Amilah dan Y. Astuti. 2006. Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Taoge dan Kacang Hijau pada Media Vacin and Went (VW) terhadap Pertumbuhan Kecambah Anggrek Bulan (Phalaenopsis amabilis, L). Bulletin Penelitian no 9.
Arditti, J. dan Ernst, R. 1993. Micropropagation of Orchid. John Wiley and Sons. New York.
Arditti, J. and A. Karim. 2000. Numerical and physical properties of orchid seeds and their biological implication. New Phytol. 145:367-421 p.
Armini, N. M., L. W. Gunawan, dan G. A. Wattimena. 1992. Perbanyakan tanaman. Bioteknologi Tanaman. Pusat Antar Universitas, IPB. Bogor. 104 hal.
Chandrkrachang, S. 2002. The Application of Chitin in Agriculture in Thailand. Advances in Chitin Science. 5: 458-462 p.
Chen, J. T., C. Chang, and W. C. Chang. 2000. A Reliable Protocol for Plant Regeneration from Callus Culture of Phalaenopsis. In Vitro cell, Dev Biol-Plant. 36: 420-423 p.
_______. and W. C. Chang. 2004. Induction of Repetitive Embryogenesis from Seed-Derived Protocorm of Phalaenopsis amabilis var Formosa Shimadzu. In Vitro Cell, Devi Biol-Plant. 40: 290-293 p.
_______. and W. C. Chang. 2006. Direct Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Leaf Explants of Phalaenopsis amabilis. Biologia Plantarum. 50(2): 169-173 p.
CITES (the Convention on International Trade in Endangered Species of Wild
Fauna and Flora). 2011. Appendices I, II, and III.
http://www.cites.org/eng/app/appendices.shtml [25 Mei 2011]
Gow, W. P., J. T. Chen, and W. C. Chang. Influence of Growth Regulator on Direct Embryo Formation from Explants of Phalaenopsis Orchids. Acta Physiol plant. 30: 507-512 p.
Gunawan, L. W. 1988. Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Pusat Antar Universitas (PAU) Bioteknologi IPB. Bogor.
__________. 2002. Teknik Kultur Jaringan. Pusat Antar Universitas (PAU) Bioteknologi IPB. Bogor.
Handini, E. dan Y. Isnaini. 2009. Kultur Daun Phalaenopsis sumatrana Korth. & Rchb.f. asal Kalimantan Barat. Prosiding Seminar Peranan Konservasi Flora dalam Mengatasi Dampak Pemanasan Global. Bali, 14 Juli 2009. Hal 206-210.
Iswanto, H. 2005. Merawat dan Membungakan Anggrek Phalaenopsis (Ed. Revisi). Agromedia Pustaka. Jakarta
Kliangkeaw, C., S. Chandrkrachang and P. Sawajsila. 2003. A Study on The Influences of Chitosan upon the trasplating and growth of Paphiopedilum bellatulum x Paph. Xangthong derived from tissue culture. National Chitin and Chitosan Conference July 17-18, 2003. Chulalongkorn University, Bangkok, Thailand.
Latip, M. A., R. Murdad, Z. A. Aziz, L. H. Ting, L. M. Govindasamy and R. Pipin. 2010. Effects of N6-Benzyladenine and Thidiazuron on Poliferation of Phalaenopsis gigantea Protocorm. AsPac J. Mol. Biol. Biotechnol. 18(1): 217-220 p.
Lee, Y. I. and N. Lee. 2003. Plant Regeneration From Protocorm-Derived Callus of Cypripedium Formosanum. In Vitro Cell. Dev. Biol. 39 : 475-479 p. Limpanavech, P., R. Pichyangkura, C. Khunwasi, S. Chadchawan, P. Lotrakul, P.
Bunjongrat, A. Chaidee and T. Akaraeakpanya. 2003. The Effect of Polymer Type, Concentration and %DD of Bicatalyte Modigied Chitosan on Flora Production of Dendrobium ‘Eiskul’. National Chitin and Chitosan
Conference July 17-18, 2003. Chulalongkorn University, Bangkok, Thailand.
Murdad, R., M. A. Latip, Z. A. Aziz and R. Pipin. 2010. Effect of Carbon Source and Potato Homogenate on In Vitro Growth and Development of Sabah’s
Endangered Orchid: Phalaenopsis gigantea. AsPac J. Mol. Biol. Biotechnol. 18(1): 199-202 p.
Obsuwan, K., S. Yoodee and A. Uthairatanakij. 2010. Application of Chitosan on In Vitro Growth of Rhynchostylis gigantea Protocorms and Seedlings. ISHS Acta Horticulturae 878.
