Isolasi oligosakarida madu lokal dan analisis aktivitas prebiotiknya

(1)

(2)

Jurnal Gizi dan Pangan

Penanggung Jawab

Dewan Editor Ketua Anggota

Redaktur Pelaksana

Penerbitan

Langganan

Alamat Redaksi

ISSN : 1978-1059

1. Ketua Umum PERGIZI PANGAN Indonesia 2. Ketua Departemen Gizi Masyarakat, FEMA, IPB

Prof. Dr. Ir. Ali Khomsan, MS (pERGIZI PANGAN/IPB) 1. Prof. Dr. dr. Razak Thaha (PERGIZI PANGAN/UNHAS) 2. Prof. Dr. Ir. Giyatmi, M.Si (PERGIZI PANGAN/USAHID) 3. Dr. Ir. Hadi Riyadi, MS (lPB)

4. Dr. Drh. Clara M Kusharto, M.Sc (pokja PGKM IPB) 5. Dr. Ir. Ahmad Sulaeman, MS (pERGIZI PANGAN/IPB) 6. Dr. Ir. Avita Usfar, M.Sc (pERGIZI PANGAN)

7. Dr. dr. Masrul (pERGIZI PANGAN/UNAND) 8. Dr. Minarto, MPS (PERGIZI PANGAN/DEPKES)

9. Dr. Ir. Handewi P Saliem, MS (PERGIZI PANGAN/DEPTAN) 10. dr. Samuel Oetoro, MS, SpGK (pERGIZI PANGAN/UI)

Leily Amalia Furkon, STP, MSi MuhammadAries, SP

Katrin Roosita, SP, M.Si

tiga kali setahun (Maret, Juli

h

November)

Rp. 100.000, Itahun; (tidak termasuk ongkos kirim)

(Tidak langganan Rp. 40.000,

I

edisi, tidak termasuk ongkos kirim) Rek. NO.0116356117

A.n. Ali Khomsan

Bank BNI DarmagaBogor

Sekretariat PERGIZI PANGAN Indonesia d

I

a Departemen Gizi Masyarakat Fakultas Ekologi Manusia (FEMA), IPB Kampus Darmaga Bogor

Telp : (0251)621258ext. 209 F a x : (0251)622276

Email: jurnalgp@yanoo.co.id

(3)

disertai biayaadministrasi Rp 100.000,-9

KATA

PENGANTAR

Jurl1al Gill da:l Panga" fJGP} ec'si Novecnber 2011 IIi sangat Istlmewa, karena akan rncn)dd' terak"ir tarnpililn cover yal'g telah digunakan tahun 2006. t/,uldi edis! Maret 2012, JGP akan tam;JiI den'lan wajar' balu terrnilsuk cover, pedoman penullsan, dan susuniln

Pcnampilali baru yang diirimp dengan semangat baru, perubahan rnanajernen dan strilte'li pengelolaan tersebut dlharapkan dapat rncmbawa JGP rnenjadl jurnal nasional yang terakreditasl.

P:lciil cdlsi r<ovember 2011 Inl JGP menYilJikan beragam artikel hasil·hasil penelitlan meliputl illtervcnsi , g'll masyarakat, ketal'anan pangan, dan preblotik pangan toka!. Studi intervensi zat glZI rnlkro rldakukan tcri1:1dap anak ,ekolah (SMP) dan tenaga kerja wanita. Suatll studi yang mengha)i tePtang pemprUh pember'an zat gizi mikro dan pendidikan gizi telhildap

gizi, penlcnuila!l zat diln pcmerut:an status bcsi telah dJlakukan. Penelitian lilln yang Juga ｲｬｾｴＺｮｧｫ｡Ｉｬ＠ pengaruh suplernentasi besl telah dllakukan pada kelompok peker)a wanita. Hasil peneliUan ini 1']enull)uhkan bahwa supiemciltasi yang dilakuka:l rnalTlpu lTleninghatka'l status besi ke!ornpok Silsaran.

Stud] asupan (,man pada kclolTlpok arak USia sekolah dilakukiln cJj Kota Bogor. SUl11ber caircln tubuh terutarna berasill dal i air putlh adalah susu. Tcrdapat kece:lderungilr: preferensi anakanah Icbln rnenyukd: ｬＱＱｩｮｵＺｲｾｮ＠ yimg ":)erasa" d:bandlngki1fl air PUti'l. Berdasarkan perlilal,m sucyekt If, tcmyat') f11aslh bililyak dlJulr,uai anak·ililak yang rnendcr;ta clehicJrils: r:ngan. ｍ･ｩｔｬ＼ｬｓｵｫｾｩｬｮ＠ rninUI11i1n (air putihfteh/susu) dalam De".i,l lT1akanan dari rurnah maupun alokasi uang pjan sang)t pentlng cJilaKukan dala:n r Ijagil cwak dgJr terhindar dari dehrdrasi,

DeSdln stllch as;roeholog; tel,,11 c:Jiilkukarl untuk me:'gevaludsi kontribllsi pangall su;nbel karbohielrat liem;,l11 unit (Ol:toh wilayah kabupaten, Penyulnbang tercesal ,leJalah beras, narl:urn kOlltribuSlf1ya lebl'l c,eelikit untuk rnasyarahat eli wrlayah perkotilan dibandingkan eli pedesaan, KOnSlIrTlSl beras tersebut leb:h rendah dibandlrlgkan dC'I1':;an illlilllSIS dan pubUkasi yang Ini dilclkllkCln oleh pe;nerrr1L1h, Surnber harbohldrat lilinnya ad;llah pgung, singkong dan ubi ]ali1r.

Penelltlan lain yang dlmuat diliai11 JlIrclal dan Pililgiln edis! t,jovember 2011 adalah tentang Pe(Jlakli Hldup Bersih dan Sehat (PHBS) selta perilahu glZl seirnbJllg, kallan darnpak aneka program pernberdilyaan masayal'akat terhadap ketahilnan pilnga:1 kcluilrga, dan penelitian rnengenai oligosJkarJda l11adu lokal serta anallsis aktivitas prcb!otiknya.

