АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ»
ПЕРВИЧНАЯ ОЦЕНКА ТАУРОЗИДА I КАК АДЪЮВАНТА ДЛЯ ДНК ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИЧ
И.Б.Андроновская1, Ю.Л.Криворутченко1, В.И.Гришковец2, В.Я.Чирва2, Й.Хинкула3, Б.Вахрен3
1Крымский Медицинский Университет
2Таврический Национальный Университет
3Каролинский Институт e-mail: [email protected]
Предпосылки: Иммуногенность генетических анти ВИЧ вакцин можно повысить с помощью иммунологических адъювантов. Недавно у сапонина Таурозида I (ТI) из Hedera taurica carr. были выявлены адъювантные свойства. В данной работе была изучена способность ТI стимулировать иммунный ответ к продукту ДНК плазмиды, кодирующей регуляторный Nef белок ВИЧ-1. Оценивалась возможность активации ВИЧ в культурах клеток Jurkat-tat и лимфоцитов периферической крови (ЛПК) под действием ТI.
Методы: Мышам BALB/c в/м дважды через 4 недели вводили 30 мкг/мышь плазмиды без TI (контроли) или с TI (25мкг/мышь). Антительный ответ оценивали с помощью ИФА. Секрецию ИЛ-4 и ИЛ-2 изучали на клетках селезенок мышей, стимулированных синтетическими пептидами, содержащими иммуногенные эпитопы Nef. В клетки Jurkat-tat или ЛПК вносили ВИЧ-1 и: i) TI однократно (в день 0);
ii) TI повторно в дни 0, 3 и 7. Для оценки результатов использовали коэффициент репродукции ВИЧ-1 (КР). Его рассчитывали как отношение концентрации ВИЧ р24 (нг/мл) к количеству жизнеспособных клеток. КР в контролях (ВИЧ добавляли к клеткам без сапонина) принимали за 100%.
Результаты: При иммунизации с TI регистрировали более выраженный гуморальный ответ.
Продукция IgG и ИЛ-2 имела место у 50% мышей, а в контролях у 33% животных. Nef- специфическая секреция клетками селезенки ИЛ-4 наблюдалась у 42% мышей, получавших TI, и у 39%
животных из контрольной группы. Данные по влиянию TI на высвобождение р24 зараженными клетками (КР, %,*P<0,05) представлены в таблице.
Клетки Jurkat-tat ЛПК
Введение сапонина Однократное Повторное Однократное Повторное
Доза сапонина мкгхml−1 100 5 100 5 100 5 100 5
КР (%) по дням
3 день 77 155* 90 94 96 106 109 128 11 день 127 94 81 107 151* 85 69 34*
Выводы: Таурозид I обладает адъювантными свойствами при введении с ДНК плазмидой, кодирующей Nef белок ВИЧ-1. Сапонин может умеренно усиливать экспрессию ВИЧ при однократном введении. Эффект можно отменить повторным введением TI.
PRELIMINARY EVALUATION OF TAUROSID I AS ADJUVANT FOR DNA ANTI HIV VACCINE
I. Andronovskaja1, Y.Krivorutchenko1, V.Grishkovets2, V.Chirva2, J.Hinkula3, B.Wahren3
1Crimean Medical University, Simferopol, Ukraine;
2Taurican National University, Simferopol, Ukraine;
3 Karolinska Institute, Stockholm, Sweden.
e-mail:
Background: The immunogenicity of genetic anti HIV vaccines may be enhanced by immunologic adjuvants.
The adjuvant properties of saponin Taurosid I (TI) from Hedera taurica carr. have been described recently. In this study adjuvant abilities of TI were studied with plasmid DNA encoding Nef regulatory protein of HIV-1.
The possibility of HIV activation in Jurkat-tat cells and human peripheral blood lymphocytes (PBL) by TI has been investigated as well.
