UJI EFEK ANTIHIPERURISEMIA EKSTRAK ETANOL
DAUN PEGAGAN (
Centella
asiatica
(L.) Urb.)
PADA MENCIT JANTAN
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH :
SITI AMALIA WAHYU PRATIWI NIM 121524167
PROGRAM STUDI EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
UJI EFEK ANTIHIPERURISEMIA EKSTRAK ETANOL
DAUN PEGAGAN (
Centella
asiatica
(L.) Urb.)
PADA MENCIT JANTAN
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH :
SITI AMALIA WAHYU PRATIWI NIM 121524167
PROGRAM STUDI EKSTENSI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan
karunianya-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi ini yang berjudul “Uji Efek Antihiperurisemia Ekstrak Etanol Daun
Pegagan (Centella asiatica (L.) Urb.) Pada Mencit Jantan”. Skripsi ini diajukan
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas
Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya kepada Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., sebagai
Dekan Fakultas Farmasi yang telah memberikan bantuan dan fasilitas selama
masa pendidikan.
Pada kesempatan ini penulis juga ingin menyampaikan terima kasih yang
sebesar-besarnya kepada Ibu Khairunnisa, S.Si., M.Pharm., Ph.D., Apt. dan Ibu
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt., yang telah membimbing penulis dengan
penuh kesabaran, tulus dan ikhlas selama penelitian hingga selesainya penulisan
skripsi ini. Penulis juga menyampaikan terima kasih kepada Bapak Prof. Dr. Urip
Harahap, Apt., Ibu Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan., M.Si., Apt., dan Bapak Drs.
Saiful Bahri, M.S., Apt. sebagai dosen penguji yang telah memberikan saran dan
kritikan kepada penulis hingga selesainya penulisan skripsi ini. Penulis juga
menyampaikan rasa terima kasih kepada seluruh staf pengajar, pegawai tata usaha
dan teman-teman yang telah membantu selama penelitian hingga terselesaikannya
Secara khusus ucapan terima kasih dan penghargaan yang tulus tiada
terhingga kepada Bapakku Drs. H. Ahmad Farijan, M.M.Pd dan Ibuku Hj. Baiq
Sumiarti, adik Wahyu, adik Reza, adik Panji dan mas Imam serta teman-temanku
Ekstensi Farmasi 2012 gelombang 2 khususnya Desi, Cut Rai, Kak Siti, Ratna,
Mayang, Winda, Muha terimakasih atas doa dan semangatnya kepada penulis
selama masa perkuliahan hingga selesainya penyusunan skripsi ini. Penulis
menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini masih memiliki banyak
kekurangan, oleh karena itu sangat diharapkan kritikan dan saran yang dapat
menyempurnakan skripsi ini.
Medan, Juni 2015
Penulis,
Siti Amalia Wahyu Pratiwi
UJI EFEK ANTIHIPERURISEMIA EKSTRAK ETANOL DAUN PEGAGAN
(Centella asiatica (L.) Urb.) PADA MENCIT JANTAN
ABSTRAK
Asam urat adalah produk akhir metabolisme purin. Kadar asam urat serum yang memiliki nilai di atas normal disebut dengan kondisi hiperurisemia. Hiperurisemia merupakan faktor resiko terjadinya arthritis gout, nefropati gout atau batu ginjal. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan pegagan memiliki efek anti inflamasi, antioksidan dan sitotoksik serta memiliki daya hambat terhadap enzim xantin oxidase secara in vitro, dimana enzim xantin oxidase merupakan enzim yang berperan dalam sintesis asam urat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek antihiperurisemia ekstrak etanol daun pegagan pada mencit jantan hiperurisemia.
Pengujian efek antihiperurisemia dilakukan secara experimental dengan menggunakan alat pengukur kadar asam urat (Easy Touch® ) dan menggunakan
potassium oxonate 200 mg/kg BB sebagai penginduksi hiperurisemia yang diberikan secara intraperitoneal dua jam sebelum pemberian perlakuan. Dua puluh lima mencit jantan dibagi menjadi lima kelompok, kelompok pertama sebagai kontrol negative yang diberikan CMC Na 1 % b/v secara oral, kelompok kedua sebagai kontrol positif yang diberikan allopurinol 10 mg/kg BB secara oral, kelompok ketiga sampai kelima diberikan ekstrak etanol daun pegagan dengan dosis masing-masing 200 mg/kg BB, 400 mg/kg BB dan 600 mg/kg BB diberikan secara oral, selanjutnya kadar asam urat diukur tiap satu jam selama empat jam pengamatan. Selanjutnya hasil yang diperoleh dianalisis menggunakan analisis variansi (ANAVA) yang dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey HSD.
Hasil analisis menunjukkan bahwa semua dosis ekstrak etanol daun pegagan memberikan efek antihiperurisemia. Tetapi hanya dosis 400 mg/kg BB dan 600 mg/kg BB yang memberikan hasil yang tidak berbeda signifikan dengan pemberian allopurinol dosis 10 mg/kg BB.
Semua suspensi ekstrak etanol daun pegagan memiliki efek antihiperurisemia dengan dosis terbaik 400 mg/kg BB.
Kata kunci : Daun pegagan, Centella asiatica (L.) Urb., efek antihiperurisemia,
ANTIHYPERURICEMIC EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF GOTU KOLA LEAVES (Centella asiatica (L.) Urb.) ON MALE MICE
ABSTRACT
Uric acid is the final product of purine metabolism. When serum uric acid level higer than normal, it called hyperuricemia condition. Hyperuricemia condition is risk factor for arthritis gout, nephropathy gout or renal stone. Some research showed gotu kola has anti inflammatory effect, antioxidant effect and cytotoxic activity, gotu kola leaves also having inhibitory effect on the xanthin oxidase in vitro assay, wherein the enzyme xanthine oxidase is an enzyme that plays a role in the synthesis of uric acid. The purpose of this research was to study the activity ethanol extract of gotu kola leaves as antihyperuricemic agent on hyperuricemic male mice.
The examination antihyperuricemic effect was carried out by using uric acid tester (Easy Touch®) and potassium oxonate 200 mg/kg BW as inducer hyperuricemic given to the abdominal cavity one hour before treated. Twenty five male mice were divided into five groups, first group as a negative control treated carboxy methyl cellulose sodium 1% b/v orally; the second group as a positive control treated allopurinol 10 mg/kg BW orally ; the third to fifth groups were treated with ethanol extract of gotu kola leaves with each dose 200 mg/kg BW, 400 mg/kg BW and 600 mg/kg BW orally. Blood uric acid levels were measured every hour for four hours. Furthermore the result were analyzed by Analysis of Variance (ANAVA) followed by Post Hoc Tukey HSD test.
The result of examination showed that all doses ethanol extract of gotu kola leaves have antihyperuricemic effect, but only ethanol extract of gotu kola leaves doses 400 mg/kg BW and 600 mg/kg BW have the same effect with allopurinol 10 mg/kg BW.
All dose ethanol extract of gotu kola leaves have antihyperuricemic effect with the best dose is 400 mg/kg BW.