Redaksi

r'ah

tJlis

(4)

JURNAL GIZI DAN PANGAN

(Journal of Nutrition and Food)

Volume 6, No 3, November 2011

DAFTAR lSI

L Pengilruh Pernberlar1 ｚｾｴ＠ Gizi /v\l"ro diln PeCididikap GiZI terhadilp Pengetahuan Glzi, Pemeruhan Zat G'l) diln Status RernaJil Putr;

Ct'silio Meti Dwiriom, R;miJClwoll, Nordinsyoh, Hedi Riyedl, don Oro)ot Morlionto .171

2. Peflingkatan Status diU' Kebugilran Fislk Pekerja Warrta Usia subur

Yoktiworo indr!(Jlll, All KhonJsof] , DocJonQ, Sukondar, Hod; Riyod;, don Rt'ni IUlOido... .178

3. Keblilsailn KOllSlInlSI Minurnan dan Asuparl Callilll pada ａｲｾｩｬｫ＠ USlil Sekolah di Perkotailil

Oodik Briowon, Poromitho ROC/JrTlO. dOll Kortlko .. 186

1. Pcr'ilaku IIIduD Bersill [Jill Sehat (PHBS) seftil Perllaku Gzi Ibu KatannYil Stiltus G:l! dan Keschat,l,l Bdl,ta di K.lbuiJ.lterl I)ojonegoro. JIl\vi1 T:mur

Lindo OWl JOYOlltl, Yektl l1(lrioi; Effendi, cion Dadon,? Sukondor ... 192

5. Filktorfaktor yilng BerpcngiHuh terhadap KonsufTlsi Dangeln SUlllber Kari)ohidrat dl Pedesailn dan Perkotililn

Suei Apriam don Yayuk Eorido Boliwati .. ... 200

6. Ketahanan Pangan Keluilrgil Pcscrta Progr,lm Pemt)crdi1Yilan t.\asYilrZlkilt di

Tin lierowat/, Bosito Gintins Pons S. Asnson. Ojoko Susanto, don Herien Puspltawoti. .. .... 208

7, Isolasi Oligosakarida Madu Lokal dan Analisis Aktlvltas PrcblOtlknya

(5)

Journal Nutrition and Food, 2011, 6(JJ:171177 Jurnal Glzi da" 2011. 6(3): 171·177

PENGARUH PEMBERIAN ZAT MULTI GIZI MIKRO DAN PENDIDIKAN GIZI TERHADAP

PENGETAHUAN GIZI, PEMENUHAN ZAT GIZI DAN STATUS BESI REMAJA PUTRI

(The effect of lr1ulti Micronutrients Supplementation and Nutrition Education on Nutrition Knowledge, Nutrients Ratio and Iron Status of Young Adolescent

Cesilla Meti Dwiriani", Rimbawan', Hardinsyah', Hadi Riyadi', dan Dra]at Martianto' , Departemen Gili Masyarakat, Fakultas Manusia, Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680 •.Alamat korespondensi: Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia, Institut Pertanian

Bogor, 16680. Telp: 0251·8621258; Fax: 02518622276: email: cmetid@yahoo.com

ABSTRACT

This study was aimed to analyze the effect of multi micronutrients (MMN) and nutrition education on nutrition knowledge, mean adequacy ratio (MAR) and iron status of young adolescent girts (YAG). The study was done in three purposively selected junior high schools (JHS) in rural Bogar by implementing a quasi experiment control trial for 112 YAG for 16 weeks: thirty five YAG in the first JIIS as a Mh1N group (SG) were given three times of MMN tablets per week, forty two YAG in the second JHS were given MMN tablet plus nutrition education delivered by trained teacher fortni'5htly called SGP '5roup and thirty five YAG in the third JHS as a control '5roup- The result showed that the increment of nutrition know/edge score as well as !.-1AR of SGP group were significantly than the other two groups. The decrement level of (lib) in SG and SGP groups was lower than in control group, but in the subset data of anemic group, both intervention groups had increased level of Hb. This imply that nutrition education improved nutrition knowledge of YAG, but M}.-1N tablet could not improve Hb level in general and only had effect on YAG suffering from anemia.

Key words: multi-micro nutrients, nutrition education, iron status, adolescent girls

PENDAHULUAN

Anemia merupakan masalah utama yang di]umpai pada rema]a wanita di dunia maupun di IndoneSIa. Depkes RI (2005) me-laporkan prevalensi 26.5 persen remaja wanita 1519 tahun, sementara Permaesih dan Herman (2005) melaporkan 30 persen pada remaja wanita 10·19 tahun. Penelitian terse-rak di wilayah Indonesia menunjuk· kan prevalensi yang bervariasi, yaitu 17.280.2 persen (AngelesAgdeppa et

01.

1997, Depkes RI 2003). Anemia disebabkan tidak hanya oleh kekurangan zat besi, tetapi zat mikro lainnya seperti a5am folat, vitamin A, vitamin C, riboflavin dan vitamin B12 juga berperan dalam terJadinya anemia, karena zat·zat gizi tersebut berperan dalam eritropoiesis (pem-bentukan sel darah merah) dan metabolisme besi (Beard 2000; Allen 2002).

Suplementasi zat besi dan folat dengan penambahan zat gizi mlkro lainnya rema· ja telah dilakukan beberapa peneliti Ahmed, Khan, dan Jackson (2001); Soekarjo et 01. (2004); Jayatissa dan Piyasena (1999); Angeles· Agdeppa et 01. (1997); Dillon (2005); Briawan (2008). Hasilnya menunjukkan penambahan zat

besi dan folat dengan vitamin dan mineral la-innya diantaranya dapat memperbaiki status besi.

Upaya mengatasi masalah disaran· kan dilakukan dengan pendekatan yang lebih berkelanjutan dan mempunyai nilai pengemba· lian ekonorni (economic return) yang relatif tinggi (Worl.d Bank 2006), yaitu melalui inter-vensi pendidikan gizi agar terjadi perubahan perilaku makan sehingga nantinya penurunan prevalensi anemia dapat lebih dicapai. Remaja dapat dikatakan merupakan target ideal pen-dldlkan , karena remaja umumnya bersifat lebih terbuka serta menunjukkan keingintahu· an dan ketertarikan terhadap ide atau penge-tahuan baru.

