Mempelajari Pengaruh Ekstraksi Cincau Hijau (Cyclea barbata L. Miers) terhadap Produksi Radikal Bebas Makrogfag Peritioneal Mencit secara In Vintro

(1)

MEMPELAJARI PENGARUH EIGSTRAIC CINCAU lIIJAU

(Cyclea barbata

L.

Miers)

TERHADAP PRODUIGI

RADIIOiL BEBAS MAICROFAG PERITONEAL MENCIT

SECARA

IN

VITRO

Oleh :

DINA MARIA 13ANDAYANI

F02496033

2000

PAIWLTAS TEI(NOLOG1 PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(2)

MEMPELAJARI PENGARUH EICSTRAK CINCAU HIJAU

(Cyclen bnrbntn L. Miers) TERHADAP PRODUKSI RADIIUL BEBAS

MAIaROFAG PERITONEAL MENCIT SECARA IN U T R O

Oleh :

DINA MARIA HANDAYANI

PO2496033

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN

Pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian

Institut Pertanian Bogor

2000

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(3)

D i m Maria Handayani. F02496033. Mempelajari Pengaruh Elcstralc Cincau

IIijau (Cyclen bnrbntn L. Miers) Terhadap Produlcsi Radilcal Bebas Mnlcrofi~g

Peritoneal Meneit Secara In Vitro. Di bawah binlbingan Dr. lr. Fransiska Zakaria, MSc dan Ir. Endang Prangdimurti, MSi.

RINGKASAN

I<ecenderungan masyarakat untuk ltembali Ice alam (buck lo ncirtire) dengan n~englconsumsi produk-produk bahan alam, terutama maltanan sehat atau fiinctioi~cil food nlerupalcan peluang seltaligus tantangan bagi kita untuk mengoptimalkan

pemanfaatan potensi sumber daya tananxin yang melimpah menjadi produk maltanan sehat. Salah satu contohnya adalah gel cincau hijau yang dibuat dari tanaman Cyclecr

bnrbatn L. Miers. Gel cincau hijau ini memililti Itandungan serat yang tinggi

sehingga gel ini baik untuk dikonsunlsi sebagai nlakanan fuugsioual. Selain itu

daun dari cincau hijau (Cyclea horbaln L. Mier.~) digunaltan sebagai obat penurun

panas, radang lambung dan penurun teltanan darah tinggi.

Pe~~elitian ini bertujuan untult mendapatltan data ilmia!l tentang khasiat

cincau hijau (Cyclea l ~ n r h o ~ o L. mi el:^) deellgan 111eningltatIta11 sistem imun Ithususnya lcenlampua~l ~neningltatltan produltsi radilcal bebas dalam sel makrofag untult lceperluan penghancuran sel (fagositosis).

Altar, batang dan daun Cyclen barbatrr L. ~Miers dielcstrak menggu~lalta~l air,

eta1101 dan heltsan. Rendemen tertinggi pada Aia (3.83 %) dan terltecil pada I-Ieb

(0.19 %). Eltstralt yang didapat dianalisa kadar protein dan total fenolnya. Analisis

ini dilalc~~ltan ~mtult menduga lcomponen yang berperan dala~n n~eni~lglcatltan aktifitas

malcrofag dala~n memprodulcsi radikal bebas. I<adar protein tertinggi pada Aia (1.100

% b l ) dan terltecil pada I-Ieb (0.026 % blc). Total fenol terbesar pada Aia (1.640 %

b k ) dan terltecil Etd (0.036 % b!c). Sedangltan total fen01 pada eltstrak heltsan tidak

terdeteksi.

Produltsi radiltal bebas malcrofag mencit diulcur secara spelttrofluorometri

dengall l c ~ ~ r v a standar nitrit oltsida. Kurva standar dibuat dengall melarutltan beberapa

lconsentrasi sodium nitrit dalam RPMI-1640 dan direaksiltan dengan DI-IR

(dihydrorodhamine) 123 sebagai sumber fluororesensnya. Peng~~kuran di1akul:an

dengan menggunaltan spelctrofluorometer pada elnisi 530 nm _{dan elcsitasi 488 nm.}

Prosedur lcultur sel maltrofag mencit yang telah diberi eltstrak digambarltan

sebagai berilcut. Mencit jantan (6 minggu) dis~untilt dengan thioglycollate 3 %.

Emnpat hari lcenl~~dian, makrofag diisolasi dan dilct~ltur dengan media lengkap. Kultur

n~altrofag dilalc~~lta~l dengan pena~nbahan 9 jellis sanlpel (Aid, Aib, Aia, Etd, Etb, Eta,

Hed, Heb da11 Hea) dengan 5 seri lconsentrasi ( C l , C2, C3, C4 dan C5) dan LPS

Snbizonelln lyphosa sebagai antigen. Sebagai lcontrol digunakan sel dita~nbah LPS

Salmonelln ty hosa tanpa penamballan elcstrak. Kemudian diikubasi selama 20 jam

tY

pada suhu 37 C , 5% C 0 2 dan 95 % 02.