Methods: 30 μg/mouse of the plasmid was administrated to BALB/c mice i/m twice with 4 weeks interval without TI (controls) and with TI (25μg/mouse). Serological response was measured by ELISA. IL-4 and IL-2 secretion was studied in spleen cells of mice stimulated with synthetic peptides containing immunogenic Nef epitopes. Jurkat-tat and PBL cells were exposed to HIV-1 and the saponin with: i) single TI addition (day 0); ii) with the repeated additions of TI on days 0, 3 and 7. The coefficient of HIV-1 reproduction (CR) was used to compare the effects of taurosids. CR was calculated as a ratio between HIV p24 concentration (ng/ml) divided
by the amount of viable cells. CR in the controls (HIV was added to cells without saponin) was considered as 100%.
Results: More pronounced humoral response was seen after immunization with TI. IgG and IL-2 secretion were seen in 50% of mice as compared with 33% in controls. Nef-specific IL-4 secretion was seen with spleen cells from the group with TI in 42% and from the control group in 39% of mice. Effects of TI on p24 release by infected cells (CR, %,*P<0,05) are shown in a table.
Cells Jurkat-tat PBL
Saponins addition Single Repeated Single Repeated
Dose of saponin μgхml−1 100 5 100 5 100 5 100 5 CR (%), days
postinfection 3 day 77 155* 90 94 96 106 109 128 11 day 127 94 81 107 151* 85 69 34*
Conclusions: Taurosid I possessed adjuvant properties when was used with plasmid DNA encoding Nef protein of HIV-1. This saponin can moderately upregulate HIV expression when used in the single addition regimen. The effect can be avoided by repeated addition of TI.
СОЧЕТАННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ВИБРОАКУСТИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ И АКТОВЕГИНА - ЭФФЕКТИВНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПРОСТАТЫ
О.Г. Базаринский, В.Л. Ярославский
Харьковская медицинская академия последипломного образования
Общеизвестно, что в качестве фактора, специфически воздействующего на восстановление нарушенного кровотока в конечностях, и особенно венозного и лимфатического оттока, в последние годы начали применять виброакустическое воздействие (ВАВ). Простатопротекторным действием обладает небольшое число препаратов животного и растительного происхождения - вобензим, биоглобин, простатилен, раверон, актовегин (А.). Естественно, что сочетание обеих возможностей обещает положительно повлиять на исход лечения ряда патологических состояний предстательной железы.
В этой связи мы использовали аппарат "Витафон", который генерирует ИКИ в пределах 30-40 мВт, и ВАВ в пределах 20-30 кГц (НПФ МИКРОЭМП, Санкт-Петербург). Нами обследовано 27 мужчина, страдающий хроническим простатитом (ХПр.) (17 чел.) и простатодинией (Пд.) (10 чел). Лечение проводилось амбулаторно, ежедневно, на курс 7-10 процедур ВАВ + А.
Сравнительная оценка результатов, полученных в 2 контрольных группах (9 мужчин с ХПр. и 7 - с Пд. , получавших только ВАВ), показала, что сочетанное влияние ВАВ+А. ускоряло выздоровление на 3- 4 дня. Болевые ощущения уменьшались после 1-2 процедур, а исчезали к 6-7-й процедуре. Анализ крови, простатического сока, результаты ультразвукового сканирования подтверждали данные о более быстрой обратной эволюции указанных заболеваний.
ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ АНОМЕРНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ МУРАМИЛДИПЕПТИДА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГРИППЕ У МЫШЕЙ
Бакова А.А., Андроновская И.Б., Малыгина В.Ю., Пертель С.С.*, Криворутченко Ю.Л.
Крымский Государственный Медицинский Университет им.С.И. Георгиевского, *Таврический Национальный Университет им. В.И. Вернадского
e-mail:
Идентификация мурамилдипептида (МДП) как минимальной иммуномодулирующей структуры клеточной стенки Mykobakterium bovis, входящей в состав полного адьюванта Фрейнда, положило начало всестороннему изучению роли естественного пептидогликана в функционировании организма человека и животных. С целью повышения биологической активности и устранения отрицательного побочного действия МДП были созданы и анализировались его синтетические производные с модификациями в различных участках молекулы. Важным аспектом изучения биологических эффектов пептидогликана является оценка его иммуномодулирующих свойств in vitro.
