Leukemia Cells

(1)

Cytotoxic Effect of Telomerase Catalytic (hTERT) and Nucleotide (hTERC) Subunit Inhibitors on Acute Promyelocytic

Leukemia Cells

Atieh Pourbagheri-Sigaroodi¹, Ava Safaroghli-Azar², Fahimeh Nemati Mansoor³,

Davood Bashash⁴

1 MSc in Biotechnology, Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University,

Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran

2 MSc in Hematology, Department of Hematology and Blood Banking, School of AlliedMedical Sciences, Shahid Beheshti

University of Medical Sciences, Tehran, Iran

3 Assistant Professor, Department of Biotechnology, Faculty of Advanced Sciences and Technology, Islamic Azad University, Pharmaceutical Sciences Branch, Tehran, Iran

4 Associate Professor, Department of Hematology and Blood Banking, School of AlliedMedical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran

(Received August 26, 2017 ; Accepted May 7, 2018)

Abstract

Background and purpose: Telomerase activity has a major role in acute promyelocytic leukemia (APL). It also has a critical role in disease recurrence. This research aimed at studying the cytotoxic effects of telomerase inhibition using oligonucleotide-based molecule against human telomerase RNA template (hTERC antisense) and non-nucleoside small molecule targeting catalytic subunit (BIBR5132) on APL-derived cell line.

Materials and methods: To evaluate whether inhibition of telomerase using either hTERC antisenseor BIBR5132 could exert cytotoxic effect in APL, NB4 cells were subjected to different concentrations of the inhibitors and subsequent cell viability, metabolic activity, induction of apoptosis were investigated using Trypan blue assay, MTT, and annexin/PI staining, respectively. Also, Caspase-3 enzymatic activity and transcriptional alteration of apoptosis-related target genes were investigated.

Results: We found that targeting telomerase using hTERC antisense (45 pmol/L) and BIBR1532 (75 µL) for 48 h reduced the survival rate of NB4 cells nearly by 30% and 40%, respectively and induced a caspase-3-dependent apoptosis. Our results also suggest that suppression of c-Myc and subsequent increment of Bax/Bcl-2 ratio coupled with decreased telomerase activity may be rational mechanisms for the cytotoxicity of both telomerase inhibitors against NB4 cells.

Conclusion: Current results clearly indicated that both BIBR1532 and hTERC antisense had anti-tumor activity against NB4 cells and anti-telomerase-based therapy may be an efficient treatment for acute promyelocytic leukemia.

Keywords: acute promyelocytic leukemia, apoptosis, NB4 cells, telomerase

J Mazandaran Univ Med Sci 2018; 28 (159): 10-20 (Persian).

* Corresponding Author: Davood Bashash- Department of Hematology and Blood Banking, School of Allied Medical Sciences, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran (E-mail: d.bashash@sbmu.ac.ir)

(2)

جم ــ ل ـــ ناد هـ ـ ع هاگـــش ــ ل ــ پ موـ ــ شز ـ ـ ـ ـــك ـ م يـ ـ ـ ـ نزا ـــ ناردـ

هرود هرامش متشه و تسيب 611

نابآ لاس 6931 ( 02 - 62 )

یشهوژپ

یکیتیلاتاک دحاوریز ناگدننکراهم کیسکوتوتیاس رثا (

hTERT

)

و ( یدیتوئلکون

hTERC

لولس رد زارمولت ) یمسول یاه

داح کیتیسولیمورپ

یدوراگیس یرقابروپ هیطع 1

رذآ یلغوارفص اوآ

2

روصنم یتمعن همیهف 3

شاشب دواد

4

هدیكچ

هقباس :فده و تاپ رد زارمولت میزنآ مهم شقن دااح کیتیسولیمورپ یمسول زنژو

Acute promyelocytic leukemia

)

رااهم کیاس وتوتیاس راسا اات تاتاد آ راب ار ام ،یرامیب دوع رد سوکعم زاتپیرکسنرت میزنآ نیا شقن نینچ مه و )APL

یدایتوئل ون داحاوریز هدنن راهم دیتوئل ونوگیلا کم اب زارمولت

hTERC antisense

هم کاچو واکلوم و ) هدانن را

یکیتیلاتا دحاوریز

(BIBR1532)

ولس رد ار زا هدت قتشم یاه

.میهد رارق هعلاطم درومAPL

شور و داوم :اه

کام ااب زارموالت رااهم اایآ ها نایا یاسررب تاهه ،یابرجت هعلاطم نیا رد

hTERC antisense

و

BIBR1532

یم رد کیس وتوتیاس رسا دناوت ولس ،دتاب هتتادAPL

یاه ه NB4

زا هدت قتشم یلولس هدر اب ،تساAPL

تظلغ هدنز سپس و دندت رامیت اگدنن راهم زا فلتخم یاه ولس ینام

ااب اایترت هاب زواتپوپآ ءاقلا و کیلوباتم تیلاعف ،اه

شور زا هدافتسا ،ولب اپیرت یاه

گنر وMTT

یزیمآ

Annexin/PI

مسیناکم یسررب یارب نینچ مه .دت یبایزرا راسا یلواکلوم یاه

زاپسا کیتامیزنآ تیلاعف ، اگدنن راهم 3

.تفرگ رارق هعلاطم دروم زوتپوپآ اب طبترم یاه ژ زا یسیونور تارییغت و

هتفای :اه هب جیاتن زا هدافتاسا ااب زارموالت داد رارق فده ه داد اشن قیقحت نیا زا هدمآ تسد

hTERC antisense

رد

تظلغ

45 pmol/L

و

BIBR1532

تظلغ رد

75 µL

ولاس ءااقب ازیم یااه

تاتشگ زا ساپ ارNB4

42 و 24 هاب تعااس

یبیرقت ازیم هب ایترت 42

و 22 یام ااعف یلولاس هدر نایا رد ار زاپاسا هاب هتاسباو زواتپوپآ و هداد شهاا دصرد .دایامن

مه راهم ه دنداد اشن جیاتن ،نینچ

c-Myc

ایب تبسن شیازفا ًابقاعتم و

Bax/Bcl-2

اعف شها اب هارمه ناکمم زارمولت تیل

ولس رد هدنن راهم ود ره کیس وتوتیاس رسا زورب رد لیخد مسیناکم تسا یاه

.دنتابNB4

:جاتنتسا یم راکتآ هعلاطم نیا جیاتن ه دن

BIBR1532

و

hTERC antisense

ولس رد کیمسولدض تارسا یاراد یاه

یمNB4

یم زارمولت راهم هیاپرب اه آمرد و دتاب یارب دناوت

هب ءلاتبم ارامیب امرد .دتاب دیفمAPL

:یدیلک یاه هژاو یلولس هدر ،زوتپوپآ ،داح کیتیسولیمورپ یمسول

زارمولت ،NB4

همدقم

شلات هرگ یارب اه مسیناکمزا ییاشگ

ها یلوکلوم یاه

یمیت یاهوراد هب تمواقم هدیدپ رد دواع زورب و ینامرد

د یدایز رایسب تعرس اب ،دنراد شقن اطرس تفرشیپ اح ر

یم تفای و دتاب ا

ه اشن هنیمز نیا رد ریخا یاه یم

ه دنهد

:لوئسم فلوم شاشب دواد

- ارهت : یکتزپاریپ هدکشناد ،یتشهب دیهت یکتزپ مولع هاگشناد d.bashash@sbmu.ac.ir

E-mail:

