Adhayanti. 2007. Hubungan tingkat pengetahuan bahaya rokok bagi kesehatan terhadap perilaku merokok. [skripsi]. Malang (ID): Universitas Brawijaya. Aginta E. 2012. Hubungan antara merokok dan kebiasaan makan dengan Status
Gizi pada Remaja Putra (Studi pada Siswa SMAN 2 Ungaran). [skripsi]. Semarang (ID): UNDIP.
Almatsier S. 2004. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta (ID): PT. Gramedia Pustaka Utama.
Anbarasi K, Van G, Balakrisna K, Devi CS. 2006. Effect of bacoside A on brain antioxidant status in cigarette smoke exposed rats. Life Science 78:1378-1384.
Andi MHF. 2006. Analisis loyalitas konsumen terhadap rokok kretek di Kecamatan Bogor Barat.[skripsi]. Bogor (ID): IPB.
41 Anonim. 2014. Nielsen Retail Audit Result 2013. [internet]. [Diunduh 2015 Feb
3]. Tersedia di: www. sampoerna.com.
Almajano MP. Carbo R. Jiménez J. Gordon MH. 2008. Antioxidant and antimicrobial activities of tea infusions. Food Chemistry. 108(1): 55-63. Ario MD. 2014. Pengaruh nikotin dalam rokok pada DM tipe 2. J Majority.
3(7):75-80.
Aryani R, Tarwoto, Nuraeni A, Miradwiyana B, Tauchid SN, Aminah S, Sumiati, Diniarti, Nurhaeni H, Saprudin AH, Chairani R. 2010. Kesehatan Remaja Problem dan Solusinya. Jakarta (ID): Salemba Medika.
Bashar SK, Mitra AK. 2004. Effect of smoking on vitamin A. vitamin E. and other trace elements in patients with cardiovascular disease in Bangladesh: a cross sectional study. Nutrition Journal. 3:18.
Benowitz NL.2003. Basic cardiovascular research and its implications for the medicinal use of nicotine. Journal of the American College of Cardiology
Volume 41: 497-498.
Block G, Marion D, Edward PN, Jason DM, Mark H, et al. 2002. Factor assosiated with oxidative stress in human population. American Journal of Epidemiology. 156(3).
Brown JE. 2011. Nutrition Through Life Cycle. USA (US): Wadsworth.
Chakraborty A, Gupta A, Singh AK, Patni P. 2014. Effect of oxidative phytochemicals on nicotine-stresssed UMNSAH/DF-1 cell line. J Tradit Complement Med. 4 (2): 126-131.
Chattopadhyay KBD. Chattopadhyay. 2007. Effect of nicotine on lipid profile. peroxidation dan antioxidant enzymes in female rats with restricted dietary protein. Indian J Med Res. 127:571-576.
Chiolero A, Faeh D, Paccaud F, Cornuz J. 2008. Consequences of smoking for body weight. body fat distribution. and insulin resistance. Am J Clin Nutr. 87:801-9.
Chopra M, O’neil ME, Keogh N, Wortley G, Southon S, Thurnham DI. 2000. Influence of increase fruit and vegetable intake on plasma and lipoprotein carotenoids and LDL-C oxidation in smokers and non smokers. Clin Chem. 46: 1818-1829.
Coimbra S, Castro E, Rocha P, Rebelo I, Rocha S, Santos-Silva A. 2006. The effect of tea in oxidative stress. Clinical Nutrition. 25:790-796.
Cooper KH. 2000. Antioxidant revolution. Nashville (USA): Thomas Nelson Publishers.
Dara AL, Bahar B, Jafar N. 2014. Kebiasaan merokok dan asupan makanan terhadap status gizi manula Kelurahan Balla Kabupaten Enrekang. Karya Ilmiah. Makassar (ID): Universitas Hasanuddin.
De Mejia EG, Ramirez-Mares MV, Puangpraphant S. 2009. Bioactive components of tea: cancer. inflammation and behavior. Brain Behavior and Immunity. 23(6): 721- 731.