Peningkatan pengetahuan remaj a yang kemudian diharapkan dapat memperbaiki sikap serta perilaku makan remaja dapat dilakukan melalui sekolah dengan pertim· bangan: 1) remaja menghabiskan sebagian besar waktunya di sekolah dan 2) sekolah nlpmiliki guru Bimbingan dan Konseling (8K) yang berkewajiban memberi bantuan kepada siswa dalam upaya menemukan pribadi, mengenal lingkungan dan merencanakan masa

(6)

Journal of Nutrition and Food, 2011,6(3): 217'224 Jumal Gizi dan 2011,6\31 17·224

ISOlASI OLiGOSAKARIDA MADU lOKAl DAN ANALISIS AKTIVITAS PREBIOTIKNYA

(isolation of Olis;osaccharides Local Honey and Analysis of its Prebiotic Activity)

Umul Karimah . Yogi Nur _" ;, Syamsul Falah', dan Suryani'

DqHrtefT,en Bloklrnla, i'akultas Matematika dan IIlnu PengetahUCln Alam, IPB

;'.iillnat kOiespondensi: Departernen Blckimia, Fakultas Matematlkil da:l ilmu Pengetahuan Alillll, il1St'tut Pertarian Dogor 16680, Telp: 02518323166

ABSTRACT

Toe obJectlVe of this study was to isolate oligosaccharides from local honey of Pu/au ,,'''''JQwa and province of Kalimantan Timur and to analyze its prebiotic activity in vitro, were isolated with activated charcoal adsorption and ethanol treatment. :ileness of this method was evaluated by Thin Chromatography and colorimetry, The

,::ps

were then

a

sample to prebiotic examinatlOn. Honey Sumbawa has . ;';cr _{oUsosaccharides COntent than honey from Kalimantan, Qualitative and quantitative assays}

ＧｾＢＧＬ･､＠ that oligosaccharide isolation method was effective to concentrate the oligosaccharide

t,; high of polymerization but tive for mono, and disaccharides removal. The percentages of hydrolysis of oligosaccharide from Sumbawa and Kalimantan by mimic jUice were 1.78\ and 0.59 Whereas, the hydrolysis wos higher with 11.8n,

ｾＬＧＭＬ｢･ｉｖ｡＠ and ＲＱＮＰＳｾＧｵ＠ Kalimantan prebiotic activity was 0,32, and 0_09

< . ｾ＠ｾｯｮ･ｹ＠ olisosaccharide from Sumbowa and Kalimantan respectively. Honey oligosaccharide <"'1 Surnbawa presented prebiotic activity than inulin as reference (0,11). GC-'" showed

L.

ocidophilus cultured in media added with Sumbawo honey

cocchoride produced lactic OCJd as the metabolite 01

i{ey words: oligosaccharide, local prebiotic

PENDAHULUAN

_probiotlk _{､･ｭｾ｡ｮ＠} _{polen dan madu sebagai} slimber prcblOtik.

Prebiotik merupakan komposisi pangan

Proc1uksi rnadu lokal di Indonesia men ca· :ldak tercerna dan memberikan

keun-115 ton per' tahun dengan daya serap sebe-:on melalui modulasi mikroblOta (FAO

sar ＱＳＧ［ｾ＠ (Sill tonga & Munthe 2009). Apis dor·

. !. Prebiotik mampu menstimulasi pertum·

sota adalah lebah madu yang hidup di hutan :, mikroflora menguntungkan seperti

Lac-Indonesia dan merupakan Ie bah rnadu lokal Ii dan Bifidobacteria. Beberapa laporan

yang paling produktif (Hutagalung 2008), Pene· :: efck prebiotik antara lain efek

litian ilrniah mengenai madu lokal di Indonesia Ｎｾ＠ (Schley & Field 2002), menurunkan Ie·

masih termasuk tentang komponen . :.11cerson & Gilliland 1999) dan kolesterol

oligosakarida madu lokal serta potensinYil

se-1:05 & Jackson 2002), meningkatkan

ab-bagai prebiotik. Penelitian ini bertujuan meng-, lneral (ScholzAhrens et

at.

2007), dan

isolasi oligosakarida rnadu lokal dari lebah Apis kanker (Reddy et 01. 1997). Sumber

dorsato asal Pulau Sumba'Na dan Provinsi : ｾ＠ umumnya merupakan ollgosakarida,

Kalirnantan Tirnur dan menganalisis aktivitas ::rbohidrat dengan panjang rantai 3

prebiotiknya secara in vitro.

1) unit (Roberfroid 2007).

','}du ad;)l;)h salah satu campuran

k;)f-\iFlg rumit di alam (Soga

MA

TERI

DAN

MET ODE ｲ｣ｾｪｬｬｮｧ｡ｮ＠ terbesar pada rnadu adalah

glukosa. Komponen lainnya yaitu Bahan dan Atat (RuizMatute et 01. 2010), mine·

madu berasal clari Huti'm Sukit

, et

01. 2003), senyawa fenolik

Gunung Tarnbora, \(ab, Blma, ｐｲｯｶｩｲｾｳｬ＠ l'hlSil

3" enZlrn, d,m air. Ol1gosakarida dar'i <

Tenggara Barat, clan Iiutan Kampung Bluan _Ｂｾ＠ jurnlah bakteri fe·

Kab. Kutai Provinsl KalImantan Tll1lur. et

at.

2005), Vamanu

Sampel pada blilan Februari 2010. formulas! produk

sim-Bah<ln yang digunakan a(lalah arang aktif.

:Jr:3 ::nkteri asam laktat

(7)

J"rllal Gizi da'l ,2011,6(3): 217224

etanol, kertas sa ring What man No.1, lempeng KLT K6F slUka Uv\erck), piridIn, butanol, t'J'(1 'naftil) etilendiamina dihidroklorida (Merck), metanol, H₂S04 , glukosa, fruktosa,

dan maltosa, a5am lambung buatan, HCl, reagen Dinitr05alisilat (DNS), fenol, saliva, bufer Nafosfat, isolat Lactobacillus acidophilus (koleksi Laboratorium Mikrobiologi, Pusat Antar Universitas, PAU, kultur Escherichia coli, kaldu de Mann Rogosa Sharpe (MRS Broth, MRSB) (Oxoid), Nutrient Broth

ＨｾｭＩ＠ (Oxoid), kaldu media Minimal M9 (MM9),

inulin chicory (/,\erck),

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah oven, neraca analitik OHAUS GA 200, vakum, hot plate stirrer (Gerhardt), inkubator (Kottermann Wisebath), penangas

em,

spektro· fotometer Genesys 10UV, laminar, otoklaf TOlvW High Pressure Steam Sterilizer ES· 315, GCMS pirolisis Shimadzu (Pusat Penelltian dan Pengembangan Departemen Kehutanan).

Metode

Penelitian Ir.1 dlawall dengan isolasi

oli-gosakarida madu lokal. Isolat kemudian diu]i secara kualitatif dan kuantitatlf untuk menge-tahul kandungan karbohidrat Selain itu, diujl pula kriteria prebiotik dari yaitu re' sistensi terhadap hidrolisis asam lambung dan a-amilase, stimulasi pertumbuhan bakteri, clan aktivitas ferment(jsi bakteri.

