Autumn 2011 [Article in Persian]
يژﻮﻟﻮﮐﺎﻣرﺎﻓ و يژﻮﻟﻮﯾﺰﯿﻓ ﺪﻠﺟ
12 ةرﺎﻤﺷ ، 1 رﺎﻬﺑ ، 1387
Response to Morphine in a unicellular animal model (Paramecium caudatum)
Seyed Sajad Shahrokhi 1, Manizheh Karami*1, Bahram Kazemi2*
1. Dept. Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahed University, Tehran, Iran
2. Cellular and Molecular Researches Center at Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran Accepted: 4 Aug 2011
Received: 5 Mar 2011
ﻢﯾﺰﻧآ ﯽﺧﺮﺑ نژ نﺎﯿﺑ و ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻦﯿﻣﻻﻮﮑﺘﮐ ﻪﯾﺰﺠﺗ و ﺰﺘﻨﺳﻮﯿﺑ رد ﻞﯿﺧد يﺎﻫ
ﺎﻫ نﺎﯾرﺎﺘﺳ
نارﺎﮑﻤﻫ و
Abstract
Introduction: Response to morphine and role of Nitric Oxide (NO) on expression of morphine response has been studied in vertebrates. But, little evidence is provided in the matter in earlier invertebrates. This investigation for the first time evaluated the effect of NO on expression of morphine potency in Paramecium caudatum.
Methods:Animal after isolation from natural media and specific identification was cultured in laboratory. 1 ml of the isolated medium including the animals was added into the Sedgwick– Rafter cell counter. One μl of drugs was infused into the cell counter. Morphine (1-60 μg/μl) was infused into the cell and its effect was recorded throughout 0- 180 sec. L-Arginine (1-8 μg/μl), a NO precursor, was infused prior to morphine (2μg/μl). The NO producing enzyme was inhibited by preinfusion of L-NAME. Also the naloxone was used to show the involvement of the opioid receptors in the signaling of morphine response. In control speciements distilled water was added solely.
Results: The Paramecia under the infusion of morphine were aggregated. The most aggregation rate was observed at a relatively low dose of the drug (2 μg/μl). L-Arginine showed a positive effect on the response (p<0.001) whearas the effect was blocked by preinfusion of the L- NAME. Naloxone showed an inhibitory effect to morphine response.
The activity of the NOS was shown by using the NADPH-diaphorase.
Conclusion:A sign of morphine potency in single–celled animal is the cell aggregation, and the present results are showing the interaction of NO system with the opioidergic system in this line. On the other hand, concerning the potentiation effect of L-arginine on morphine effective dose in the model, this finding may be useful in reducing of morphine’s side effects in patients under the treatment of the drug, and in the drug economy as well.
Key words:Paramecium caudatum, Morphine Potency, Nitric oxide
* Corresponding author e-mail: [email protected] Available online at: www.phypha.ir/ppj
ﺲﯿﺳﺄﺗ ١٣۴٧
and
Pharmacology
يژﻮﻟﻮﮐﺎﻣرﺎﻓ و يژﻮﻟﻮﯾﺰﯿﻓ 15
) 3 (،
318 329–
ﺰﯿﯾﺎﭘ 1390
يژﻮﻟﻮﮐﺎﻣرﺎﻓ و يژﻮﻟﻮﯾﺰﯿﻓ
ﺪﻠﺟ 12 ةرﺎﻤﺷ ، 1 ، رﺎﻬﺑ 1387
يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ﯽﻧاﻮﯿﺣ لﺪﻣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺦﺳﺎﭘ )
Paramecium caudatum (
ﯽﺧﺮﻫﺎﺷ دﺎﺠﺳ ﺪﯿﺳ ﯽﻣﺮﮐ هﮋﯿﻨﻣ ،1
2
، *
ﯽﻤﻇﺎﮐ ماﺮﻬﺑ
3
1 . د ،ﻪﯾﺎﭘ مﻮﻠﻋ هﺪﮑﺸﻧاد ،ﯽﺳﺎﻨﺷ ﺖﺴﯾز هوﺮﮔ ﺪﻫﺎﺷ هﺎﮕﺸﻧا
ناﺮﻬﺗ ،
ﯽﺘﺸﻬﺑ ﺪﯿﻬﺷ ﯽﮑﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد، ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ و ﯽﻟﻮﻠﺳ تﺎﻘﯿﻘﺤﺗ ﺰﮐﺮﻣ .2 ناﺮﻬﺗ ،
ﺖﻓﺎﯾرد : 14 ﺪﻨﻔﺳا 89
شﺮﯾﺬﭘ : 13 دادﺮﻣ 90
و ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻢﯾﺰﻧآ ﯽﺧﺮﺑ نژ نﺎﯿﺑ ﺰﺘﻨﺳﻮﯿﺑ رد ﻞﯿﺧد يﺎﻫ و ﻪﯾﺰﺠﺗ ﻦﯿﻣﻻﻮﮑﺘﮐ ﺎﻫ نﺎﯾرﺎﺘﺳ
و نارﺎﮑﻤﻫ
هﺪﯿﮑﭼ
ﻪﻣﺪﻘﻣ : ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺦﺳﺎﭘ ﺘﺨﻣ ﻞﻣاﻮﻋ ﺶﻘﻧ و
ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ هﮋﯾو ﻪﺑ ﻒﻠ رد نآ نﺎﯿﺑ ﺮﺑ(NO)
هﺮﻬﻣ ناراد نﺎـﮔﺮﻬﻣ ﯽـﺑ رد ﻪﻟﺎـﺴﻣ ﻦـﯾا ياﺮﺑ ﯽﻓﺎﮐ ﺪﻫاﻮﺷ ﺎﻣا ،ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ
دراﺪﻧ دﻮﺟو ﺖﺴﭘ .
ﺶﻘﻧ ﺶﻫوﮋﭘ ﻦﯾا رد رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ترﺪﻗ نﺎﯿﺑ ردNO
Paramecium caudatum ياﺮﺑ
ﻦﯿﻟوا رﺎﺑ درﻮﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ راﺮﻗ ﺖﻓﺮﮔ .
ﺎﻫ شور : ا ﺲﭘ ﯽﻧاﻮﯿﺣ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺪـﺷ هداد شروﺮـﭘ هﺎﮕـﺸﯾﺎﻣزآ رد ﻪﻧﻮﮔ ﺪﯿﺋﺎﺗ و ﯽﻌﯿﺒﻃ ﻂﯿﺤﻣ زا يزﺎﺳاﺪﺟ ز
. رﺎﻤـﺷ لﻮﻠـﺳ مﻻ ﻪـﺑ ﺺﻟﺎـﺧ ﺖـﺸﮐ ﻂﯿـﺤﻣ زا ﺮـﺘﯿﻟ ﯽـﻠﯿﻣ ﮏـﯾ
Sedgwick-Rafter ﮏﯾ ﻢﺠﺣ رد وراد و ﻪﻓﺎﺿا
ﺪﺷ ﺢﯿﻘﻠﺗμl . ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺢﯿﻘﻠﺗ ﺮﺛا (1-60 μg/μl)
ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ ﯽﻃ (0 -180 sec)
ﺪﯾدﺮﮔ شراﺰﮔ .
لا - ﻦﯿﻨﯾژرآ (1-8 μg/μl) ،
زﺎﺳ ﺶﯿﭘ ﻦﯿﻓﺮﻣ زا ﻞﺒﻗ ،NO
(2 μg/μl) ﺪﻟﻮﻣ ﻢﯾﺰﻧآ و ﺢﯿﻘﻠﺗ
ﺰﯾﻮﺠﺗ ﺶﯿﭘ ﺎﺑNO L-NAME
ﺪﺷ رﺎﻬﻣ . تاﺮـﺛا رد يﺪـﯿﺋﻮﯿﭘا يﺎـﻫ هﺪـﻧﺮﯿﮔ ﺖـﻟﺎﺧد نداد نﺎـﺸﻧ ياﺮـﺑ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ
زا ﻦﯿﻓﺮﻣ ﮓﻨﯿﻟﺎﻨﮕﯿﺳ Naloxone
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا . ﻢﺘﺴﯿﺳ ﺖﯿﻟﺎﻌﻓ ﺎﺑNO
NADPH-diaphorase درﻮﻣ
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﯽﺳرﺮﺑ .
ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ رد ﺪﻫﺎﺷ ي ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ﺮﻄﻘﻣ بآ .
ﺎﻫ ﻪﺘﻓﺎﯾ : يﺎﻫ لﻮﻠﺳ P. caudatum ﺘﺒﺴﻧ زود ﺖﺤﺗ ﺰﯿﻧ ﻊﻤﺠﺗ ﺖﻟﺎﺣ ﻦﯾﺮﺘﺸﯿﺑ و ﺪﻧﺪﺷ ﻊﻤﺘﺠﻣ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﯿﺛﺎﺗ ﺖﺤﺗ
ًﺎ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻦﯿﺋﺎﭘ (2 μg/μl)
ﺪﺷ هﺪﻫﺎﺸﻣ . لا - ﺮـﺛا ﻦﯿـﻨﯾژرآ
ﺖﺷاد ﺪﻨﯾاﺮﻓ ﻦﯾا ﺮﺑ ﺖﺒﺜﻣ )
p<0.001 ( ﺰﯾﻮﺠﺗ ﺶﯿﭘ ﻪﮑﯿﻟﺎﺣ رد L-NAME
دﺮﮐ ﻒﻗﻮﺘﻣ ار تاﺮﺛا ﻦﯾا .
Naloxone داد نﺎﺸﻧ يرﺎﻬﻣ ﺮﯿﺛﺎﺗ ﺰﯿﻧ
. ﺪﯾﺎـﺴﮐا ﮏـﯾﺮﺘﯿﻧ ﻢﯾﺰﻧآ ﺖﯿﻟﺎﻌﻓ ﺮﯿﯿﻐﺗ
زﺎﺘﻨﯿﺳ Nitric Oxide Synthase) (
ﺎﺑ NADPH-diaphorase رد
P. caudatum ﺪﺷ هداد نﺎﺸﻧ
.