[Depkes] Departemen Kesehatan. 2008. Point-Point Laporan Riskesdas Tahun 2007. [internet]. [diunduh 2014 Feb 3]. Tersedia pada: http// www.litbang.depkes.go.id.
. 2010. Laporan Riskesdas Tahun 2007.
[Internet]. [diunduh 2014 Feb 3]. Tersedia pada: http// www.litbang.depkes.go.id.
42
. 2013. Laporan Riskesdas Tahun 2013.
[internet]. [diunduh 2014 Feb 3]. Tersedia pada: http// www.litbang.depkes.go.id.
Devaranavadgi BB, Aski BS, Kashinath RT, Hundekari IA. 2012. Effect of cigarette smoking on blood lipids- a study in Belgaum, Northern Karnataka,India. Global Journal of Medical Research. 12(1): 57-61.
Dias TR, Tomás G, Teixeira NF, Alves MG, Oliveira PF, dan Silva BM. 2013. White tea (camellia sinensis (l.)): antioxidant properties and beneficial health effects. International Journal of Food Science. Nutrition and Dietetics (IJFS). 2:101.
Dietrich M, Block G, Hudes M, Morrow JD, Norkus EP, Traber MG, Cross CE, Packer L. 2002. Antioxidant supplementation decreases lipid peroxidation biomarker F(2)-isoprostanes in plasma of smokers. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 11: 7–13.
Diniatik, Soemaryo E, Indri K. 2007. Perbandingan kadar flavonoid total dan tanin total pada teh hijau dan teh hitam. Pharmacy. 5(3):1-5.
Diken H, Mustafa K, Cemil T, Basra D et al. 2000. Effect of cigarette smoking on blood antioxidant status in short term and long term smokers. Turk J Med Sci. 31:533-557.
Dirican M, Sarandol E, Ulukaya E, Tokullogil HS. 1999. Effect of smoking on serum lipid and lipoprotein concentration and lecitin: cholesterolacyltransferase activity. The Journal of Medical Investigation. 46:169-172.
Dwifitri YZ. 1999. Identifikasi hubungan kebiasaan merokok pada wanita dengan kadar vitamin C dan LDL-C kolesterol serum darah. [skripsi]. Bogor (ID): IPB.
Ebersbach SP, Alves T, Fonseca AT, Oliveira MA, Machado UF, Seraphi PM. 2013. Cigarette smoke exposure severely reduced peripheral insulin sensitivity without changging GLUT4 expression in oxidative muscle of wistar rats. Arq Bras Endocrinol Metab. 57:1.
El-Zayadi AR. 2006. Heavy smoking and liver. World J.Gastroenterol. 12(38):6089-6101.
Ferrari CKB. 2001. Oxidative stress pathophysiology: Searching for an effective antioxidant protection. Int Med J. 8:175-184.
Firenzuoli F, Gori L, Crupi A, Neri D et al. 2004. Flavonoids: risks or therapeutic opportunities. Recenti Progressi in Medicina. 95: 345-351.
Fulder. 2004. Khasiat Teh Hijau. Jakarta (ID): Prestasi Pustaka.
Gawish AM, Issa AM, Mcnaa SM. 2012. Role of green tea on nicotine toxicity on liver and lung of mice: histological and morphometrical studies. African Journal of Biotechnology. 11(8): 2013-2025.
Gee Mc. 2005. Is cigarette smoking associated with suicidal ideation among young people?. The American Journal of Psychology. [internet]. [diunduh 2014 Nov 9]. Tersedia pada: http//www.proquest.com.
Gibson RS. 2005. Principles of Nutritional Assessment. 2nd.Ed. New York (US): Oxford University Press Inc.
Goptadianto DA, Wongkar D, Ticoalu SHR. 2013. Perbandingan kadar kolesterol high density lipoprotein darah pada pria perokok dan bukan perokok. Jurnal e-Biomedik. 1(2):967-1001.
43 Grassi D, Draijer R, Desideri G, Mulder T, Ferri C. 2012. Efects of black tea with and without a fat load on vascular function in miLDL-Cy hypertensive subjects. Circulation. 125: AP061.