Нами изучено защитное действие 7 аномерных производных МДП при экспериментальной гриппозной инфекции у мышей. Использовали α и β стериоизомеры метил- и бутилгликозидов МДП,
β-бутил-мурамилтетрапептид-дезоксихолилы, в молекуле которых остаток изоглутамина пептидного фрагмента был амидирован метиловым эфиром N-(дезоксихолил)-L- лизина. β-бутил-МДП-димер получали диацилированием β-бутилгликозидом мурамилдипептида мостикового тетрапептида по α- аминогруппам лизиновых остатков.
Препараты вводили мышам линии BALВ/c внутрибрюшинно в дозе 10 и 50 мкг, по терапевтической либо профилактической схеме. В работе использовали вирус гриппа А/WSN/1/33 H1N1, полученный из коллекции Института вирусологии им. Д. И. Ивановского (Москва), адаптированный к репродукции в легких мышей. Основным критерием наличия защитного действия у производных МДП считали повышение выживаемости мышей в опытной группе по сравнению с контролем. Учитывали также время начала гибели животных и среднюю продолжительность их жизни. У выживших после инфицирования вирусом гриппа мышей изучали титры антигриппозных сывороточных антител.
Из 7 исследованных аномерных производных МДП протективным действием при летальном гриппе у мышей обладал только β-метил-МДП, использованный в качестве профилактического средства.
Применение этого производного повышало выживаемость животных в 2 раза, среднюю продолжительность жизни на 3,83+0,01 суток Ни один из изучаемых препаратов не обладал терапевтическим эффектом при экспериментальном гриппе у мышей. Некоторые производные оказывали токсическое действие,
STUDY OF THE ANOMERIC MDP DERIVATIVES ACTION IN AN INFLUENZA INFECTED MICE
Bakova A. A., Andronovskaja I. B, Maligina V. Y. Pertel S. S., Krivorutchenko Y. L.
Crimean Medical University, Taurican National University e-mail:
The identification of MDP as a minimal immunomodulating module of the Mykobakterium bovis cell wall included it in complete Freund`s adjuvant, was the beginning of all-round study of natural peptidoglycan role in human or animal physiology. With the purpose of biological activity increase and elimination of negative actions of MDP, several MDP derivatives were created and analyzed. The estimation of MDP`s immunomodulation poperties in vitro was studied as an important aspect of their biological effects.
Protective properties of the 7 MDP derivatives were studied on the lethal mice model of influenza virus infection. In this case α and β stereoisomers of methyl- and bythil- glycosids were used.
The substances were administrated to BALВ/c mice in a doze of 10 and 50 μg at therapeutical or prophylactic circuit. The influenza virus A/WSN/1/33 H1N1 type, received from the D. I. Ivanovskij Virusology Institute (Moscow) and adapted to mice was used in this study. The increase of a range of mice viability in experimental group was considered to be a basic criterion of MDP derivatives protective actions. Also the time of animal death beginning and average duration of their life were took into account. The level of antiviral antibodies was studied in the group of survived mice as well
Among 7 investigated MDP derivatives only β-methyl MDP had protective effect as a preventive mean in lethal model of influenza mice infection. The application of this derivative increased mice viability in 2 times and average life duration on 3,83±0,01 days. Any of investigated substances had no therapeutical effect in the experimental mice infection. Some derivatives were found as a toxic substances,
ПОИСК ВЫСОКОАКТИВНЫХ ТИРЕОСТАТИКОВ СРЕДИ ПРОИЗВОДНЫХ АЗОТ-, КИСЛОРОД- И СЕРОСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛОВ
Божко Т.С., Ладогубец Е.В., Комарова И.В.
Институт проблем эндокринной патологии АМН Украины им. В.Я. Данилевского E-mail: [email protected]
Лекарственные средства, применяемые в настоящее время для медикаментозной терапии гипертиреоза, содержат в своем составе фрагмент тиомочевины и являются достаточно токсичными, способными вызывать серьезные побочные эффекты при длительном использовании. В связи с этим возникает необходимость поиска новых соединений с иной химической структурой, которые на фоне высокой антитиреоидной активности обладали бы низкой токсичностью.