Isolasi O/igosakarida (Hernandez et al. 2009)

Sebanyak 500 mg madu ditambah dengan 3 gram arang aktif kemudian dilarut-kan ke dalam 100 mL etanol 10 persen dan diaduk selama 30 menit. Campuran disaring dengan kertas saring Whatman No.1 pada keadaan vakum dan arang aktif dibilas dengan 25 mL etanol 10 persen. Desorpsi oligosakarida dilakukan dengan menambahkan 100 mL etanol 50 persen v/v, Campuran diaduk selama 30 menit dan disaring lagi dengan kertas saring Whatman NO.1. Filtrat dievaporasi pad a ke-adaan vakum pada s,uhu 40°(,

Deteksi Oligosakarida dengan Kromatogra/i Lapis Tipis (KLT)

Efektivitas metode isolasi oligosakarida diu]i secara kualitatif clengan KLT.

dilarut kan dal,lm ctanol 50 perscn ciengan konsentrasi 5 persen b/v, stanciar kar-bohiclrat dibuat pada konsentrasi 1 perscn b/v. Sarnpel ditotolkan ke lempeng KLT dan dielusi ｣Ａ･ｭｾ｡ｮ＠ cClmpuran pelarut pirid in :butanol: air (4:6: 3 v/v) IAso et at. 1960). Setelah kering, lei:lpeng

218

Journal of Nutrition and Food, 2011. 6(3): :2 :;

direndam hingga jenuh dengan larutan beriS] O. 100 mL N*(1·naftil) etilenciiClmina dihidrokloricla pada sistem pelarut yang tercilri atas metanol:H,SO, (97:3 v/v) (Vergara et 0/.

2010). Lempeng dipanaskan pada oven suhu 90°C hingga spot dapat terlihal.

Pengukuran Komposisi Korbohidrat

Gula pereduksi diukur dengan metodc DNS (modifikasi Wichienchot et al. 2010). Karbo-hidrat total diukur dengan metode fenol-sulfat (modlfikasi Wichienchot

et

01,

2010). Kurva standar glukosa dibuat pada kon-sentrasi 0-1 mg/mL,

Pengujion Kriteria Prebiotik

Resistensi terhadap hidrolisis asam lambung (Wichlenchot

et

01. 2010)

Isolat ollgosakarida dllarutkan dalam air reverse osmosis (RO) clengan konsentrasi 1

mg/mL. Asarn lambung buatan dlbuat dengan

buffer HCl dengan kornposlsi dalam L: NaCl (8), KCl (0.2), HPO,·2H}O (825), NaH:PO, (14.35), CaCl2 · (0.01), MgCl

r

6H20 (0.18)

Pengaturan pH 2 dilakukan dengan HCI 5 M. Buffer HCl clitambahkan ke larutan sampel dengan perbandingan 1: 1 dan dlinkubasi pada suhu 37°C selarna 2 . Pada jam ke·O, 1, dan 2 diarnbil 0.2 mL untuk penguJian kandungan gula pereduksi, sernentara itu untuk peng-ukuran karbohidrat total diambil sebanyak 0.2 mL dan hanya diukur pada jarn ke-O. Pengujian dilakukan dengan dua kali ulangan. Persentase hidrolisis dihitung dengan rumus sebagai berikut:

. GI) . Gp " _ x I ()()

!Iidro/isIS ("0)

Vo/u! Kfl - C;p

d)

Keterangan

GPt konsentrasi gula perecluksi ke·t konsentrasi gula pereduksi jam ke-O

KH kOllsentrasi karbohidrat

Reslstensi terhadap hidrol1sis n-amilase (Wichienchot et 01. 2010).

Amilase cliperoleh dari saliva yang dien-cerkan hingga konsentrasinya 3 unitlmL, Isolat oligosakarlda disiapkan dengan membuat laru t·

an 1 persen sampel bufer N::-dosf :. Kemuclian larutan enzirn clitambClhkan ke

I.,',,:

an sZlinpel ciengan perbanclingan 1.1. C}';l::

an diinkubasi selarna 4 jam dan ｣ｊｩｵｾＬｵＬ＠

(8)

Journal of Nutntion and Food, 2011, 6(3): 217224

StlmulasJ pertumbuhan baktcn (rnodlfikasi Huebner

et

01.

2008)

Bakteri yang digunakan adalah bakteri prOblOtlk L dan bakteri enterik E. coli. Sebelum digunakan. kultur L acidophilus dlturnbuhkan pad a MRSB semalarn pada suhu 37°( secara aerob dengan aerasi 100 rpm, Kultur E. coli diperlakukan sama dengan per-bedaan media kultur yaitu NB. Media uJi sti-mulasi terdiri atas 10 mL MRSB untuk bakten probiotik dan media ,'AM9 untuk bakteri cnterik. Setiap media ditambah dengan 1 mL larutan berisi 10 mg Kultur bakten kemudian diinokulasi sebanyak 5 persen v/v ke dalarn media uji stirnulasi dan diinkubasl selama 24 jam pada suhu 37"C dengan aerasi. Rapat Optlk (Optical Density, 00) diukur pada

II 600 nm pada jam ke-O, dan 24. Sianko adalah media uji stimulasi tanpa inokulasi bakteri. Aktivitas stirnulasi dinyatakan secara kuantitatif melalui

/ '/' Il

I ':; I) I ':i

Keterangan:

Ppt - OD protllotlk PdClu prcbloLlk sett':;,h t )i,'n

PpO OD probiolik pad,) preblOtJk s{'(elih 0 j,)rTI

Pgt OD probiotlk pada wntrol (gtukosal

PgO pi obioUk pilrJa kontro! (gtlikosa) setetah

(J Jam

Ept - OD entclik pada prebiotlv. le'Lelah t Jam EpO OD entci ik p"cia setelah 0 Jam

Egt cOD cntcr;k pada ig!ukosa)

t Jcrn

OD enter ,v. pad a kontrol (glukosa) 5t'telah

o

Jam

Ｚｾｳ＠ Fennentasi Bakteri

-..,ltu! L. acidophilus yang rnenunjukkan

,cr, stmlulasi pertumbuhan tertinggi diuji

untuk aktivitas fermentasi bakteri. Aktivltas kultur ditentukan dengan mengukur produk akhir ferrnentasi yang berupa asarn organik dengan GC-MS Pirolisis Shimadzu_ Suhu injek-tor 200°C, helium sebagai gas pernbawa, dan Flame Ionization Detector (FlO) sebagai detek-tor. Krornatogram yang diperoleh dibandingkan dengan basis data Wiley7.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Karakteristik Wama dan Isolat Oligosakarida Madu

Hutan Surnbawa dan Kalimantan meru-pakan sentra perburuan madu hutan di Indonesia. Sampel rnadu hutan diambil pada bulan Februari 2010 dengan bantuan penduduk setempat. Madu lokal yang digunakan dihasil·

Jurnal G1ZI Pargan, 2011. 6(3j: 217·224

kan dan [ebah hutan lipis dorsoto, Kedua sampel madu yang digunakan adalah madu multifloral.