1 . یژولونکتویب دترا یسانترا یروانف و مولع هدکشناد ،

اریا ، ارهت ،یملاسا دازآ هاگشناد ،ییوراد مولع دحاو ،نیون یاه

4 . وخ دترا یسانترا اریا ، ارهت ،یتشهب دیهت یکتزپ مولع هاگشناد ،یکتزپاریپ هدکشناد ، وخ کناب و یسانت

3 . رایداتسا

، یروانف و مولع هدکشناد ،یژولونکتویب هورگ دحاو ،نیون یاه

اریا ، ارهت ،یملاسا دازآ هاگشناد ،ییوراد مولع

2 . رایشناد

، وخ هورگ اریا ، ارهت ،یتشهب دیهت یکتزپ مولع هاگشناد ،یکتزپاریپ هدکشناد ، وخ کناب و یسانت

: تفایرد خیرات 2

/ 6 / 1336 : تاحلاصا تهه عاهرا خیرات 44

/ 6 / 1336 : ایوصت خیرات 11

/ 4 / 1331

(3)

مااهم زا یااکی ییاریمااان رد لاایخد یاهرا وزاااس نیراات

ولس زواتپوپآ هب تبسن تمواقم و یناطرس یاه تایلاعف

یم زارمولت میزنآ دتاب

1

زاتپیرکاسنرت میزنآ کی زارمولت.)

شخب کی زا ه تسا سوکعم RNA

اایhTR hTERC

)

کااایتیلاتا شاااخب کااای و

hTERT

هدااات لیکاااشت )

تسا

4

ولاس رث ا رد .)

مواس یااه میزانآ ،ینااسنا کیتا

یم تیلاعف دقاف زارمولت رث ا ه تسا یلاحرد نیا ؛دتاب

ولس ژ اایب لایلد هب یناطرس یاه

hTERT

ژ و یااه

یااسیونور روت اااف وااچ مااه آ هااب هتااسباو

c-Myc

زا

یم رادروخرب زارمولت میزنآ یلااب تیلاعف دنتاب

3

، 2

.)

هابان تایلاعف ه تسا هداد اشن نیشیپ هعلاطم یااه

دواهو هاب وداب زا هاچ ،سواکعم زاتپیرکسنرت میزنآ نیا یااهوراد ااب هاههاوم زا سپ هچ و یروموت ولس دمآ یمیت گنیلانگیاس یاهریاسم دت اعف هب رجنم ،ینامرد

هدرتسگ یم یا ولس زا ه دوت هالباقم رد یناطراس یااه

یمیات یاهوراد کیس وتوتیاس تارسا اب تاظفاحم یناامرد

رب عنام و هدر آ رد زوتپوپآ زو

یام اه دوات

5

نیاب رد .)

یمیخدب یلاابدنلب تسیل ها یناسنا یاه

میزانآ تایلاعف

مااه و زنژوتاااپ رد یاامهم رایااسب شااقن زارمواالت نیاانچ

شیپ یم افیا ارامیب یهگآ کیتیاسولیمورپ یماسول ،دن

دااح

Acute promyelocytic leukemia

)

(APL)

یاکی

هدت هتخانت زا یمیخدب نیرت

یم اه ااس رد .دتاب 4224

،

میزنآ تیلاعف اهنت هن ه دنداد اشن شناراکمه و یرافغ رد زارمولت 32

لاااب یمسول نیا هب ءلاتبم ارامیب زا دصرد

یم هب ءلاتبم ارامیب امرد هب خساپ ازیم نیب هکلب ،دتاب دوهو یگنتاگنت طابترا زین زارمولت میزنآ تیلاعف وAPL

دراد

6

مه .)

آ نینچ گ اه تیلاعف ازیم ه دندومن شراز

شیپ رد سوکعم زاتپیرکسنرت میزنآ نیا میخداب یاهزاس

یم یدیئولیم یارب یزونگورپ رتماراپ کی اونع هب دناوت

ارامیب دوت هتفرگ رظنردAPL

6

مهم شقن هب ههوت اب .)

ماهم زا یاکی اوانع هاب میزانآ نیا هاصخشم نیرات

یااه

ولس هار زا هدافتسا ،یناطرس یاه یاهرا

ینامرد یانتبم

رب راهم لباق زا یکی هب زارمولت ثحب

نیرت ییتارتاسا یااه

هب ینامرد یمسول رد صوصخ داح کیتیسولیمورپ

لیدابت .تسا هدت

فداه ااب یدداعتم یااهوراد رضاح اح رد

هدمآ دوهو هب زارمولت میزنآ راهم عوان سااسا راب ه دنا

اایتوئل ونوگیلا هتااسد راااهچ هااب میزاانآ ناایا راااهم یاهد

یدیتوئل ون دحاوریز هدنن راهم

hTERC

ولاانآ ،) یااه

اگدنن راهم یدیزوئل ونریغ اگدنن راهم ،یدیزوئل ون میسقت هقرفتم اگدنن راهم و )یکیتیلاتا دحاوریز یدنب

یاام دنواات

1

هداوناااخ ود ، اگداانن راهم ناایا نیااب رد .)

هااب یکیتیلاااتا و یداایتوئل ون دااحاوریز اگداانن راهم لااایلد تااااعلاطم رد عوااالطم یروموتداااض تاراااسا

یرپ هاهوت دروام نیریااس زا شیاب ااکینیل و اکینیل

هاااتفرگ راراااق دااانا

4

تااااعلاطم زا یراماااشیب داداااعت .)

یرپ ولس زا یعیسو فیط یور اکینیل یناطراس یااه

مه و درگ و رس ،یرم ،تاتسورپ اطرس وچ زاین هنیاس

لورپ شهااا رد اگداانن راهم ناایا ییارااا رااب ویااسارفی

ولس هتتاد دییات کیتسلاپوئن یاه دنا

14 - 3

. )

را ک هاب مزلا

یااسررب هاا تااسا رد هااتفرگ تروااص یاااه

صوااصخ

امرد یاه یناطرسدض ینتبم

هاب زاین زارمولت راهم هیاپ رب

هدر ملاعا تحارص هدافتسا اب زارمولت راهم رسا رد ه دنا

زا ماه ییاهریاسم ،یاکیتنژ ای و ییوراد تلاخادت واچ

DNA damage response

اااعف زوااتپوپآ و )DDR

یم آ هجیتن رد و دنوت ،رموالت واط دات هااتو و ااه

شها یههوت لباق تروص هب یناطرس ولس ءاقب ازیم یم بای د

13

.)