ﺘﻧ ﯿ يﺮﯿﮔ ﻪﺠ : ـﻫد ﯽـﻣ نﺎﺸﻧ قﻮﻓ ﺞﯾﺎﺘﻧ و ﺖﺳا ﯽﻟﻮﻠﺳ ﻊﻤﺠﺗ زوﺮﺑ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ﯽﻧاﻮﯿﺣ لﺪﻣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﯽﺋوراد تاﺮﺛا زا ﯽﮑﯾ ﻢﺘـﺴﯿﺳ ﻪـﮐ ﺪ
رد يﺪـﯿﺋﻮﯿﭘا ﻢﺘـﺴﯿﺳ ﺎـﺑNO
P. caudatum دراد ﻞﺧاﺪﺗ ﺎﺘﺳار ﻦﯾا رد
. لا ﯽﺘﯾﻮﻘﺗ ﺦﺳﺎﭘ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﺮﮕﯾد فﺮﻃ زا -
ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﯽﺒﻧﺎـﺟ تاﺮـﺛا ﺶﻫﺎـﮐ يﺎﺘﺳار رد ﺪﻧاﻮﺗ ﯽﻣ ﻪﺘﻓﺎﯾ ﻦﯾا ،ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺛﻮﻣ زود ﺮﺑ ﻦﯿﻨﯾژرآ )
رد
ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺎﺑ نﺎﻣرد ﺖﺤﺗ نارﺎﻤﯿﺑ (
ﯾوراد دﺎﺼﺘﻗا ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ﻞﺋﺎﺴﻣ و ﺪﺷﺎﺑ ﺪﻨﻤﺷزرا ﯽ
.
هژاو يﺪﯿﻠﮐ يﺎﻫ :
P. caudatum ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ،ﻦﯿﻓﺮﻣ ترﺪﻗ ،
ﻪﻣﺪﻘﻣ
*ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ
(Nitric Oxide)
يزﺎﮔ و ﮏﭼﻮﮐ لﻮﮑﻟﻮﻣ
ﺪـﻨﮐ ﯽﻣ ﺖﮐرﺎﺸﻣ ﺎﻫﺪﻨﯾاﺮﻓ زا يرﺎﯿﺴﺑ مﺎﺠﻧا رد ﻪﮐ ﺖﺳا ﻞﮑﺷ .
ﯽﻧاﻮـﯿﺣ يﺎـﻫ لﺪﻣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ تاﺮﺛا يﺎﻘﻟا رد ﻞﻣﺎﻋ ﻦﯾا ﺖﯿﻤﻫا ﺖﺳا هﺪﺷ هداد نﺎﺸﻧ 12]
.[
ﻢﯾﺰـﻧآ ﻞـﻣﺎﻋ ﻦـﯾا ﺰﺘﻨﺳﻮﯿﺑ لﻮﺌﺴﻣ
تﺎﺒﺗﺎﮑﻣ لﻮﺌﺴﻣ ةﺪﻨﺴﯾﻮﻧ*
:
[email protected]
ﻪﻠﺠﻣ هﺎﮕﺑو :
www.phypha.ir/ppj
زﺎﺘﻨﯿﺳ ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ
(Nitric Oxid Synthase)
ﻦﯿﻟوا ﺖﺳا
هداد حﺮـﺷ ناراﺪﻧﺎﺘﺴﭘ لﺎﯿﻠﺗوﺪﻧا يﺎﻫ لﻮﻠﺳ و ﺎﻫژﺎﻓوﺮﮐﺎﻣ رد رﺎﺑ ﯽﻠـﺻا مﺮـﻓوﺰﯾا ﻪــﺳ ﻞـﻗاﻻ هزوﺮـﻣا و ﺪـﺷ
(NOS1, NOS2,
NOS3)
ﺖﺳا هﺪﺷ ﯽﻓﺮﻌﻣ ناراﺪﻧﺎﺘﺴﭘ رد نآ زا 17]
3,
. [
رد ﺎـﻣا
ﺎﺑ ﻪﻄﺑار ﯽـﺋوراد تاﺮﺛا زوﺮﺑ رد نآ ﺶﻘﻧ و لﺎﻨﮕﯿﺳ لﻮﮑﻟﻮﻣ ﻦﯾا
ﺖـﺴﯿﻧ ﺖـﺳد رد ﯽﻓﺎـﮐ ﺪﻫاﻮـﺷ هﺮﻬﻣ ﯽﺑ نارﻮﻧﺎﺟ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ .
زا
ﺪـﯿﻟﻮﺗ رد ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﺮﯿﺛﺄـﺗ ﻪﺑ ناﻮﺗ ﯽﻣ دﻮﺟﻮﻣ ﺪﻫاﻮﺷ دوﺪﻌﻣ ﻪﻠﻤﺟ دNO
ر
Ascaris suum
) ﺪﺗﺎﻤﻧ ﯽﻋﻮﻧ (
دﺮـﮐ هرﺎـﺷا 25]
ﺰـﯿﻧ و[
و ﻦﯿﻓﺮــﻣ لﺎﻨﮕﯿــﺳ لﺎــﻘﺘﻧا ﺪــﻧور ﯽــﻓﺮﻌﻣ ياﺮــﺑ ﯽﺗﺎــﻌﻟﺎﻄﻣ
ﺲﯿﺳﺄﺗ 1347
β
ﺪـﻨﻧﺎﻣ راد هﮋـﻣ يا ﻪـﺘﺧﺎﯾ ﮏـﺗ ناﻮـﯿﺣ يداﺪﻌﺗ رد ﻦﯿﻓروﺪﻧا- Paramecium, Stentor
و
Tetrahymena
ﻪــﺘﻓﺮﮔ مﺎــﺠﻧا
و يﺪـﯿﺋﻮﯿﭘا يﺎﻫرﻮﺘﭙﺳر ﺎﺑ ار داﻮﻣ ﻦﯾا ﺶﻨﮑﻤﻫﺮﺑ ﻪﮐ ﺖﺳا
–G
ﺪـﻫد ﯽـﻣ نﺎـﺸﻧ ﯽﻟﻮﻠـﺳ يﺎـﻫ لﺪـﻣ ﻦﯾا ﺢﻄﺳ رد ﺎﻫ ﻦﯿﺌﺗوﺮﭘ 16]
15,
. [
يﺎـﻫ لﻮـﮑﻟﻮﻣ ﺖﺧﺎﻨـﺷ ﻪـﮐ ﺎﺠﻧآ زا ﺎﻣا داﻮـﻣ فﺪـﻫ
رﺎﯿـﺴﺑ يﺎﻫدﺮﺑرﺎﮐ ياراد ﯽﻟﻮﻠﺳ ﺢﻄﺳ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺪﻨﻧﺎﻣ يﺪﯿﺋﻮﯿﭘا ﯽﺋوراد هدﺎﻔﺘﺳا ﯽﻠﻤﻋ ﯽﮔدﺮﺘﺴﮔ ﻪﺑ ﻪﮐ ﺖﺳا ﮏﯾژﻮﻟﻮﮐﺎﻣرﺎﻓ ﻢﻬﻣ رد ﻪـﻌﻟﺎﻄﻣ ﻪـﻧﻮﮔﺮﻫ ﺪـﻣﺎﺠﻧا ﯽـﻣ نﺎﺴﻧا و تﺎﻧاﻮﯿﺣ رد داﻮﻣ ﻦﯾا تﺎــﻧﺎﯾﺮﺟ نﺪــﺷ ﺮــﺗ ﻦــﺷور ﺚــﻋﺎﺑ ﯽﻟﻮــﮑﻟﻮﻣ و ﯽﻟﻮﻠــﺳ ﺢﻄــﺳ ﯿﺛﺎﺗ نﺎﯿﺑ رد هﺪﻨﻨﮐ ﻪﻠﺧاﺪﻣ ﯽﯾﺎﯿﻤﯿﺷﻮﯿﺑ و داﻮـﻣ ﻦـﯾا ﯽـﺋوراد تاﺮ
ﯽﺘﺷاﺪﻬﺑ ﻪﻓﺮﺻ -
ﺪﺷ ﺪﻫاﻮﺧ يدﺎﺼﺘﻗا .ﺑ
ﻞـﻤﻋ ﯽﮔدﺮﺘـﺴﮔ ﺎ
NO
رد رﻮﮐﺬﻣ ﻞﻣﺎﻋ ﺮﮔا دﻮﺑ ﺪﻫاﻮﺨﻧ رﺎﻈﺘﻧا زا رود ،يرﻮﻧﺎﺟ ﻪﻠﺴﻠﺳ رد تﺎـﻧاﻮﯿﺣ رد ﻪـﭽﻧآ ﺎـﺑ ﻪﺑﺎـﺸﻣ و ﺮﺛﺆﻣ دﺮﮑﻠﻤﻋ ﺰﯿﻧ نﺎﮕﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ﯽﻣﺎــﻤﺗ رد ﺖــﺳا هﺪــﯾدﺮﮔ شراﺰــﮔ نﺎــﺴﻧا ﯽــﺘﺣ و ﺮــﺗ ﯽﻟﺎــﻋ ا ﻪﻠﻤﺟ زا ﯽﺗﺎﯿﺣ يﺎﻫﺪﻨﯾآﺮﻓ اﺮﯾز ،ﺪﺷﺎﺑ ﻪﺘﺷاد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﯽﺋوراد تاﺮﺛ
رد
P. caudatum
فﺪـﻫ يﺎﻫ لﻮﮑﻠﻣﻮﯿﺑ ﻞـﯿﻠﯿﻧاﻮﮔ ﺪـﻨﻧﺎﻣNO
زﻼﮑﯿﺳ 13]
ﻪﺘﺴﺑاو راد ﻪﭽﯾرد ﯽﻤﯿﺴﻠﮐ لﺎﻧﺎﮐ و ﻢﯿﺳﺎﺘﭘ لﺎﻧﺎﮐ ،[
ژﺎﺘﻟو ﻪﺑ 22]
20,
19,
9,
ﻦﯿﻟودﻮﻤﻟﺎﮐ ،[
4]
)[
يﺎـﻫ ﻦﯿﺌﺗوﺮﭘ زا ﯽﮑﯾ
ﻢﯾﺰــﻧآ ﺖــﯿﻟﺎﻌﻓ ياﺮــﺑ مزﻻ (NOS
نزو ﺎــﺑ ﻦﯿﺌﺗوﺮــﭘ ﮏــﯾ و
155kDa
14]
ﻢﯾﺰﻧآ ﻪﺑ ﻪﯿﺒﺷ رﺎﯿﺴﺑ ﻪﮐ [ NOS1
ناراﺪﻧﺎﺘﺴﭘ ﯽـﻣ
ﺖﺳا هﺪﻣآ ﺖﺳد ﻪﺑ ﺪﺷﺎﺑ .