Gupta V, Sunita T, Agarwal, Pallavi S et al. 2006. Effect of short term cigarette smoking on insulin resistance and lipid profil in asymptomatic adults.
Indian Journal Physiol Pharmacol. 50(3):285-290.
Han JY, Kim CS, Lim KH, Kim JH, Kim S, Yun YP, Hong JT, Oh KW. 2011. Increases in blood pressure and heart rate induced by caffeine are inhibited by (-)-epigallocatechin-3-o-gallate: involvement of catecholamines. Journal Of Cardiovascular Pharmacology. [internet]. [diunduh 2014 Mar 4]. Tersedia pada: http //journals.lww.com/cardiovascularpharm/Abstract /publishahead/Increases_in_Blood_Pressure_and_Heart_Rate_Induced.9944 9.aspx.
Hardie DG. 2003. Minireview: the AMP-actived protein kinase cascade: the key sensor of cellular energy status. Endocrinology. 144:5179-5183.
Hardinsyah, Briawan D. 1994. Penilaian dan Perencanaan Konsumsi Pangan. Bogor (ID): Departemen GMSK, FAPERTA IPB.
Hardinsyah, Retnaningsih, Herawati T, Wijaya R. 2002. Analisis Kebutuhan Konsumsi Pangan. Bogor (ID): Pusat Studi Kebijakan Pangan dan Gizi (PSKPG).
Hardinsyah, Tambunan V 2004. Angka Kecukupan Energi. Protein. Lemak. dan Serat Makanan. Dalam Widya Karya Nasional Pangan dan Gizi VII: Ketahanan Pangan dan Gizi di Era Otonomi Daerah dan Globalisasi. Jakarta (ID): WKNPG.
Hilal, Engelhardt. 2007. Characterisation of white tea – comparison to green and black tea. Journal of Consumer Protection and Food Safety. 2: 414 – 421. Imai K, Nakachi K. 1995. Cross sectional study of effects of drinking green tea on
cardiovascular and liver diseases. BMJ. 310: 693–696.
Kelly G. 2002. The interaction of cigarette smoking and antioxidant part I: diet and caroteniods. Alternative Medicine Review. 7:5
Khasanah H. 2013. Hubungan frekuensi merokok dengan status gizi pada anak usia sekolah dasar di RT 07 dan RW 08 Kelurahan Sawah Besar Semarang. [skripsi]. Semarang (ID): Universitas Muhammadiyah Semarang.
Khosravi HM, Zeinab Ahadi, Marziyeh FT. 2014. The effect of green tea versus sour tea on insulin resistance. lipids profiles and oxidative stress in patients with type 2 diabetes mellitus:a randomized clinical trial. IJMS. 39:5.
Kim HS, Quon MJ, Kim J. 2014. New insights into mechanism of polyphenols beyond antioxidant properrties; lessson from green tea polyphenols, epigallocatechin 3-gallate. Redox Biology. 2:187-195.
Kim W, Jeong MH, Cho SH, Yun JH, Chae HJ, Ahn YK, Lee MC, Cheng X. Kondo T, Murohara T et al. 2006. Effect of green tea consumption on endothelial function and circulating endothelial progenitor cells in chronic smokers. Circ. J. 70: 1052–1057.
Komes D, Horzic D, Belšcak A, Kovacevic GK, Vulic I. 2010. Green tea preparation and its influence on the content of bioactive compounds. Food Research International 43:167-176
Koutelidakis AE, Argyri K, Serafini M, Proestos C, Komaitis M, Pecorari M, Kapsokefalou M. 2009. Green tea, white tea, and pelargonium purpureum
44
increase the antioxidant capacity of plasma and some organs in mice.
Nutrition. 25(4): 453-458.
Kurku H, Kacmaz M, Kisa U, Dogan O, Caglayan O. 2015. Acute and cronic impact of smoking on salivary and serum total antioxidant capacity. J Pak Med Assoc. 65(2): 164-169.