O’Byrne, P. 2001. A to Z of South East Asian Orchids Species, 1st ed. Orchids
Society of South East Asia. Singapore.
Pusat Kajian Buah-Buahan Tropika (PKBT). 2007. Pisang. LPPM. Institut Pertanian Bogor.
Prihatmanti, D. 2002. Penggunaan zpt NAA dan BAP serta air kelapa untuk
menginduksi organogenesis tanaman Anthurium (Anthurium
andraenanum Linden ex Andre). Skripsi. Jurusan Budidaya Petanian, Fakultas Pertanian, IPB. Bogor.
41
Puspitaningtyas, D. M. dan S. Mursidawati. 1999. Koleksi Anggrek Kebun Raya Bogor. Vol. 1, No. 2. Bogor: UPT BalaiPengembangan Kebun Raya-LIPI. Rahayu, E. M. D., E. Handini, S. Mursidawati, dan Y. Isnaini. 2010, Penggunaan bahan organik untuk pembesaran kultur in vitro anggrek Phalaenopsis fuscata rchb.f. Makalah dipresentasikan pada Seminar Nasional Green Technology, UIN Malang, 20 November 2010.
Rianawati, S., A. Purwito, B. Marwoto, R. Kurniati, dan Suryanah. 2009. Embriogenesis somatik dari eksplan daun anggrek Phalaenopsis sp L. J. Agron 37(3): 240 – 248 hal.
Risna, R. A., Y. W. C. Kusuma, D. Widyatmoko, R. Hendrian, dan D.O. Pribadi. 2010. Spesies Prioritas untuk Konservasi Tumbuhan Indonesia Seri I Arecaceae, Cyatheaceae, Nepenthaceae, Orchidaceae. LIPI Press. Bogor. Rizky W. H., A. Nuraini, E. Suminar and K. Syahruddin. 2010. Growth and
Development of Protocorm Like Bodies Hybrid Dendrobium Orchids on MS Medium With Cytokinin and Auksin Combination. International Seminar on Horticulture to Support Food Security June 22-23, 2010. Bandar Lampung, Indonesia.
Sanford, P. A. 2002.Comercial Source of Chitin and Chitosan and Their Utilization . Advances in Chitin Science. 6: 35-42 p.
Sastrapraja, S. 1980. Jenis-Jenis Anggrek. Lembaga Biologi Nasional LIPI. Balai Pustaka. Jakarta
Shahidi, F. J. K. Kamil, Y. T. Jeon and S. K. Kim. 2001. Antioxidant Role of Chitosan in a Cooked Cod (Gadus Morhua) Model System. Journal of Food Lipids. 9: 57-64 p.
Untari, R. dan D. M. Puspitaningtyas. 2006. Pengaruh Bahan Organik dan NAA terhadap Pertumbuhan Anggrek Hitam (Coelogyne pandurata Lindl.) dalam Kultur In Vitro. Biodiversitas. 7(3): 344-348 hal.
Thomas T. D., and J. T. Puthur. 2004. Thidiazuron Induced High Frequency Shoot Organogenesis in Callus from Kigelia pinnata L. Bot. Bull. Acad. Sin. 45: 307-313 p.
Tokuhara, K. and M. Mii. 1993. Micropropagation of Phalaenopsis and
Doritaenopsis by Culturing Shoot Tips of Flower Stalk Buds. Plant Cell Reports.21: 46-51 p.
__________. 2001. Induction of Embryogenicand Cell Suspension Culture from
Shoot Tips Exiced From Flower Stalk Buds of Phalaenopsis
Wattimena, G. A. 1991. Bioteknologi Tanaman. Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB.
_________, D. Dinarti, M. S. Rahayu and N. Dahniar. 2003. Preliminary Study on The Effect of Coconut Water and Aspirin on In Vitro Conservation of Sweet Potato ( Ipomea batata L). CV. Sukuh. International Seminar on Sweet Potato. Departement of Agronomy IPB and CIP-South East Asia and Pasifik Bogor.
WCMC. 2011. The List of Indonesian Threatened Plants. The World Conservation Monitoring Centre. IUCN, Gland, Switzerland and Cmbridge, UK.
Widiastoety, D., dan Purbadi. 2003, Pengaruh Bubur Ubikayu dan Ubijalar Terhadap Pertumbuhan Planlet Anggrek Dendrobium. Jurnal Hortikultura 13(1): 1 – 6 hal.