یااسررب دوااهو اااب ریسااات صوااصخ رد ددااعتم یاااه

ماسیناکم زونه ،زارمولت هدنن راهم یاهوراد یناطرسدض داانن راهم ناایا قاایقد لاامع ه

مااه و اااه تاریسااات نیاانچ

آ کیس وتوتیاس یمیخدب رد اه

هاب کایژولوتامه یاه

یمن صخشم یتسرد شیب تاعلاطم هب و دتاب

جایتحا یرت

ریساااات اااات میدااات آ راااب اااام ،هاااعلاطم نااایا رد .دراد میزاانآ فاالتخم دااحاوریز هداانن راهم ود کیمااسولدض ،زارمولت

BIBR1532

)یکیتیلااتا دحاوریز هدنن راهم

لا و دااایتوئل ونوگی

hTERC antisense

هدااانن راهم

یتنآ قتشم یلولس هدر رب ار )یدیتوئل ون دحاوریز سنس

میهد رارق یسررب دروم داح کیتیسولیمورپ یمسول زا هدت .

(4)

ع یدوراگیس یرقابروپ هیط

ناراکمه و یشهوژپ

اه شور و داوم

یلولس رامیت و تش ولاس ،یبرجت هعلاطم نیا رد یااه

NB4

زا قتاشم

)روتاساپ وتیتاسنا )دااح یتیسولیمورپ یمسول طیاحم رد

تش

RPMI 1640

ااب هارمه 12 داصرد ،FBS 100 U/ml

ینپ و نیلیس

100 µg/ml

دات هداد تاش نیسیاموتپرتسا

یاامد ااب روتابوکنا رد و 31

یتنااس هاهرد رااشف و داراگ

ید نبر دیااس ا 5

هااب .دنداات یرادااهگن دااصرد ،هولاااع

ولاس تحص زا انیمطا تهه یااه

،NB4

ژmRNA

یبی رت

PML/RARα

اسا ااب کاینکت زا هدافت

RQ-PCR

لس نیا یارب نیلا

دروم یسررب رامیت تهه .تفرگ رارق

ولس ،یلولس یاه

تظلغ ابNB4

هدانن راهم زا فلتخم یاه

یدیزوئل ونریغ یکیتیلااتا داحاوریز

BIBR1532

و )

یدایتوئل ون دحاوریز هدنن راهم

hTERC antisense

)

مز تدم رد زارمولت ا

یاه 42 و 24 رامیت تعاس .دندات

ویاسارفیلورپ ازایم یور لاح تارسا زا یریگوله تهه لس ءاقب و ولس ،نیلا

هدات صخاشم تاظلغ ااب ااه زا یا

هبDMSO

اونع شیامزآ یمامت .دندت رامیت یفنم رتن ااه

هس تروص هب را تقد شیازفا روظنم هب .دت ماجنا هناگ

اپیرت یلولس عشه ازیم یسررب ومزآ ولب

ب روااظنم هااب ریسااات یااسرر

BIBR1532

و

hTERC

antisense

هدنز ازیم رب ولس ینام

ولاس ،اه یااه

NB4

دادعت هب

cell/ml 4.5×105

فالتخم یااهزود روضح رد

تداام هااب وراد 42

و 24 سپااس .دنداات هاابوکنا تعاااس

ولس تباسن ااب رراقم امز رد هدت رامیت یاه 1

هاب 1 ااب

ااپیرت یتاایح گنر والب

2 / 2 دات طوالخم داصرد هاب ،ه

تدم 1 یلا 4 آ هقیقد رد سپاس و دندت ویسابوکنا ار

رد و هدات هداد رارق رتموتیسامه ملا هب طوبرم یاهربمچ ولاس .دندات شرامت پوکسورکیم ریز نایا ها ییااه

ولااس ءزااه دااندومن عشااه ار گاانر و هدراادم یاااه

ولس هدنز دندرکن عشه دوخ هب ار یگنر چیه ه ییاه

ا ااب سپاس .دندت عوسحم ازایم رایز وامرف زا هدافتاس

هدنز ولس ینام دندت هبساحم اه

:

ازیم هدنز )دصرد ینام

= ولس دادعت هدنز یاه دادعت÷ ولس ل اه 122)×

)

ولس کیلوباتم تیلاعف یسررب اب اه

MTT assay

یااااهوراد ریساااات یباااایزرا یاراااب

BIBR1532

و

hTERC antisense

ولااس کاایلوباتم تاایلاعف رااب یاااه

،NB4

دعت دا 5222 تیلپ کهاچ ره هب ولس 36

هناخ یا

یواااح ااامز تداام هااب و هفاااضا وراد دااقاف و 42

و 24

روتابوکنا رد تعاس

CO2

هبوکنا راد تتشگ زا سپ .دت

ولس هب رظن دروم امز تدم والحم تایلپ لاخاد یاه

MTT 5mg/ml

هاب و دایدرگ هفااضا )ااکیرمآ ،امگیاس

تداام 3 روتااابوکنا رد تعاااس 31

رااق هااهرد .تاافرگ را

رود اب تیلپ سپس 1222g

تدم هب 12 ژوفیرتنااس هاقیقد

ییور ولحم در یلاخ زا سپ و هدت 122

راتیلورکیم

رااه یرواان عشااه .داات هفاااضا کااهاچ رااه هابDMSO

هاگتاسد طاسوت کهاچ

ELISA reader

رد جوام واط

512 .دت تئارق رتمونان

یرتموتیاسولف زا هدافتسا اب زوتپوپآ صخات یسررب م هب زارموالت هدانن راهم یاهوراد ریسات یسررب روظن

همانرب یلولس رم ءاقلا رب ،هدت یزیر

125

× 5 رد ولس

تیلپ کهاچره 14

هاناخ یا هاتخیر تدام هاب و دات 24

تااظلغ اااب تعاااس یوراد زا فاالتخم یاااه

BIBR1532

15 - 12 و )رلاوااامورکیم

hTERC antisense

25 - 5

پ .دیدرگ رامیت )رلاوموکیپ تست زا س

ولس یوتو ااه

تافااسف رفاااب اااب -

نیلاااس فرااعم دوزاافا و )PBS

یاااه

AnnexinV-FITC

Roche Applied Science

،) اااملآ ،

PI Roche Applied Science

، ویاسابوکنا رفاب و ) املآ ،

هنومن تدم هب اه 15

ااتا یاامد رد و یکیراات رد هاقیقد

ولااس یااسررب .دنداات هاابوکنا هاگتااسد زا هدافتااسا اااب اااه

ف رتموتیاااسول

PartecPasIII

جواام وااط اااب و ) اااملآ ،

کیرحت 244 شباتزاب و رتمونان 514

.تافرگ مااجنا رتموناان

هداد لیلحت و هیزجت رازافا مران طاسوت ااه

FloMax 2.3

.تفرگ تروص

هزادنا زاپسا کیتامیزنآ تیلاعف ازیم یریگ 3

هدات ءااقلا یلولاس رام اایآ ه نیا یسررب یارب طااسوت

BIBR1532

و

hTERC antisense

یلولااس هدر رد

(5)