Key words : Gotu kola leaves, Centella asiatica (L.) Urb., antihyperuricemic effect,
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
HALAMAN JUDUL ... ii
LEMBAR PENGESAHAN ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
ABSTRAK ... vi
ABSTRACT ... vii
DAFTAR ISI ... viii
DAFTAR TABEL ... xi
DAFTAR GAMBAR ... xii
DAFTAR LAMPIRAN ... xiii
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 3
1.3 Hipotesis ... 3
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat Penelitian ... 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 5
2.1 Tanaman pegagan ... 5
2.2 Simplisia dan Ekstrak ... 7
2.3 Metode ekstraksi ... 7
2.5 Hiperurisemia ... 10
2.6 Gout ... 11
2.7 Obat antihiperurisemia ... 12
2.8 Potassium oxonat ... 14
BAB III METODE PENELITIAN ... 15
3.1 Alat-alat ... 16
3.2 Bahan-bahan ... 16
3.3 Hewan percobaan ... 16
3.4 Penyiapan bahan ... 16
3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ... 17
3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 17
3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 17
3.5.3 Penetapan kadar air ... 18
3.5.4 Penetapan kadar sari larut air ... 18
3.5.5 Penetapan kadar sari larut etanol ... 19
3.5.6 Penetapan kadar abu total ... 19
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ... 19
3.6 Skrining Fitokimia ... 20
3.6.1 Pemeriksaan alkaloida ... 20
3.6.2 Pemeriksaan flavonoida ... 20
3.6.3 Pemeriksaan tanin ... 21
3.6.4 Pemeriksaan saponin ... 21
3.6.5 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 21
3.8 Prosedur uji efek penurunan kadar asam urat ... 22
3.8.1 Pembuatan CMC Na 1% ... 22
3.8.2 Pembuatan suspensi allopurinol ... 22
3.8.3 Pembuatan larutan potassium oxonate ... 22
3.8.4 Pembuatan suspensi EEDP (sediaan uji) ... 23
3.8.5 Penyiapan hewan percobaan ... 23
3.8.6 Pengujian efek antihiperurisemia ... 23
3.9 Analisis data ... 24
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 25
4.1 Identifikasi tumbuhan ... 25
4.2 Karakteristik simplisia dan ekstrak ... 25
4.3 Pengujian efek antihiperurisemia ... 27
4.3.1 Pengujian efek penurunan kadar asam urat ekstrak .. 27
4.3.2 Uji perbedaan efek antihiperurisemia ... 31
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 34
5.1 Kesimpulan ... 34
5.2 Saran ... 34
DAFTAR PUSTAKA ... 35
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
3.1 Matrix rancangan penelitian ... 15
4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia daun pegagan ……... 25
4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak daun
pegagan ... 26
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka pikir penelitian ……….. 4
2.1 Mekanisme inhibisi sintesis asam urat oleh allopurinol 14
2.2 Mekanisme kerja potassium oxonat menghambat
urikase ... 14
4.1
4.2
Grafik kadar asam urat rata-rata setelah pemberian CMC Na, suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB ...
Diagram rata-rata persen penurunan kadar asam urat yang diperoleh dari setiap kelompok perlakuan (CMC Na, suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan
suspensi EEDP 600 mg/kg BB) ……….
28
30
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan ... 39
2 Rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan ... 40
3 Gambar daun segar, simplisia dan serbuk daun pegagan ... 41
4 Gambar mikroskopik serbuk simplisia daun pegagan ... 43
5 Bagan alur penelitian ... 44
6 Perhitungan kadar air serbuk simplisia daun pegagan ... 46
7 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air serbuk simplisia daun pegagan ... 47
8 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol serbuk simplisia daun pegagan ... 48
9 Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia daun pegagan ... 49
10 Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam simplisia daun pegagan ... 50
11 Volume maksimum sesuai rute pemberian dan konversi dosis 51
12 Perhitungan volume pemberian sediaan ... 52
13 Gambar hewan percobaan ... 54
14
Gambar alat pengukur asam urat ... 55
15 Data Pengukuran Kadar Asam Urat ... 56
16 Data Persen Penurunan Kadar Asam Urat ... 57
17 Hasil analisis data statistik ... 58
UJI EFEK ANTIHIPERURISEMIA EKSTRAK ETANOL DAUN PEGAGAN
(Centella asiatica (L.) Urb.) PADA MENCIT JANTAN
ABSTRAK
Asam urat adalah produk akhir metabolisme purin. Kadar asam urat serum yang memiliki nilai di atas normal disebut dengan kondisi hiperurisemia. Hiperurisemia merupakan faktor resiko terjadinya arthritis gout, nefropati gout atau batu ginjal. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan pegagan memiliki efek anti inflamasi, antioksidan dan sitotoksik serta memiliki daya hambat terhadap enzim xantin oxidase secara in vitro, dimana enzim xantin oxidase merupakan enzim yang berperan dalam sintesis asam urat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek antihiperurisemia ekstrak etanol daun pegagan pada mencit jantan hiperurisemia.
Pengujian efek antihiperurisemia dilakukan secara experimental dengan menggunakan alat pengukur kadar asam urat (Easy Touch® ) dan menggunakan
potassium oxonate 200 mg/kg BB sebagai penginduksi hiperurisemia yang diberikan secara intraperitoneal dua jam sebelum pemberian perlakuan. Dua puluh lima mencit jantan dibagi menjadi lima kelompok, kelompok pertama sebagai kontrol negative yang diberikan CMC Na 1 % b/v secara oral, kelompok kedua sebagai kontrol positif yang diberikan allopurinol 10 mg/kg BB secara oral, kelompok ketiga sampai kelima diberikan ekstrak etanol daun pegagan dengan dosis masing-masing 200 mg/kg BB, 400 mg/kg BB dan 600 mg/kg BB diberikan secara oral, selanjutnya kadar asam urat diukur tiap satu jam selama empat jam pengamatan. Selanjutnya hasil yang diperoleh dianalisis menggunakan analisis variansi (ANAVA) yang dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey HSD.
Hasil analisis menunjukkan bahwa semua dosis ekstrak etanol daun pegagan memberikan efek antihiperurisemia. Tetapi hanya dosis 400 mg/kg BB dan 600 mg/kg BB yang memberikan hasil yang tidak berbeda signifikan dengan pemberian allopurinol dosis 10 mg/kg BB.
Semua suspensi ekstrak etanol daun pegagan memiliki efek antihiperurisemia dengan dosis terbaik 400 mg/kg BB.
Kata kunci : Daun pegagan, Centella asiatica (L.) Urb., efek antihiperurisemia,
ANTIHYPERURICEMIC EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF GOTU KOLA LEAVES (Centella asiatica (L.) Urb.) ON MALE MICE
ABSTRACT
Uric acid is the final product of purine metabolism. When serum uric acid level higer than normal, it called hyperuricemia condition. Hyperuricemia condition is risk factor for arthritis gout, nephropathy gout or renal stone. Some research showed gotu kola has anti inflammatory effect, antioxidant effect and cytotoxic activity, gotu kola leaves also having inhibitory effect on the xanthin oxidase in vitro assay, wherein the enzyme xanthine oxidase is an enzyme that plays a role in the synthesis of uric acid. The purpose of this research was to study the activity ethanol extract of gotu kola leaves as antihyperuricemic agent on hyperuricemic male mice.
The examination antihyperuricemic effect was carried out by using uric acid tester (Easy Touch®) and potassium oxonate 200 mg/kg BW as inducer hyperuricemic given to the abdominal cavity one hour before treated. Twenty five male mice were divided into five groups, first group as a negative control treated carboxy methyl cellulose sodium 1% b/v orally; the second group as a positive control treated allopurinol 10 mg/kg BW orally ; the third to fifth groups were treated with ethanol extract of gotu kola leaves with each dose 200 mg/kg BW, 400 mg/kg BW and 600 mg/kg BW orally. Blood uric acid levels were measured every hour for four hours. Furthermore the result were analyzed by Analysis of Variance (ANAVA) followed by Post Hoc Tukey HSD test.
The result of examination showed that all doses ethanol extract of gotu kola leaves have antihyperuricemic effect, but only ethanol extract of gotu kola leaves doses 400 mg/kg BW and 600 mg/kg BW have the same effect with allopurinol 10 mg/kg BW.
All dose ethanol extract of gotu kola leaves have antihyperuricemic effect with the best dose is 400 mg/kg BW.