Widyastuti, T. 2003. Pengaruh media dasar dan penambahan persenyawaan organik kompleks terhadap pertumbuhan semai anggrek bulan raksasa (Phalaenopsis gigantea J. J. Smith, 1909) pada kultur in vitro. Skripsi. Jurusan Konservasi Sumbedaya Hutan, Fakultas Kehutanan, IPB. Bogor. Wiendi, N. M. A., G. A. Wattimena, dan L. V. Gunawan. 1991. Perbanyakan
tanaman. Bioteknologi Tanaman I. Pusat Antar Universitas IPB. 507 hlm. Ying-Chun, C., C. Chen, and C. Wei-Chin. 2000. A reliable culture of protocol
for plant regeration from callus Phalaenopsis. In Vitro Cell Dev. Biol-Plant. 36(5):420-423 p.
Lampiran 1. Komposisi Setengah Konsentrasi Media Murashige dan Skoog (½ MS) dan New Dogasima Medium (NDM)
Stok Bahan ½ MS dalam Media
(mg/l) NDM dalam media (mg/l) Makro NH4NO3 825 480 KNO3 950 200 KH2PO4 85 550 KCl - 150 KI 0.42 - CaCl2.2 H2O 220 Ca(NO3)2. 4H2O - 470 MgSO4.7 H2O 185 250 Mikro MnSO4.4 H2O 11.2 3 ZnSO4.7 H2O 4.3 0.5 CuSO4.5 H2O 0.013 0.025 H3BO3 3.1 0.5 Na2MoO4.2 H2O 0.13 0.025 COCl2.6 H2O 0.0013 0.025 FeSO4.7 H2O 13.9 2 780 Fe-EDTA - 21 Na2EDTA 18.7 3 730 Vitamin Myo-Inositol 100 100 Thiamin-HCl 0.1 1 Niacin 0.5 1 Pyridoxin-HCl 0.5 1 Calcium Pantothenate - 1 Adenin - 1 l-Cystein - 1 d-Biotin - 0.1 Glycine 2 -
45
Lampiran 2 . Komposisi Media Knudson C.
Bahan Konsentrasi dalam Media (mg/l) Konsentrasi dalam Larutan stok 50x (g/500 ml)
Volume larutan stok yang dibutuhkan per
liter media (ml)
Unsur Makro
1. Ca(NO3)2.4H2O 1 000 50 10
2. (NH4)2.SO4 500 25 10
3. MgSO4.7H2O 250 12.5 10
4. FeSO4.7H2O 25 Ditimbang langsung
5. KH2PO4 250 12.5 10
Unsur Mikro
1. MnSO4.2H2O 7.5
(MnSO4.H2O) 7.268 0.3634 10
Lampiran 3. Planlet Awal Phalaenopsis gigantea.
Lampiran 2. Kematian Eksplan Daun Phalaenopsis gigantea akibat Toksin
Keterangan : A. Tingkat toksin pada beberapa media, B. Eksplan daun P. gigantea yang mati akibat toksin
Lampiran 5. Tunas Multipel Eksplan Phalaenopsis gigantea.
Keterangan: A dan B = media G10 (KC + air kelapa + ekstrak taoge), C dan D = media G11 (KC + air kelapa + ekstrak taoge + ekstrak ubi).
A B
C D
47
Lampiran 6. Tunas Samping Eksplan Phalaenopsis gigantea.
Keterangan: A. Media G11 (KC + air kelapa + ekstrak taoge + ekstrak ubi), B. Media G12 (KC + air kelapa + ekstrak taoge + ekstrak pisang), C. Media G13 (KC + air kelapa + ekstrak taoge + ekstrak ubi + ekstrak pisang), D. Media A13 (Media ½ MS +15 ppm kitosan) C
B A
Latar Belakang
Phalaenopsis gigantea merupakan salah satu jenis anggrek dari genus
Phalaenopsis (golongan anggrek bulan) dan penyebarannya terbatas hanya di Kalimantan dan Sabah (Puspitaningtyas dan Mursidawati, 1999). Phalaenopsis gigantea merupakan salah satu spesies prioritas untuk konservasi tumbuhan Indonesia pada tahun 2010 (Risna et al., 2010). Perdagangan P. gigantea sudah diatur dan dibatasi oleh kuota karena sudah termasuk dalam Appendix II CITES (CITES, 2011) dan diatur dalam Peraturan Pemerintah No 7/1999, serta Peraturan Menteri Kehutanan No P.57/Menhut II/ 2008 (Risna et al., 2010). Namun status kelangkaan spesies ini belum dieavaluasi dalam IUCN red list (WCMC, 2011). Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Bogor telah melakukan upaya konservasi spesies ini, salah satunya dengan cara perbanyakan secara kultur jaringan atau in vitro.