ﯽﯾوراد ترﺪﻗ
(Drug Potency)
داﻮﻣ
ﮏـﯿﻣﺎﻨﯾدﻮﮐﺎﻣرﺎﻓ زرﺎﺑ يﺎﻫ ﻪﺼﺨﺸﻣ زا ﯽﮑﯾ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺪﻨﻧﺎﻣ رﺪﺨﻣ ﺖـﺳا داﻮـﻣ ﻦـﯾا ﻪﺑ هﺪﻧز دﻮﺟﻮﻣ ﺦﺳﺎﭘ ﯽﻓﺮﻌﻣ ياﺮﺑ 21]
10,
رد[
ـﺿو ﻪـﺑ نﺎـﯾﺮﺟ ﻦـﯾا ﯽﯾﺎﯿﻤﯿـﺷ ﻮﺘﯿﺳ يﺎﻫرﺎﮐ و زﺎﺳ ﻪﮑﯿﻟﺎﺣ حﻮ
ﻪـﻠﻤﺟ زا ﺎـﻫ لﻮـﮑﻟﻮﻣ ﯽـﻀﻌﺑ ﺖﻟﺎﺧد ﻪﺑ ﺎﻬﻨﺗ ﺖﺳا هﺪﺸﻧ ﻦﯿﯿﺒﺗ يدرد ﺪـﺿ ﺦﺳﺎﭘ ﻪﮑﻧﺎﻨﭽﻤﻫ ﺖﺳا هﺪﺷ دﺎﻨﺘﺳا ﺪﻧور ﻦﯾا ردNO
يﺪﯿﺋﻮﯿﭘا داﻮﻣ )
ﻦﯿﻓﺮﻣ هﮋﯾو ﻪﺑ (
ﻪﻈﻓﺎﺣ و يﺮﯿﮔدﺎﯾ تﺎﻧﺎﯾﺮﺟ ﺰﯿﻧ و
ﺐــﺴﺘﻨﻣ ﺰــﯿﻧ ﮏــﯾژرا ﮏــﯾﺮﺘﺘﻧ ﻢﺘــﺴﯿﺳ ﻪــﺑ ناراد هﺮــﻬﻣ رد ار
ﺪــﻨﻧاد ﯽــﻣ 24]
18,
12,
5,
.[
ﻦﯾاﺮﺑﺎــﻨﺑ رد ﻦﯿﻓﺮــﻣ ﺦــﺳﺎﭘ ﻪــﻌﻟﺎﻄﻣ
ﺪـﻨﻧﺎﻣ يا ﻪـﺘﺧﺎﯾ ﮏـﺗ ﯽﻧاﻮـﯿﺣ يﺎﻫ لﺪﻣ هﮋﯾو ﻪﺑ ،نﺎﮔﺮﻬﻣ ﯽﺑ
Paramecium caudatum
يﺎـﻫ ﻪـﯾﺎﭘ ﺖﺧﺎﻨـﺷ ﻪـﺑ ﺪﻧاﻮﺗ ﯽﻣ
ﺪﻣﺎﺠﻧﺎﯿﺑ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺎﻫ نآ سار رد و رﺪﺨﻣ داﻮﻣ تاﺮﺛا ﯽﺘﺴﯾز .
داﻮﻣ و شور ﺎﻫ
P.caudatum
زا اﯾ ﺎﮕﺘﺴ ه يﺎﻫ بآ ﺷ ﯿﺮ ﻦﯾ ،ﺖـﻗﻮﻣ ﻪـﻠﻤﺟزا ﮕﺑآ
ﯿ ﺎﻫﺮ ي ﻢﮐ ﻖﻤﻋ و هﺎﮕﺑآ ﺎﻫ ﺎـﺑ و يروآ ﻊـﻤﺟ ﺒﻃ ﺖـﺸﮐ
ﯿ ﯽـﻌ
)ﺧ ﯿ ﺪﻧﺎﺴ ه ﯾ ﻪﺠﻧﻮ ( ﺎﻣزآ رد ﯾ ﻪﮕﻧ هﺎﮕﺸ ﺪـﺷ يا ﻪـﻧﻮﮔ ﺪﯿﺋﺎﺗ و يراد
11]
10,
. [
اﺪﺘﺑا هﺎﮕﺸﯾﺎﻣزآ رد ناﻮﯿﺣ شروﺮﭘ و ﺖﺸﮐ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ راﺪﻘﻣ
ي
ﯾ ﻪﺠﻧﻮ ﮏﺸﺧ ) 5 مﺮﮔ ( ار رد 500 ﻣ ﯿ ـﻠ ﯽ ﻟﯿ ﺮـﺘ بآ ﻪـﺑ تﺪـﻣ 10
ﻗد ﯿ ﻪﻘ هﺪﻧﺎﺷﻮﺟ و ار طﻮﻠﺨﻣ ﺲﭘ
ﮏﻨﺧزا نﺪـﺷ رد ﺷ ﯿ ﻪـﺸ برد
راد رد ﺎﻣد ي
4 °C
) ﻪﺑ ناﻮﻨﻋ ﺤﻣ ﯿ ﻂ اﺬﻏ ﯽﯾ ﺎﭘ ـﯾ ﻪ ( ﻪـﮕﻧ ﺖـﺷاد .
اﺮﺑ ي ﻬﺗ ﯿﻪ ﺤﻣ ﯿ ﻂ ﺖﺸﮐ ﺒﻃ ﯿ ـﻌ ﯽ ﻪـﺑ ازا ي ﺮـﻫ
200 ml
بآ 20
ﺮﺘﯿﻟ ﯽﻠﯿﻣ ﯾ يﺬﻐﻣ ﻂﯿﺤﻣ زا
ﻪﺠﻧﻮ ﻪﻓﺎﺿا
،ﺪﺷ ﺲﭙﺳ ﮏـﺗ ﯾ ﻪـﺘﺧﺎ
درﻮﻣ ﺮﻈﻧ ﺎﺑ ﮏﻤﮐ ﭘﯿ ﺖﭙ ﻪﺑ اﯾ ﻦ ﺤﻣ ﯿ ﻂ ﻘﻠﺗ ﯿ ﺢ دﺮﮔ ـﯾ ﺪ . رد ﺎﻬﻧ ـﯾ ﺖ
ﺮﻫ 72 ﺖﻋﺎﺳ ﯾ ﮏ
،رﺎﺑ ﺳﺎﭘ ژﺎ ﺖـﺸﮐ ﮏـﺗ ﯾ ﻪـﺘﺧﺎ درﻮـﻣ ﺮـﻈﻧ زا
ﺤﻣ ﯿ ﻂ ﻠﺒﻗ ﯽ ﻪﺑ ﺤﻣ ﯿ ﻂ هزﺎﺗ مﺎﺠﻧا ﺖﻓﺮﮔ و اﯾ ﻦ ﻞﻤﻋ ﺎﺗ ﺎـﺠﻧآ ﻪـﮐ
ﺖﺸﮐ
ًﺎﺘﺒﺴﻧ ﺼﻟﺎﺧ ﯽ زا ﮏﺗ ﯾ ﻪﺘﺧﺎ درﻮﻣ ﺮﻈﻧ ﻬﺗ ـﯿ ﻪ ،دﻮـﺷ اﺮـﮑﺗ ر
دﺮﮔ ﯾﺪ . مﺎﺠﻧاﺮﺳ اﺮﻓ ﯾ ﺪﻨ ﺖﺸﮐ نداد ﺤﻣرد ﯿ ﻂ ﻋﻮﻨﺼﻣ ﻪـﺑ ﯽ اﺮـﺟا
ﻣآرد ﺪ 11]
. [
ياﺮﺑ ﻬﺗ ﯿﻪ ﺤﻣ ﯿ ﻂ ﺖﺸﮐ ﻋﻮﻨﺼﻣ ﯽ ردﻮﭘ2 g
ﺮـﻤﺨﻣ رد ـﯾ ﮏ
ﻟﯿ ﺮﺘ بآ ﺮﻄﻘﻣ ﻞﺣ و ﻞﺻﺎﺣ ﺲﭘ زا وﻼﮐﻮﺗا رد ﺎﻣد ي ﻪﮕﻧ4 °C
ﺪﺷ يراد . ﻬﺗ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﯿ
ﺤﻣ ﻪ ﯿ ﺖﺸﮐ ﻂ وﺎﺣ
ي ﮏﺗ ﯾ ﻪـﺘﺧﺎ درﻮـﻣ
،ﺮﻈﻧ ﻪﺑ ازا ي ﺮـﻫ
60 ml
ا زا ـﯾ ـﺤﻣ ﻦ ﯿ د يﺮـﺘﭘ رد ﻪـﮐ ﻂ ـﯾ
ﺶ
ﺮﺘﺳا ﯾ ﯽﻣ ﻪﻓﺎﺿا ﻞ داﺪﻌﺗ ،ﺪﺷ
ي ﻣﯿ ﻧﺎﮔراوﺮﮑ ﯿ ﻢﺴ زا ـﺤﻣ ﯿ ﻂ ﺖـﺸﮐ
ﺒﻃ ﯿﻌ ﯽ ﻪﺑ ﮏﻤﮐ ﭘﯿ ﺖﭙ ا ﻪﺑ ﯾ ﺤﻣ ﻦ ﯿ ﻘﻠﺗ ﻂ ﯿ ﺪـﺷ ﺢ . ﺎﻬﻧ رد ـﯾ ﺮـﻫ ﺖ
72 ﺖﻋﺎﺳ ﯾ ﮏ ﺤﻣ زا ﺖﺸﮐ ژﺎﺳﺎﭘ ،رﺎﺑ ﯿ
ﯽﻠﺒﻗ ﻂ ـﺤﻣ ﻪﺑ ﯿ ﻂ ﺎـﺗ ،هز
مﺎﺠﻧا ﺪﺷ و اﯾ ﻦ ﻞﻤﻋ ـﺳ و يرﺎـﺘﻓر تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ ﻪـﮐ ﯽﻧﺎـﻣز ﺎﺗ ﯿ
ﻮﺘ
ﺷﯿ ﻤ ﯽﯾﺎﯿ ﺎﭘ ﻪﺑ ﺎﯾ ﭘ ﻪﻣادا ،ﺪﺳﺮﺑ ن ﯿ
دﺮﮐ اﺪ .
