ITB 8.1.2 0,551 g 5,71
4 ITB 10.1 0,342 g 5,55
Lampiran 7. Karakterisasi FTIR Gugus
Fungsi
Rentang Bilangan Gelombang
(cm-1) (Literatur)
Bilangan Gelombang cm-1 Standar ITB
4.2
ITB 7.3.1
ITB 8.1.2
ITB 10.1 C – H 1852-2976 2932 2921 2922 2918 2922 C = O 1640-1790 1719 1742 1701 1647 1740 C – O 1057-1277 1275 1233 1232 1233 1233
49 Lampiran 8. Sampel Tanah Tambang, Bengkulu Utara
Kode Sampel
Penampakan Tanah Keterangan
Titik 1 Warna: coklat gelap
Titik 2 Warna: merah gelap
Titik 3 Warna: merah terang
Titik 4 Warna: hitam
Titik 5 Warna: merah terang
50
Titik 6 Warna: coklat gelap
Titik 7 Warna: coklat gelap
Titik 8 Warna: merah terang
Titik 9 Warna: coklat terang
Titik 10 Warna: merah gelap
51 Lampiran 9. Isolasi Bakteri Penghasil P(3HB) Menggunakan Media CPO
Bakto Agar No Nomor
Sampel
Jumlah Koloni
Jumlah Sel CFU
Foto Hasil Isolasi
1. Sp 1 Tersebar
2. Sp 2 92 9,2 X 105
3. Sp 3 Tersebar
4. Sp 4 30 3,0X 105
52 5. Sp 5 300 3,0 X 106
6. Sp 6 Tersebar
7. Sp 7 80 8,0 X 105
8. Sp 8 94 9,4 X 105
9. Sp 9 58 5,8 X 105
53
10. Sp 10 Tersebar
54 Lampiran 10. Skrining Bakteri P(3HB) Menggunakan Sinar UV 365 nm
Gambar 5. Skrining Bakteri Penghasil P(3HB) dengan Larutan Nile Blue A pada media CPO Bakto Agar, Kode Isolat ITB 4.2
ITB 4.2
55 LANJUTAN
Gambar 6. Skrining Bakteri Penghasil P(3HB) dengan Larutan Nile Blue A pada media CPO Bakto Agar, Kode Isolat ITB 7.3.1
ITB 7.3.1
56 LANJUTAN
Gambar 7. Skrining Bakteri Penghasil P(3HB) dengan Larutan Nile Blue A pada media CPO Bakto Agar, Kode Isolat ITB 8.1.2
ITB 8.1.2
57 LANJUTAN
Gambar 8. Skrining Bakteri Penghasil P(3HB) dengan Larutan Nile Blue A pada media CPO Bakto Agar, Kode Isolat ITB 10.1
ITB 10.1
58 Lampiran 11. Isolat Bakteri P(3HB) pada Media Agar Miring
Keterangan :
1. Isolat Bakteri ITB 4.2 2. Isolat Bakteri ITB 7.3.1 3. Isolat Bakteri ITB 8.1.2 4. Isolat Bakteri ITB 10.1
ITB 4.2
ITB 7.3.1
ITB 8.1.2
ITB 10.1
59 Lampiran 12. Fermentasi isolat bakteri P(3HB)
Keterangan :
1. Cairan Fermentasi Isolat Bakteri ITB 4.2 2. Cairan Fermentasi Isolat Bakteri ITB 7.3.1 3. Cairan Fermentasi Isolat Bakteri ITB 8.1.2 4. Cairan Fermentasi Isolat Bakteri ITB 10.1
60 Lampiran 13. Biomassa Kering Bakteri Penghasil P(3HB)
Keterangan :
1. Biomassa Bakteri P(3HB) ITB 4.2 2. Biomassa Bakteri P(3HB) ITB 7.3.1 3. Biomassa Bakteri P(3HB) ITB 8.1.2 4. Biomassa Bakteri P(3HB) ITB 10.1
61 Lampiran 14. Karakterisasi FTIR
Gambar 9. Spektrum FTIR P(3HB) Standar (Aldrich, Chemical)
62 LANJUTAN
Gambar 10. Spektrum FTIR Senyawa PHB yang di isolasi dari Sel Kering Isolat Bakteri ITB 4.2
63 LANJUTAN
Gambar 11. Spektrum FTIR Senyawa PHB yang di isolasi dari Sel Kering Isolat Bakteri ITB 7.3.1
64 LANJUTAN
Gambar 12. Spektrum FTIR Senyawa PHB yang di isolasi dari Sel Kering Isolat Bakteri ITB 8.1.2
65 LANJUTAN
Gambar 13. Spektrum FTIR Senyawa PHB yang di isolasi dari Sel Kering Isolat Bakteri ITB 10.1
66 Lampiran 15. Pengamatan Bentuk Sel Bakteri pada Pewarnaan Gram
Bakteri Penghasil P(3HB) Kode
Sampel
Gambar Keterangan
ITB 4.2 Kode Isolat : 8
Pewarnaan Gram : Gram Positif (+) Bentuk Sel : Basil
ITB 7.3.1
Kode Isolat : 15
Pewarnaan Gram : Gram Positif (+) Bentuk Sel : Basil
ITB 8.1.2
Kode Isolat : 20
Pewarnaan Gram : Gram Positif (+) Bentuk Sel : Basil
ITB 10.1 Kode Isolat : 29
Pewarnaan Gram : Gram Positif (+) Bentuk Sel : Basil
67 Lampiran 16. Pengamatan Pewarnaan Endospora
Kode Sampel
Gambar Keterangan
ITB 4.2 Positif Endospora
ITB 7.3.1
Positif Endospora
ITB 8.1.2
Positif Endospora
ITB 10.1 Positif Endospora
68 Lampiran 17. Pengamatan Uji katalase
Kode Sampel
Gambar Keterangan
ITB 4.2 Positif Katalase
ITB 7.3.1
Positif Katalase
ITB 8.1.2
Positif Katalase
ITB 10.1 Positif Katalase
69 Lampiran 18. Pengamatan Uji Motilitas
Keterangan :
1. Positif Motilitas ITB 4.2 2. Positif Motilitas ITB 7.3.1 3. Positif Motilitas ITB 8.1.2 4. Positif Motilitas ITB 10.1
70 Lampiran 19. Alat yang digunakan pada penelitian ini
No Alat Keterangan
1 Inkubator digunakan untuk
menginkubasi atau menyimpan sampel pada temperatur tertentu.
2 Laminar Air Flow (LAF)
digunakan untuk memindahkan atau mensubkultur biakan mikroorganisme.
3 Autoklaf sterilisasi basah
yang digunakan untuk mensterilisasi peralatan kimia dan media terhadap suhu dan tekanan tinggi yaitu 121ºC selama 15-20 menit.
71
4 Hot Plate digunakan untuk
memanaskan larutan dan mehomogenkan larutan media.
5 Timbangan Analitik
digunakan untuk menimbang bahan atau media yang akan digunakan.
6 Rotary Shaking Inkubator
digunakan untuk memelihara atau menginkubasi biakan mikroorganisme pada suhu optimum dengan
pengocokan dengan kecepatan 200 rpm pada suhu 30ºC.
7 Vortex digunakan untuk
homogenisasi cairan.