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의학박사 학위논문

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Academic year: 2023

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간세포 암종 PDX에서 수확한 조직으로부터 오가노이드가 형성되었습니다. 또한 유기물이 형성되었습니다. ForamPDX가 형성될 수 있었으며, 간세포암종 오가노이드를 -150°C의 액체 질소에 보존했습니다. 일차 조직으로부터 다세포 오가노이드 모델 확립.

일차 조직 유래 오가노이드는 간 충성 세포를 포함합니다. 정상 간세포와 간세포 암종 조직을 이용한 오가노이드 모델의 형성.

Figure 1. 환자 유래 간세포암의 NOD-SCID 마우스에 이종이식 및 종양 분리.
Figure 1. 환자 유래 간세포암의 NOD-SCID 마우스에 이종이식 및 종양 분리.

구축된 정상 간 및 간세포암 조직의 오가노이드 모델에서 상동성 조사

배양배지는 FBS가 포함된 RPMI 배지와 FBS가 포함되지 않은 줄기세포 배지인 HAM 배지를 사용한다. 회전 타원체 성장 속도 및 분화에 대한 효과는 ca.에서 용해 및 오르가노이드에 의해 확인되었습니다. 10 일. 지층을 관찰하고 기록하였으며, 각 사진을 현미경으로 촬영하여 크기를 측정하였다.

구축된 정상 간 및 간세포암 오가노이드에서 biomarker 발현을 조사

구축된 간세포암 오가노이드와 항암제인 cisplatin 을 이용하여 drug

확립된 정상 간 및 간세포 암종 오가노이드의 바이오뱅크 보존 확인. 간세포 암종 PDX와 간세포 암종 오가노이드 간의 상호 적합성에 대한 평가. 간세포 암종 조직 현미에서 유래된 간세포 암종 PDX 및 간세포 암종 오가노이드.

정상 간 조직과 간세포 암종 조직 사이의 오가노이드 형태 비교. 구축된 오가노이드를 형태학적으로 비교함으로써 정상적인 간 조직과 달리 간세포암종을 발견할 수 있습니다. 정상 간 조직과 간세포 암종 오가노이드의 형태학적 비교.

일차 조직, 간세포 암종 PDX 및 간세포 암종 오가노이드에서의 바이오마커 발현. 정상적인 간 조직에서는 간세포 암종 조직과 간세포 암종 PDX, 간세포 암종 오가노이드가 각각 존재합니다. 간세포암종 오가노이드와 시스플라틴을 이용한 약물 스크리닝 테스트.

위 오가노이드는 전장의 후방 단계에서 위 세포의 3차원 분화에 의해 제조되었습니다. 이는 줄기세포 특성을 가장 잘 나타내는 간세포 암종 오가노이드로 볼 수 있습니다. 바이오마커의 발현에서 AFP, KRT-7 및 KRT-19는 간세포 암종 유기체의 특징입니다.

본 연구에서 제작된 간세포암종 오르가노이드 중 약 3개의 오르가노이드를 사용합니다. 이 연구에서 우리는 간세포 암종 오가노이드를 성공적으로 구성할 수 있었습니다.

Figure 5. 간세포암 조직으로부터 비롯된 간세포암 PDX 및 간세포암 오가노이드 현미
Figure 5. 간세포암 조직으로부터 비롯된 간세포암 PDX 및 간세포암 오가노이드 현미

구축된 정상 간 및 간세포암 조직의 오가노이드의 바이오 뱅크에 보존 가능한지

행잉 드롭 방식과 로우 바인딩 플레이트 방식을 이용한 오가노이드 모델 형성 과정. 오르가노이드의 H&E 염색 이미지에서 세포가 촘촘하게 채워져 있는 것으로 관찰되었습니다(그림 7). 확인 후 이러한 특징이 더 잘 관찰되었습니다. 고배율 시야에서 확대하여 보면 이는 정상입니다.