Perbanyakan P. gigantea secara vegetatif sulit dilakukan karena
Phalaenopsis merupakan anggrek monopodial. Pertumbuhan P. gigantea sangat lambat di alam maupun pada media kultur jaringan. Pada media kultur jaringan P. gigantea memerlukan waktu hingga 5 tahun untuk siap aklimatisasi. Informasi mengenai perbanyakan P. gigantea masih sangat terbatas.
Penelitian mengenai kultur in vitro P. gigantea sudah pernah dilakukan oleh [Kartiman (2004); Murdad et al., (2010) ; dan Latip et al., (2010)], namun ketiganya menggunakan Protocorm Like Bodies (PLBs) sebagai sumber eksplan.
Protocorm Like Bodies didapatkan dari perbanyakan melalui biji secara in vitro, namun sekarang ini sangat sulit untuk mendapatkan buah dan biji P. gigantea. Oleh karena itu, perlu mencari alternatif eksplan lainnya untuk pembentukan PLBs, salah satunya adalah melalui kultur daun. Publikasi hasil penelitian mengenai kultur daun P. gigantea sampai saat ini belum ditemukan.
Hasil Penelitian Kartiman (2004) menunjukan bahwa kombinasi IBA 0,5 mg/l dengan BAP 1 mg/l pada media ½ MS dapat meningkatkan jumlah PLBs
terbanyak pada kultur PLBs P. gigantea. Hasil penelitian Handini dan Isnaini (2009) menunjukan bahwa pembentukan PLBs terbanyak pada kultur daun
2
anggrek P. sumatrana dijumpai pada media ½ MS dengan penambahan kombinasi 2 mg/l BAP dengan 0,01 mg/l NAA. Latip et al., (2010) menambahkan bahwa penambahan 0,5 – 2 mg/l BAP dan 0,1 – 0,3 mg/l Thidiazuron (TDZ) dapat meningkatkan jumlah PLBs yang terbentuk pada kultur PLBs P. gigantea. Mengacu pada penelitian diatas, maka kultur daun P. gigantea dilakukan dengan kombinasi media yang hampir sama.
Pada kultur daun P. gigantea perlu diperhatikan pula sisa pangkal batang setelah pemotongan daun. Oleh karena itu, penyelamatan pangkal batang dilakukan dengan mengkulturkannya kembali secara in vitro.
Kultur in vitro anggrek P. gigantea pada media Hyponex sudah pernah dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Kebun Raya Bogor, namun pertumbuhannya masih kurang optimal (Widyastuti, 2003). Hasil penelitian Widyastuti (2003) menunjukan bahwa hasil terbaik dalam pertumbuhan kecambah
P. gigantea dijumpai pada media KC dengan penambahan ekstrak pisang atau ubi. Menurut Gunawan (2002), ekstrak pisang merupakan komponen tambahan yang sangat popular pada media anggrek. Akan tetapi, kultur in vitro spesies
Phalaenopsis lain pada media Knudson C (KC) ditambah bahan organik air kelapa dan ekstrak taoge menunjukan hasil yang cukup optimal. Air kelapa telah diketahui sebagai sumber zat pengatur tumbuh yang dapat digunakan untuk perkembangan embrio, diantaranya adalah sitokinin endogen (Wattimena, et al., 2003).
Hasil penelitian Pornpeanpakdee et al., (2006) menunjukan bahwa pertumbuhan PLBs Dendrobium Sonia Jo ‘Eiskul’ meningkat secara signifikan
pada media dengan penambahan 10-20 mg/l kitosan. Kitosan merupakan polisakarida alami yang dibentuk oleh polimer N-asetil-D-glukosamin dan D-glukosamin. Pada bidang pertanian, kitosan biasa digunakan untuk pupuk, proteksi tanaman dan stimulasi pertumbuhan (Sukwattanasinitt et al.,2001). Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kultur daun dan pangkal batang anggrek P. gigantea pada beberapa media kultur jaringan.
Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk :
1. Mendapatkan kombinasi zat pengatur tumbuh yang tepat untuk induksi organogenesis P. gigantea.
2. Mengetahui media yang cocok untuk pertumbuhan pangkal batang anggrek P. gigantea.
Hipotesis
1. Terdapat komposisi media kultur yang optimum untuk kultur daun dan pangkal batang anggrek P. gigantea.
2. Senyawa organik kompleks dapat meningkatkan pertumbuhan pangkal batang anggrek P. gigantea.
3. Kitosan dapat meningkatkan pertumbuhan pangkal batang anggrek