Kusano C, Bucalen F. 2008. Total antioksidan capacity: a biomarker in biomedical and nutritional studies. Journal of Cell and Molecular Biology.
7(1):1-15.
Lee IP, Kim YH, Kang MH, Roberts C, Shim JS, Roh JK. 1997. Chemopreventive effect of green tea (camellia sinensis) against cigarette smoke-induced mutations (SCE) in Human. J Cell Biochem Suppl. 27:68-75 Lim DY. 2005. Comparison of green tea extract and epigallocatechin gallate on secretion of catecholamines from the rabbit adrenal medulla. Arch Pharm Res. 28(8):914-922.
Marangon KB, Herbeth E, Leconte AP, Dauphin P, Groiler P, Chancerelle Y, Artur Y, Siest G. 1998. Diet. antioxidant atatus and smoking habits in Franch Men. Am J Clin Nutr. 67:231-237.
McKay DL, Blumberg. 2002. The role of tea in human health: an update. Journal of the American College of Nutrition. 21(1): 1–13.
Meenakshisundaram R, Rajendiran C, Thirumalaikolundusubramaniann P. 2010. Lipid and lipoprotein profiles among middle aged male smokers: a study from southern India. Tobacco Induced Disease. 8:1-5.
Miller NJ, Rice-Evans, Davies MJ, Gopinathan V, Milner A. 1993. A novel method for measuring antioxidant capacity and its application to monitoring the antioxidant status in premature neonates. Clin Sci. 84:407-412.
Murakami T, Ohsato K. 2003. Dietary green tea intake preserves and improves arterial compliance and endothelial function. J. Am. Coll. Cardio. 41: 271. Muthkumaran S, Sdheer AR, Menon Vp, Nalini H. 2008. Protective effect of
quercetin on nicotine induced prooxidant and antioxidant imbalance and DNA damage in wistar rat. Toxicology. 13(5):217-224.
Nagaya N, Yamamoto H, Uematsu M, Itoh T, Nakagawa K. 2004. Green tea reverses endothelial dysfunction in healthy smokers. Heart. 90: 1485–1486. Neki NS. 2002. Lipid profile in chronic smokers-a clinical study. JIACM.
3(1):51-4.
Onyesom I, Osioma E, Ighodayenowho OK. 2012. Serum antioxidant capacity of some nigerian cigarette smokers. JPBM. 18(14):1-2.
[PERKENI] Perkumpulan Endokrinologi Indonesia. 2011. Konsensus Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 di Indonesia. Jakarta (ID): Perkeni.
[PPTK] Pusat Penelitian Teh dan Kina. 2006. Sustainable Tea. Prosiding Pertemuan Teknis Industri Teh Berkelanjutan. Wisata Agro Gunung Mas PTPN VIII Bogor. 12-13 September. Bogor.
Princen HM, van D, Buytenhek R, Blonk C, Tijburg LB et al. 1998. No effect of consumption of green and black tea on plasma lipid and antioxidant levels and on LDL-C oxidation in smokers. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18: 833–841.
45 Prior R, Xianli Wu, Karen S. 2005. Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements. J. Agric. Food Chem. 53: 4290-4302.
Rayati DJ, Wahyu H. 2009. More than A Cup of Tea. Bandung (ID) : PPTK. Rifai N, Warnick G, McNamara JR. 1992. Measurements of
Low-Density-Lipoprotein Cholesterol in Serum: a Status Report. ClinChem. 38(1).150-60. Rohdiana D. 2011. Teh Ini Menyehatkan : Telaah Ilmiah Populer. Bandung (ID) :
Penerbit Alfabeta.
Rohdiana D, Arief DZ, Soemantri M. 2013. Aktivitas penangkapan radikal bebas DPPH (1.1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl) oleh teh putih berdasarkan suhu dan lama penyeduhan. Jurnal Penelitian Teh dan Kina. 16:1.