ﻬﺑpH
ﯿ ﻪـــﻨ اﺮـــﺑ ي ﺪـــﺷر لﻮﻠـــﺳ ﺎـــﻫ ي
P.caudatum
دوﺪﺤﻣرد ه2 /0 8± /6 ﻣ ﯽ ﺪﺷﺎﺑ . اﺮﺑ ي ﻈﻨﺗ ﯿﻢ ردpH
اﯾ ﻦ هدوﺪـﺤﻣ
زا لﻮﻠﺤﻣ ﺎﻫ ي ﺘﺳا ﯿ ﮏ ﺳا ﯿﺪ و دﻮﺳ 1 /0 لﺎﻣﺮﻧ هدﺎﻔﺘﺳا ﺷ ﺪ 11]
. [
ﻨﭽﻤﻫ ﯿ ﻦ ﺎﻣد ي ﻬﺑ ﯿ ﻪﻨ اﺮﺑ ي ﺪﺷر لﻮﻠﺳ ﺎـﻫ ي
P.caudatum
رد هدوﺪﺤﻣ 2 32± ﻪﺟرد ﺘﻧﺎﺳ ﯿ داﺮﮕ ﻣ ﯽ ﺷﺎﺑ ﺪ 14]
، [
ـﻈﻨﺗ ﺖﻬﺟ ﯿ
ﻢ
ﺤﻣ ،ﺎﻣد ﯿ يوﺎﺣ ﺖﺸﮐ ﻂ
P.caudatum
اﺮـﺷ رد ﯾ ﺎﻣزآ ﻂ ﯾ هﺎﮕـﺸ
يﺎﻣد ﺖﺤﺗ 2
32± ﻪﺟرد ﺘﻧﺎﺳ ﯿ ﻪـﮕﻧ داﺮﮕ تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ و ﺪـﺷ يراد
ﻤﻫ رد يرﺎﺘﻓر ﯿ
ﺎﻣد هدوﺪﺤﻣ ﻦ ﯽﯾ
ﺳر مﺎﺠﻧا ﻪﺑ ﯿﺪ
.
داﻮــﻣ زا ﺪــﻨﺗرﺎﺒﻋ هدﺎﻔﺘــﺳا درﻮــﻣ :
Morphine sulphate
) ﺮﺧ ــﯾ راﺪ ي هﺪــﺷ ﺖﮐﺮــﺷزا دﺎــﻤﺗ
ﺎــﺑ زﻮــﺠﻣ ﻤــﺳر ﯽ زا ترازو
ﺖـــﺷاﺪﻬﺑ (،
L-arginine
) زا ﺖﮐﺮـــﺷ -USA
Sigma
(،
NG -
nitro-L-Arginine methyl ester) L-NAME
زا ﺖﮐﺮﺷ
- USA Biochemical Research Inc.,
( و
Naloxone
hydrocloride
) زا ﺖﮐﺮﺷ ﻟﻮﺗ ﯿﺪ وراد (.
اﺮﺑ ﻪﺑ وراد ﺢﯿﻘﻠﺗ ي ﺤﻣ
ﯿ ﻂ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺖﺸﮐ ﮏﺗ
ﯾ ﻪﺘﺧﺎ ا و ي ﻬﺗ ﯿﻪ
ﺎﻫزود ي ﺼﺨﺸﻣ ﯽ زا ﺎﻫوراد
، ا ﯾ ﻦ داﻮﻣ ﺎﺑ وزاﺮﺗ ي ﻗد ﯿ ﻖ زﻮـﺗ ﯾ ﻦ و
رد بآ ﺮﻄﻘﻣ ﻪـﯿﻬﺗ لﻮـﻠﺤﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ دﺮﮔ
ـﯾ هﺪ و رد ﺎﻬﻧ ـﯾ ﺖ رد
ﺣ ﮏﯾ ﻢﺠ ﻣﯿ وﺮﮑ ﯿﻟ ﺮﺘ ﻤﻫ ﮓﻧﺮﺳ ﻂﺳﻮﺗ ﯿ
نﻮﺘﻠ ﺪﺷ ﺢﯿﻘﻠﺗ . ـﺒﻗ ا ﻞ ز
ﻫ ﺮ رﺎﺑ ﯽﺋوراد ﺢﯿﻘﻠﺗ
، اﺪﺘﺑا 1 ﻣ ﯿﻠ ﯽ ﻟﯿ ﺮﺘ زا ـﺤﻣ ﯿ ﻂ ﺖـﺸﮐ وﺎـﺣ ي
لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ﻪﺑ نورد مﻻ دراﺪﻧﺎﺘﺳا و صﻮـﺼﺨﻣ
شرﺎﻤـﺷ وﺪـﺳ
ﯾ ﮏ - ﺮـﺘﻓار
(Sedgwick-Rafter Counting
Chamber)
لﺎــﻘﺘﻧا هداد
،ﺪــﺷ رﻮﻃ ﯾ ﻪــﮑ ﻢﮐاﺮــﺗ لﻮﻠــﺳ ﺎــﻫ ي
P.caudatum
رد نورد مﻻ ـــﺑاﺮﺑ ﺎـــﺑ ﺮ
paramecia/ml
250
2600± و ﺎﻣد ي ﺤﻣ ﯿ ﻂ رد نﺎﻣز تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رﺎﺘﻓر ي 2 32± ﻪـﺟرد
ﺘﻧﺎﺳ ﯿ داﺮﮕ و 2/
0 8/± 6 ﺪﺷﺎﺑpH=
14]
. [
ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﻞﺒﻗ اﺪﺘﺑا
ﯾ ﮏ
ﻗد ﯿ ﻪﻘ ﺖﺻﺮﻓ هداد ﺪﺷ ﺎﺗ لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ﺎـﺑ نﺎـﮑﻣ
ﺪﺟ ﯾﺪ ) مﻻ وﺪﺳ ﯾ ﮏ ( رﺎﮔزﺎﺳ ﻧﻮﺷ ﺪ . ﺲﭙـﺳ داﻮـﻣ قﻮـﻓ ﺮﮐﺬـﻟا رد
ﻪﻄﻘﻧ ﺼﺨﺸﻣ ﯽ زا مﻻ وﺪﺳ ﯾ ﮏ ) ﻪﮐ رد ز ـﯾ ﺮ ﺰـﻨﻟ 4 ) ﺖـﺤﺗ ( 4X
ﻣﯿ پﻮﮑﺳوﺮﮑ رﻮﻧ
ي ﻈﻨﺗ ﯿﻢ هﺪﺷ دﻮﺑ ( و ﺢﯿﻘﻠﺗ رﺎﺘﻓر لﻮﻠـﺳ ﺎـﻫ ي
P.caudatum
رد ﻪﻄﻘﻧ ﺢﯿـﻘﻠﺗ زا ﺮﻃ ـﯾ ﻖ ﺰـﻨﻟ 4 ﻣ ﯿ پﻮﮑـﺳوﺮﮑ
رﻮﻧ ي ) (4X
هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺑ و ﺳرﺮ ﺪﯾدﺮﮔ ﯽ .
رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﺳرﺮﺑ
ﯽ رﺎﺘﻓر ﺟ رﻮﻧﺎ ﮏـﺗ ﯾ ﻪـﺘﺧﺎ ا ي ﺲـﭘ ﺢﯿـﻘﻠﺗ زا
ﻖــﯾﺮﻃ زا ناﻮــﯿﺣ ﻦــﯾا رﺎــﺘﻓر شرﺎﻤــﺷ
داﺪــﻌﺗ لﻮﻠــﺳ ﺎــﻫ ي
P.caudatum
رد ﺢﯿـﻘﻠﺗ ﻪﻄﻘﻧ نورد
مﻻ دراﺪﻧﺎﺘـﺳا وﺪـﺳ
ﯾ ﮏ -
ﺮــﺘﻓار ﻞــﺻاﻮﻓ ﯽــﻃ ﺎــﻣز
ﯽﻧ 0 ،
̋ 5 ،
̋
15 ،
̋
30 ،
̋
60 ،
̋
120 و
̋180
ﺮﻃزا ﯾ ﻖ ﻣ ﯿ ناﺪ د ﯾﺪ ﺰﻨﻟ 4 ) ﺖﺤﺗ (4X
ﻣﯿ پﻮﮑﺳوﺮﮑ يرﻮـﻧ
ﻣ راﺮﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮ ﺖﻓﺮﮔ
و تﺎﺒﺳﺎﺤﻣ ﻮﺑﺮﻣ
ﻪﻃ ﺖﺒﺛ دﺮﮔ ـﯾ ﺪ،
مزﻻ
ﻪﺑ ﺮﮐذ ﺖﺳا ﻪﮐ رﺰﺗ ﯾ ﻖ ﺮﻫ زود ﺺﺨﺸﻣ از ـﯾ وراد ﺎ داﻮـﻣ درﻮـﻣ
ﺮﻈﻧ ﻞﻗاﺪﺣ 5 رﺎﺑ راﺮﮑﺗ ﺪﺷ .