یم زاپسا هب هتسباوNB4

کایتامیزنآ تایلاعف اام ،دتاب

زاپسا 3 زاپسا تی طسوت ار 3

یباایزرا دروام )امگیاس

کیرتموتفوتکپاسا صیخشت ساسارب ومزآ نیا .میداد رارق وکلوم -p

نیلینآورتین

p-nitroanilim

) لاصتم )pNA

اصتخا یارتسبوس یاهتنا هب یم زاپسا یص

رواط هب .دتاب

ولس ،هصلاخ تظلغ اب اه

زا رظن دروم یاه

BIBR1532

ااای و

hTERC antisense

تداام هااب 24

رااامیت تعاااس

یم رود ااب ژوفیرتنااس و راظن دروام اامز زا ساپ .دنوات

622 تدم یاربg

5 رفااب ،یلولاس تالپ زایل تهه ،هقیقد

یم هفاضا آ هب تازیلا رود ااب ًاددجم دوت

20000 g

هاب

تدم 12 یم ژوفیرتناس هقیقد یال ماجح رد .ددرگ

122

،رتیلورکیم 5

ااب تناتانرپوس زا مرگورکیم 45

راتیلورکیم

رفاب

assay

هارمه هب 12 زاپسا یارتسبوس زا رتیلورکیم 3

تدام هب 4 تایلپ رد تعااس 36

یام هابوکنا هاناخ .دوات

زاپسا طسوت دیتپپ تسکت 3

گانر دت دازآ هب رجنم

یمpNA

جوام واط رد رتموتفوتکپسا کم اب ه دوت 225 هزادنا لباق nm

یم یریگ .دتاب

نومزآ

TRAP

اایآ ها نایا یاسررب تاهه

hTERC antisense

و

BIBR1532

یاام زارمواالت راااهم هااب رداااق تاایلاعف ؛دنااتاب

تاای طااسوت سوااکعم زاتپیرکااسنرت ناایا کاایتامیزنآ

Telo TAGGG

تاای لمعلاروتااسد ساااسارب درواام

اااایزرا .تااافرگ راراااق یب زا ساااپ ،رواااظنم نااایا یاراااب

نیئتورپ جارختسا لولاس

ی ژویفرتنااس و زایلا رفااب طاسوت

جارختااسا نیئتورااپ ، آ واامزآ طااسوت هداات

TRAP

Telomeric repeat amplification protocol

یسررب )

.دت یاهداناب هارامه هاب هدات رایثکت زارمولت تلاوصحم

ladder

ژ یور رب 4

یلپ دصرد لیر آ

دایمآ کام ااب گنر

تارتین یزیمآ .دندات هدهااشم لاباق )امگیاس هرقن

مران کام ااب ژ ریواصت زیلانآ رازافا

Quantity One

و

Multi-analyst

Bio-Rad Laboratories

) داات ماااجنا .

زارموالت تایلاعف هاسیاقم قایرط زا زارموالت رااهم دصرد ولس ولس و وراد اب هدت رامیت یاه راتن هوراگ یااه

ساحم .دت هب

جارختسا زتنس ،RNA

وcDNA Real-time PCR

Total RNA

ویااسابوکنا ااامز تداام زا سااپ 24

ولس هتعاس جارختاسا تای هلیسو هب اهوراد اب اه

RNA

High pure RNA Isolation Kit, Roche

) قاابط

هااب سپااس .تفریشااپ تروااص هدنزاااس ت راات لااکتورپ صولخ یسررب روظنم عشه تبسن هدت جارختساRNA

یرواان 462 هااب رتمونااان 442

هاگتااسد طااسوت رتمونااان

هاب داعب هالحرم رد .تافرگ راراق یبایزرا دروم پاردونان تخاااااس روااااظنم زتنااااس تاااای زا ،cDNA

cDNA

revertAid first strand cDNA Synthesis Kit, Takara Bio

هدافتاسا هدنزااس ت رات لاکتورپ قبطرب )

ژ زا کی ره یصاصتخا یاهرمیارپ .دت اه یااه

ااب فد

مرن زا هدافتسا رازافا

Gene Runner

تیاصاصتخا و یاحارط

آ یلاوات ااب ااه

Primer Blast

تیااس رد

NCBI

دروام

ده تفرگ رارق یبایزرا هرامت و

1 .)

ژ اایب ازیم یسررب ،همادا رد ااب راظن دروام یااه

کینکت

Real-time PCR

هاگتاسد طسوت

Light-cycler

(Roche)

فرگ رارق یبایزرا دروم هاب طوابرم طیارت و ت

لکیس اعف هلحرم :لمات یترارح یاه یزاس

32 رد هیناس

یامد 35 ههرد یتناس ویاساروتانِد دعب هلحرم رد ،)دارگ

5 رد هیناس 35 ههرد یتنااس ناشنتس ِا/گنیلینآ و )داراگ

42 رد هیناس 62 ههرد یتناس دادعت هب )دارگ 22

،لکیس

هرامش لودج 1

یاهرگزاغآ یلاوت: ومزآ رد هدافتسا دروم

Real-time PCR

ژ میقتسم رگزاغآ

5’-3’

) سوکعم رگزاغآ

5’-3’

) bpزیاس

)

HPRT TGGACAGGACTGAACGTCTTG

CCAGCAGGTCAGCAAAGAATTTA 111

Bax CGAGAGGTCTTTTTCCGAGTG

GTGGGCGTCCCAAAGTAGG 424

2 - Bcl CGGTGGGGTCATGTGTGTG

CGGTTCAGGTACTCAGTCATCC 32

c-Myc GTCAAGAGGCGAACACACAAC

TTGGACGGACAGGATGTATGC 162

Survivin CCAGATGACGACCCCATAGAG

TTGTTGGTTTCCTTTGCAATTTT 154

(6)

یم ازایم یباایزرا روظنم هب زین عوک ینحنم زیلانآ .دتاب رد و تفریشاپ ترواص هدت دیلوت تلاوصحم تیصاصتخا

ومرف زا هدافتسا اب تیاهن

ΔΔct

2 –

یبسن ازیم هخسن

یااه

ایبmRNA

هدنن ژ .دیدرگ هبساحم رظن دروم یاه

یرامآ زیلانآ هداد لیلحت روظنم هب هخسن زا هدمآ تسد هب یاه

43

مراان رازاافا هداد .داایدرگ هدافتااساSPSS

هداات هاائارا یاااه

لااصاح

mean±SD

زا هداامآ تااسد هااب جیاااتن 3

واامزآ

یم هناگاده نعم فلاتخا ازیم .دنتاب

ی داد نیب راد ه

یااه

هب ار هدمآ تسد هب ومزآ هلیسو

t t-test

یبایزرا دروم )

نعم فلاتخا ازیم .میداد رارق ی

هداد راد هدت لیلحت یاه

تروص هب

، *

رگنایب 25 / 2

<

یمp

.دتاب

اه هتفای

زارموالت یدایتوئل ون و یکیتیلااتا دحاوریز اگدنن راهم ازیم ولس ویسارفیلورپ و ءاقب NB4یاه

شها ار یم دنهد

شهاا رد زارموالت میزانآ راهم ریسات یسررب تهه ولااس ویااسارفیلورپ و ءاااقب ازاایم زا هداات قتااشم یاااه