Rosiana DI. 2012. Hubungan status merokok, aktivitas fisik, asupan zat gizi, dan konsumsi alkohol dengan IMT pada mahasiswa fakultas teknik universitas Indonesia tahun 2012. [skripsi]. Jakarta (ID): Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Indonesia.
Serafini M, Laranjinha JA, Almeida LM, Maiani G. 2000. Inhibition of human LDL-C lipid peroxidation by phenol-rich beverages and their impact on plasma total antioxidant capacity in humans. J. Nutr. Biochem. 11: 585–590. Shimamura T, Zho W, Hu Z. 2007. Mechanism of action and potential for use of tea catechine as an anti-infective. Anti-infective Agent in Medical Chemistry. 6(1):57-62.
Sitepoe M. 2000a. Kekhususan Rokok Indonesia. Jakarta (ID) : PT. Gramedia. . 2000b. Usaha Mencegah Bahaya Merokok. Cetakan 3. Jakarta (ID) :
PT Gramedia Widiasarana Indonesia.
Sohle J, Knott A, Holtzmann U, Siegner R, Gronniger E, Schepky A, Gallinat S,
Wenck H, Stab F, Winnefeld M. 2009. White tea extract induces lipolytic activity and inhibits adipogenesis in human subcutaneous (pre)-adipocytes.
Nutrition & Metabolism . 6:20.
Sudheer AR, Kalpana C, Srinivasan M, Menon VP. 2005. Ferulic acid mudulateds altered lipids profile and prooxidant/antioxidant status in circulation during nicotine-induced toxicity: a dose dependent study. Toxicol Mech Method. 15:375-381.
Sujayanto G. 2008. Khasiat Teh Untuk Kesehatan dan Kecantikan. Flona Serial Oktober (I): hal. 34-38.
Sung H, Min WK, Lee W, Chun S, Park H, Lee YW, Jang S, Lee DH. 2005. The effects of green tea ingestion over 4 weeks on atherosclerotic markers. Ann. Clin. Biochem. 42: 292–297.
Thielecke F, Boschmann M. 2009. The potential role of green tea catechins in the prevention of metabolic sindrom- a review. Phytochemistry.(1): 1-14.
Tsuneki H, Ishizuka M, Terasawa M, Wu J-B, Sasaoka T, Kimura I. 2004. Effect of green tea on blood glucose levels and serum proteomic patterns in diabetic (db/db) mice and on glucose metabolism in healthy humans. BMC Pharmacology . 4:18.
Venditti E, Bacchetti T, Tiano L, Carloni P, Greci L, Daminani E. 2010. Hot vs. cold water steeping of different teas: Do they affect antioxidant activity?.
Food Chem. 119:1597-1604.
Watson TDG, Butterwick RF, McConnell M, Markwell PJ. 1995. Development of method for analyzing plasma lipoprotein concentrations and associated
46
enzyme activities and their use to measure the effects of pregnancy and lactation in cat. American Journal of Veterinary Research. 56: 289−296.
Wang CT, Chang HH, Hsiao CH, Lee MJ, Ku Hc, Kao YH. 2009. The effect of green tea (-)epigallocatechin-3-gallate on reactive oxygen species in 3T3-Li preadipocytes and adipocytes depend on the glutathione and 67 kDa laminin receptor pathways. Mol Nutr Food Res. 53(3): 349-60.
[WHO] World Health Organization. 2003. Joint WHO/FAO Expert Consultation on Diet. Nutrition. and Prevention of Chronic Diseases. Draft 28 March 2002. Geneva (FR). http://www.who.int/world-health-day/q_and_a.en.shtml [10 Oktober 2014]
____. 2004. Human energy requirements : principles and definitions. Report of Joint FAO/WHO/UNU Expert Consultation. Food and Agriculture Organization of the United Nations (GB). 2004. http://www.fao.org/docrep [17 Agustus 2014].
Yang YC, Lu FH, Wu JS, Wu CH, Chang CJ. 2004. The protective effect of habitual tea consumption on hypertension. Arch Intern Med. 164: 1534–
1540.
Yildiz D. 2004. Nicotine, its metabolism and an overview of its biological effects.