В Институте синтезированы новые оригинальные азот-, кислород- и серосодержащие гетероциклические соединения с нетрадиционными фармакофорами. В основу целенаправленного синтеза веществ с предполагаемой антитиреоидной активностью положена гипотеза о возможном участии гетероциклов в процессе биосинтеза тиреоидных гормонов за счет образования устойчивых донорно – акцепторных комплексов с молекулярным йодом.
Цель работы. Выявление новых тиреостатиков среди представителей гетероциклических соединений.
Методы. Скрининговые исследования новых биологически активных соединений (БАС) проведены на крысах популяции Вистар. БАС вводили перорально ежедневно в течение 10 суток в дозе, эквимолярной 10 мг/кг препарата сравнения - мерказолила. Тиреоидный статус животных оценивали по содержанию тиреоидных гормонов в сыворотке крови, а также по данным гистологического и морфометрического анализа щитовидной железы. Острую токсичность исследовали методом Прозоровского на трех видах животных при пероральном и внутрибрюшинном введении.
Результаты. При тестировании почти все вещества в большей или меньшей степени проявляли антитиреоидную активность, что позволило рассматривать некоторые структурные элементы как нетрадиционные «антитиреоидные» фармакофоры. Вместе с тем, было выявлено два вещества-лидера, относящихся к ряду кислород-содержащих гетероциклических соединений, которые обладали более высокой, чем мерказолил специфической активностью. При этом зобогенный эффект, в отличие от препарата сравнения, был менее выражен (прирост массы щитовидной железы при воздействии веществ- лидеров составлял 27-36% против 79-88 % для мерказолила). При изучении острой токсичности установлено, что ЛД50 для соединений-лидеров на порядок выше, чем у мерказолила, что позволило отнести их к классу относительно безвредных.
Выводы. В ходе скрининговых исследований выявлен новый класс соединений с антитиреоидной активностью - производные изобензофуранонов. Два новых БАС, относящиеся к этому ряду, являются перспективными для дальнейшего изучения вследствие высокой специфической активности, не уступающей препарату сравнения, низкой токсичности и отсутствия зобогенного эффекта. Дальнейшее детальное изучение их действия может быть положено в основу создания эффективных и безвредных тиреостатиков нового поколения.
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ БИОДЕГРАДАЦИИ ЦИНАЗЕПАМА ПРИ ЕГО ВВЕДЕНИИ ИНДИВИДУАЛЬНО И В ВИДЕ КОМПЛЕКСА С β-ЦИКЛОДЕКСТРИНОМ
Бойко И.А., Костенко С.В., Макан С.Ю., Андронати К.С., Андронати С.А.
Физико-химический институт им. А.В. Богатского НАН Украины
Совместные исследования ФХИ им. А.В. Богатского НАН Украины и НИИ фармакологии АМН России привели к созданию высокоэффективного гипнотика, не нарушающего структуру сна – гемисукцината 3-окси-7-бром-5-(о-хлорфенил)-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она (циназепама), обладающего высокой анксиолитической и седативной активностью. Отличительной особенностью данного препарата является отсутствие миорелаксантного эффекта при приеме в терапевтических дозах [1]. С целью повышения его стабильности и биодоступности ранее были получены его супрамолекулярные комплексы с β-циклодекстрином (β-ЦД) типа "гость-хозяин"[2].
Мы провели сравнительный анализ биодеградации циназепама в плазме крови и мозге крыс при введении его индивидуально и в виде комплекса с β-ЦД в опытах in vitro и in vivo. Исследования биодеградации меченого 14С-циназепама и его инклюзивного комплекса с β-ЦД с тканями мозга in vitro позволило оценить фармакокинетику циназепама при отсутствии гематоэнцефалического барьера.
Установлено, что основным направлением биотрансформации циназепама в организме лабораторных животных является процесс ферментативного гидролиза сложно-эфирной группы циназепама с образованием 3-гидроксифеназепама. Данные радиометрических исследований экстрактов гомогената мозга свидетельствуют, что циназепам в большей степени биотрансформируется в мозге в сравнении с плазмой (рисунок).