ولس ات میدت آ رب ،داح تیسولیمورپ یمسول هدر یاه

یلولااس ،زارمواالت فاالتخم هداانن راهم ود اااب ارNB4

یکیتیلاتا دحاوریز هدنن راهم

BIBR1532

هدنن راهم و )

ئل ون دحاوریز یدیتو

hTERC antisense

مییاامن رامیت )

هدنز دصرد سپس و ولس ریثکت ازیم و ینام

طسوت ار اه

اپیرت تست تاسد هاب جیاتن .میهد رارق یبایرزا دروم ولب

رامیت ه دندوب آ زا ی اح هدمآ 24

ولس هتعاس ااب ااه

راجنم زود هب هتسباو تروص هب زارمولت هدنن راهم ود ره ز دصرد شها هب هدان

ولاس یناام و ااه

ماه رامات نیانچ

ولس یم هدنز یاه هرامت ریوصت ددرگ

1 اامه .) ها رواط

یوراد ،تسا هدت هداد اشن

BIBR1532

یااهزود رد 12

،

45 ، 52 و 15 یااط رد رلاواامورکیم 24

تااسناوت تعاااس

ولس ءاقب ازیم یااه

اایترت هاب ارNB4

2 ، 11 ، 4 / 43 و

24 صوصخرد .دهد شها دصرد

hTERC antisense

زا نییااپ یااهزود هاچرگا ه دوب آ زا ی اح جیاتن زین هدنن راهم

5 و 12 ازایم راب ینادانچ ریساات )رلاوموکیپ

ولااس ءاااقب یاااه

یاامنNB4

ولااس رااامیت ؛دراشااگ اااب اااه

رتلاااااااب یااااااهزود 32

و 25 نااااایا زا )رلاواااااموکیپ

هدانز داصرد یراداانعم ترواص هب دیتوئل ونوگیلا یناام

ولس ار اه یم شها هرامت ریوصت دهد 1

.)

هرامش ریوصت 1

هدانز یااه ولاس رامات و ینام هدنز دصرد شها :

یلولس هدر رامیت اقاعتم زارموالت اگدنن راهم ابNB4

BIBR1532

و hTERC antisense زود هاب هتسباو تروص هب زارمولت هدنن راهم ود ره .

ولس ریثکت و ءاقب ازیم امز و یاه

ها ارNB4 .دنداد ش نیگنایم

التخم یراا ار هاس زا لاصاح جیاتن رایعم فارحنا و ف

mean ± SD )

و هباساحم p value هدامآ تاسد هاب

، * رگناایب 25 / 2 p<

ااشن ) راگ

ینعم راد .دوب رتن هنومن اب هسیاقم رد یرامآ رظن زا جیاتن دوب

ولس کیلوباتم تیلاعف شها یاه

زارمولت راهم اقاعتمNB4

ااظنم هااب رد زارمواالت راااهم ااایآ هاا ناایا یااسررب رو

ولس داح کیتیسولیمورپ یمسول یاه یام )APL

داناوت

ولااس کاایلوباتم تاایلاعف شهااا هااب رااجنم ؛دواات اااه

ولس یاه زا هدانیازفا یااهزود اابNB4

BIBR1532

و

hTERC antisense

تایلاعف ازایم سپاس و دندت رامیت

آ کیلوباتم یرتمیرلاا تاست طاسوت اه

MTT assay

یام اشن جیاتن .تفرگ رارق یبایزرا دروم رااهم ها دنهد

زا هاوااخ و یکیتیلاااتا دااحاوریز قاایرط زا هاوااخ زارمواالت یکیلوبااتم تایلاعف شهاا اب یدیتوئل ون دحاوریز قیرط یام هارامه امز و زود هب هتسباو تروص هب ریواصت داتاب

هرامت 4 ولس رامیت ه یروط هب .) زود نیرتلاااب ااب ااه

زا

BIBR1532

15 و )رلاوااامورکیم

hTERC antisense

(7)

25 زا سااپ ار کاایلوباتم تاایلاعف ازاایم )رلاوااموکیپ

تتشگ 24 ازایم هاب اایترت هاب تعاس 21

و 34 داصرد

یم شها تاراسا هدانن راهم ود راه ایترت نیدب و دهد

اااامعا یلولااس هدر ناایا رد ار دوااخ کیااس وتوتیاس یم هرامت ریوصت دنیامن 4

.)

صت هرامش ریو 2 : ولس کیلوباتم تیلاعف یسررب یاه

ااب رامیت زا سپNB4

فالتخم یاهزود BIBR1532

و hTERC antisense رد زارموالت رااهم .

یلولااس هدر قاایرط زا هاوااخ و یکیتیلاااتا دااحاوریز قاایرط زا هاوااخNB4

ولس کیلوباتم تیلاعف شها هب رجنم یدیتوئل ون دحاوریز یام ااه

.دوات

ا و نیگنایم التخم یراا ار هس زا لصاح جیاتن رایعم فارحن ف

mean ± SD )

و هبساحم P value هدمآ تسد هب

، * رگنایب 25 / 2

<

ااشنp انعم راگ ی راد

.دوب رتن هنومن اب هسیاقم رد یرامآ رظن زا جیاتن دوب

ولس رامیت یاه

ابNB4 BIBR1532

و

hTERC antisense

مولت میزنآ تیلاعف شها هب رجنم هتسباو تروص هب زار

یم زود هب دوت

ریساات نییعت تهه

BIBR1532

و

hTERC antisense

ولس ام ،زارمولت تیلاعف رب یاه

تاظلغ ااب ارNB4

یااه

داصرد سپاس و میدوامن رامیت هدنن راهم ود زا فلتخم وامزآ طسوت زارمولت میزنآ تیلاعف راهم دروامTRAP

رامیت .میداد رارق یبایزرا 24

ولاس هتعاس یااه

اابNB4

یاااهزود رد زارمواالت یکیتیلاااتا هداانن راهم 52

و 15

میزانآ تایلاعف زا یههوات لاباق ترواص هب رلاومورکیم یام یریگوله زارمولت هرامات ریواصت دایامن

3 هبااشم .)

راتفر

BIBR1532

زاین یدیتوئل ون دحاوریز هدنن راهم ،

اایم تااسناوت زود رد ار زارمواالت میزاانآ تاایلاعف از

25

دودح ًابیرقت دوخ زا رلاوموکیپ 36

داهد شهاا داصرد

هرامات ریوصت 3

هاب جیااتن داییات رواظنم هاب ،هامادا رد .)

ومزآ زا هدمآ تسد زارموالت راهم صوصخ ردTRAP

میااظنت رد مااهم ژ ود ااایب ازاایم ،وراد ود رااه طااسوت ،زارموالت تیلاعف

c-Myc

و

survivin

یاسررب دروام زاین زا هدامآ تاسد هاب جیااتن .تفرگ رارق

Real-time PCR

هاااب خاااساپ رد ژ ود راااه اااایب ازااایم هااا داد ااااشن

BIBR1532

و

hTERC antisense

ًلامااا تروااص هااب

نعم ی هرامات ریواصت تافای شهاا یراد 3

دواخ ها )

ولس رد زارمولت میزنآ راهم رب یدییات زا هدت قتشم یاه

یمورپ یمسول یم داح کیتیسول

.دتاب

رتن یاه ژ و زارمولت میزنآ تیلاعف یسررب: هدنن

یلولااس هدر رد آ اااب رااامیت زا سااپNB4

BIBR1532 و

hTERC

antisense شهاا هاب ردااق زود هاب هتاسباو ترواص هاب وراد ود ره .