Key words : Gotu kola leaves, Centella asiatica (L.) Urb., antihyperuricemic effect,
BAB I
PENDAHULUAN
1.1Latar Belakang
Asam urat merupakan senyawa kimia hasil akhir dari metabolisme nucleic
acid atau metabolisme purin dalam tubuh. Berdasarkan penelitian bahwa 90% dari
asam urat merupakan hasil katabolisme purin yang dibantu oleh enzim guanase dan
xantin oxidase (Shamley, 2005). Jika produksi asam urat meningkat
(overproduction) dan ginjal tidak mampu mengeluarkan asam urat dengan cukup
dari dalam tubuh (underexcretion), maka kadar asam urat dalam darah akan
meningkat di atas normal, keadaan ini disebut dengan hiperurisemia. Apabila
keadaan hiperurisemia tidak ditangani dalam jangka waktu lama, maka keadaan
tersebut dapat menjadi penyebab timbulnya arthritis gout, nefropati gout atau batu
ginjal (Hidayat, 2009).
Usaha untuk menurunkan kadar asam urat darah dapat dilakukan dengan
mengurangi produksi asam urat atau meningkatkan ekskresi asam urat oleh ginjal
(Price and Wilson, 2002). Umumnya untuk mengatasi penyakit asam urat
digunakan obat sintesis seperti allopurinol. Allopurinol merupakan obat yang
bekerja menghambat pembentukan asam urat melalui penghambatan aktivitas
enzim xantin oxidase, namun karena allopurinol mempunyai efek samping yang
merugikan dan membahayakan seperti gangguan pada gastrointestinal, neuritis
perifer, toksisitas hati dan reaksi alergi pada kulit (Katzung, 2002), maka
dikembangkan pengobatan alternatif menggunakan tumbuhan, salah satunya yaitu
Pegagan merupakan tumbuhan kosmopolit atau memiliki daerah
penyebaran sangat luas. Pegagan tumbuh liar di seluruh Indonesia, umumnya pada
daerah-daerah beriklim tropis, dari dataran rendah hingga ketinggian 2,500 meter di
atas permukaan laut. Tumbuhan ini ditemui tumbuh melimpah di tempat-tempat
terbuka, seperti telaga dan tempat yang agak terlindung. Tumbuhan ini lebih
menyukai lingkungan yang basah seperti selokan, areal persawahan, tepi-tepi jalan,
padang rumput bahkan tepi-tepi tembok atau pagar (Depkes RI, 1977).
Beberapa penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa tumbuhan
pegagan memiliki khasiat sebagai antiulcer (Abdulla, dkk., 2010), anticemas
(Bradwejn, dkk., 2000), antioxidant (Jayshree, dkk., 2003), antihipertensi
(Incandela, dkk., 2001; Cesarone, dkk., 2001), kardioprotektif (Gnanapragasama,
dkk., 2004; Gnanapragasama, dkk., 2007), immunodulator (Jayathirtha, M., 2004),
neuroprotektif (Kumar, dkk., 2009), sitotoksik (Babykutty, dkk., 2009) serta
antiinflamasi (Li, dkk., 2009). Berdasarkan penelitian Sugianto, dkk (2012) daun
pegagan dapat menghambat enzim xantin oxidase secara in vitro, dimana xantin
oxidase merupakan enzim yang mengubah hipoxantin menjadi xantin dan xantin
menjadi asam urat (Price dan Wilson, 2005), selain itu efek antiinflamasi tumbuhan
pegagan dapat meredakan radang pada gout yang disebabkan oleh keadaan
hiperurisemia yang tidak ditangani dalam jangka waktu lama.
Kandungan kimia pegagan diantarnya triterpenoid: asiatikosida,
madekasosida, asam sianat, asam indosentoat, bayogenin; flavonoid: kaemferol,
kuesertin; saponin: sentelasapogenol A,B dan D (BPOM RI, 2010). Kandungan
yang diduga mampu menurunkan kadar asam urat yaitu flavonoid, dimana
Secara tradisional pegagan telah digunakan masyarakat untuk mengobati
penyakit kulit, sakit perut, batuk, batuk berdarah, disentri, penyembuhan luka,
radang, pegal linu, asma, wasir, tuberkulosis, lepra, demam dan penambah selera
makan (BPOM RI, 2010).
Oleh karena itu, peneliti tertarik melakukan uji in vivo terhadap efek
antihiperurisemia daun pegagan dengan metode induksi menggunakan potassium
oxonate.
1.2Perumusan masalah
Berdasarkan uraian di atas, maka rumusan masalah dalam penelitian ini
adalah sebagai berikut:
a.apakah ekstrak etanol daun pegagan mempunyai efek antihiperurisemia terhadap
mencit jantan yang diinduksi potassium oxonate?
b.berapakah dosis dan waktu paling efektif ekstrak etanol daun pegagan sebagai
antihiperurisemia?
1.3Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis dalam penelitian ini
adalah sebagai berikut:
a.ekstrak etanol daun pegagan mempunyai efek antihiperurisemia terhadap mencit
jantan yang diinduksi potassium oxonate.
b.ekstrak etanol daun pegagan dosis tertinggi memiliki efek antihiperurisemia
paling baik dari semua dosis yang diberikan dan waktu pengamatan jam ke-4
1.4Tujuan penelitian
Adapun tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui :
a.efek antihiperurisemia ekstrak etanol daun pegagan terhadap mencit jantan.
b.dosis dan waktu paling efektif ekstrak etanol daun pegagan yang mempunyai
efek antihiperurisemia.
1.5Manfaat penelitian
Manfaat penelitian ini adalah untuk memberikan informasi kepada
masyarakat tentang kemampuan daun pegagan sebagai antihiperurisemia.
1.6Kerangka Pikir Penelitian
Adapun kerangka pikir pada penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 1.1
Variabel bebas Variabel terikat Parameter
-Allopurinol 10 mg/kg BB
Kontrol negatif : -CMC Na 1 % BB
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1Tanaman Pegagan
Berikut adalah klasifikasi tanaman, nama daerah, deskripsi tanaman,
kandungan kimia dan manfaat tanaman pegagan.
2.1.1 Klasifikasi tanaman
Pegagan diklasifikasikan sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Apiales
Famili : Apiaceae
Genus : Centella
Spesies : Centella asiatica (L.) Urban
2.1.2 Nama daerah
Pegagan di Indonesia dikenal dengan nama daerah, Sumatra: pegagan
(Aceh), daun kaki kuda, daun penggaga, penggaga, rumput kaki kuda, pegagan,
kaki kuda (Melayu), pegago, pugago (Minangkabau); Jawa: cowet gompeng,
antanan, antanan gede (Sunda); Bali: gagan-gagan, ganggagan, kele lere (Sawo);
Nusa Tenggara: bebele (Sasak); Maluku: sarowati (Halmahera), kolotidi manora
(Ternate); Sulawesi: pegaga, wisu-wisu (Makasar), cipubalawo (Bugis), hisu-hisu
2.1.3 Deskripsi tanaman
Pegagan merupakan tumbuhan terna atau herba tahunan, tanpa batang tetapi
dengan rimpang pendek dan stolon-stolon yang melata, panjang 10 cm sampai 80
cm. Daun tunggal, tersusun dalam roset yang terdiri dari 2 sampai 10 daun,
kadang-kadang agak berambut; tangkai daun panjang sampai 50 mm, helai daun berbentuk
ginjal, lebar dan bundar dengan garis tengah 1 cm sampai 7 cm, pinggir daun
beringgit sampai beringgit-bergerigi, terutama ke arah pangkal daun. Perbungaan
berupa payung tunggal atau 3 sampai 5 bersama-sama keluar dari ketiak daun
kelopak, gagang perbungaan 5 mm sampai 50 mm, lebih pendek dari tangkai daun.
Bunga umumnya 3, yang di tengah duduk, yang di samping bergagang pendek;
daun pelindung 2, panjang 3 mm sampai 4 mm, bentuk bundar telur; tajuk berwarna
merah lembayung, panjang 1 mm sampai 1,5 mm, lebar sampai 0,75 mm. Buah
pipih, lebar lebih kurang 7 mm dan tinggi lebih kurang 3 mm, berlekuk dua, jelas
berusuk, berwarna kuning kecoklatan, berdinding agak tebal (Depkes RI, 1977).