1 2 3 4 5
Скорость (мкг/мл,(г).мин-1) биодеградации циназепама при инкубации комплекса с β-ЦД с плазмой крови и тканями мозга крыс. По оси абсцисс время – 1 - 15 мин; 2 – 30 мин; 3 – 60 мин; 4 – 120 мин; 5 – 240 мин.
3-Гидроксифеназепам обнаруживается в плазме крови и тканях мозга и в экспериментах in vivо.
Показано, что 3-гидроксифеназепам является агонистом БДР и проявляет более высокий аффинитет к бенздиазепиновым рецепторам ЦНС в сравнении с циназепамом (Кi 2,48 и 64,1нМ соответственно).
Сравнение их фармакологических профилей позволило установить, что 3-гидроксифеназепам обладает значительно меньшей способностью потенцировать гексеналовый сон, проявляет более выраженное миорелаксантное действие, сравнимую с циназепамом анксиолитическую активность и только в противосудорожной активности в тесте антагонизма с коразолом он превосходит циназепам[1,3].
Принимая во внимание вышеизложенное можно предположить, что фармакологический эффект циназепама обусловлен суммарным действием циназепама и его метаболита 3-гидроксифеназепама.
Литература
Андронати С.А., Якубовская Л.Н., Яворский А.С. Патент СССР, №1828645 от 13.10.92 Andronati S.A., Shapiro Yu.E., Gorbatuk V.Ya. et. Al. // J. Incl. Phenom.-1996.- Vol.24. –P. 175-186.
Феназепам /С.А. Андронати, Г.Я. Авруцкий, А.В. Богатский и др.- Киев: Наук. думка, 1982,-288с.
COMPARATIVE ANALYSIS OF BIODEGRADATION OF CINAZEPAM ADMINISTERED INDIVIDUALLY OR IN COMPLEX WITH β-CYCLODEXTRINE
Boiko I.A., Kostenko C.V., Makan S.Yu., Andronati K.S., Andronati S.A.
A.V. Bogatsky Physico-chemical Institute of the NAS of Ukraine
Joint studies of A.V. Bogatsky Physico-chemical Institute of the NAS of Ukraine and Institute of Pharmacology of AMS of Russia lead to development of a highly potent hypnotic which does not corrupt sleep patern – hemi-succinate of 3-oxy-7-bromo-5-(o-chlorophenyl)-1,2-dihydro-3H-1,4-benzodiazepine-2-one (cinazepam), possessing high anxiolytic and sedative activity. A distinctive feature of this agent is the lack of myorelaxant effect upon administration of therapeutic doses [1]. In order to strengthen its stability and bioavailability its supramolecular complexes with β-cylcodextrine (β-CD) of “guest-host” type [2].
We have conducted a comparative analysis of biodegradation of cinazepam in blood plasma and rat brain after administration of it individually and in complex with β-CD in experiments in vitro and in vivo. Studies of biodegradation of labeled 14C-cinazepam and its inclusive complex with β-CD in brain tissues in vitro allow pharmacokinetics of cinazepam in absence of blood-brain barrier be estimaten. It has been found that the major direction of cinazepam biotransformation in organisms of laboratory animals is a process of enzyme hydrolysis of esther group of cinazepam with formation of 3-hydroxy-phenazepam. Results of radiometric studies of brain homogenate extracts have proved that cinazepam is biotransformed in brain in greater extent than in plasma (see Fig.).
1 2 3 4 5
Rate (μ/ml, (g) min-1) of
biodegradation of cinazepam during incubation of complex of β-CD with blood plasma and brain tissues of rats. X-axis – time: 1 – 15 min; 2-30 min; 3 – 60 min; 4 – 120 min; 5 – 240 min.
3-Hydroxy-phenazepam is pound in blood plasma and brain tissues in vivo.