Ｌ｜ｾ｡､ｵ＠ lokal Sumbawa memiliki warna

coklat keruh. sementara madu Kalimantan berwarna coklat bemng. Aso et 01. (1960) menyebutkan beberapa wama madu antar'a lain kuning, kuning pucat, coklat, coklat pucat, dan coklat gelap. Faktor utama yang menyebabkan perbedaan warna pad a madu adalah sumber nektar (National Honey Boord). Faktor lam yang rnempengaruhi wama madu adalah proses penyimpanan, kadar senyawa fenolik, dan kadar mineral (Anklam 1997).

Rendemen lsolat oligosakarida madu Surnbawa adalah 1.79 persen, sedangkan ren-dernen isolah madu Kalimantan sebesar 2,06 per·sen. Isolat yang dihasilkan berwama hitam untuk rnadu Surnbawa dan coklat untuk madu Kalimantan. Hal ini terkait clengan wama madu sebelum isolasi. Kedua isolat yang diper-oleh terlihat mengilap yang diduga merupakan gulZl yang mengalarni karamelisasi.

Kromatogram Oligosakarida Madu Sumbawa dan Kalimantan

Krornatogram yang dihas ilkan menun jukkc:m kiwclungan madu dan isolat oligo-sakarida madu SUlllbawa relatlf sarna yakni monosakarida campuran glukosa dan fr'uktosa. dan karbohidrat dengan ｏｐｾｚ＠ (Garnbar 1 a) Terdapat sedlkit perbedaan nitai Rf yang diduga berasal dari rnatriks sampel yang mempengaruhi pergerakan karbohidrat selama proses eLusi.

Spot krornatograrn isolat oligosakarida dengan nilai Rf 0.46, 0.56, dan 0.68 mernlliki ketebalan yang hampir sama dengan spot pada madu Surnbawa. Ini rnengindikasikan bahwa ta hap isolasi tidak begitu rnernpengaruhi jumlah karbohidrat tersebut. Spot untuk di- dan mo-nosakarida yang tebal menunjukkan kandungan keduanya rnasih tinggi. Hal mi memperkuat ha-sH yang diperoleh pada visualisasi isolat oligo-sakarida yang rnengkilap,

Krornatogram isolat oligosakarida juga menunjukkan 2 spot baru dengan Rf 0.12 dan 0.46 yang dapat dibedakan menJadi spot se· cara jelas clan diduga merupakan oligosa· karicla yang paling banyak dikandung oLeh rna· du Surnbawa. Selain itu eli antara kedua spot terdapat ekor yang menunjukkall kumpuLan oLigosakarieia Ekor tersebut tidak dapat dibe-dakan secara menjadi spot·spot tcrtentu. Hal ini dikarenakan pada madu terdapat pu luhan Jenis senyawa karbohidrat clengan kadar

(9)

Jurnal .2011,6(3): 217-224

yang rendah sehingga tidak memberikan batas antarspot yang spesifik.

Kromatogram madu Kalimantan meng-hasilkan cmpat spot sementara isolat oligo-sakaridanya menghasilkan lima spot (Gambar

I b). Kromatogram isolat menunjukkan kompo-sisi karbohidrat yang relatif sam a dengan madu tanpa isolasi yakni mono-, disakarida, dan karboh Id rat DP::::2. Jika dibandingkan dengan nilai Rf standar, spot dengan nilai Rf 0.69

scbenarnya terdirr atas dua spot yaitu mono- dan disakarida. Spot ini jauh lebih tebal spot lain. Oleh karenanya isolat madu Kalimantan juga diper-kirakan masih mengandung mono- dan disa· Kanda yang tinggi. Terdapat dua spot dengan nilai Rf 0.11 dan 0.37, ini hanya muneul pada kroma-isolat oligosakarida. Isolat sakarida madu Kalimantan juga menun]ukkan

ekor pada kromatogram yang mcngindlkasikan beragam karbohidrat datam ]umlah yang rendah (Gambar 1 b).

a

b

';8 0 .68

O.5f:P·6

0.46

0.12

1

SX G S M

1

_{F KX G K M}

Gambar 1. Kromatogram Isolat 01 igosakarrda Madu (a) Sumbawa; (b) Kalimantan. F: fruktosa, G: glukosa, M: Maltosa, SX: madu Sumbawa, S: isolat oligosakarida madu Sumbawa, KX: madu Kalimantan, K: isolat oligosakarida madu Kalimantan. Ekor kromatogram ditunjukkan dengan tanda panah.

Kromatogram isolat oligosakarida madu Sumbawa dan Kalimantan mcnunjukkan meto-de isolasi oligosakarida yang dlgunakan efektif dalam mcmekatkan Kadar karbohldrat

DP yang lebih tinggi (DP,,3). Ini clapat dilihZlt dari sampcl Isolat oligosakarida yang menun-Jukkan Jclanya spot-spot bClrll Hasil kroma· togram isolat oligosakaric!a maclu Surnbawa dJn Kalimantan juga menun]ukkan

ekor pacJa krornatograrn. Hal ini rnenandakan bahwa pada konsentrasi dan penotolan KLT yang sama, oligosZlkarida pada rnadu berada Kadar yang sangat rendah

Journal of Nutrition and Food. 2011, 6(3): 217-224

tidak dapat dldeteksi dan rnengha· silkan spot. Sementara itu proses isolasi mampu meningkatkan Kadar oligosakarida

se-terlihat pada kromatogram mes-kipun belum dapat digolongkan menjadi spot yang Masih adanya spot mono dan disakarida menandakan senyawa-senyawa ter-sebut belum berhasrl dlhilangkan dan masih berada dalam ]umlah yang tinggi.

Komposisi Karbohidrat Madu HasH Isolasi

Kandungan karbohidrat isolat ollgosaka· rica madu Juga ditentukan seeara kuantitatif dengan metode spektrofotometri. Madu Sum· bawa mengandung gula pereduksi 36.24±0.24 persen dan karbohldrat total 66.021:0.54 per· sen bib. Adapun Isolat oligo-sakarida rnadu Sumbawa mengandung gula peredllksi dan kar-bohidrat total berturut-turut 33,591:0.66 dan 64.381:2,99 persen bib. Madu Kalimantan pereduksi 67.8±0.38 persen dan karbohidrat total 82.45±3.7 persen bib, Semen tara itu Isolat oligosakaridanya

mengan-peredllksi 42.39±1.19 persen dan karbohidrat total 73.99±2.55 persen bib.