2.1.4 Kandungan kimia
Pegagan mengandung triterpenoid: asiatikosida, madekasosid, asam asiatat,
asam madekasat, asam indosentoat, bayogenin, asam 2α, 3β, 20, 23
-tetrahidroksiurs-28-oat, asam euskapat, asam terminolat, asam 3β-6β
-23-tri-hidroksiolean-12-en-28-oat, asam 3β-6β-23-trihidroksiurs-12-en-28-oat; flavonoid:
kaempferol, kuersetin; Saponins: sentelasapogenol A, sentelasaponin A,B dan D;
poliasetilen; kadiyenol, sentelin, asiatisin dan sentelesin (BPOM, 2010).
2.1.5 Manfaat tanaman
Penggunaan tanaman pegagan secara tradisional digunakan untuk mengobati
radang, pegal linu, asma, wasir, tuberkulosis, lepra, demam dan penambah selera
makan (BPOM RI, 2010).
2.2 Simplisia dan Ekstrak
Simplisia ialah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang belum
mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang
telah dikeringkan. Simplisia dibedakan menjadi 3 yaitu :
a. Simplisia nabati ialah simplisia yang berupa tanaman utuh, bagian tanaman atau
eksudat tanaman. Eksudat tanaman ialah isi sel yang secara spontan keluar dari
tanaman atau isi sel dengan cara tertentu dipisahkan dari tanamannya dan belum
berupa zat kimia murni.
b. Simplisia hewani ialah simplisia yang berupa hewan utuh, bagian hewan atau
zat-zat berguna yang dihasilkan oleh hewan dan belum berupa zat-zat murni.
c. Simplisia pelikan (mineral) ialah simplisia yang berupa bahan pelikan (mineral)
yang belum diolah atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum berupa zat
kimia murni.
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa
aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai,
kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang
tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan
(Ditjen POM, 1995).
2.3 Metode Ekstraksi
Ekstraksi adalah suatu proses penyarian senyawa kimia yang terdapat di
metode yang tepat. Metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut, dibedakan
menjadi:
a. Cara dingin
Metode ekstraksi cara dingin dibedakan menjadi :
i.Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan
pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruangan (kamar).
ii.Pekolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur
ruangan.
b. Cara panas
Metode ekstraksi dengan cara panas dibedakan menjadi :
i. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan debgan
adanya pendingin balik.
ii. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan
jumlah pelarut relative konstan dengan adanya pendingin balik.
iii. Digesti
yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan
pada temperatur 40 - 50oC.
iv. Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air
(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur (96 - 98
o
C) selama waktu tertentu (15-20 menit) ).
v. Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥ 30 menit) dan suhu -
sampai titik didih air (Depkes RI, 2000).
2.4Asam Urat
Asam urat merupakan produk akhir katabolisme purin. Purin yang
menghasilkan asam urat dapat berasal dari tiga sumber, yaitu purin dari makanan,
konversi asam nukleat jaringan menjadi nukleotida purin dan sintesis de novo basa
purin (Ernest, dkk., 2008).
Nukleotida purin yang utama pada manusia adalah adenosine monofosfat
(AMP) dan guanosin monofosfat (GMP). Kedua nukleotida tersebut akan dipecah
menjadi bentuk nukleosida oleh fosfomonoesterase menjadi adenosine dan
guanosin. Adenosine akan mengalami deaminasi menjadi inosin oleh enzim
adenosine deaminase. Fosforilasi ikatan N-glikosinat inosin dengan guanosin
dikatalis oleh nukleosida purin fosforilase sehingga akan dilepaskan senyawa
ribose-1-fosfat dan basa purin. Setelah itu, hipoxantin dan guanine membentuk
xantin yang masing-masing dikatalis oleh enzim xantin oxidase dan guanase.
Xantin yang terbentuk akan kembali dikatalisis oleh xantin oxidase menjadi asam
Kadar asam urat pada serum normal laki-laki adalah 5,1 ± 1,0 mg/dl dan
pada perempuan adalah 4,0 ± 1,0 mg/dl. Nilai ini akan meningkat sampai 9-10
mg/dl pada seseorang dengan gout (Price dan Wilson, 2005), sedangkan pada
mencit normal kadar asam uratnya adalah 0,5-1,4 mg/dl dan mencit dikatakan
hiperurisemia jika kadar asam urat darahnya berkisar antara 1,7-3,0 mg/dl
(Muhtadi, dkk., 2012). Manusia memiliki kadar asam urat yang lebih tinggi dari
hewan mamalia lain karena manusia tidak memiliki enzim urikase, yaitu enzim
yang menguraikan asam urat menjadi allantoin yang mudah larut (Katzung, 2002).
Asam urat diketahui berfungsi sebagai antioksidan dan mungkin antioksidan
yang paling penting penting dalam plasma dengan kontribusi sampai 60 % dari
seluruh aktivitas pembersihan radikal bebas dalam serum manusia. Tetapi asam
urat juga bersifat prooksidatif pada kondisi tertentu, khususnya bila antioksidan
lain berada pada level yang rendah. Observasi klinis dan laboratoris
memperlihatkan peningkatan konsentrasi asam urat dalam darah lebih dari 5,5
mg/dl, dikaitkan dengan disfungsi endotel, jadi walau mempunyai peranan sebagai
antioksidan yang signifikan, asam urat secara langsung maupun tidak langsung
dapat menyebabkan kerusakan vaskuler (Wisesa dan Suastika, 2009).
2.5Hiperurisemia
Hiperurisemia adalah keadaan dimana terjadi peningkatan kadar asam urat
darah di atas normal. Beberapa hal yang dapat meningkatkan kadar asam urat
dalam darah serta merupakan faktor penyebab terjadinya hiperurisemia adalah
sebagai berikut:
a. Peningkatan produksi asam urat (overproduction)
pyrophos-phate synthetase (PRPP synthetase) akan menyebabkan peningkatan PRPP
yang merupakan kunci sintesa purin dan terjadi defisiensi
hypoxanthine-guanine phosphoribosyl tranferase (HGPRT) akan meningkatkan
metabolisme guanine dan hipoxantin menjadi xantin.
ii.Penyebab sekunder yaitu terjadi peningkatan asupan purin, konversi asam -
nukleat meningkat, penguraian ATP meningkat.
b. Penurunan ekskresi asam urat (underexcretion)
Hal ini dapat terjadi karena penyebab primer (idiopatik) dan penyebab
sekunder yaitu berupa insufiensi ginjal, terjadi inhibisi pengeluaran asam urat
(ketoasidosis, laktat asidosis) dan peningkatan reabsorbsi tubular (Gaw, dkk.,
2011).
2.6Gout
Gout (pirai) merupakan kelompok penyakit heterogen sebagai akibat deposisi
kristal monosodium urat pada jaringan, akibat gangguan metabolisme berupa
hiperurisemia. Gout dapat bersifat primer dan skunder. Gout primer merupakan
akibat langsung pembentukan asam urat tubuh yang berlebihan atau akibat
penurunan ekskresi asam urat. Gout sekunder disebabkan karena pembentukan
asam urat yang berlebihan atau ekskresi asam urat yang berkurang akibat proses
penyakit lain atau pemakaian obat-obat tertentu.
Terdapat empat tahap perjalanan klinis gout yang tidak terobati, yaitu:
a. Tahap pertama adalah hiperurisemia asimtomatik. Pada tahap ini pasien tidak
menunjukkan gejala-gejala selain dari peningkatan kadar asam urat serum.