It has been shown that 3-hydroxy-phenazepam is an agonist of BZR and exerts a higher affinity for
benzodiazepine receptors of CNS compared with cinazepam (Ki 2.48 and 64.1 nM, respectively). Comparing of their pharmacological profiles allowed to show that 3-hydroxy-phenazepam has a significantly lower ability to potentiate hexenal sleep, demonstrates a more avid myorelaxant activity, anxiolytic activity comparable with that of cinazepam, and only in anti-seizure activity in a corazol antagonism test it superseded cinazepam [1,3].
Taking into account the above stated it may be assumed that pharmacological effect of cinazepam is a function of a concerted effects of cinazepam and its metabolite 3-hydroxy-phenazepam.
Literature
Андронати С.А., Якубовская Л.Н., Яворский А.С. Патент СССР, №1828645 от 13.10.92 Andronati S.A., Shapiro Yu.E., Gorbatuk V.Ya. et. Al. // J. Incl. Phenom.-1996.- Vol.24. –P. 175-186.
3. Феназепам /С.А. Андронати, Г.Я. Авруцкий, А.В. Богатский и др.- Киев: Наук. думка, 1982,-288с
ВКЛАД ГЛУТАМИНМЕТАБОЛИЗИРУЮЩЕЙ СИСТЕМЫ В ЭФФЕКТЫ НОВОГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ПРОИЗВОДНЫХ L-ГЛУТАМИНА
Валюк Т.Ч., Величко М.Г., Каравай А.В., Нефёдов Л.И.
Институт биохимии НАН Беларуси e-mail: [email protected]
Рядом исследователей идентифицирована новая группа соединений пептидной природы, обладающих выраженным ингибирующим действием на рост неопластической ткани, которая носит название антинеопластоны (АНП). Среди АНП выделяют отдельную группу соединений, имеющих в составе производные L-глутамина. Нами был модифицирован АНП AS2-1, в составе которого изменено соотношение исходных композиций производных L-фенилаланина и L-глутамина, - авторское название
“Деглутам” (ДГ) [Заявка № а 19990937 на выдачу патента РБ. Препарат, содержащий производные L- глутамина, обладающий противоопухолевой активностью. Нефёдов Л.И.. Величко М.Г., Каравай А.В., Леднёва И.О., Валюк Т.Ч. Приоритетная спр. Заявл. 15/10/1999]. На основе предварительных результатов исследований было высказано предположение об “антиглутаминовом” механизме действия препарата, реализация которого, возможно, связана с активностью процессов биосинтеза и утилизации глутамина.
Целью настоящей работы явилось изучение глутаминметаболизирующей системы в тканях животных-опухоленосителей SM-1 и РС-1 на фоне введения ДГ, представляющего собой композицию L- фенилацетата и N-фенилацетил-L-глутамина в форме натриевой соли в соотношении 3,5:1,5, в дозе 125 мг/кг.
Материалы и методы. Эксперимент проведен на белых крысах-самках линии Wistar CRL:(WI) WU BR с подкожно перевитыми SM-1, РС-1, которым внутрижелудочно (в/ж) вводили ДГ в дозе 125 мг/кг 2 раза в сутки в течение 10 дней. Исследуемые показатели сравнивали с полученными у контрольных опухоленосителей, получавших изотонический раствор хлорида натрия.
Спектрофотометрически в супернатантах из печени и опухоли крыс (10000 g × 3 мин.) определяли активность глутаминсинтетазы (ГС; НФ 6.3.1.2.), фосфат-зависимой (ФЗГ) и фосфат-независимой (ФНГ)
глутаминазы (НФ 3.5.1.2.), а также уровень эндогенного глутамина в тканях печени, опухоли и плазме крови животных.