Menurut Khalil

et

01. (2001), kandungan perec1uksi madu sekltar 75 persen, dan karbohidrat totalnya meneapai 85 persen. Madu Sumbawa mengandung gula pereduksi dan karbohidrat total yang lebih rendah. Sementara ItU, madu Kalimantan mengandung dan karbohidrat total dalam rentang umum tersebur. Namun demikian, madu Sumbawa mengandung lebih banyak oligosakarida dlbandingkan rnadu Kalimantan. Kandungan oligosakarida ini dapat dilihat dar; selisih antara karbohidrat total dengan gula pereduksrnya. Oligosakarida tergolong gula Beberapa disakarida rneru-pakan gula nonpereduksi. Kandungan oligo-sakanda madu Sumbawa sek;tar 29.78 persen, sementara oligosakarida madu Kalimantan sekitar 14.65 persen.

UJi kuantitatif menunjukkan metode ad-sorpsi arang aktif dan konsentrasi etanol ber-tingkat hampir tidak memberi pengaruh pada madu Surnbawa. Kandungan gula ;so-lat ollgosakarrda yang masih tinggi ini memo perkllat' hasH visllalisasl dan kromatogram isolat.

Metocle isolasi menurullkan Kadar gula rereduksi hingga 25 persen isolat oligosakaridCl madu Kalimantan, semen tara karbohidrat total hanya secJikit. Berclasarkzrn kroma tograrn nya, isolat oligo-sakarida madu Kalimantan spot

[image:9.611.56.249.340.557.2]

(10)

ｾｩｏｕ［＠ of Nutntion end Food, 2011,6(3): 217224

mOllO- dan disakarida yang masih tebal,

Scmentara ltu metode kolorimetri menun ｊＺｾ＠ l.;an kandungan gula pereduksinya sudah

'l:h dan madu awaL Hal

dap,lt terjadi karena tldak semua disa-ｾｽＢ､｡＠ adalah gula pereduksi, pada

disakarida tidilk terdeteksi KLT terdeteksi

kolorimetri

Hernandez

et

01. (2009) dan Sanz

et

01.

120051 menyebutkan mono dan disakarida dlhllangkan hampir seluruhnya dengan metode adsorpsl arang aktif. Hill ini berbeda hasH yang diperoleh baik dengan kualitatif maupun kuantitatlf. Per-｢ｃｬｾｊｊＬｬ＠ hasll yang diperoleh ini dapat

dise-ca:)·]r; perbedaan

grade

bahan isolasi yang

Resistensi terhadap Asam Lambung dan Am11ase

Res1stensi torhadap asam lilmbung dan "dalah salah saW sy,lrat dari prebiotik

! Re'E'f rOid 2007)_ Sampel per

sc:ntase hidrolisls lsolat madll SCJmt;a'.va dan madu Kalimantan berbeda_ memiliki tingkat hlcirolisis asam tertinggi pada Jam pertama inkubasl ,78 persen untuk isolat

Sumbawa dan 0,59 persen untuk madu Ka;;'11antan, Jumlah ini kemudian menurun pad3 pm kedlla 1, Z7 person untuk isolat nda madu Sumbawa dan 0,4 persen untc,k madu Kalimantan.

Pengukuran pada ke2 menunjukkan pe'sentase hidrolisis bernilai negatif untuk !solcH oligosakarida madu Kalimantan. Nilai mi dapat disebabkan adanya gangguan 10n dari garam yang menyusun asam lambung blElt3". Metode ONS yang digunakan untuk pereduksi akan terganggu bila SJr,pcl mengandung ban yak ion (Sinegani & Ernt')zi 2.006).

Hidrolisis amilase saliva meningkat se-'::aktu untuk masingmasmg lsolat

oligo-ｳ｡ｾ＠ :;nda madu, Isolat oligosakarida madu SLIm-bJ i. mengalarni hldrolisis sebanyak 8.18.

ic;,=

dan 11.87 persen pada]am ke1, 2, dan 4_ :,entara isolat oligosakarida rnacJu Kali

mengalami hidrolisis sebesar 13.76,

dan 21.03 persen, Bcrbeda dengan

,,;'JI1 resistensi terhac1ap asam lambung, madu Kalimantilfl menga-. tngkat hidrolisis yang lebih tinggimenga-. Hal im

(1,,:::]' dikaitkan dengan hast! pengukuran kom

p'=,:

ｾＢｈ｢ｯｮｩ､ｲ｡ｴ＠ sebelumnya yang menunjuk·

JUlnal Glzi dan Pangan, 2011, 6{h 17224

kan jumlah gula pada isolat sakarida madu Kalimantan yang leb1h tinggi di-bandingkan madu Sumbawa. ReSlStensi oligosa-karida ini sesuai dengan Rlttig (2001) dalam Sanz

et

01_ (2005) yang rnenyebutkan bahwa oLJgosakarida madu memiliki resistensi terha-dap asam dan enZlm pencernaan se cara in vitro,

Stimulasi Pertumbuhan Bakteri

Kurva pertumbuhan L. acidophi/us yang ditumbuhkan dalam MRSB menunjukkan kultur usia 24 jam telah berada di fase stationer (Gambar 2). Kurva pertumbuhan E. coli berpe-doman pada Kao

et

01. (2004) dan KJur & Chakraborti (2010) yang menyebutka n pad a jam ke2.4, kultL,r E. coli telah berada pada lase stasioner_ Fase stasioner terJadi saat sum ber nutrisi yang berasal dari media mulal ha-bis. UJi st1mulasi dllakukan memberi-kan isolat ollgosakarida sebagal sumber karbon (e) tambahan ke dalarn media kultur bakteri. Bakteri yang mampu memanfaatkan sampet isolat ollgosakarJda madu sumber kar

akan ukkan pertumbuhan yang lebih balk kultur bakteri tJinnya, Hal ini dltunjukkan melJlul sellslh nilal

00

an-tara jam ke24 dan Jam keO yang lcblh

Gambar 2. Kurva Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus dalam MRSB

Berdasarkan OD yang diperoleh pada Jam keO dan ke,24, diperoleh bahwa isolat oligosakanda madu Sumbawa, Kalimantan, dan inulin memil.ikl aktivltas preblot1k yaHu mam-pu menstlmulaSl pertumbuhan bak teri L. acidophilus. Isolat rTlaciu Sumba-wa mcmberikan pengaruh prebiotik sebesC1r 0.3274, yon'S, hamplr kali lcbll1 besar dibal1c1ing inulin yakni sebcsar 0.1189, Sernen, tara isolat ol;gosdkancia madu Kalimantan me-nunJukkan stllTllIlilSI y,lng paling

renclah yaknl 0.0973.