Hanya 20 % dari pasien hiperurisemia asimtomatik yang berlanjut menjadi
b. Tahap kedua adalah arthritis gout akut. Serangan gout akut terjadi ketika kristal
urat mulai terbentuk pada cairan sinovial. Pada tahap ini gejala yang muncul
sangat khas, yaitu radang sendi yang akut dan timbul sangat cepat dalam waktu
singkat. Keluhan monoartikuler berupa nyeri, bengkak, merah dan hangat,
disertai keluhan sistemik berupa demam, menggigil dan merasa lelah.
c. Tahap ketiga adalah tahap interkritis. Tahap ini merupakan kelanjutan stadium
gout akut, dimana secara klinik tidak muncul tanda-tanda radang akut, meskipun
pada cairan sendi masih ditemukan kristal urat, yang menunjukkan proses
kerusakan sendi yang terus berlangsung progresif. Tahap ini bisa berlangsung
beberapa tahun sampai 10 tahun tanpa serangan akut dan tanpa tata laksana yang
adekuat akan berlanjut ke stadium gout kronik.
d. Tahap keempat adalah tahap gout kronik. Pada tahap ini terjadi kerusakan
persendian dan bahkan persendian mengalami kehancuran total oleh adanya
deposit kristal monosodium urat, terjadi kerusakan yang ekstensif dan permanen
(Price dan Wilson, 2005).
2.7Obat antihiperurisemia
Berikut ini adalah golongan obat-obat yang digunakan untuk mengatasi
kondisi hiperurisemia :
a.Golongan urikosurik
Obat-obat golongan ini dapat meningkatkan ekskresi asam urat dengan
menghambat reabsorbsi asam urat di tubulus ginjal sehingga terjadi peningkatan
ekskresi asam urat melalui urin. Oleh karena itu, fungsi ginjal yang baik sangat
mendukung mekanisme kerja obat golongan ini. Pasien yang menggunakan
meningkatkan ekskresi asam urat (Price dan Wilson, 2005). Obat-obat urikosurik
diantaranya adalah :
i.Probenesid
Probenesid biasanya dimulai pada dosis 0,5 mg secara oral setiap hari
dalam dosis terbagi, meningkat sampai 1 gram sehari setelah 1 minggu
penggunaan. Harus diberikan bersama makanan untuk mengurangi efek
gastrointestinal yang tidak diinginkan.
ii.Sulfinpirazon
Sulfinpirazon dimulai pada dosis oral 200 mg sehari, meningkat sampai
400-800 mg sehari. Harus diberikan dalam dosis terbagi bersama makanan untuk
mengurangi efek gastrointestinal yang tidak diinginkan (Katzung, 2002).
b.Penghambat xantin oxidase
Satu-satunya obat golongan ini yang masih digunakan hingga sekarang yaitu
allopurinol. Allopurinol dan metabolit utamanya oksipurinol (alloxanthine)
merupakan inhibitor xantin oxidase dan mempengaruhi perubahan hipoxantin
menjadi xantin dan xantin menjadi asam urat. Allopurinol juga menurunkan
konsentrasi intraseluler PRPP. Oleh karena waktu paruh metabolitnya panjang,
allopurinol cukup diberikan satu kali sehari. Dosis awal untuk allopurinol adalah
100 mg sehari, dosis allopurinol dapat ditingkatkan sampai 300 mg/hari tergantung
pada respon kadar asam urat. Efek samping pada pemakaian allopurinol yaitu
terjadi gangguan gastrointestinal termasuk mual, muntah dan diare, terjadi reaksi
alergi, toksisitas hati, neuritis perifer dan lain-lain (Katzung, 2002). Mekanisme
2.8Potassium oxonat
Potassium oxonat merupakan salah satu penginduksi hiperurisemia pada
hewan pengerat. Potassium oxonat bekerja dengan cara menghambat urikase atau
urat oxidase. Enzim tersebut mengkatalis reaksi perubahan asam urat menjadi
allantoin. Jika enzim tersebut dihambat maka akan terjadi penumpukan asam urat
pada hewan uji (Watanabe, dkk., 2006). Metabolisme asam urat menjadi allantoin
dan mekanisme kerja potassium oxonat dalam menghambat urikase dapat dilihat
pada Gambar 2.2
Asam urat + 2H2O + O2
Allantoin + CO2 +H2O
Keterangan : : menghambat
: terurai
Gambar 2.2 Mekanisme kerja potassium oxonat dalam menghambat urikase
(Mazzali, dkk., 2001)
Gambar 2.1 Mekanisme inhibisi sintesis asam urat oleh allopurinol (Katzung, 2002) Ket : =
menghambat
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan penelitian
yaitu pengumpulan bahan, identifikasi tumbuhan, pembuatan simplisia,
karakterisasi dan skrining fitokimia simplisia, pembuatan ekstrak, pengujian efek
penurunan kadar asam urat secara oral terhadap mencit jantan dan analisis data.
Matrix rancangan penelitian ditunjukkan pada Tabel 3.1
Tabel 3.1 Matrix rancangan penelitian
3.1Alat-alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas,
aluminium foil, blender (Panasonic®), lemari pengering, mikroskop (Olympus®),
hot plate (Fisons®), oven listrik (Memmert®), tanur (Nabertherm®) timbangan
digital (Mettler Tolledo®), seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, eksikator,
cawan porselin, cawan alas datar, mortir, stamfer, objek glass, rotary evaporator
(Hooke D®), timbangan hewan, oral sonde, stopwatch, spuit 1 ml, alat pengukur
kadar asam urat (Easy touch®).
3.2Bahan-bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu simplisia daun
pegagan (Centella asiatica (L.) Urb.), etanol 70 %, kloral hidrat, potassium
oxonate (Sigma Aldrich®), allopurinol (Hexpharm®), aquades, aqua pro injeksi,
CMC Na dan pakan ternak.
3.3Hewan Percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit-
jantan, berat badan 24 g – 30 g, umur 2 - 3 bulan sebanyak 25 ekor. Hewan
diaklimatisasi selama 2 minggu dengan tujuan untuk menyeragamkan makanan dan
hidupnya dengan kondisi yang serba sama sehingga dianggap memenuhi syarat
penelitian.
3.4Penyiapan bahan
3.4.1 Pengumpulan bahan
Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa
digunakan adalah daun pegagan hijau dan segar yang diambil di halaman Fakultas
Hukum Universitas Sumatera Utara .
3.4.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan oleh Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(LIPI) Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi Bogor.
3.4.3 Pembuatan simplisia
Pembuatan simplisia dilakukan dengan cara daun pegagan yang telah
dikumpulkan, dibersihkan dari pengotor, lalu dicuci bersih dengan air sampai
bersih dan ditiriskan. Selanjutnya dikeringkan dengan cara diangin-anginkan
terlebih dahulu, lalu dikeringkan di dalam lemari pengering sampai simplisia rapuh
ketika diremas. Selanjutnya diblender sampai menjadi serbuk dan disimpan dalam
wadah tertutup rapat.
3.5Pemeriksaan karakteristik simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik,
mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu
tidak larut asam, penetapan kadar sari larut dalam air, dan penetapan kadar sari
larut dalam etanol.
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan pada daun pegagan segar meliputi
pemeriksaan bentuk dan warna.
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun
ditambahkan sedikit serbuk simplisia daun pegagan dan ditutup dengan kaca
penutup, selanjutnya dilihat di bawah mikroskop.
3.5.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen).
Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung, pendingin, tabung
penyambung dan tabung penerima. Cara penetapannya yaitu:
Pada labu bulat dimasukkan 200 ml toluena dan 2 ml air suling, didestilasi
selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian
volume air di dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Kemudian
kedalam labu yang berisi toluen jenuh tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia
daun pegagan yang telah ditimbang saksama, lalu dipanaskan hati-hati selama 15
menit. Setelah toluen mulai mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes
per detik hingga sebagian air tersuling. Kemudian kecepatan dinaikkan hingga 4
tetes per detik. Kemudian setelah semua air tersuling, bagian dalam pendingin
dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung
penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah
sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air
yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang
diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (Depkes RI, 1995).