간 조직 오가노이드의 경우 세포가 크게 원형 선으로 관찰되는 반면, 간세포암종 오가노이드는 종양 세포의 밀도로 인해 세포가 뭉쳐진 형태로 관찰됩니다. 간세포암종 오가노이드의 경우 줄기세포와 같이 분화도와 증식력이 높은 세포로 구성되어 있음을 알 수 있다. Hep Par1은 간세포 유래 종양을 나타내는 바이오마커입니다. 이는 정상적인 간 조직에서 발현되지만 간세포 암종 조직에서 더 많이 발현됩니다. 이는 간세포암종 조직에서 간세포가 더 많이 증식하기 때문이다. 사용된 인체 조직이 간세포암종임을 확인할 수 있다.

EpCAM은 이동과 분화의 지표로, 발현 수준이 높을수록 분화 정도가 낮아 예후가 좋지 않습니다. AFP는 간세포암종의 특징적인 표지자로, 발현이 많을수록 예후가 좋지 않습니다. 간세포 암종의 오가노이드가 간세포 암종 조직 및 간세포 암종 PDX보다 더 잘 발현된다는 것을 관찰할 수 있습니다.

KRT-7 및 KRT-19는 간 줄기 세포에서 대부분 잘 발현되는 바이오마커이며 간세포 암종 오가노이드에서 더 많이 발현되는 것으로 관찰되었습니다.

Figure 6. Hanging-drop method 및 low-binding plate 방식의 오가노이드 모델 형성과정
Figure 6. Hanging-drop method 및 low-binding plate 방식의 오가노이드 모델 형성과정

간세포암 오가노이드와 cisplatin 을 이용한 drug screening test

이는 확인되었으며, 시스플라틴 용량 1μM에서는 대조군과 유의한 차이를 보이지 않았다.

오가노이드의 동결보존능력 평가

간세포암 PDX 와 간세포암 오가노이드의 상호 호환성 평가

그 중 하나가 주목받고 있는데, 오가노이드(Organoid)는 살아있는 장기와 유사한 오가노이드 배양물을 말하며, 인체의 모든 장기에 대한 어떠한 오가노이드도 형성될 수 있다. 낭포성 섬유증은 오가노이드가 임상 연구를 위한 새로운 플랫폼으로 주목받기 시작한 곳입니다. 오가노이드 배양의 효과를 검증할 수 있는 전임상 테스트 모델은 여전히 ​​제한적입니다.

현재 오가노이드는 혀에서 결장까지 마우스 위장관의 일차 조직으로 만들어집니다. 26 유도만능줄기세포(iPSC)를 사용해 만든 오가노이드 뇌. 본 연구에서는 인간의 1차 조직인 정상 간 조직과 간세포암종 조직을 이용한 새로운 항암제 스크리닝과 맞춤형 치료의 새로운 장을 여는 전임상 오가노이드 모델 개발에 성공했습니다.

50개 이상의 간세포암종 조직을 확보하였고, 오가노이드 형성, 오가노이드와의 비교 및 ​​상호호환성 평가를 위해 간세포암종 PDX를 준비하였습니다. 조작된 오가노이드가 실제로 약물 성능 테스트에 적용될 수 있음을 확인했다. 현재 여러 가지 오가노이드가 개발되었지만 아직 인간의 모든 장기에 대해 오가노이드가 형성되지는 않았습니다.

오가노이드는 실제 장기에 해당하는 세포로 구성되어 있지만, 실제 장기의 거시적 구조를 재현하는 것은 부족합니다. 이를 극복하기 위해서는 투명한 오가노이드를 구축하는 것이 필요하다. 오가노이드 바이오뱅킹을 둘러싼 윤리적 문제도 다루어집니다.

Gambar

Figure 1. 환자 유래 간세포암의 NOD-SCID 마우스에 이종이식 및 종양 분리.
Figure 2. 인체로부터 1차 조직을 채취하여 1차 배아 세포주 확보.
Figure 3. 1차 조직으로부터 다세포 오가노이드 모델 확립.
Figure 4. 1차조직을 이용하여 Hanging-drop 방식, Low-biding plate를 사용하여 오가노 이드 구축.
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