L.acidophilus mcmil1kl cnzim yang mampu mendegrac!dsl oligosakclrlda madu

dan slImbcr k21rbon.

L. acidophilu5 mernilikl 5'211 msm dan Bfr,1I yang

[image:10.611.281.439.388.491.2]

(11)

Jdrnal Gizi dan Panga,). 2011, 6(3j: 217·224

terlibat dalarn pernanfaatan FOS, salah satu jenis prebiotik, sumber karbon. Gen rnsm mengodekan ATP binding cassette (ABC) transporter yang menyalurkan SLirnber karbon ke dalam sel. Sementara itu gen BfrA rnengodekan fruktosidase yang berfungsi untuk mencerna FOS. Efek stirnulasi pertumbuhan yang ditunjukkan oleh prebiotik ber'sifat spesifik terhadap galur bakten. Tidak semua bakteri probiotik dapat rnernanfaatkan semua prebiotik (Artanti 2009).

Isolat oligosakarida rnadu Surnbawa menunjukkan aktivitas prebiotik yang lebih tinggi dlbandingkan inulin Biedrzycka dan Bielecka (2004) menyebutkan oligosakarida rantal pendek. tanpa percabangan, dan larut air lebih mudah dimanfaatkan oleh bakteri. Oligosakarlda rnadu urnumnya merupakan di-, trio, dan tetrasakarida, sernentara inulin adalah oligosakarida dengan DP 10-60.

Aktiyitas F ermentasi

Kriteria prebiotik ketiga ialah mem-pengaruhi aktivitas ferrnentasi. AktlYitas fer-rnentasi cliukur melalui produk fermentaSI yang clihasllkan kultur. Isolat oligosakarida madu Sumbawa menunjukkan efek stimulasl pertum-buhan yang paling tlnggi sehingga kultur L.

acidophilus yang ditumbuhkan pada media tersebut diLiji untuk mengetahui produk fermentasi yang dihasilkan. Krornatogram me Ilunjukkan 19 puncak senyawa tercleteksi dari kultur terse but (Gambar 3)_

Kultur bakteri usia 24 jam yang clitum-buhkan dalam lingkungan aerob menghasilkan

A

F

Journal of Nutrition and Food, 201/. 6(3}: 217224

asarn laktat (puncak E) sebagai metabolit uta-ma yaitu 48.01 persen. L. acidophilus tergo-long bakteri asarn laktat hornoferrnentatif se-hlllgga metaboiit utarnanya adalah asarn lak-tat. Berdasarkan kroma togram. asarn laktat yang dibentuk seluruhnya merupakan t ipe L(+). Hasil ini berbeda dengan Sanders dan Klaenhamrner (2001) yang menyebutkan bahwa L. acidophilus rnenghasilkan asam laktat tipe L(+) dan D{).

Dalam lingkungan aerob, L. ocidophilus menghasilkan asam laktat sebaga; metabolit utama, namun dalam keadaan anaerob seperti pada kolon, bakteri illl Juga menghasilkan asam asetat yang merupakan asarn lemak rantai pendek (t,jaaber et 01. 2004). Asam asetat Juga mungkin terbentuk kilrena asam laktat digunakan oleh bakteri hetero-fermentatif. GIbson et 01. (1996) menyebutkan bahwa dalarn kolon, rnetabolit yang dlhasilkan suatu Jenis bakteri dapat digunakan oleh bakten lain dan menghasllkan rnctabol it yang baru. Jiang dan Savaiano (1997) rnenyebutkan bahwa penambahan

L.

acidophilus pada fer-rncntasi kultur berkesmarnbLingall yang diinokulasi dengan baktcrr feces rncnghasilkan peningkatan produksi asam asetat. /\sam laktat adalah asam organik yang rnenguntungkan pada pencernaan karena dapa t berfungsi sebagai antimikrob bagi bakteri di dalarn kolon (Sanders & Klaenharnmer 2001). Selain itu, salah satu rnekanisrne penurunan kolesterol oleh

L.

acidophitus adalah pengikatan kolesterol dengan asam laktat (Suzuki

et al.

1991 dalarn Jiang & Savaiano 1997).

S

K 0

0 _p 0

I

L ｾ＠

RI

I

•

III

•

Gambar 3. Krornatogram Gel'AS Piroli'>ls Kultur L. acidophil us dalarn MRSB dengan Isolat Oligosakarida Madu Surnbawa sebagai Tambahan Surnber Karbon Menunjukkan Asarn Laktat (E) sebagai Metabolit Ekstraseluler yang Utama

[image:11.612.67.460.480.699.2]

(12)

Journal of Nutrition and Food, 2011, 6(3): ＲＱＷｾＲＲＴ＠

KESIMPULAN

Madu Sumbawa mengandung Jumlah ollgosakarida yang lebih tinggi dibandmgkan madu Kalimantan. Isolasi oligosakarida dengan arang aktif dan etanol bertingkat 10 dan 50% tldak efektif untuk menghilangkan ｭｯｮｯｾ＠ dan dlsakarida tetapi efektif untuk memekatkan "onsentrasi oligosakarida ｄｐｾＳＮ＠

Pengujian

in vitro

menunjukkan isolat ollgosakarida madu Sumbawa dan Kalimantan mcmenuhi kriteria prebiotik yakni resistcn ter-hadap a5am lambung dan enzim pencernaan, .ncmillki efek stimulasi pertumbuhan yang celek t1f, dan mempengaruhi aktivitas ｦ･ｲｭ･ｮｾ＠

:asi. lsolat oligosakarida madu Sumbawa ｭ･ｾ＠

ｾｵｮｊｵｫｫ｡ｮ＠ efek 5timulasi pertumbuhan bakteri

L.

acidophilus terbe5ar. Kultur L acidophilus fang ditumbuhkan flilda media dengan isolat

c

llgosakarida madu Sumbawa sebagai

tambah-an

sumber C menghasilkan asam laktat sebagai ＬｾＱＲｴＧｬＧｊｯｬｩｴ＠ utama (48.01%)

Selam itu pemanfaatan potensi ekonoml

"s"

perlu dioptimalkan untuk menmgkatkan ::Jr .. kapita dan dilakllkan pendistribusian .3·'g merat a agar pembangunan pangan dapat

'3sakan oleh semlla pihak.