رﺎﻨﮐ رد تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رﺎﺘﻓر ي و ﻊـﻤﺟ روآ ي و ﺰﺠﺗ ـﯾ ﻪ و ﻠﺤﺗ ـﯿ ﻞ
هداد ﺎــﻫ تﺎــﻌﻟﺎﻄﻣ ﻮﺘﯿــﺳ
ﺎــﺑ ﯽﯾﺎﯿﻤﯿــﺷ شور
ﺘﯿﺳ ــﺷﻮ ﯿﻤ ﯿﺎ ﯽﯾ
NADPH-diaphorase
23]
1,
اﺮﺑ[
ي ﺳرﺮﺑ ﯽ ﻞﺧاﺪﺗ ﺳ ﯿ ﺘـﺴ ﻢ
ﺎﺑNO
ﻓﺮﻣ ﯿ ،ﻦ مﺎﺠﻧا ﺪﺷ :
رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ اﺮﺟا
ي ﻞﺣاﺮﻣ ﻨﮑﺗ ـﯿ ﮏ
NADPH-diaphorase
ﺮﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ
(Sample)
زا لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ار ﻪﮐ ًﻼﺒـﻗ
ﺖﺤﺗ ﺢﯿﻘﻠﺗ ﺎﻫزود ي ﺼﺨﺸﻣ زا ﯽ داﻮﻣ يور ﺮﺑ ،ﺪﻧدﻮﺑ ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ
مﻻ ﺢﻄﺳ يﺎﻫ
ﻤﺗ ـﯿ يﺰ رد ﯽﻘﯾﺎـﻗد ،ﻞـﻘﺘﻨﻣ اﻮـﻫ
ي ﺎﻣزآ ﯾ هﺎﮕـﺸ
ﮏﺸﺧ و ﻓﯿ ﺲﮑ ﺪﯾدﺮﮔ و ﺲﭙﺳ ﺮﺑ ور ي مﻻ ﺎﻫ ي ـﻓ ﯿ ﺲﮑ ،هﺪـﺷ ﻠﻤﻋ
ﯿ تﺎ زﯾ
،ﺮ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻪﺑ ﻪﻠﺣﺮﻣ و ﻪﻠﺻﺎﻓﻼﺑ ﻪﺑ اﺮﺟا رد ﺪﻣآ .
1 - ﯽﻫﺪﺑآ : ﺎﺑ ﻮﺸﺘﺴﺷ زا ﻞـﮑﻟا ﯽـﻟوﺰﻧ تﺎﺟرد رد 96°
ﺎـﺗ
50°
تﺪﻣ ﻪﺑ ﮏﯾﺮﻫ 3
ﻮﺸﺘﺴﺷ ﺲﭙﺳ و ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
بآ ﻪـﺑ تﺪـﻣ
10 ﻪﯿﻧﺎﺛ .
2 - ﮓﻧر ﻣآﯿ ﺰ ي ﺻﺎﺼﺘﺧا ﯽ : اﺮﺑ ي ﮓﻧر ﻣآ ـﯿ ﺰ ي ـﺻﺎﺼﺘﺧا ﯽ
ﺘﯿﺳ ﺷﻮ ﯿﻤ ﯿﺎ ﯽﯾ
NADPH-d
ﺮﺑ ور ي ﺮﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ مﻻ ﻓﯿ ﺲﮑ هﺪـﺷ
ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ وﺎﺴﻣ زا ي لﻮﻠﺤﻣ ﺎﻫ ي
NADPH
)
1mg/ml
رد ﺮﻓﺎﺑ
تﺎﻔـــﺴﻓ (
و ،
0.2 mg/ml
زا
N.B.T (Nitro Blue
Tetrazolium)
ﺮﻓﺎﺑ رد تﺎﻔﺴﻓ ﺪـﺷ ﻪﻓﺎﺿا )
ﺮﻓﺎـﺑ تﺎﻔـﺴﻓ ﻪـﺑ
ناﻮﻨﻋ لﻼﺣ ﺖﺤﺗ 7 هدﺎﻔﺘﺳاpH=
ﺪﺷ .(
ﺐـﯿﮐﺮﺗ ﻦـﯾا ﻪﺑ ﺪـﻨﭼ
هﺮﻄﻗ
Triton-x-100
) ﻪﺑ ناﻮﻨﻋ
Detergent
ﮓﻧر و داﻮﻣ يﺎﻫ
ﯽﻓﺎﺿا ( ﮏﻤﮐ ﻪﺑ ﻪﮐ ﺮﻓﺎﺑ
ﻗر ﯿ ﺪﺷ ﻖ دﻮﺑ ه ) 3
% ( ﻪﻓﺎﺿا و ،ﺪﯾدﺮﮔ
مﻻ ﺮﻫ ﻪﺑ تﺪﻣ ﺪﻨﭼ ﻧﺎﺛ ﯿﻪ نﺎﮑﺗ هداد ﺪﺷ يﺪـﻌﺑ ﻞـﺣاﺮﻣ ياﺮﺑ ﺎﺗ
دﻮﺷ هدﺎﻣآ .
3 - يﺎـﻣد ﺖﺤﺗ نﻮﯿﺳﺎﺑﻮﮑﻧا
°C
40 : مﻻ زا ﮏـﯾ ﺮـﻫ يﺎـﻫ
ﯽـﺻﺎﺼﺘﺧا يﺰـﯿﻣآ ﮓـﻧر ﺖـﺤﺗ قﻮﻓ شور ﺎﺑ ﻪﮐ هﺪﺷ ﺲﮑﯿﻓ ﺘﯿﺳ ـﺷﻮ ﯿﻤ ﯿﺎ ﯽﯾ
NADPH-d
يرﺎـﻤﻨﺑ رد ،ﺪــﺷ ﻊـﻗاو
°C
40 ﻪــﺑ
تﺪﻣ 30 ﺪﯾدﺮﮔ يراد ﻪﮕﻧ ﻪﻘﯿﻗد .
جرﺎـﺧ يرﺎﻤﻨﺑ زا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺲﭙﺳ
هﺪﺷ
، هداد رﻮﺒﻋ ًﺎﻌﯾﺮﺳ ﺮﻄﻘﻣ بآ زا ﻪﻧﻮﻤﻧ ،ﮓﻧر يﻮﺸﺘﺴﺷ ﺖﻬﺟ
ﺪﺷ هدﺎﻣآ ﺪﻌﺑ ﻪﻠﺣﺮﻣ ياﺮﺑ و 4 - زا ﻞﮑﻟا ﯽﺸﯾاﺰﻓا تﺎﺟرد ﺎﺑ يﺮﯿﮔ بآ 50°
ﺎﺗ 96° ﺮـﻫ
تﺪﻣ ﻪﺑ ﮏﯾ 3
ﻪﯿﻧﺎﺛ .
5 - فﺎﻔﺷ زﺎﺳ ي تﺪـﻣ ﻪـﺑ ﮏﯾﺮﻫ ﻞﻠﯾﺰﮔ ﺾﯾﻮﻌﺗ ود ﺎﺑ 15
ﻪﯿﻧﺎﺛ . 6 - نﺪﻧﺎﺒﺴﭼ )
Mounting
:(
رد ﺎﻬﻧ ـﯾ ﺖ مﻻ ﻪـﻧﻮﻤﻧ ﺮـﻫ ﻪـﺑ
ﮏــﻤﮐ ﺐــﺴﭼ نﻼﺘــﻧا )
Entellan
( ﺮﺧ ــﯾ راﺪ ي هﺪــﺷ ﺖﮐﺮــﺷزا
Merck
ﺪﺷ هﺪﻧﺎﺒﺴﭼ .
ﺰﺠﺗ ــﯾ ﻪ و ﻠﺤﺗ ــﯿ ﻞ رﺎــﻣآ ي ﻪــﯿﻟوا ﺎــﺑ هدﺎﻔﺘــﺳا زا نﻮــﻣزآ
K.S.
( Kolmogrov Smirnov)
ﺺﺨﺸﻣ دﺮـﮐ ﻪـﮐ هداد ﺎـﻫ
اراد زﻮﺗ ي ﯾ ﺪﻨﺘﺴﻫ لﺎﻣﺮﻧ ﻊ .
هدﺎﻔﺘـﺳا ﺎﺑ ﺲﭙﺳ زا
ﻟﺎـﻧآ ﯿﺰ راو ـﯾ ﺲﻧﺎ
)
ANOVA
(ﯾ ﻪﻓﺮﻃ ﮏ ﻂﯿـﺤﻣ رد
راﺰـﻓا مﺮـﻧ يرﺎـﻣآ
،SPSS
هوﺮﮔ تﺎﻓﻼﺘﺧا ندﻮﺑ راد ﯽﻨﻌﻣ ﺎـﻣزآ ﺖـﺤﺗ يﺎﻫ
ﯾ ﺶ ﻪـﺑ ﺖﺒـﺴﻧ
ﺪﺷ هداد نﺎﺸﻧ لﺮﺘﻨﮐ .
ﻪﻣادا رد ﻦﯿـﺑ تﺎﻓﻼﺘﺧا ﯽﺳرﺮﺑ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ
هوﺮﮔ ،ﺎـﻫ ﺎـﺑ ﺖـﺴﺗ ﺎـﻫ ي
Post-hoc
) وLSD Tukey HSD
(
ﺤﻣ ﺒﺳﺎ مﺎـﺠﻧا ﺮﺘﺸﯿﺑ تﺎ ﺪـﺷ
. ﻼﺘـﺧا ف هداد ﺎـﻫ ي ) داﺪـﻋا ( ﻧﺎﺛ ـﯿ ﻪ
ﻢﺘﺼﺷ ﺲﭘ زا رﺰﺗ ﯾ ﻖ ﺎﻫزود ي ﻒﻠﺘﺨﻣ ﻪﺑ هداد ﺎﻫ ي ﻧﺎﺛ ﯿﻪ ﻢﺠﻨﭘ ﻪﺑ
ترﻮﺻ ﺑﺎﺴﺣ ﯽ ) ﻼﺘﺧا ﺗ ف داﺪﻌ ( ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ و ﻪﺑ ترﻮﺻ ﻣ ﯿ ﮕﻧﺎ ﯿ ﻦ
±
ﺎﻄﺧ ي دراﺪﻧﺎﺘﺳا ﺎﻤﻧ ﯾ ﺶ هداد ﺪﺷ ﺮﺿ.
ﯾ ﺎـﻔﻟآ ﺐ 05 /0 ﺮـﻈﻧ ردα=
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ .
د ﯽﻔﯿﮐ و ﯽﻤﮐ ﻞﯿﻠﺤﺗ و ﻪﯾﺰﺠﺗ ياﺮﺑ طﻮﺑﺮﻣ يﺎﻫ هدا
ﺘﯿﺳ ﮏﯿﻨﮑﺗ ﻪﺑ ﺷﻮ
ﯿﻤ ﯿﺎ ﯽﯾ
NADPH-d
ﺎﺑ هدﺎﻔﺘﺳا راﺰـﻓا مﺮـﻧ زا
Image Tool
و ،ﺪـﻣآ ﻞـﻤﻋ ﻪﺑ يرادﺮﺑ ﺲﮑﻋ مﻻ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﻫ زا
رد نﻮﯿــﺳاﺮﺒﯿﻟﺎﮐ ﺖــﺤﺗ راﺰــﻓا مﺮــﻧ ﻦــﯾا ﻂﯿــﺤﻣ رد ﺎــﻫ ﺲــﮑﻋ
يﺎﻫ ﺖﺣﺎﺴﻣ 100
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﯽﺳرﺮﺑ درﻮﻣ يﺮﺘﻣوﺮﮑﯿﻣ .