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia daun pegagan, dimaserasi selama 24 jam
dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling 1000 ml) dalam
labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, dibiarkan selama 18
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada
suhu 1050C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam air dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia daun pegagan, dimaserasi selam 24 jam
dalam 100 ml etanol 95% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6
jam pertama, dibiarkan selama 18 jam, kemudian disaring. Diuapkan 20 ml filtrat
sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan
ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105 oC sampai bobot tetap. Kadar sari larut
dalam etanol dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk simplisia daun pegagan yang telah digerus dan
ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porcelin yang telah dipijar dan ditara,
kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran
dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam. Kemudian didinginkan dan ditimbang
sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan
dengan 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam
asam dikumpulkan, disaring dengan kertas saring, dipijarkan, kemudian
didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam
3.6Skrining fitokimia
Pemeriksaan alkaloid, saponin (Depkes RI, 1995), flavonoid dan tannin
(Fansworth, 1966), steroid/triterpenoid (Harborne, 1987).
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk simplisia daun pegagan ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian
dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9
ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan lalu
disaring. Filtrat dipakai untuk percobaan berikut:
a. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan Mayer akan terbentuk
endapan bewarna putih atau kuning
b. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan Bouchardat akan terbentuk
endapan bewarna coklat hitam
c. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan Dragendorff akan terbentuk
endapan bewarna merah atau jingga.
Alkaloida dinyatakan positif jika terjadi endapan atau paling sedikit dua atau
tiga dari percobaan diatas.
3.6.2 Pemeriksaan flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia daun pegagan ditambahkan 10 ml air panas,
dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml filtrat
ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil
alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna
3.6.3 Pemeriksaan Tannin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia daun pegagan disari dengan 10 ml air
suling, disaring lalu filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna.
Diambil 2 ml larutan lalu ditambahkan 1 - 2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %.
Terbentuk warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tannin.
3.6.4 Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia daun pegagan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi dan ditambahkan 10 ml air suling panas, didinginkan kemudian
dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk buih setinggi 1-10 cm yang
mantap tidak kurang dari 10 menit dan pada penambahan 1 tetes larutan asam
klorida 2 N, buih tidak hilang, menunjukkan adanya saponin.
3.6.5 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoida
Sejumlah 1 g serbuk simplisia daun pegagan dimaserasi dengan 20 ml n
-heksana selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada
sisa dalam cawan penguap ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes
asam sulfat pekat. Diteteskan pada saat akan akan mereaksikan sampel uji. Timbul
warna ungu atau merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya
steroid-triterpenoid.
3.7Pembuatan ekstrak Etanol Daun Pegagan
Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode
maserasi, sesuai dengan yang tertera dalam Farmakope Indonesia (1979).
Prosedurnya adalah sebagai berikut :
Sebanyak 300 gram serbuk simplisia daun pegagan dimaserasi dengan 75
terlindung dari cahaya matahari sambil diaduk, kemudian disaring dan ampas
dimaserasi kembali dengan etanol 70% secukupnya hingga diperoleh 100 bagian.
Maserat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator pada
temperatur ± 40oC sampai diperoleh ekstrak kental.
3.8Prosedur Uji Efek Penurunan Kadar Asam Urat
3.8.1 Pembuatan CMC Na 1 % sebagai kontrol negatif
Pembuatan suspensi CMC Na 1 % dilakukan dengan cara berikut : sebanyak
1 gram CMC Na ditaburkan ke dalam lumpang yang berisi air suling panas
sebanyak 20 ml, didiamkan selama 15 menit hingga diperoleh massa yang
transparan, digerus hingga berbentuk gel dan diencerkan dengan sedikit air suling,
kemudian dituang ke dalam labu tentukur 100 ml, ditambah air suling sampai batas
tanda.
3.8.2 Pembuatan suspensi allopurinol sebagai kontrol positif
Konsentrasi suspensi allopurinol yang dibuat adalah 0,1 % dengan cara
sebagai berikut: ditimbang tablet allopurinol satu persatu sebanyak 20 tablet dan
ditimbang berat 20 tablet, selanjutnya diserbukkan, kemudian ditimbang
allopurinol yang telah diserbukkan setara dengan berat 25 mg allopurinol,
kemudian dimasukkan dalam lumpang, ditambahkan sedikit CMC Na 1 %, digerus
homogen, dimasukkan ke dalam labu tentukur, kemudian dicukupkan dengan CMC
Na 1 % sampai 25 ml.
3.8.3 Pembuatan Larutan Potassium Oxonate (LPO) 150 mg/25 ml
Pembuatan LPO dilakukan dengan cara sebagai berikut : ditimbang serbuk-
potassium oxonate sebanyak 150 mg kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur
3.8.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Pegagan (Sediaan uji)
Konsentrasi ekstrak yang dibuat adalah 2 %, 4 % dan 6 %. Pembuatannya
dilakukan dengan cara sebagai berikut : ekstrak ditimbang masing-masing
sebanyak 200 mg, 400 mg dan 600 mg, dimasukkan masing-masing ke dalam
lumpang, gerus hingga homogen ditambahkan sedikit CMC Na 1 %, selanjutnya
dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur, kemudian masing-masing
konsentrasi di cukupkan dengan CMC Na 1 % sampai 10 ml.
3.8.5 Penyiapan hewan percobaan
Hewan yang digunakan adalah mencit jantan dengan berat 20 - 30 g, jumlah
25 ekor mencit dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok kontrol positif, kontrol
negatif dan kelompok uji yang terdiri dari 3 dosis (200 mg/kg BB, 400 mg/kg BB
dan 600 mg/kg BB ) dan setiap kelompok perlakuan terdiri dari 5 ekor mencit.
Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara
terlebih dahulu selama kurang lebih dua minggu untuk penyesuaian lingkungan,
kemudian dipuasakan selama 18 jam sebelum digunakan.
3.8.6 Pengujian efek antihiperurisemia
Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 5 kelompok, masing-masing
terdiri dari 5 ekor hewan percobaan. Kelompok tersebut adalah:
Kelompok I : diberikan CMC Na dosis 1 % BB
Kelompok II : diberikan suspensi allopurinol dosis 10 mg/kg BB
Kelompok III : diberikan suspensi EEDP dosis 200 mg/kg BB
Kelompok IV : diberikan suspensi EEDP dosis 400 mg/kg BB
Masing-masing kelompok diukur kadar asam urat puasa. Kemudian
disuntikkan penginduksi asam urat yaitu potassium oxonate secara intraperitonial
(i.p), setelah 1 jam kemudian, diukur kembali kadar asam urat pada masing-masing
tiap kelompok perlakuan (kadar asam urat terinduksi), selanjutnya 1 jam berikutnya
diberikan sediaan uji secara per oral, lalu diukur kembali kadar asam uratnya
setelah diberikan perlakuan setiap 1 jam selama 4 jam pengamatan. Dicatat hasil
pengukuran masing-masing kelompok perlakuan (Watanabe, dkk., 2006; Muhtadi,
dkk., 2012; Simamarta, dkk., 2012; Kristiani, dkk., 2013). Selanjutnya dihitung
persen penurunan kadar asam urat (KUA) dengan rumus sebagai berikut.