Perlu dilakukan penentuan konsentrasi

':3ro[ yang optlmum untuk menghilangkan dan disaka(ida madu. Oligosakanda ma-: .• c:kal perlll diidentifikasi lebih lanjut. Uji

.Hasi pertumbuhan bakteri perlu dilakukan

3,):11 keadaan anaerob sesual keadaan

in vivo

kolon, dengan isolat berupa campuran ］ＢＬｾ＠ reri kolon dan fruktoollgosakarida (FOS)

prebiotik pembanding.

UCAPAN TERIMA KASI H

Terirnakasih kepada Direktorat Jenderal ＺＺＧＺＭｩＨｾｩ､ｩｫ｡ｮ＠ Tinggi (Ditjen Dikti) yang telah ''::',d,Hlai Program Kreativitas Mahasiswa

::_].' I Penelitian ini.

DAFTAR PUST AKA

. >::·;son JW & Gilliland SE, 1999. Effect of f errnented milk (yogurt) containing Lactobacillus ocidophilus L1 on serum cholesterol in hypercholesterolemic humans. J Am Col Nutrition, 18(1), 43· 50.

.:'n E. 1997. A review of the analyitical methods to determine the geographical

Jurnal Gili dan Pangan, 2011, 6(3): 217224

and botanical origin of honey. Food Chem, 63(4), 549·562.

Artanti A. 2009. Pengaruh Prebiotik Inulin dan Fruktooligosakarida (FOS) Terhadap Pertumbuhan Tiga Jenis Probiotik. Skripsi Sa rjana Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, IPB, Bogor.

Aso K, Watanabe T & Yamao K. 1960. Studies on honey: on the sugar composition of honey. Tohoku Journal of Agriculture Research, 1, 101108 .

Biedrzycka & Bielecka M. 2004. Prebiotic effectiveness of fructans different degrees polymerization. Trends in Food Sci & Tech, 15, 170175_

[FAO] Food Agriculture Organization. 2007. FAO Technical Meeting on Prebiotics. FAO, Rome.

Gibson GR, Willems A, Reading S, & Collins MD. 1996. Fermentation of nondigestible oligosaccharides by human colonic bacteria. Proceedings of the Nutrition Society, 55, 899·912.

Hernandez 0, RuizMatute AI, Olano A, Moreno F J & Sanz ML. 2009. Comparison of fractionation techniques to obtam prebiotic galactooligosaccharides_ Int Oairy J, 19,531536.

Huebner J, Wehling RL, Parkhurst A & Hutkins

RW. Z008. Effect of processing

conditions on the prebiotic activity of commercial prebiotics. Int Oairy J, 18, 287293.

Hutagalung LE. Z008. Perkembangan Perolehan Iv'.adu Lebah Hutan (Apis dorsota) oleh Pemanen Madu di Kabupaten Tapanuli Utara. Skripsi Sarjana Departernen Teknologi HasH Hutan, Fakultas Kehutanan, IPB, Bogar.

Jiang T & Savaiano DA. 1997. In

vitro

lactose ferm'entatlon by human colonic bacteria

IS modified by Lactobocillu5 ocidophilus

supplementation. J Nut, 127, 1489-1495.

Kao

et

aL 2003. Transcriptomebased determination of multiple transcription regulator actiVities in Escherichia coli by using network component analysis.

PN/1S, 101,641646.

..

(13)

Jurnal Gizl dan Pangan, 2011, 6(3): 217-224 Journal of Nutrition and Food, 2011, 6(3): 217-224

Kaur P & Chakraborti A. 2010. Proteome

analysis of food borne pathogen

enteroaggregative

Escherichia

coli

under acid stress. J Proteomics

Bioinform, 3, 10-19

Khalil

et at.

2001. Biochemical analysis of

different brands of unifloral honey available at the northern region of

Bangladesh. The Sciences, 1 (6),

385-388.

Naaber

et al.

2004. Inhibition of

Clostridium

difficile

strains by intestinal

Lactobacillus

species. J Med Microbial, 53, 551554.

Nanda

et at.

2003. Physico'chemical properties and estimation of mineral content in honey produced from different plants in Northern India. Journal of Food CompOSition and Analysis, 16,613619.

[NHB] National Honey Board. Honey color. YII"""",.nhb.org (4 Nov 2010).

Reddy BS, Hamid R, & Rao CV. 1997. Effect of dietary oligofructose and inulin on colonic preneoplastic aberrant crypt foci inhibition. Carcinogenesis, 18(7), 13711374.

Roberfroid M. 2007. Prebiotics: the concept revisited. J Nut, 137, 830837.

RUlzMatute AI, Brokl M, Soria AC, Sanz ML, & MatinezCastro. 2010_ Gas chroma-tographicmass spectrometric charac-terisation of tri and tetrasaccharides in honey. Food Chem, 120,637642.

Sanders ME & Klaenhammer TR. 2001. Invited review: the scientific basis of

Lactobacillus

acidophilus

NCFM

functionality as a probiotic.

J

Dairy Sci, 84(2),319331.

Sanz

et al.

2005. In vitro investigation into the potential prebiotic activity of honey oligosaccharides. J Agric Food Chem, 53(8), 29142921.

Schley PO & Field CJ. 2002. The immune-enliancing effects of dietnry fibres and prebiotics. British

J

Nutr, 87, 221230.

Scholz Ahrens

et

of.

2007. Prebiotics, probiotics, and synbiotics affect mineral absorption, bone minera I content, and bone structure. J Nutr, 137, 838846_

Silitonga L T & Munthe MG. 2009. Amway jajaki rnadu RI masuk pasar dunia. Bisnis Indonesia, 11 September.

Sinegani AAS & Emtiazi G. 2006_ The relative effects of some elements on the DNS method in cellulose assay.

J

Appl Sci Environ, 10(3), 9396.

Soga T. 2002_ Analysis of carbohydrates in food and bevarages by HPLC and CE. J Chromatogr Library, 66, 483502. Vamanu

et of.

2008. Obtaining of a symbiotics

product based on lactic acid bacteria, pollen and honey. Pakistan J BioI Sci, 11 (4),613617.

Vergara CMAC, Honorato TL, Maia GA, & Rodrigues S. 2010. Prebiotic effect of fermented 'cashew apple

(Anacardium

occidentale

L) juice. Food Sci Tech, 43, 141145.

Wichienchot S, Jatupornpipat M, & Rastall RA_ 2010_ Oligosaccharides of pitaya (dragon fruit) flesh and their prebiotic properties. Food Chern, 120, 850857.

Williams CM & Jackson KG. 2002. Inulin and oligofructose: effects on lipid metabolism from human studies_ British

J

Nutr, 87, 261264.

Yao

et of.

2003.

Flavonoids, phenolic acids and abscisic acid in Australian and New Zealand

Leptospermum

honeys. Food Chem, 81,159168.