ﺎﻫ ﻪﺘﻓﺎﯾ
ﺑ طﻮﺑﺮﻣ يرﺎﺘﻓر تاﺪﻫﺎﺸﻣ سﺎﺳا ﺮﺑ ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ نﺎﻣز ﻪ
0
،
̋ 5 ،
̋
15 ،
̋
30 ،
̋
60 ،
̋
120 و
̋180
(Time interval)
،
ﻪـﺑ ﺖﺒـﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد ﺎﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا يﺎﻫ لﻮﻠﺳ يرﺎﺘﻓر ﺦﺳﺎﭘ يﺎﻨﺒﻣ ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ
P.caudatum
ﻪـﺑ
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد ﺎﻫوراد )
ﯽﯾﺎﻨـﺷآ نﺎﻣز ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ لوا ﻪﯿﻧﺎﺛ ﺞﻨﭘ
يرﺎﮔزﺎﺳ و يراﺮـﻗﺮﺑ و هﺪـﺷ ﺢﯿـﻘﻠﺗ هدﺎﻣ ﺎﺑ ﻪﻬﺟاﻮﻣ رد تﺎﻧاﻮﯿﺣ
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد رﻮﮐﺬﻣ هدﺎﻣ ﺖﻈﻠﻏ نﺎﯾداﺮﮔ .(
ﺦﺳﺎﭘ
Morphine
: ﻞﮑﺷ 1 رد ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﺦـﺳﺎﭘ هﺪﻨﻫد نﺎﺸﻧ
P.caudatum
ﺖﺳا . هداد ﺎﻫ ﻟﺎﻧآﺎﺑ ﯿﺰ راو ﯾ ﺲﻧﺎ )
ANOVA
(ﯾ ﮏ
ﻪﻓﺮﻃ درﻮﻣ ﺰﺠﺗ ﯾﻪ و ﻠﺤﺗ ﯿ ﻞ راﺮﻗ ﺖﻓﺮﮔ ﻪﮐ ﺎـﺑ ﻪـﺟﻮﺗ ﻪـﺑ ﺘﻧ ﯿ ﻪـﺠ
نﻮﻣزآ :)
F(9,30) = 97.813, p<0.001
( هوﺮـﮔ تﺎﻓﻼﺘﺧا ﺎـﻫ
لﺮﺘﻨﮐ ﺎﺑ ﯽﻨﻌﻣ ًﻼﻣﺎﮐ راد
ﺖﺳا . يﺎﻫ نﻮﻣزآ ﺎﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ ﺰﯿﻟﺎﻧآ
Post
ﻪﮐ ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧhoc
ﻓﺮـﻣ ﯿ ﻦ رد زود μg
2 ﺖﺒـﺴﻧ ﻪـﺑ ﺎـﺳ ﯾﺮ
ﺎﻫزود ﺑﯿ ﺮﺘﺸ ﯾ اﺰﻓا ﻦ ﯾ ﺶ رد ار لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ ﺎﻫ
دراد .
ﺦﺳﺎﭘ لا - ﻦﯿﻨﯾژرآ
Arginine) -
:(L
ﻞﮑﺷ 2 نﺎﺸﻧ هﺪـﻨﻫد
ﺮﯿﺛﺎﺗ زود ﺎﻫ ي ﻒﻠﺘﺨﻣ
L-arginine
) 1،
2،
4،
8 ﺐـﺴﺣﺮﺑ µg/µl
(
ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ﺮﺑ
لﻮﻠﺳ ﺎـﻫ ي
P.caudatum
لﺮـﺘﻨﮐ ﺎـﺑ ﻪـﺴﯾﺎﻘﻣ رد
ﺖﺳا . ﺎـﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا رد
ﻧﺎﺛ ـﯿ ﻪ ﻢﺘـﺼﺷ ﺲـﭘ زا ﺢﯿـﻘﻠﺗ
ﺖﺒﺴﻧ ﻪﺑ ﻧﺎﺛ ﯿﻪ ،ﻢﺠﻨﭘ ﺖـﺤﺗ زا4X
ﻣ ﯿ پﻮﮑـﺳوﺮﮑ رﻮـﻧ
ﺎـﻫرﺎﺑ ي
و ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ هداد
ﺎﻫ ﻪﺑ ترﻮﺻ ﻣ ﯿ ﮕﻧﺎ ﯿ ﻦ ﺎﻄﺧ± ي دراﺪﻧﺎﺘـﺳا ﺎـﻤﻧ
ﯾ ﺶ
هداد هﺪﺷ ﺪﻧا . ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﻪﺠﯿﺘﻧ هداد
ﺎﻫ ﺎﺑ ﻟﺎﻧآ ﯿﺰ راو ـﯾ ﺲﻧﺎ ﻪـﻓﺮﻃ ﮏـﯾ
)
ANOVA
( : )
F(4,19)=140.699, p<0.001
( نﺎــــــﺸﻧ
ﻞﮑﺷ 1 - زود رادﻮﻤﻧ - ﻣ ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫزود ﺖﺳا يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺦﺳﺎﭘ ﻦﯿﻓﺮ
) 60 ، 40 ، 20 ، 16 ، 8 ، 4 ، 2 ، 1 ، 5/
0 ﺐﺴﺣﺮﺑ µg/µl ( ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ ﻦﺘﻣ رد جرﺪﻨﻣ 0
ﺎﺗ 180 ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ دﻮﺑ ﺮﻄﻘﻣ بآ ﻪﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ .
ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد
ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ Mean±SEM اﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا
يﺎﻫ لﻮﻠﺳ د P. caudatum
ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد )
ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ، زا4X
ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ .
ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ Post hoc لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧا
p<0.001 و٭٭٭
p<0.01 و٭٭
p<0.05 ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭
.
ﻪﮐ ﺪﻫد ﯽﻣ فﻼﺘﺧا
هوﺮﮔ ﺎﻫ لﺮﺘﻨﮐ ﺎﺑ
ًﻼﻣﺎﮐ ـﻨﻌﻣ ﯽ راد ﺖـﺳا . زا
يﺎﻫ ﺰﯿﻟﺎﻧآ
Post hoc
ﺺﺨـﺸﻣ ﻪـﮐ ﺪـﯾدﺮﮔ
زود
g L-arg
μ 2
ﺖﺒﺴﻧ ﻪﺑ ﺎﺳ ﯾﺮ ﺎـﻫزود ي
L-arg
ﺑﯿ ﺮﺘـﺸ ﯾ ﻦ اﺰـﻓا ﯾ ﺶ رد ار داﺪـﻌﺗ
لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ﺖﺳا ﻪﺘﺷاد لﺎﺒﻧد ﻪﺑ .
ﺦﺳﺎﭘ
L-NAME
: ﻞﮑﺷ 3 ﺦﺳﺎﭘ
L-NAME
ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ار
ﺪــﻫد ﯽــﻣ نﺎــﺸﻧ .
ﺎــﻫزود ي ﻒــﻠﺘﺨﻣ
L-NAME
) 1،
2،
4،
8
ﺐﺴﺣﺮﺑ
µg/µl
( و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ فﻼﺘﺧا
داﺪﻌﺗ لﻮﻠﺳ ﺎـﻫ ي
P.caudatum
ﻧﺎﺛرد ﯿﻪ ﻢﺘﺼﺷ ﺲـﭘ زا ﺢﯿـﻘﻠﺗ ﺖﺒـﺴﻧ ﻪـﺑ ﻪـﯿﻧﺎﺛ ﻢﺠﻨﭘ
، ﺖﺤﺗ زا4X
ﻣ ﯿ پﻮﮑﺳوﺮﮑ رﻮـﻧ
و ﺪـﺷ ﻪﺒـﺳﺎﺤﻣ ﺎـﻫرﺎﺑ ي
ﺎﻫ هداد ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ﺪﯾدﺮﮔ شراﺰﮔ رﺎﯿﻌﻣ فاﺮﺤﻧا ±
. لﺮـﺘﻨﮐ هوﺮـﮔ
دﺮــﮐ ﺖــﻓﺎﯾرد ار ﺮــﻄﻘﻣ بآ ﻂــﻘﻓ .
هداد ﺎــﻫ ﺎــﺑ ﻟﺎــﻧآ ﯿﺰ راو ــﯾ ﺲﻧﺎ
)
ANOVA
(ﯾ ﺰﺠﺗ درﻮﻣ ﻪﻓﺮﻃ ﮏ ﯾ
و ﻪ ﻠﺤﺗ ﯿ ﻞ راﺮﻗ
،ﺖﻓﺮﮔ ﻪﮐ ﺎﺑ
ﻪــﺟﻮﺗ ﻪــﺑ ﺘﻧ ﯿ ﻪــﺠ نﻮــﻣزآ : )
F(4,19)=48.905, p<0.001
(
هوﺮﮔ فﻼﺘﺧا ﺎﻫ
لﺮﺘﻨﮐ ﺎﺑ ﯽﻨﻌﻣ ًﻼﻣﺎﮐ ﯽﻣ راد
ﺪﺷﺎﺑ . ﺮﺘـﺸﯿﺑ ﺰﯿﻟﺎـﻧآ
ﻪﮐ ﺖﺳا ﯽﮐﺎﺣ زود
g L-NAME
μ ﺑﯿ2
ﺮﺘﺸ ﯾ ﻦ ﺶﻫﺎـﮐ داﺪـﻌﺗ
لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ﺖﺳا ﻪﺘﺷاد لﺎﺒﻧد ﻪﺑ ار .
ﻞﮑﺷ 2 - لا ﺦﺳﺎﭘ ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ار ﻦﯿﻨﯾژرآ_ .
ﻞﻣﺎﻋ ) 1،2
، 4،8 ﺐﺴﺣﺮﺑ µg/µl ( رد و ﺰﯾﻮـﺠﺗ تﺎـﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ ﻦﺘﻣ رد جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ 0
ﺎﺗ 180 ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ دﻮﺑ ﺮﻄﻘﻣ بآ ﻪﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ .
ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد Mean±SEM
لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا
يﺎﻫ P.caudatum زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ )
ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ، ﺖـﺳا هﺪـﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X
. ﺰﯿﻟﺎـﻧآ ﺎـﺑ Post
لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧاhoc p<0.001
و٭٭٭
p<0.05 ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭
.
(µg/µl ﺐﺴﺣﺮﺑ1،2،4،8) ﻞﻣﺎﻋ .ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ارL-NAME ﺦﺳﺎﭘ-3 ﻞﮑﺷ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ ﻦﺘﻣ رد جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ 0
ﺎﺗ 180 لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ تﺎﻧاﻮﯿﺣ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ )
ﺮﻄﻘﻣ بآ ( ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ . ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد Mean±SEM
لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا
يﺎﻫ P.caudatum ﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ نﺎﺸﻧ ﺖ )
ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ، ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X
. ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ
Post hoc لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧا p<0.001
و٭٭٭
p<0.05 ﺪﺷ هداد٭
.
ـﺳﺎﭘ لا و ﻦﯿﻓﺮـﻣ كﺮﺘـﺸﻣ ﺦ -
ﻦﯿـﻨﯾژرآ
(L-arg+2 μg
Morphine)
: ﻞﮑﺷ 4 ﺳﺎﭘ ﺦ لا و ﻦﯿﻓﺮﻣ كﺮﺘﺸﻣ -
ار ﻦﯿـﻨﯾژرآ
ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ .
ﺤﻣ رﻮ ﻘﻓا ﯽ نﺎـﺸﻧ هﺪـﻨﻫد ﺎـﻫزود ي ـﻠﺘﺨﻣ ﻒ
L-
arg+2μg Morphine
) 1،
2،
4،
8 ﺐﺴﺣﺮﺑ µg/µl
( ﻣ ﯽ ﺪﺷﺎﺑ ﻪـﮐ
ﺪـﻨﺘﻓﺮﮔ راﺮـﻗ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ درﻮﻣ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ .
ار رﻮﮐﺬـﻣ لﺮـﺘﻨﮐ
ﺖـﻓﺎﯾرد ار ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﺮﺛﻮـﻣ زود ﺎﻬﻨﺗ ﻪﮐ ﺪﻧداد ﻞﯿﮑﺸﺗ ﯽﺋﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺪﻧدﺮﮐ
. هداد ﺎﻫ ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ و ﺶﯾﺎﻣزآ رﺮﮑﻣ راﺮﮑﺗ ﻞﺻﺎﺣ ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ
±
ﺖﺳا رﺎﯿﻌﻣ فاﺮﺤﻧا .
ﻟﺎﻧآ ﯿﺰ راو ـﯾ ﺲﻧﺎ )
ANOVA
( ﺎـﻫ هداد ﻦـﯾا
ﯽﻨﻌﻣ ًﻼﻣﺎﮐ فﻼﺘﺧا راد
ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ ار :
)
F(4,15)=76.786,
p<0.001
( ﯽﻣ ﺪﺷﺎﺑ . ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺑ ﻪـﮐ ﺖـﺳا ﯽﮐﺎﺣ ﺮﺘﺸﯿ زود
4 μg L-
)arg
ﺖﺒﺴﻧ ﻪـﺑ ﺎـﺳ ﯾﺮ ﺎـﻫزود ي
L-Arg
( ﻪـﺑ هاﺮـﻤﻫ زود
2μg
Morphine
ﺑﯿ ﺮﺘــﺸ ﯾ ﻦ اﺰــﻓا ﯾ ﺶ ار رد اﺪــﻌﺗ د لﻮﻠــﺳ ﺎــﻫ ي
ﻞﮑﺷ 4 - لا ﺦﺳﺎﭘ ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ار ﻦﯿﻨﯾژرآ_ .
ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﻢﺘﺴﯿﺳ ﻞﻣﺎﻋ )
µg/µl 4 ( ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﻦﺘﻣ رد جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺛﻮﻣ زود )
µl / 2µg ( ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ 0
ﺎﺗ 180 ﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻂﻘﻓ ﻪﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴ
) µl / 2µg ( ﺖﺒﺛ دﻮﺑ
ﺪﯾدﺮﮔ . ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد Mean±SEM
يﺎﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا P.caudatum
ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد )
شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﺎﻫ ( ﺖﺤﺗ ، ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X
. ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ Post hoc ﺘﺧا لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼ p<0.001
و٭٭٭
p<0. 01 و٭٭
p<0.05 ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭
.
ﻞﮑﺷ 5 - ﺦﺳﺎﭘ L- NAME لا ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ار
- ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ و ﻦﯿﻨﯾژرآ .
ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﻢﺘﺴﯿﺳ ﻞﻣﺎﻋ )
µg/µl 8 - 1 ( جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
لا ﺮﺛﻮﻣ زود ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﻦﺘﻣ رد -
ﻦﯿﻨﯾژرآ ) µl / 4µg ( ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﺮﯿﺧا ﻞﻣﺎﻋ ﻦﯾا و )
µl / 2µg ( ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ 0
ﺎﺗ 180 ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ
ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻂﻘﻓ ﻪﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ )
µl / 2µg ( ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ دﻮﺑ .
ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد Mean±SEM
يﺎﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا P.caudatum
ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
ﻢﺘﺼﺷ ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ )
ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ، ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X
. ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ Post hoc لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧا
ﺖﺒﺜﻣ p<0.001 و٭٭٭
p<0.01 ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭٭
.
P.caudatum
ﺖﺳا ﻪﺘﺷاد لﺎﺒﻧد ﻪﺑ .
ﺦـﺳﺎﭘ كﺮﺘـﺸﻣ
L-NAME+L-Arginine+Morphine
:
ﻞﮑﺷ 5 ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ ار ﺦﺳﺎﭘ ﻦﯾا .
رﻮﺤﻣ ﻘﻓا ﯽ نﺎـﺸﻧ هﺪـﻨﻫد
ﺎﻫزود ي ﻒﻠﺘﺨﻣ
L- NAME
)1
،2
،4
،8 ﺐﺴﺣﺮﺑ µg/µl
( ﺖـﺳا
ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﻪﮐ
4 μg L- arg
ﺮـﺑ مﺪـﻘﻣ نآ و
2 μg Morphine
ﺪﺷ ﺰﯾﻮﺠﺗ .
د ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ زا ﺲﭘ ﺮـﮕﯾد يﺎـﻫ ﺖﻤـﺴﻗ ﻖﺑﺎﻄﻣ ﺎﻫ هدا
هداد ﺎﻫ ﺎﺑ ﻟﺎﻧآ ﯿﺰ راو ﯾ ﺲﻧﺎ )
ANOVA
(ﯾ ﺰﺠﺗ درﻮﻣ ﻪﻓﺮﻃ ﮏ ﻪـﯾ
و
ﻠﺤﺗ ـــﯿ ﻞ ﻪـــﮐ،ﺖﻓﺮﮔراﺮﻗ ﺎـــﺑ
ﻪـــﺟﻮﺗ ﻪـــﺑ ﺘﻧ ﯿ ﻪـــﺠ نﻮـــﻣزآ :
)
F(4,19)=1.037, p<0.001
( فﻼﺘﺧا هوﺮﮔ ﺎﻫ ﻪـﮐ لﺮـﺘﻨﮐ ﺎﺑ
يﺎﻬﻨﻣ
L-NAME
ﺖﺳا
ًﻼﻣﺎﮐ ﻨﻌﻣ ﯽ راد ﻣ ﯽ ﺪﺷﺎﺑ . زود رد
4 μg
L- NAME
ﺎﺳ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯾ
ﺎﻫزود ﺮ ﺑﯿ ﺮﺘـﺸ ﯾ ﻦ ﺶﻫﺎـﮐ رد داﺪـﻌﺗ
لﻮﻠﺳ ﺎﻫ ي
P.caudatum
ﺖـﺳا هداد خر .
ﻪـﺴﯾﺎﻘﻣ رﻮـﻈﻨﻣ ﻪـﺑ
لا ﯽﺘﯾﻮﻘﺗ تاﺮﺛا -
ﻪـﺑ تاﺮﺛا ﻦﯾا ﻪﮑﻨﯾا و ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺦﺳﺎﭘ ﺮﺑ ﻦﯿﻨﯾژرآ
لا ﻪﻧ و ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﻪﻄﺳاو -
ﯽـﺒﯿﮐﺮﺗ ﺦـﺳﺎﭘ ﺖـﺳا ﻦﯿـﻨﯾژرآ ﻦـﯾا زﺎـﺳ ﺶﯿـﭘ و ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﺪﻟﻮﻣ ﻢﯾﺰﻧآ هﺪﻨﻨﮐ رﺎﻬﻣ ﻞﻣﺎﻋ
لﻮﮑﻟﻮﻣ ) ﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﺪﯾ
( ﻞﮑـﺷ رد تﺎﻧاﻮﯿﺣ رد 6
هداد ﺶﯾﺎـﻤﻧ
ﺖﺳا هﺪﺷ .
ﻢﯾﺰﻧآ رﺎﻬﻣ ﺎﺑ ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ ﺮﯾﻮﺼﺗ ﻦﯾا ﻪﮐ ﻪﻧﻮﮕﻧﺎﻤﻫ
ﮏـﯾﺮﺘﯿﻧ ﺖﮐرﺎـﺸﻣ ﺮـﺑ ﺮـﻣا ﻦـﯾا ﻪـﮐ ﺪﺷ ﻒﻗﻮﺘﻣ ﯽﺘﯾﻮﻘﺗ تاﺮﺛا دراد ﺖﻟﻻد هﺪﺷ ﺖﯾﻮﻘﺗ ﺦﺳﺎﭘ رد ﺪﯾﺎﺴﮐا .