% penurunan kadar asam urat =
Keterangan : a = kadar asam urat terinduksi
b= kadar asam urat pada waktu pengamatan jam ke-n
3.9Analisis data
Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan metode analisis variansi
(ANAVA) dan Kruskal Wallis dengan tingkat kepercayaan 95 %, jika hasilnya
berbeda secara signifikan maka dilanjutkan dengan uji Tukey HSD dan Mann
Whitney untuk melihat perbedaan nyata antar kelompok perlakuan. Analisis
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1Identifikasi Tumbuhan
Hasil Identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Bogoriense,
Bidang Botani Pusat Penelitian- LIPI Bogor adalah :
Jenis : Centellaasiatica (L.) Urban
Suku : Apiaceae (lampiran 1, halaman 39)
4.2Karakteristik Simplisia dan Ekstrak
Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia daun pegagan diperoleh daun
berbentuk ginjal, panjang 4 - 5 cm dan lebar 3 - 4 cm, berwarna hijau tua, pangkal
helai daun berlekuk, ujung daun membundar, pinggir daun bergerigi, tulang daun
rata-rata terdiri dari 6 atau 7. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia
daun pegagan terlihat adanya epidermis dengan stomata tipe anisositik, rambut
penutup, serabut sklerenkim dan epidermis atas (lampiran 4, halaman 43). Hasil
karakterisasi serbuk simplisia daun pegagan dapat dilihat pada Tabel 4.1
Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia daun pegagan
No Karakteristik serbuk simplisia Simplisia
Kadar (%) Persyaratan (%)
1 Kadar air 3,97 < 10
2 Kadar sari larut dalam air 17,24 ≥ 6
3 Kadar sari larut dalam etanol 15,33 > 9,5
4 Kadar abu total 7,87 ≤ 19
5 Kadar abu tidak larut dalam asam 5,03 ≥ 5
Karakterisasi simplisia daun pegagan bertujuan untuk menjamin kualitas
bahan baku yang akan digunakan untuk membuat ekstrak etanol daun pegagan.
Penetapan kadar air bertujuan untuk memastikan bahwa kadar air simplisia daun
(1995) yaitu sebesar 10 %, karena jika melewati kadar yang dipersyaratkan akan
terjadi pertumbuhan jamur. Hasil penetapan kadar air simplisia daun pegagan
memenuhi syarat yaitu kurang dari 10 %. Penetapan kadar sari yang larut dalam air
dilakukan untuk mengetahui zat-zat yang tersari dalam pelarut air. Hasil penetapan
kadar sari larut dalam air yang diperoleh yaitu 17,24 %. Penetapan kadar sari larut
dalam etanol menyatakan zat-zat yang tersari dalam pelarut etanol tetapi mungkin
tidak larut dalam air (Depkes RI, 2000). Hasil penetapan kadar sari larut dalam
etanol yang diperoleh yaitu 15,33 %. Penetapan kadar abu dilakukan untuk
mengetahui gambaran mineral internal dan eksternal yang berasal dari awal proses
yang terkandung dalam simplisia (Depkes RI, 2000). Hasil penetapan kadar abu
simplisia daun pegagan yaitu sebesar 7,87 %. Sementara itu penetapan kadar abu
tidak larut asam untuk mengetahui kadar senyawa organik yang tidak larut asam,
misalnya silikat (Depkes RI, 2000). Hasil penetapan kadar abu tidak larut asam
yang diperoleh yaitu sebesar 5,03 %.
Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun pegagan
dapat dilihat pada Tabel 4.2
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak
No Pemeriksaan Serbuk simplisia Ekstrak
1 Alkaloida - -
pemeriksaan flavonoid, saponin, tannin dan steroid/triterpenoid menunjukkan hasil
yang positif pada simplisia dan ekstrak, sedangkan pemeriksaan alkaloid
hasil karakterisasi penelitian Sugianto, dkk., (2012) yang menunjukkan bahwa hasil
pemeriksaan alkaloid pada simplisia dan ekstrak daun pegagan hasilnya positif, hal
ini diduga karena pereaksi yang digunakan agak sedikit berbeda, pada penelitian
sebelumnya digunakan pereaksi Mayer, Wegner dan Dragendorff, sedangkan pada
penelitian ini digunakan pereaksi Mayer, Bouchardat dan Dragendorff. Pada
penelitian ini juga diduga jumlah kandungan alkaloid pada daun pegagan
jumlahnya sedikit. Tetapi hal tersebut tidak terlalu berpengaruh pada penelitian ini,
karena kandungan kimia yang diduga sebagai antihiperurisemia pada sampel ini
yaitu flavonoid.
4.3Pengujian efek antihiperurisemia
4.3.1 Uji efek penurunan kadar asam urat ekstrak
Pada penelitian ini digunakan 5 kelompok besar perlakuan yaitu kelompok
kontrol negatif menggunakan CMC Na 1 % BB, kontrol positif menggunakan
suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, kelompok uji terdiri dari tiga dosis perlakuan
ekstrak (suspensi EEDP dosis 200 mg/kg BB, suspensi EEDP dosis 400 mg/kg BB,
dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB). Ketiga dosis EEDP tersebut dipilih karena
sebelumnya telah dilakukan orientasi dosis EEDP dengan variasi dosis 50 mg/kg
BB, 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB dan 400 mg/kg BB, tetapi karena dosis 50
mg/kg BB dan 100 mg/kg BB menunjukkan hasil penurunan yang sangat kecil,
maka dipilihlah dosis 200 mg/kg BB, 400 mg/kg BB dan 600 mg/kg BB.
Uji efek antihiperurisemia ekstrak etanol daun pegagan per oral dilakukan
dengan cara menginduksi mencit agar hiperurisemia dengan potassium oxonate,
dimana pengukuran kadar asam urat dilakukan dengan menggunakan alat pengukur
Potassium oxonate digunakan sebagai penginduksi asam urat, dimana
potassium oxonate merupakan inhibitor enzim urikase. Dalam kebanyakan
mamalia terdapat enzim urikase yang berfungsi mengubah asam urat menjadi
allantoin yang lebih mudah larut dalam air (Katzung, dkk., 2002). Dengan
dihambatnya enzim urikase oleh potassium oxonate, asam urat akan tertumpuk dan
tidak tereliminasi dalam bentuk urin (Kristina, dkk., 2013).
Pada Tabel 4.3 dan Gambar 4.1 dapat dilihat kadar asam urat rata-rata
mencit untuk semua kelompok perlakuan selama 4 jam pengamatan.
Tabel 4.3 Kadar asam urat rata-rata mencit selama 4 jam pengamatan
1 jam 2 jam 3 jam 4 jam
Gambar 4.1 Grafik kadar asam urat rata-rata setelah pemberian CMC Na, suspensi
allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB.
Grafik di atas menunjukkan bahwa kelompok perlakuan yang diberikan
ekstrak memiliki efek antihiperurisemia pada mencit jantan, hal ini dapat dilihat
dengan membandingkannya dengan kelompok perlakuan yang diberikan CMC Na
dosis 1 % BB, dimana pada pemberian CMC Na dosis 1 % BB, kadar asam urat
mencit terus meningkat, sedangkan pada pemberian sediaan uji (ekstrak)
menunjukkan adanya penurunan kadar asam urat pada mencit.
Pada jam ke-1, kelompok perlakuan yang diberikan CMC Na 1 % BB,
suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP
400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB, kadar asam urat mencit
mengalami kenaikan. Hal ini disebabkan potassium oxonate telah bekerja
menghambat enzim urikase sehingga kadar asam urat di dalam darah mencit
meningkat.
Pada jam ke-2, ke-3, ke-4 dan ke-5 kelompok yang diberikan suspensi
allopurinol 10 mg/kg BB , suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP 400
mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB memberikan efek penurunan kadar
asam urat, sedangkan kelompok yang diberikan CMC Na 1 % tidak memberikan
efek penurunan kadar asam urat (kadar asam urat tetap meningkat). CMC Na tidak
menunjukkan efek penurunan terhadap kadar asam urat pada mencit diduga karena
CMC Na tidak mengandung zat aktif yang berkhasiat sebagai antihiperurisemia.
Selanjutnya untuk menentukan kekuatan efek antihiperurisemia semua
kelompok perlakuan tiap jam selama 4 jam pengamatan, maka dihitunglah persen
(%) penurunan kadar asam urat mencit. Hasil perhitungan % penurunan kadar asam
kadar asam urat rata-rata pada mencit selama 4 jam pengamatan dapat dilihat pada
Gambar 4.2
Gambar 4.2 Diagram rata-rata persen penurunan kadar asam urat yang diperoleh
dari setiap kelompok perlakuan (CMC Na, suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB).