یم یلولس هدر رد زارمولت میزنآ تیلاعف ریساات یاسررب تاهه .دناتاب

میااظنت یاااه ژ ااایب رااب اگداانن راهم ،زارمواالت تاایلاعف هداانن

ولاااس یااااه یااااهزود اااابNB4

52 و 15 یوراد زا رلاوااامورکیم

BIBR1532 و

32 و 25 یوراد زا رلاواااموکیپ hTERC antisense

ژ ود ااایب سپااس و دنداات رااامیت c-Myc

و survivin کااینیکت اااب

Real-time PCR .تافرگ رارااق یباایزرا دروام

اایم فارااحنا و نیگن

لتخم یرا ار هس زا لصاح جیاتن رایعم ف

mean ± SD هباساحم )

و P value هدامآ تاسد هاب

، * رگناایب 25 / 2

<

ااشنp یانعم راگ راد

زاپسا هب هتسباو زوتپوپآ ءاقلا هب رجنم زارمولت راهم 3

رد

ولس یاه مNB4

ی دنوت

دوخ تارسا یروموتدض یاهوراد ه نیا هب ههوت اب دااجیا ای و یزوتپوپآ یاهریسم در اعف قیرط زا ای ار

یم امعا یلولس هخرچ رد فقوت ات میدت آ رب ،دنیامن

یلولاس رام ءاقلا رب ار زارمولت اگدنن راهم نیا ریسات یلولاس هدر رد زواتپوپآ هاب هتسباو وامزآ طاسوتNB4

Annexin/PI assay

زا ساپ .میاهد راراق یباایزرا دروام

ویسابوکنا 24

ولس هتعاس تظلغ اب اه

زا فالتخم یااه

(8)

لیدیتافسف جورخ ازیم وراد ولس حطس رد نیرس

ااب ااه

جیااتن .تافرگ راراق یباایزرا دروام یرتموتیاسولف شور هدات ءااقلا زواتپوپآ شیازفا زا ،یرتموتیاسولف زا لصاح ره اب رامیت اقاعتم ود راه .دراد تایاکح هدانن راهم ود

ولاس دصرد شیازفا ثعاب اهنت هن وراد یااه

Annexin-

ولس دصرد هکلب ؛دندت تبثمV

یااه

Annexin-V/PI

دنداد شیازفا زین ار تبثم

25 / 2

<

)p

هرامت ریوصت 2

.)

هدات ءااقلا زواتپوپآ اایآ ه نیا یسررب تهه ،همادا رد زا زارموالت هدانن راهم ود راه طسوت دات ااعف قایرط

زاپسا میزنآ 3

یم تروص ولس ،دریگ

یااه ااب ارNB4

وامزآ یاراب ها یهباشم یاهزود

Annexin/PI assay

تتشگ سپ و میدر رامیت ،دوب هدت هدافتسا 24

تعاس

زاپااسا کاایتامیزنآ تاایلاعف ازاایم 3

تاای طااسوت ار

Caspase-3 assay

نایا جیااتن .مایداد رارق یبایزرا دروم

ومزآ ولس رد زارمولت راهم ه داد اشن زین یاه

NB4

زاپسا میزنآ زود هب هتسباو دت اعف اب 3

تاسا هارامه

هرامت ریوصت 2

،زارموالت هدانن راهم ود راه ًلاامتحا و )

هتاسباو یاهریاسم قیرط زا یلولس هدر نیا رد ار زوتپوپآ یم اعف زاپسا هب .دنیامن

زواتپوپآ ءااقلا: زاپاسا هاب هتاسباو

3 یلولاس هدر رد NB4

ااب راامیت زا سپ BIBR1532

و hTERC antisense ولاس .

یوراد ااب ااه

BIBR1532

52 و 15 یوراد و )رلاواامورکیم hTERC antisense

32 و 25 تدم هب )رلاوموکیپ 24

ءااقلا سپاس و دندت رامیت تعاس

تیلاعف و زوتپوپآ زاپسا کیتامیزنآ

3 بایزرا دروم .تفرگرارق ی نیگناایم

لتخم یرا ار هس زا لصاح جیاتن رایعم فارحنا و ف

mean±SD )

و هبساحم P value هدمآ تسد هب

، * رگنایب 25 / 2 p<

) اشن انعم راگ ی راد

ولس رامیت یاه

ابNB4 BIBR1532

و

hTERC antisense

یازفا ثعاب ایب شها و کیتوتپوپآورپ یاه ژ ایب ش

یتنآ یاه ژ یم کیتوتپوپآ

دوت

رام اایآ ها نایا یسررب روظنم هب هعلاطم نیا رد یلولاس هدر رد زارموالت رااهم طاسوت هدات ءااقلا یلولس لایخد ماهم یااه ژ یسیونور تیلاعف رد رییغت ابNB4

یم هارمه زوتپوپآ رد ولس ؛دتاب

اامز تدم یارب اه 24

یوراد اب تعاس

BIBR1532

52 و 15 و )رلاوامورکیم

یوراد

hTERC antisense

32 و 25 راامیت )رلاوموکیپ

ژ زا یاخرب ایب حطس سپس و دندت یاتنآ

کایتوتپوپآ

Bcl-2

کاایتوتپوپآورپ و ) هلیااسو هاااب )Bax

کاااینکت

Real-time PCR

هاب جیااتن .تافرگ راراق یباایزرا دروم

یم اشن هدمآ تسد دنهد

ولس ههاوم ه یااه

اابNB4

ااایب شیازاافا اااب زارمواالت هداانن راهم یاااهوراد وBax

ایب شها

Bcl-2

هرامات ریواصت تسا هدوب هارمه 5

.)

مه ایب شیازفا لیلد هب ،نینچ اایب شهاا وBax

Bcl-

تبااسن ،2 Bax/Bcl-2

ولااس رد هااهاوم یاااه

اااب هداات

ولاس هاب تباسن زارموالت اگدانن راهم زا کیره یااه

شیازافا ااب زین هلئسم نیا ه هدوب هارمه شیازفا اب رتن هرامت ریوصت تسا هداد اشن ار دوخ زوتپوپآ ازیم 5

.)

: ولاس راامیت زا ساپ زواتپوپآ ااب طبترم یاه ژ تارییغت یااه

ابNB4 BIBR1532 و

hTERC antisense راجنم زارموالت هدانن راهم ود ره .