Результаты и обсуждение. Введение ДГ достоверно не изменяло суммарное содержание глутамина в печени и плазме крови опухоленосителей SM-1 и PC-1, в то время как наиболее отчётливо проявляется снижение уровня аминокислоты в тканях опухоли. Эффекты ДГ на глутаминметаболизирующие ферменты у животных-опухоленосителей различаются в зависимости от скорости роста новообразования. Так, в печени и опухоли животных с РС-1 наблюдалась активация ГС (в 1,7 раза) и активация ФЗГ (в 1,5 раза) в печени. В печени животных с карциносаркомой SM-1 на фоне снижения активности глутаминметаболизирующих ферментов (ГС - в 2 раза, ФЗГ - в 2,5 раза, ФНГ - в 4 раза) наблюдалась активация ферментов (ГС - в 4 раза, ФЗГ - в 3,5 раза, ФНГ - в 7 раз) в ткани опухоли.
Следует отметить, что при введении ДГ показатели активности исследуемых ферментов в ткани печени приближались к значениям интактных здоровых животных.
Выводы. Таким образом, полученные данные показывают, что чувствительность опухолей к исследуемому ДГ определяется скоростью роста неоплазмы и активностью метаболических процессов, ответственных за формирование фонда глутамина в ткани опухоли.
THE CONTRIBUTION OF GLUTAMINE METABOLIZED SYSTEM TO THE EFFECTS OF NEW ANTITUMOR PREPARATION ON THE BASE OF L-GLUTAMINE DERIVATIVES
Valiuk T.Ch., Velichko M.G., Karavai A.V., Nefyodov L.I.
National Academy of Sciences of Belarus, Institute of Biochemistry e-mail: [email protected]
The new group of peptide nature compounds which is markedly inhibit the action of neoplastic tissue growth called antineoplastons (ANP) was identified. Among ANP are noted the individual group of compounds, which consist of L-glutamine derivatives. ANP AS2-1, in which the ratio of initial composition of L- phenylalanine and L-glutamine derivatives is changes (the autors name is “Deglutam”; DG) [Claim №a 19990937 on the issue of patent of Belarus. The preparation which consist of L-glutamine derivatives, possessed of antitumor activity. Nefyodov L.I., Velichko M.G., Karavai A.V., Lednyova I.O., Valiuk T.Ch. Priority inf.
15/10/1999] was modified by us. On the base of results, which were received early, the supposition about
“antiglutamine” mechanism action of preparation, the realization of which maybe is connected with the activity the processes of glutamine synthesis and utilization.
The aim of our research work is studying of the glutamine metabolized system in the tissues of the rats with carcinosarcoma SM-1 under the influence of DG, which is the composition of L-phenylacetate and N- phenylacetyl-L-glutamine in the form of sodium salt in the ratio 3,5:1,5, in the dose of 125 mg/kg.
Materials and methods. The experiment was held on the white female rats of the line Wistar CRL:(WI) WU BR with subcutaneously transplanted SM-1, PC-1 under the influence of DG in the dose of 125 mg/kg of the body’s weight during their intragastric (i/g) injection 2 times per day for 10 days. The activity of glutamine synthetase (GS; EC 6.3.1.2.), phosphate-dependent glutaminase (PDG) and phosphate-independent glutaminase (PIG) was determined by a spectrophotometer in the supernatant from the rats liver and tumor (10000 g × 3 min) and the level of endogen glutamine in the liver, tumor and plasma of blood of the animals.
Results. The injection of DG authenticitely change not the total maintenance of glutamine in the liver and plasma blood rats with tumor SM-1 and PC-1, whereas the decrease of amino acid level in the tumor was revealed. The effects of DG on the glutamine metabolized enzymes in the tumor-bearing animals are differ upon the rate tumor growth. In the liver and tumor of the animals with PC-1 the activity of GS was increased (in 1,7 times) and PDG (in 1,5 times) in the liver. In the liver of the rats with carcinosarcoma SM-1 during the decrease the activity of glutamine metabolized enzymes (GS - in 2 times, PDG - in 2,5 times, PIG - in 4 times) was detected the activation of the enzymes (GS - in 4 times, PDG - in 3,5 times, PIG - in 7 times) in the tumor. It is need to note, that under the injection of DG the activity of studied enzymes in the liver approximate to the data of intact animals.
Conclusions. Thus, our data indicate that the sensitivity of tumor to the DG determined by tumor growth rate and activity of metabolic processes that answer for forming the glutamine reserves in the tumor.