Diagram di atas menggambarkan diagram batang kelompok perlakuan
CMC Na terbalik (berada di bawah), hal itu disebabkan oleh nilai persen penurunan
kadar asam urat mencit pada kelompok tersebut bernilai negatif (tidak
menunjukkan efek penurunan kadar asam urat pada mencit), sedangkan diagram
batang kelompok perlakuan lainnya berada di atas (bernilai positif), hal tersebut
karena kelompok perlakuan lainnya memiliki efek penurunan kadar asam urat pada
mencit. Selain itu diagram tersebut juga menunjukkan kekuatan semua kelompok
perlakuan dalam menurunkan kadar asam urat, dimana urutan kekuatan efek
penurunan kadar asam urat tiap jam selama 4 jam pengamatan mulai dari yang
tertinggi yaitu suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 600 mg/kg BB,
suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan yang paling lemah adalah suspensi EEDP 200
4.3.2 Uji perbedaan efek antihiperurisemia
Data hasil pengukuran kadar asam urat yang diperoleh selanjutnya diolah
menggunakan SPSS untuk melihat perbedaan efek antihiperurisemia antar
kelompok perlakuan. Data tersebut sebelumnya diuji dengan metode Shapiro-Wilk
untuk melihat apakah tiap kelompok terdistribusi normal atau tidak. Hasil uji
Shapiro-Wilk menunjukkan bahwa persen penurunan kadar asam urat mencit pada
tiap kelompok perlakuan terdistribusi normal (lihat pada lampiran 16, halaman 46).
Selanjutnya dilakukan uji homogenitas.
Uji homogenitas varian Levene dilakukan untuk mengetahui kesamaan
varian dari data kadar asam urat mencit pada tiap kelompok . Hasil menunjukkan
bahwa data kadar asam urat mencit pada waktu pengamatan jam ke-1 sampai jam
ke-3 bervariasi homogen, sehingga dilanjutkan ke uji parametrik yaitu uji ANAVA,
sedangkan untuk kelompok perlakuan pada jam ke-4, diperoleh data yang tidak
bervariasi homogen, sehingga data tersebut dilanjutkan ke uji non parametrik
Kruskal-Wallis. Uji ANAVA dan uji Kruskal-Wallis menunjukkan perbedaan yang
signifikan dengan nilai (p<0,05), hal ini berarti bahwa pada jam ke-1 sudah mulai
terlihat perbedaan yang bermakna antara kelima kelompok perlakuan. Karena uji
ANAVA dan Kruskal-Wallis menunjukkan perbedaan yang signifikan, maka
dilanjutkan dengan uji Tukey untuk waktu pengamatan jam ke-1 sampai jam ke-3
dan uji Mann Whitney untuk waktu pengamatan jam ke-4.
Dari hasil analisis Tukey, diperoleh dari jam ke-1 sampai jam ke-3,
kelompok perlakuan yang diberikan CMC Na menunjukkan perbedaan yang
signifikan dengan kelompok perlakuan lain (suspensi allopurinol 10 mg/kg BB,
mg/kg BB) dengan nilai signifikan (p<0,05), sedangkan kelompok perlakuan yang
diberikan suspensi EEDP 200 mg/kg BB tidak berbeda signifikan dengan
kelompok yang diberikan suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600
mg/kg BB dengan nilai signifikan (p>0,05) tetapi berbeda segnifikan dengan
kelompok perlakuan yang diberikan suspensi allopurinol 10 mg/kg BB dengan nilai
signifikan (p<0,05) dan kelompok perlakuan yang diberikan suspensi EEDP 400
mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB tidak berbeda signifikan dengan
kelompok perlakuan yang diberikan suspensi allopurinol 10 mg/kg BB (kontrol
positif) dengan nilai (p>0,05). Sementara itu hasil uji Mann Whitney menunjukkan
bahwa pada waktu pengamatan jam ke-4, kelompok perlakuan yang diberikan
CMC Na berbeda secara signifikan dengan semua kelompok perlakuan yang lain
(suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 200 mg/kg BB, suspensi EEDP
400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB) dengan nilai (p<0,05), begitu
juga dengan kelompok perlakuan yang diberikan suspensi EEDP 200 mg/kg BB
yang menunjukkan nilai signifikan (p<0,05) terhadap semua kelompok perlakuan
lainnya (CMC Na, suspensi allopurinol 10 mg/kg BB, suspensi EEDP 400 mg/kg
BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB). Sedangkan untuk kelompok perlakuan
yang diberikan suspensi EEDP 400 mg/kg BB dan suspensi EEDP 600 mg/kg BB
tidak berbeda signifikan dengan kelompok yang diberikan suspensi allopurinol 10
mg/kg BB.
Hasil tersebut sesuai dengan pernyataan Bourne dan Zastrow (2011), yang
menyatakan bahwa peningkatan dosis obat harusnya akan meningkatkan respon
peningkatan respon akhirnya akan menurun, karena sudah tercapai dosis yang
sudah tidak dapat meningkatkan respon lagi.
Dari uraian di atas dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun pegagan
cukup efektif menurunan kadar asam urat. Hal ini memberikan gambaran atas
potensi daun pegagan sebagai antihiperurisemia. Senyawa aktif yang diduga
berperan dalam menurunkan kadar asam urat darah adalah flavonoid. Flavonoid
dilaporkan dapat menghambat kerja enzim xantin oxidase (Umamaheswari, 2013;
Lin, dkk., 2002). Dimana xantin oksidase merupakan enzim yang mengubah
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1Kesimpulan
Kesimpulan di dalam penelitian ini adalah:
a. Pemberian ekstrak etanol daun pegagan (EEDP) memiliki efek
antihiperurisemia, ditunjukkan dengan nilai signifikan ketiga dosis EEDP
berbeda signifikan dengan kelompok yang diberikan CMC Na (p<0,05).
b. Dosis yang paling efektif dari ekstrak etanol daun pegagan (EEDP) sebagai
antihiperurisemia adalah 400 mg/kg BB pada jam ke-4.
5.2Saran
Berdasarkan kesimpulan di atas, maka disarankan untuk penelitian
selanjutnya dilakukan uji efek antihiperurisemia daun pegagan dengan pelarut yang
lain misalnya etil asetat, sebagai bahan perbandingan untuk ekstrak etanol daun
DAFTAR PUSTAKA
Abdulla, M.A., AL-Bayaty, F.H., Younis L.T., and Abu H.M.I. (2010). Anti-ulcer activity of Centella asiatica leaf extract against ethanol-induced gastric mucosal injury in rats. Journal of Medicinal Plants Research. 4(13): 1253-1259.
Babykutty, S., Padikkala, J., Sathiadevan, P.P., Vijayakurup, V., Azis TKA., Srinivas, P., Gopala, S. (2009). Apoptosis induction of Centella asiatica on human breast cancer cells. African J. Trad. Compliment Alternat, Med. 6(1): 9-16.
Bourne, R.H., dan Zastrow, V.M. (2001). Reseptor dan Farmakodinamika Obat. Dalam Farmakologi Dasar dan Klinik. Edisi I. Jakarta: Salemba Medika.
BPOM RI. (2010). Serial Data Ilmiah Terkini Tumbuhan Obat; Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban). Jakarta: Direktorat Obat Asli Indonesia
Bradwejn, J., Zhou, Y., Koszycki, D.,Shlik, J. (2000). A double blind, placebo-controlled study on the effects of gotu kola (Centella asiatica) on acoustic startle response in healthy subject. J.Clin Psychopharmacol. 20(6): 680.
Cesarone, M.R., Incandela, L., De Sanctis, M.T., Belcaro, G., Bavera, P., Bucci, M., Ippolito, E. (2001). Evaluation of treatment of diabetic microangiopathy with total triterpenic fraction of Centella asiatica: A clinical prospective randomized trial with a microcirculatory model. Angiol. 52(2): 49-54.
Depkes RI. (1977). Materia Medika Indonesia. Jilid I. Jakarta: Departemen
Ernest, M.E., Clark, E.C. dan Hawkins, D.W. (2008). Dalam: Dipiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke, G.R., Wells, B.G., dan Posey, L.M.