ایب شیازفا هب کیتوتپوپآورپ ژ

یاتنآ ژ شها نینچ مه وBax کایتوتپوپآ

Bcl-2 یااه ژ ایب تبسن شیازفا اب تیاهن رد وراد ود نیا .دندت وBax

Bcl-2 .دندت یلولس هدر نیا رد زوتپوپآ ءاقلا هب رجنم فاراحنا و نیگناایم

(9)

التخم یراا ار هاس زا لاصاح جیااتن رایعم ف

mean ± SD و هباساحم )

P value ب هدمآ تسد ه

، * رگنایب 25 / 2

<

اشن )p جیااتن دواب رادانعم رگ

.دوب رتن هنومن اب هسیاقم رد یرامآ رظن زا

ثحب

یم اشن هعلاطم نیا زا هدمآ تسد هب جیاتن ها دهد

و ءااقب ازایم شهاا هاب ردااق زارمولت هدنن راهم ود ره ولس ویسارفیلورپ یاه

زود هاب هتسباو تروص هبNB4

یم اب ماه .دنت تایلاعف ازایم رااهم ااب وراد ود راه نیانچ

یم یلولس کیلوباتم ار دوخ کیس وتوتیاس تارسا دنناوت

رامیت رد ه یروط هب ؛دنیامن امعا 24

ولس هتعاس یاه

ااااااابNB4 BIBR1532

زود رد 15 و رلاواااااامورکیم

hTERC antisense

تظلغ رد 25

ءااقب ازیم رلاوموکیپ

ولس یاه زا شیبNB4

22 یم شها دصرد هباشم .دبای

هااتفای نیاانچ هااعلاطم رد یا

ولااس یور یا یمااسول یاااه

راااهم هاا دوااب هداات صخااشم زااین داااح کیتااسلابوفنل یام زارمولت یکیتیلاتا دحاوریز تدام هااتو رد داناوت

ولاس ءاااقب ازاایم شهاا هااب راجنم یاااه

Pre-B ALL

ددرگ

12

مه .)

هداد ااشن زاین یراگید تاعلاطم رد نینچ

دت یم اهنت هن زارمولت راهم ه تسا ه ءااقب ازیم زا دناوت

ولااس دیدااشت هااب رداااق هااکلب ،دااهاکب یروااموت یاااه

یمیاات یاااهوراد کیااس وتوتیاس تارااسا زااین ینااامرد

یم دتاب

13 - 15

نیراس لیدیتافاسف جورخ ازیم یسررب .)

ولس حطس رد یااه

تایلاعف یاسررب نیانچ ماه وNB4

زاپسا کیتامیزنآ 3

قیقحت رد رااهم ه ه داد اشن ام

دااحاوریز راااهم قاایرط زا هاوااخ زارمواالت میزاانآ تاایلاعف راجنم یدیتوئل ون دحاوریز قیرط زا هاوخ و یکیتیلاتا زاپاسا ریسم هب هتسباو زوتپوپآ ءاقلا هب 3

ولاس رد یااه

یم داح کیتیسولویمورپ یمسول هدامآ تسد هب جیاتن .ددرگ

ه دوب آ زا ی اح نیشیپ هعلاطمرد دودح رد

32 دصرد

دااح کیتیاسولیمورپ یماسول دراوم زا اراامیب ،)APL

واط یاراد TRF

Terminal restriction fragment

)

یم یهاتو ااشن ها دنتاب

هاهوت لاباق ییااناوت هدانهد

ولااس یرااامیب تفرااشیپ و راایثکت رد کیمااسول یاااه

یم دتاب

6

زا و یرامیب دوع ازیم ه تسا ر ک هب مزلا .)

هم آ م یمیت یاهوراد هب تمواقم هدیدپ زورب رت ینامرد

یرتلااااب زارمواالت تاایلاعف هاا ینارااامیب زا هتااسد آ رد یم شیب ،دنتاب یم ارامیب ریاس زا رت

داتاب

6

سااسا راب .)

هتفای نیا یم رظن هب ،اه یماسول هاب ءلاتبم ارامیب ه دسر

امرد یارب یبسانم یاهدیدنا داح کیتیسولیمورپ ییاه

اب یم زارمولت راهم ساسا دنتاب

42

.)

وکلوم نیب رد یلولاس رام میاظنت رد ها ییااه

یاسیونور روت ااف ،دنراد شقن

c-Myc

هتخانات زا یاکی

هدت وکلوم نیرت یم ییاه

هولاع ه دتاب رداق ه نیا رب

یم ،تسا یلولس ویسارفیلورپ رتن هب راب ریساات اب دناوت

ژ یااسیونور ازاایم یااتنآ یاااه

پوپآ مااه کاایتوت وااچ

survivin

و

Bcl-2

ولس رد ار زوتپوپآ زورب میظنت زین اه

یامن د

41

مه .)

هداد اشن زین رگید تاعلاطم ،نینچ ها دنا

یسیونور روت اف

c-Myc

میاظنت کای ماهم رایاسب هدانن

یاام زارمواالت ژ ااایب راااهم قاایرط زا و دااتاب

survivin

یم رد زارموالت تیلاعف شیازفا هب رجنم دناوت ولاس

یااه

ددرگ یناطرس

44

تاسد هب جیاتن ه تسا ر ک هب مزلا .)

رد زارموالت میزانآ راهم ه داد اشن هعلاطم نیا زا هدمآ ولس یاه ژ ایب شها اب اهنت هنNB4

یااه

c-Myc

و

survivin

ژ تباسن شیازافا هاب راجنم هاکلب ،دوب هارمه

کاایتوتپوپآورپ یااتنآ ژ هاابBax

کاایتوتپوپآ

Bcl-2

یم هب جیاتن زا یلامتحا ریسفت کی ،ساسا نیمه رب .ددرگ

یم یسررب نیا رد هدمآ تسد ها دتاب تروص نیا هب دناوت

هدانن راهم ود ره ًلاامتحا

BIBR1532

و

hTERC antisense

ژ ایب ازیم رییغت قیرط زا یتنآ و ورپ یاه

کایتوتپوپآ

ولاس کایلوباتم تیلاعف شها هب رجنم هدر یااه

NB4

و هتشگ قایرط زا ار دواخ کیاس وتوتیاس رسا تیاهن رد هدر نایا رد زواتپوپآ هطساو اب یلولس رم دومن اعف ًاریخا ه آ ههوت الاه هتکن .تسا هدومن امعا یلولس تسا هدت صخشم زنژوتااپ رد لیخد مهم یاهریسم راهم ه

مهAPL

مایپ ریسم راهم وچ یناسر

یمPI3K

قایرط زا دناوت

لت میزنآ راهم رد کیاس وتوتیاس تاراسا اقلا ثعاب زارمو

یلولاااس هدر ددراااگNB4

43

تاراااسا هااا دااانچ راااه ؛)

رااهم ااقاعتم زین زارمولت راهم زا لقتسم کیس وتوتیاس

(10)

ولس ردPI3K

کیماسول یاه هدات شرازاگ زاینAPL

تسا

42

، 45

. )

یام اشن یسررب نیا جیاتن ل رد ها داهد

داحاوریز قیرط زا هچ زارمولت میزنآ راهم و یکیتیلااتا

ازیم شها هب رجنم یدیتوئل ون دحاوریز قیرط زا هچ ولس ویسارفیلورپ و اقب یم کیمسول یاه

