BAB I. PENDAHULUAN
A. Hasil Penelitian
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan di Laboratorium Biokimia Jurusan Pendidikan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam UNY, diperoleh hasil sebagai berikut:
1. Penentuan Kadar Protein Terlarut dengan Metode Lowry a. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan dengan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang 650 - 750 nm. Sampel yang digunakan untuk penentuan panjang gelombang maksimum adalah kasein 1 mg/mL. Panjang gelombang yang dipilih adalah 720 nm dimana panjang gelombang tersebut memberikan absorbansi terbesar, yaitu 1,096 pada rentang panjang gelombang 650 - 750 nm. Data hasil absorbansi penentuan panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada Lampiran 6.
b. Penentuan Kurva Standar Protein Kasein
Penentuan kurva standar protein kasein dilakukan dengan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang maksimum, yaitu 720 nm. Protein yang digunakan untuk penentuan kurva standar protein adalah kasein 0,1; 0,2; 03; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; dan 1 mg/mL. Variasi konsentrasi substrat kasein diperoleh dengan pengenceran larutan induk kasein 1 mg/mL menggunakan larutan buffer fosfat pH 8.
Data hasil absorbansi penentuan kurva standar protein dapat dilihat pada Lampiran 6. Berdasarkan variasi konsentrasi kasein dan absorbansi yang dihasil-
32
kan dapat dibuat grafik hubungan antara konsentrasi kasein dan absorbansi, sehingga diperoleh persamaan regresi linear (y = ax + b), yaitu y = 1,1042x + 0,0092 dengan nilai r2 sebesar 0, 9958 dan nilai r sebesar 0, 9979.
2. Penentuan Kadar Protein Tripsin
Pada penentuan kadar protein tripsin digunakan panjang gelombang 720 nm. Enzim tripsin dibuat dengan cara melarutkan padatan tripsin ke dalam larutan buffer pH 8. Absorbansi rata-rata yang diperoleh dari pengukuran kadar protein enzim tripsin adalah 0, 091. Absorbansi yang diperoleh dapat digunakan untuk penentuan kadar protein dalam tripsin dengan memasukkannya ke dalam persamaan garis linear kurva baku protein y = 1,1042x + 0,0092, sehingga diperoleh kadar protein enzim tripsin sebesar 0,074 mg/mL. Perhitungan kadar protein dalam tripsin dapat dilihat pada Lampiran 7.
3. Penentuan Aktivitas Enzim Tripsin dengan Metode Anson a. Penentuan pH Optimum
Pada penentuan pH optimum dilakukan dengan pengukuran absorbansi dari variasi pH 7, 8, dan 9 pada panjang gelombang 650 nm. Penentuan aktivitas enzim tripsin dilakukan pada suhu 35°C dan waktu inkubasi 20 menit. Penentuan pH optimum enzim tripsin dilakukan sebanyak tiga kali dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Penentuan pH Optimum untuk Aktivitas Enzim Tripsin
Variasi pH Aktivitas Enzim Tripsin (
pada suhu 35°C
pH 7 0,00218
pH 8 0,00473
33
Penetuan pH optimum ditentukan berdasarkan data aktivitas enzim tripsin yang paling besar. Berdasarkan data dari Tabel 1, pH 8 memiliki aktivitas terbesar, sehingga merupakan pH optimum. Adapun perhitungan aktivitas enzim tripsin yang dapat dilihat pada Lampiran 8.
b. Penentuan Suhu Optimum
Pada penentuan suhu optimum dilakukan dengan pengukuran absorbansi dari variasi suhu 31°C; 33°C; 35°C; 37°C; dan 39°C. Penentuan aktivitas enzim tripsin dari variasi suhu optimum dilakukan pada pH optimum, yaitu 8 dan waktu inkubasi 20 menit. Penentuan suhu optimum enzim tripsin dilakukan sebanyak tiga kali dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Penentuan Suhu Optimum untuk Aktivitas Enzim Tripsin
Variasi Suhu Aktivitas Enzim Tripsin ( 31°C 0,00283 33°C 0,00433 35°C 0,00457 37°C 0,00478 39°C 0,00337
Penentuan suhu optimum ditentukan berdasarkan data aktivitas enzim tripsin yang paling besar. Berdasarkan Tabel 2, suhu 37°C memiliki aktivitas terbesar, sehingga merupakan suhu optimum. Adapun perhitungan aktivitas enzim tripsin yang dapat dilihat pada Lampiran 9.
c. Penentuan Waktu Inkubasi Optimum
Pada penentuan waktu optimum dilakukan dengan pengukuran absorbansi dari variasi waktu inkubasi 10, 15, 20, 25, dan 30 menit. Penentuan aktivitas enzim tripsin dari variasi waktu optimum dilakukan pada pH dan suhu optimum
34
yaitu pH 8 dan suhu 37°C. Penentuan waktu inkubasi optimum enzim tripsin dilakukan sebanyak tiga kali dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjuk- kan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Aktivitas Enzim Tripsin dengan Variasi Waktu Inkubasi
Variasi Waktu Inkubasi Aktivitas Enzim Tripsin ( pada suhu 37°C 10 menit 0,00297 15 menit 0,00469 20 menit 0,00477 25 menit 0,00401 30 menit 0,00232
Penentuan waktu inkubasi optimum ditentukan berdasarkan data aktivitas enzim tripsin yang paling besar. Berdasarkan Tabel 3, waktu inkubasi 20 menit memiliki aktivitas terbesar, sehingga merupakan waktu inkubasi optimum. Adapun perhitungan aktivitas enzim tripsin yang dapat dilihat pada Lampiran 10.