Toxicon. 43:629-632.
Yunitasari L. 2010. Quality control pengolahan teh hitam di unit Perkebunan Tambi, PT. Perkebunan Tambi Wonosobo. [tugas akhir]. Surakarta (ID): UNS.
Zang M, Xu S, Karlene A, Zucallo A, Hou X, Jiang B, Wierzbicki M, Verbeuren TJ, Cohen RA. 2006. Polyphenols stimulate AMP-actived protein kinase, lower lipid, and inhibits accelerated atherosclerosis in diabetic LDL-C receptor- deficient mice. Diabetes. 55:2180-2191.
Zanzer YC. 2012. Studi pengaruh variasi pemberian kadar teh hijau dalam mengontrol level glukosa plasma darah post prandial pada subjek dewasa muda sehat. [Skripsi]. Bogor (ID) : IPB.
Zhen M, Wang O, Huang X, Cao L, Chen X, Sun K, Liu Y, Li w, Zhang L. 2007. Green tea polyphenol epigallocatechin-3-gallate inhibits oxidative damage and preventive effect on carbon tetracloride induced hepatic fibrosis. J Nutr Biosch. 18:795-805.
47
LAMPIRAN
Lampiran 1 Studi sebelumnya terkait status oksidatif dan profil lipid yang pernah dilakukan menggunakan teh hijau
Peneliti Desain Studi
Subjek Dosis intervensi Durasi Intervensi Hasil Imai dan Nakachi (1995) Cross-sectional study 1371 laki-laki
Konsumsi teh hijau 1. < 3 gelas/hr 2. 4-9 gelas/hr 3. >10 gelas/hr Habitual intake Terjadi penurunan trigliserida dan kolesterol yang signifikan. Banyaknya konsumsi teh/hr berhubungan dengan penurunan prevalensi penyakit jantung (>10 gelas/hr= 26%, 4-9 gelas/hr = 29%, < 3 gelas/hr= 39.8%) Lee at al. (1997) Clinical trial 52 subjek. 3 gelas/hr Kelompok 1 : non-smokers; kelompok 2 : smokers; kelompok 3 :
smokers dan minum teh hijau; dan kelompok 4
smoker/coffee drinkers
6 bulan Terjadi penurunan kerusakan oksidatif pada DNA, serta memiliki resiko lebih rendah pada pembentukan karsinogen. Princen et al. (1998) Randomi zed single blind, placebo-controlle d paralel 32 laki-laki dan 32 perempuan sehat
1. 6 gelas teh hijau (3 gram/ 150 ml/gelas) 2. kapsul dengan 309 mg EGCG/kapsul (6 x 4 kpsl/hr)
4 minggu Terdapat perbedaan pada profil lipid namun tidak signifikan Serafini et al. (2000) Clinical trial 5 orang sehat tidak merokok 300 ml air (kontrol), 300 ml teh hijau (6 gram
teh hijau)
Single dose Terjadi peningkatan yang signifikan pada kapasitas antioksidan total plasma. Teh hijau siginifikan menurunkan oksidasi LDL. Murakami dan Ohsato (2003) Open design 150 orang Jepang berusia > 60 tahun 1. >800 ml teh hijau / hr (n=77) 2. <800 ml teh hijau / hr (n=73)
4 bulan Konsumsi teh hijau melindungi orang Jepang dari beberapa faktor resiko yang mengurangi atero-trombogenic, melindungi fungsi endotelial dan kemungkinan berkontribusi pada rendahnya kasus kardiovaskular di Jepang. Intervensi signifikan menurunkan kolesterol dan melancarkan peredaran darah Nagaya et al. (2004) Randomi zed cross-over
20 perokok 400 ml teh hijau dengan 247 mg
EGCG
Single dose Intervensi tidak berpengaruh signifikan pada glukosa darah, profil lipid, tekanan darah, detak jantung namun signifikan meningkatkan
48