ماه .دوت نیانچ ،

ایب شها قیرط زا ًلاامتحا هدنن راهم ود ره

c-Myc

و

ژ ایب ازیم نیب داعت دزمهرب و کایتوتپوپآورپ یاه

یتنآ ر رد زوتپوپآ زورب هب رجنم کیتوتپوپآ یلولاس هد

NB4

یم .ددرگ ازایم رد زارموالت هدات تباس شقن هب ههوت اب کیتیاسولیمورپ یماسول هب ءلاتبم ارامیب امرد هب خساپ

هاب ،شهویاپ نیا زا هدمآ تسد هب جیاتن نینچ مه و داح یم رظن رااکهار زارموالت اگدانن راهم زا هدافتاسا داسر

.دتاب ارامیب نیا امرد تهه یبسانم ینامرد

س یرازگساپ

نیدب هلیسو زا تنواعم تاقیقحت و

یرواانف هاگاشناد

مولع یکتزپ دیهت هب یتشهب تهه نیمات ههدوب قایقحت

و رکشت .ددرگ یم ینادردق

References

1. Cech TR. Beginning to understand the end of the chromosome. Cell 2004; 116(2): 273-279.

2. Feng J, Funk WD, Wang SS, Weinrich SL, Avilion AA, Chiu CP, et al. The RNA component of human telomerase. Science 1995; 269(5228): 1236-1241.

3. Wojtyla A, Gladych M, Rubis B. Human telomerase activity regulation. Mol Biol Rep 2011; 38(5): 3339-3349.

4. Cerni C. Telomeres, telomerase, and myc. An update. Mutat Res Res 2000; 462(1): 31-47.

5. Moriarty TJ, Dupuis S, Autexier C. Rapid upregulation of telomerase activity in human leukemia HL-60 cells treated with clinical doses of the DNA-damaging drug etoposide.

Leukemia 2002; 16(6): 1112- 1120.

6. Ghaffari SH1, Shayan-Asl N, Jamialahmadi AH, Alimoghaddam K, Ghavamzadeh A.

Telomerase activity and telomere length in patients with acute promyelocytic leukemia:

indicative of proliferative activity, disease progression, and overall survival. Ann Oncol 2008; 19(11): 1927-1934.

7. De Cian A, Lacroix L, Douarre C, Temime- Smaali N, Trentesaux C, Riou JF, et al.

Targeting telomeres and telomerase. Biochimie 2008; 90(1): 131-155.

8. Shay JW, Wright WE. Telomerase therapeutics for cancer: challenges and new directions. Nature Reviews Drug Discov 2006; 5(7): 577-584.

9. Damm K, Hemmann U, Garin-Chesa P, Hauel N, Kauffmann I, Priepke H, et al. A highly selective telomerase inhibitor limiting human cancer cell proliferation. EMBO J 2001;

20(24): 6958-6968.

10. Kondo Y, Koga S, Komata T, Kondo S.

Treatment of prostate cancer in vitro and in vivo with 2-5A-anti-telomerase RNA component.

Oncogene 2000; 19(18): 2205-2211.

11. Shammas MA, Koley H, Bertheau RC, Neri P, Fulciniti M, Tassone P, et al. Telomerase inhibitor GRN163L inhibits myeloma cell growth in vitro and in vivo. Leukemia 2008;

22(7): 1410-1418.

12. Xiang-Kui F, Rui-Hua Y, Bao-Jiang L, Xiang- Ming C, LIN W, et al. Antisense oligodeoxynucleotide against human telomerase reverse transcriptase inhibits the proliferation of Eca‑109 esophageal carcinoma cells. Exp Ther Med 2014; 8(4): 1247-1252.

13. Feldser DM, Hackett JA, Greider CW.

Telomere dysfunction and the initiation of genome instability. Nat Rev Cancer 2003;

3(8): 623-627.

(11)

14. Bashash D, Ghaffari SH, Mirzaee R, Alimoghaddam K, Ghavamzadeh A.

Telomerase inhibition by non-nucleosidic compound BIBR1532 causes rapid cell death in pre-B acute lymphoblastic leukemia cells.

Leuk Lymphoma 2013; 54(3): 561-568.

15. Bashash D, Zareii M, Safaroghli-Azar A, Omrani MD, Ghaffari SH. Inhibition of telomerase using BIBR1532 enhances doxorubicin-induced apoptosis in pre-B acute lymphoblastic leukemia cells. Hematology 2017; 22(6): 1-11.

16. Ward RJ, Autexier C. Pharmacological telomerase inhibition can sensitize drug- resistant and drug-sensitive cells to chemotherapeutic treatment. Mol Pharmacol 2005; 68(3): 779-786.

17. Meng E, Taylor B, Ray A, Shevde LA, Rocconi RP. Targeted inhibition of telomerase activity combined with chemotherapy demonstrates synergy in eliminating ovarian cancer spheroid-forming cells. Gynecol Oncol 2012; 124(3): 598-605.

18. Bashash D, Ghaffari SH, Zaker F, Kazerani M, Hezave K, Hassani S, et al. BIBR 1532 increases arsenic trioxide-mediated apoptosis in acute promyelocytic leukemia cells:

therapeutic potential for APL. Anticancer Agents Med Chem 2013; 13(7): 1115-1125.

19. Asghari-Kia L, Bashash D, Safaroghli-Azar A, Momeny M, Hamidpour M, Ghaffari SH.

Targeting human telomerase RNA component using antisense oligonucleotide induces rapid cell death and increases ATO-induced

apoptosis in APL cells. Eur J Pharmacol 2017; 809: 215-223.

20. Shay JW, Keith WN. Targeting telomerase for cancer therapeutics. Br J Cancer 2008;

98(4): 677-683.

21. Dang CV. c-Myc target genes involved in cell growth, apoptosis, and metabolism. Mol Cell Biol 1999; 19(1): 1-11.

22. Endoh T, Tsuji N, Asanuma K, Yagihashi A, Watanabe N. Survivin enhances telomerase activity via up-regulation of specificity protein 1-and c-Myc-mediated human telomerase reverse transcriptase gene transcription. Exp Cell Res 2005; 305(2): 300-311.

23. Bashash D, Delshad M, Safaroghli-Azar A, Safa M, Momeny M, Ghaffari SH. Novel pan PI3K inhibitor-induced apoptosis in APL cells correlates with suppression of telomerase:

An emerging mechanism of action of BKM120. Int J Biochem Cell Biol 2017;

91(Pt A): 1-8.

24. Bashash D, Safaroghli-Azar A, Delshad M, Bayati S, Nooshinfar E, Ghaffari SH.

Inhibitor of pan class-I PI3K induces differentially apoptotic pathways in acute leukemia cells: Shedding new light on NVP- BKM120 mechanism of action. Int J Biochem Cell Biol 2016; 79: 308-317.

25. Bashash D, Safaroghli-Azar A, Dadashi M, Safa M, Momeny M, Ghaffari SH. Anti- tumor activity of PI3K-δ inhibitor in hematologic malignant cells: Shedding new light on resistance to Idelalisib. Int J Biochem Cell Biol 2017; 85: 149-158.