d. Penentuan Konsentrasi Substrat Maksimum
Pada penentuan konsentrasi substrat maksimum dilakukan dengan pengu- kuran absorbansi dari variasi konsentrasi substrat 2, 4, 6, 8, dan 10 mg/mL. Penentuan aktivitas enzim tripsin dari variasi konsentrasi substrat maksimum dilakukan pada pH, suhu, dan waktu inkubasi optimum, yaitu pH 8, suhu 37°C, dan waktu inkubasi 20 menit. Penentuan konsentrasi substrat maksimum enzim tripsin dilakukan sebanyak tiga kali dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 4.
Penentuan konsentrasi substrat maksimum ditentukan berdasarkan data aktivitas enzim tripsin yang paling besar. Berdasarkan Tabel 4, konsentrasi substrat 10 mg/mL memiliki aktivitas terbesar, sehingga merupakan konsentrasi substrat
35
maksimum. Adapun perhitungan aktivitas enzim tripsin yang dapat dilihat pada Lampiran 11.
Tabel 4. Hasil Aktivitas Enzim Tripsin dengan Variasi Konsentrasi Substrat
Variasi Konsentrasi Substrat Aktivitas Enzim Tripsin ( pada suhu 37°C 2 mg/mL 0,00133 4 mg/mL 0,00192 6 mg/mL 0,00252 8 mg/mL 0,00293 10 mg/mL 0,00295
e. Penentuan Aktivitas Enzim Tripsin pada Kondisi Optimum
Penentuan aktivitas enzim tripsin dilakukan substrat kasein pada pH, suhu, lama waktu, dan konsentrasi tertentu yaitu kondisi optimum yang sudah dilakukan pada prosedur sebelumnya. Kondisi optimum yang digunakan yaitu pH 8, suhu 37°C, dan waktu inkubasi 20 menit dengan konsentrasi substrat kasein sebesar 10 mg/mL untuk menentukan aktivitas enzim tripsin. Penentuan aktivitas enzim tripsin pada kondisi optimum dilakukan sebanyak lima kali dengan hasil aktivitas enzim tripsin yang ditunjukkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Aktivitas Enzim Tripsin pada Kondisi Optimum
Pengukuran ke - Aktivitas Enzim Tripsin ( pada suhu 37°C 1 0,00125 2 0,00115 3 0,00140 4 0,00250 5 0,00135 Rerata 0,00153
Berdasarkan data Tabel 5, dapat dihitung aktivitas rata-rata enzim tripsin pada kondisi optimum dari kelima sampel yang bernilai 0,00153 mg/mL per menit
36
pada 37°C. Perhitungan aktivitas enzim tripsin pada kondisi optimum dapat dilihat pada Lampiran 12.
f. Penentuan Aktivitas Enzim Tripsin terhadap Penambahan ZnSO4 dengan Metode Anson Termodifikasi
Penentuan aktivitas enzim tripsin terhadap penambahan ZnSO4 dengan metode Anson modifikasi dilakukan pada kondisi optimum yaitu pH 8, suhu 37°C, waktu inkubasi 20 menit, dan konsentrasi substrat kasein 10mg/mL. Penambahan ion logam Zn2+ dalam bentuk ZnSO4 dilakukan dengan variasi
konsentrasi 0,0010 M; 0,0015 M; 0,0020 M; 0,0025 M; dan 0,0030 M.
Senyawa ZnSO4 berbagai konsentrasi yang digunakan untuk penentuan
aktivitas enzim tripsin berasal dari kristal zink sulfat yang dilarutkan dalam akuades menjadi larutan induk ZnSO4 0,01 M. Larutan induk ZnSO4 0,01 M diencerkan menjadi berbagai konsentrasi.
Penambahan senyawa ZnSO4 berbagai konsentrasi untuk penentuan aktivitas enzim tripsin dilakukan dengan mencampurkan senyawa ZnSO4 dan enzim tripsin yang selanjutnya ditambahkan pada substrat kasein. Penentuan aktivitas enzim tripsin dengan penambahan senyawa ZnSO4 dilakukan sebanyak tiga kali dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 6.
Tabel 6. Hasil Penentuan Aktivitas Enzim Tripsin dengan Penambahan Senyawa ZnSO4
Konsentrasi Senyawa ZnSO4 Aktivitas Enzim Tripsin ( pada suhu 37°C 0.0010 M 0,00157 0.0015 M 0,00158 0.0020 M 0,00165 0.0025 M 0,00158 0.0030 M 0,00163
37
Berdasarkan Tabel 6, aktivitas enzim tripsin dengan penambahan berbagai konsentrasi ZnSO4 memiliki aktivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan aktivitas enzim tripsin tanpa penambahan senyawa ZnSO4 pada kondisi optimum.
Hal ini menunjukkan bahwa penambahan senyawa ZnSO4 dengan konsentrasi 0,0010 M; 0,0015 M; 0,0020 M; 0,0025 M; dan 0,0030 M dapat meningkatkan aktivitas enzim tripsin, sehingga senyawa ZnSO4 bertindak sebagai aktivator.
Perhitungan aktivitas enzim tripsin dengan penambahan berbagai konsentrasi ZnSO4 dapat dilihat pada Lampiran 13.