Lampiran 1 Studi sebelumnya terkait status oksidatif dan profil lipid yang pernah dilakukan menggunakan teh hijau
Peneliti Desain Studi
Subjek Dosis intervensi Durasi Intervensi
Hasil
aliran darah. Konsumsi teh hijau melindungi fungsi endotelial pada perokok sehat karena efek antioksidan pada teh tersebut. Sano et al. (2004) Case-control 109 pasien PJK, 97 pasien tanpa PJK 1. kelompok kasus (case): konsumsi teh hijau 4 gelas/hr 2. kelompok kontrol (control): konsumsi teh hijau 6 gelas/hr Habitual intake
Konsumsi teh signifikan lebih banyak pada kelompok kontrol (tanpa PJK). Terdapat hubungan negatif antara banyaknya konsumsi teh dengan kejadian PJK (berbanding terbalik). Semakin banyak konsumsi teh maka insiden PJK rendah (OR=0.84 CI 95% 0.76-0.91). Konsumsi teh hijau merupakan faktor protektif PJK. Sung et al. (2005) Clinical trial 12 subjek sehat 600 ml teh hijau/hr (5.2 gram)
4 minggu Level oksidasi LDL dan profil lipid menurun meskipun tidak signifikan. Kim et al. (2006) Open design 20 perokok muda
8 gram bubuk teh hijau/hr (EGCG=3.2%)
2 minggu Konsumsi teh hijau meningkatkan peningkatan antioksidan plasma. Teh hijau efektif untuk
mencegah penyakit jantung pada perokok berat. Coimbra et al. (2006) Clinical trial 34 subjek sehat
Teh hijau 1 liter/hr 4 minggu Terjadi peningkatan TAC dan penurunan MDA
Lampiran 1 Studi sebelumnya terkait status oksidatif dan profil lipid yang pernah dilakukan menggunakan teh hijau (Lanjutan)
49 Lampiran 2 Ethical clearence
50
Lampiran 3 Prosedur Analisis TAC (Miller et al. 1993/Randox Ltd)
Metode ini berdasarkan pembentukan ABTS®+ kation. Prinsip pengukurannya adalah pembentukan ABTS®+ dari ABTS® (2,2’ -Azino-di-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonat]) yang diinkubasi dengan enzim peroksidase (metmyoglobin) dan H2O2. Kation ABTS®+. Pada metode ini, spektrofotometer digunakan untuk mengukur tingkat kehilangan warna ketika antioksidan ditambahkan ke dalam kromofor biru-hijau ABTS®. Aktivitas antioksidan senyawa karotenoid, fenolik, dan beberapa plasma antioksidan dapat ditentukan berdasarkan hilangnya warna ABTS®. Pengukuran dilakukan dengan cara menghitung tingkat penurunan radikal kation sebagai presentase penghambatan absorbsi pada panjang gelombang 600 nm selama 6 menit. Absorbansi campuran reaksi antara ABTS® dan antioksidan nantinya akan dibandingkan dengan trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksilik acid) dan hasilnya dinyatakan dalam bentuk TEAC. Trolox merupakan analog vitamin E yang larut air dan dapat digunakan sebagai standar antioksidan. Prinsip perubahan reaksi ABTS® pada pengukuran status antioksidan total metode TEAC adalah sebagai berikut,
HX-FeIII + H2O2 X- [FeIV
= 0] + H2O ABTS®+X [FeIV = 0] ABTS®+
+ HX - FeIII Keterangan :
HX-FeIII : Metmyoglobin X - [FeIV= 0] : Ferrylmyoglobin
ABTS® : 2,2'-Azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulphonate] ABTS® : trademark dari Boehringer Mannheim.