نﻮــــــﺴﮐﻮﻟﺎﻧ و ﻦﯿﻓﺮــــــﻣ كﺮﺘــــــﺸﻣ ﺦــــــﺳﺎﭘ :
(Naloxone+Morphine)
: ﻞﮑــﺷ 7 ــﺳﺎﭘ ﻦــﯾا نﺎــﺸﻧ ار ﺦ
ﺪﻫد ﯽﻣ . ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫزود ﻪﮐ ﺖﺳا نآ هﺪﻨﻫد نﺎﺸﻧ ﯽﻘﻓا رﻮﺤﻣ
Naloxone
) 4/
0 ، 2/
0 ، 1/
0 ﺐﺴﺣﺮﺑ ، µg/µl
( زود ﺮـﺑ مﺪـﻘﻣ
ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺛﻮﻣ µg/µl
2 هداد و ﺖـﺳا هﺪـﺷ ﺰﯾﻮـﺠﺗ ﺎـﺑ ﺎـﻫ
ﺰﯿﻟﺎـﻧآ
ﺲﻧﺎﯾراو )
ANOVA
( راﺮـﻗ ﻞـﯿﻠﺤﺗ و ﻪـﯾﺰﺠﺗ درﻮـﻣ ﻪﻓﺮﻃ ﮏﯾ
نﻮـﻣزآ ﻪـﺠﯿﺘﻧ ﻪـﺑ ﻪـﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﻪﮐ ،ﺖﻓﺮﮔ )
F(4,19)=400.856,
p<0.001
( هوﺮﮔ فﻼﺘﺧا ﯽﻨﻌﻣ ًﻼﻣﺎﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﺎﺑ ﺎﻫ
ﯽـﻣ راد ﺪـﺷﺎﺑ .
ﻦﯿﻓﺮﻣ ار لﺮﺘﻨﮐ ﻪﻧﻮﻤﻧ µg/µl
2 ﺪﻫد ﯽﻣ ﻞﯿﮑﺸﺗ .
يﺎـﻫ نﻮﻣزآ
ﻞﮑﺷ 6 - لا ﺦﺳﺎﭘ - ﺎﯾ و ﻦﯿﻨﯾژرآ لا ﯽﺒﯿﮐﺮﺗ ﺦﺳﺎﭘ
- و ﻦﯿﻨﯾژرآ L-NAME ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ار
. زﺎـﺳ ﺶﯿـﭘ ﻞﻣﺎﻋ )
لا - ﻦﯿـﻨﯾژرآ ) ( µl / 4µg (
ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺛﻮﻣ زود ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ﺎﯾ )
µl / 2µg ( ﺪﯾﺎﺴﮐا ﮏﯾﺮﺘﯿﻧ ﻢﺘﺴﯿﺳ هﺪﻨﻨﮐ رﺎﻬﻣ ﺎﯾ و ﺪﺷ ﺰﯾﻮﭽﺗ )
µg/µl 8 - 1 ( ﻣ ﻦﺘـﻣ رد جرﺪـﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘـﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ لا ﺮﺛﻮـﻣ زود ﺮـﺑ مﺪـﻘ
- 180 ﺎﺗ0 ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ ( 2µg/µl) ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﺮﯿﺧا ﻞﻣﺎﻋ ﻦﯾا و ( 4µg/µl) ﻦﯿﻨﯾژرآ يﺎـﻫ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ
ﯽﻔﻨﻣ ) ﺮﻄﻘﻣ بآ ﻂﻘﻓ (
ﺖﺒﺜﻣ و ) ﻦﯿﻓﺮﻣ µl / 2µg ( ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ . ﻦﯿﮕﻧﺎﯿﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ هداد Mean±SEM
يﺎﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا P.caudatum
ﺢﯿـﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ )
ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ، ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X
. ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ Post hoc ﺖـﺒﺜﻣ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧا
p<0.001
٭٭٭
و p<0. 01 و٭٭
p<0.05 ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭
.
يرﺎﻬﻣ ﺮﺛا ﻪﮐ دﺮﮐ ﺺﺨﺸﻣ ﺮﺘﺸﯿﺑ
Naloxone
ﻦﯿﻓﺮﻣ ترﺪﻗ ﺮﺑ
)
Morphine Potency
( ﺖﻈﻠﻏ ﺶﯾاﺰﻓا ﺎﺑ )
زود ( ﯽﻣ ﺮﺘﺸﯿﺑ دﻮﺷ .
هوﻼﻋ ﺮﺑ ﺪﻫاﻮﺷ رﺎﺘﻓر ي ﺎـﺑ هدﺎﻔﺘـﺳا زا شور ﺳ ﯿ ـﺷﻮﺘ ﯿﻤ ﯽﯾﺎﯿ
NADPH-diaphorase
) ﺎـﻫ شور و داﻮـﻣ ﺖﻤﺴﻗ رد جرﺪﻨﻣ (
ﺖﯿﻟﺎﻌﻓ ﺳﯿ ﻢﺘﺴ ردNO
لﻮﻠﺳ ﺎـﻫ ي
P.caudatum
نﺎـﺸﻧ د هدا
ﺪﺷ . ﺪﻫاﻮﺷ ﺑ ﻪ ﺖﺳد هﺪﻣآ ﻦﯾا ﺎﺑ شور ﺳ ﯿ ـﺷﻮﺘ ﯿﻤ ﯿﺎ ﯽﯾ ﺺﺨـﺸﻣ
ﻒﻠﺘﺨﻣ ﻂﯾاﺮﺷ ﺖﺤﺗ ﻪﮐ ﺖﺳا نآ هﺪﻨﻨﮐ ﻣ
ـﯿ ناﺰ و تﺪـﺷ ﮓـﻧر
ﺑآ ﯽ ﻟﻮﺗ ﯿﺪ
،هﺪﺷ ﺼﺧﺎﺷ ﯽ زا ﻣﯿ ناﺰ ﻟﺎﻌﻓ ﯿ ﺖ ﺳ ﯿ ﻢﺘﺴ )NO
ﺖﯿﻟﺎﻌﻓ
ﻞﮑﺷ 7 - يا ﻪﺘﺧﺎﯾ ﮏﺗ ناﻮﯿﺣ رد ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺎﺑ هاﺮﻤﻫ ار نﻮﺴﮐﻮﻟﺎﻧ ﺦﺳﺎﭘ ﺪﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ
. ﯽﺘﺑﺎﻗر ﻞﻣﺎﻋ )
µg/µl 4 /0 - 1/
0 ( ﺮﺛﻮﻣ زود ﺮﺑ مﺪﻘﻣ ﻦﺘﻣ رد جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ﻖﺑﺎﻄﻣ
ﻦﯿﻓﺮﻣ ) µl / 2µg ( ﯽﻧﺎﻣز ﻞﺻاﻮﻓ رد و ﺰﯾﻮﺠﺗ تﺎﻧاﻮﯿﺣ ﻪﺑ 0
ﺎﺗ 180 ﻦﯿﻓﺮﻣ ﻂﻘﻓ ﻪﮐ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﯽﻟﻮﻠﺳ شرﺎﻤﺷ ﻪﻄﺳاو ﻪﺑ ﺎﻫ نآ رﺎﺘﻓر ﻪﯿﻧﺎﺛ )
µl / 2µg ( ﺪﯾدﺮﮔ ﺖﺒﺛ دﻮﺑ .
هداد
ﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ ﺎﻫ ﻦﯿﮕﻧﺎﯿ
Mean±SEM يﺎﻫ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ فﻼﺘﺧا
P.caudatum ﻢﺠﻨﭘ ﻪﯿﻧﺎﺛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺢﯿﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ﻢﺘﺼﺷ ﻪﯿﻧﺎﺛ رد
) ﺎﻫ شور ﺶﺨﺑ تﺎﺟرﺪﻨﻣ ﺎﺑ ﻖﺑﺎﻄﻣ (
ﺖﺤﺗ ،
ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﺋارا يرﻮﻧ پﻮﮑﺳوﺮﮑﯿﻣ زا4X .
ﺰﯿﻟﺎﻧآ ﺎﺑ Post hoc ﺖﺒﺜﻣ لﺮﺘﻨﮐ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ تﺎﻓﻼﺘﺧا p<0.001
ﺪﺷﺎﺑ ﯽﻣ٭٭٭
.
8A 8B 8C
ﻞﮑﺷ 8 - ار ﮏﯾژﻮﻟﻮﺘﯿﺳ ﺪﻫاﻮﺷ ﻞﮑﺷ ﻦﯾا ﺎﺑ
هدﺎﻔﺘﺳا زا شور ﺳ ﯿ ﺷﻮﺘ ﯿﻤ ﯽﯾﺎﯿ NADPH-diaphorase ﺖﯿﻟﺎﻌﻓ نداد نﺎﺸﻧ ياﺮﺑ
ﺳﯿ ﻢﺘـﺴ ردNO لﻮﻠـﺳ ﺎـﻫ ي P.caudatum
نﺎﺸﻧ ﺪﻫد ﯽﻣ . ﻦﯾا ﺎﺑ شور ﻒﻠﺘﺨﻣ ﻂﯾاﺮﺷ ﺖﺤﺗ :
:A ﯽﺋﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ ﻦﯿﻓﺮﻣ ﺮﺛﻮﻣ زود :B
ـﺑ هاﺮـﻤﻫ ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﺮﺛﻮﻣ زود لا ﺎ
- و ﻦﯿـﻨﯾژرآ :C
ﻦﯿﻓﺮـﻣ ﺮﺛﻮـﻣ زود لا هاﺮـﻤﻫ
- و ﻦﯿـﻨﯾژرآ L-
،ﻣNAME ﯿ ناﺰ و تﺪﺷ ﮓﻧر ﺑآ ﯽ ﻟﻮﺗ ﯿﺪ هﺪﺷ ﻪﮐ ﺼﺧﺎﺷ ﯽ زا ﻣﯿ ناﺰ ﻟﺎﻌﻓ ﯿ ﺖ ﺳ ﯿ ﻢﺘﺴ ) NO ﺖـﯿﻟﺎﻌﻓ ﺰـﻧآ ﯾﻢ ( NOS ﺖـﺳا هدﺮـﮐ ﺮـﯿﯿﻐﺗ ،ﺪـﺷﺎﺑ ﯽـﻣ .
ﺶﻨـﮐاو ﺖـﯿﻌﻗﻮﻣ ﺎـﻫ نﺎـﮑﯿﭘ
NADPH-diaphorase ﺪﻨﻫد ﯽﻣ نﺎﺸﻧ ار
.
No reaction to NADPH-d High reaction to
NADPH-d
Low reaction to NADPH-d