Pereaksi yang dibutuhkan dan komposisinya
Pereaksi Komposisi
Buffer (R1) Chromogen (R2) Substrate(R3) Standard
Phosphate Buffered Saline 80 mmol/l. pH 7.4 Metmyoglobin 6.1 µmol/l
ABTS® 610 µmol/l
Hydrogen peroxide (in stabilised form) 250 µmol/l 6-hydroxy-2.5.7.8-tetramethylchroman
-2-carboxylic acid
Prosedur
Pipetkan ke dalam kuvet:
Blanko Standar Sampel
DDH2O 20 µl - -
Standar - 20 µl -
Sampel - - 20 µl
Chromogen (R2) 1 ml 1 ml 1 ml
Ket : DDH2O = aqua bidestillata/ ultrapure water
20 µl serum darah diambil dari plasma
51 Lampiran 3 Prosedur Analisis TAC (Miller et al. 1993/Randox Ltd) (Lanjutan)
Pipetkan ke dalam kuvet:
Blanko Standar Sampel
Substrat (R3) 200 µl 200 µl 200 µl
Perhitungan :
Faktor = Konsentrasi standar ∆ A Blanko−∆ A Standar
m mol/L= Faktor x (∆ A blanko-(∆ A sampel)
nilai normal TAC = 1.23-2.00 m mol/L
Campurkan dengan baik, inkubasi pada suhu 370C dan baca absorban pada λ = 600 nm (A1),
sisihkan
baca absorban pada λ = 600 nm (A2) selama 3 menit
A2 - A1 = ∆A sample/standard/blank
52
Lampiran 4 Prosedur analisis profil lipid plasma 1. Trigliserida (TG) (Watson et al. 1995)
Analisis kadar trigliserida menggunakan metode GPO-PAP. Prinsipnya adalah pengukuran trigliserida setelah mengalami pemecahan secara enzimatik oleh lipoproteinlipase. Dibuat larutan blanko dengan menggunakan 1000 µl reagen 1 (TG). Standar dibuat dengan penambahan 1000 µ l reagen 1 (TG) dengan 10 µ l standar. Dan untuk pembuatan sample dicampurkan 1000 µ l reagen dengan 10 µl serum. Diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20-25oC. Dibaca absorbansinya pada λ 500 nm.
2. Kolesterol total (TC) (Watson et al.1995)
Pada penetapan kadar kolesterol total, digunakan metode CHOD-PAP. Prinsip metode ini adalah menggunakan enzim kolesterol oksidase (CHOD) dan kolesterol esterase serta menggunakan phenol 4-aminoantipirin untuk membentuk senyawa berwarna yang dapat dideteksi dengan spektrofotometer. Dibuat larutan blanko dengan 1000 µ l reagen CHOD-PAP. Dibuat larutan standard dengan 1000 µ l reagen dengan 10 µ l standard. Dibuat larutan sample dengan 1000 µ l reagen dan 10 µ l sample (serum yang telah disetrifuge). Diinkubasi selama 5 menit pada 37oC. Dibaca absorbansinya pada λ 500 nm, tidak boleh lebih dari 60 menit.
3. HDL-C Precipitant
Kadar HDL-C diukur dengan metode tidak langsung atau metode presipitasi yang menggunakan reagen HDL presipitat dan reagen kolesterol. Prinsip metode ini adalah HDL diendapkan dan setelah disentrifugsi. Disiapkan 3 tabung reaksi untuk presipitasi, blanko dan sampel, kemudian dipipet 250 µl sampel lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan reagen presipitasi HDL sebanyak 500 µl, setelah itu dicampur dan dibiarkan selama 10 menit pada
suhu 37˚C lalu disentrifus dengan kecepatan 10000 rpm selama 2 menit.
Kemudian diambil supernatan sebanyak 100 µl lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang lain kemudian ditambahkan reagen kolesterol sebanyak 1000 µ l
kemudian campur lalu diinkubasi pada suhu 37˚C selama 10 menit lalu standar
dan sampel terhadap blanko reagen dibaca pada photometer dalam waktu 6 menit dengan panjang gelombang 500 nm.
4. LDL-C perhitungan Friedwald
LDL-C dihitung menggunakan rumus Friedwald. Penggunaan metode ini diperbolehkan bila kadar trigliserida <400 mg/d. Perhitungan tersebut menggunakan rumus sebagai berikut (Rifai et al. 1992),
53 Lampiran 5 Nilai PAR (Physical Activity Rate) untuk berbagai aktivitas pada