Pengulturan radiltal bebas yang diprodulcsi sel makrofag yaitu setelah

inlcubasi berakhir sejumlah 111 suspensi sel dilisis pada suhu -20 OC tllininlal 1 jam

(4)

10 111 DHR 123. Elnisi dibaca inenggunaltail spelttrofluorometer pada emisi 530 nni

dan elcsitasi 488 1111-1. Hasil penelitian menunjulclcan bahwa sa~npel Heb-C1 (25.478

m M ) , Eta-C1 (25.750 m M ) , Hea-C4 (26.403 inM), Heb-C5 (26.458 m M ) , Hea-C2

.

(26.838 m M ) , Eta-C5 (26.974 m M ) , Etb-C3 (27.654 m M ) , Etb-C4 (28.183 m M ) , Hed-C2 (28.854 m M ) , Heb-C2 (32.956 m M ) , Hea-C3 (33.880 m M ) , Hea-C1 (34.343 i n M ) dan Hea-C5 (41.522 m M ) mampu menghasilltan radiltal bebas lebih tinggi dari ltoiitrol (25.330 mM). Tetapi hanya ekstralt Hea-C5 (41.522 m M ) yang berbeda

iiyata terl~adap ltontrol (25.330 m M ) pada p < 0.01. Dari data tersebnt diltetahui

elcstralt cincau liijau (Cyclen barbata L. Miers) yang diekstrak deligall pelarut noii

polar dan pada ltonsentrasi tertentu mempunyai lteniampuan untuk menstimulir alctivitas iiialtrofag dalam inemprodultsi radiltal bebas.

Berdasarltan uji dullcan pada p < 0.01 eltstrak Aid (Cl-C5), Aib (Cl-C5),

Aia (Cl-C5) dau Etb (Cl-C2) n~enghasilkan radiltal bebas yaiig lebih rendah dan ,

berbeda ilyata dibandinglcan kontrol. Eltstrak tersebut iilempunyai sifat

immunosupresif.

Peilgulturan proliferasi maltrofag menggunakan metoda MTT, yaitu 6 jam

sebelum inlcubasi beralthir ditambahltan 10 pl MTT dan diinltubasi pada suh~i 37 OC,

5% COz dan 95 % 01 sehingga terbentult forn~azan. Sebelum dibaca dengan

spectroilic Eliza plate reader pada panjang gelonlbang 540 n m , ditambahkan 80 111

HCI-isopropanol. Berdasarkan uji duncan pada p < 0.01 menunjukkan bahwa

(5)

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

FAICULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

MEMPELAJARI PENGARUH EKSTRAK CINCAU HIJAU

(Cyclen bnrbntn L. Miers) TERHADAP PRODUKSI RADIKAL BEBAS

MAKROFAG PERITONEAL MENCIT SECARA IN WTRO

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelai SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN

Pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Peitanian

Oleh :

DINA MARTA HANDAYANI

F02496033

Dilahirkan di Batang, tanggal 18 Maret 1978

Tanggal lulus : 18 November 2000

0

(6)

I U T A PENGANTAR

Segala puji dan syultur penulis panjatltan kehadirat Allah SM'T, atas segala

hidayali-Nya sehiligga pent~lis dapat riienyelesaikan sltripsi ini dengan baik.

Pada lcesempatan ini, penulis ingin mengl~capkan teri~na kasili yang sebesar-

besarnya kepada seluruli pihak yang telah membantu, nlembimbing, ~ne~igaralikali d a ~ i

niengoreksi seluruh pekerjaan penulis sehingga skripsi ini dapat tersusun. P e n ~ ~ l i s

ingin mengucapltan banyak terima kasili kepada :

I. Bapak (se~noga selalu dalnai disisi-Nya), lbu, Mas Pliiet. Mas To. Mbak Ena,

Mbalc Ani, Mbalc Novi, Mbak Ida, Mas Pus dan empat "kltrccrci kecilkr~" l.ilo.,

Cita, Dimas dan Bulan atas doa, ltasih sayang, perhatian dan dukungannya.

2. Ibu Dr. Ir. Fransislta Zakaria, MSc. dali lbu Ir. Endang I'rangdi~iiurti, Msi.

selaku dosen pe~ubi~nbing yang telah dengan sabar meiiibimbing dan

~iiengoreltsi selur~~li pekesjaan pennlis sehingga skripsi ini dapat tersusun

dengall baik.

3. Bapalc Ir. Alfi Ichatib, MSc. yang berkenan sebagai dosen pengltji dan terilna

ltasis atas saran dan masukannya terhadap penulisati sltripsi ini.

4. Ibu Dr. Ir. Nurheni Sri Palupi, Msi., Ibu Ir. Didah Nur Faridah dan lbu Aisyah

yang telah memberikan masukan, saran, ltoreksi dan literaturnya.

5. Mira "Miro", Edna "Ananta" dan Seno "ASP" yang telah berji~ang hersallla-

sania mewujudltan sebuah impian "Cyclea" dan persahabatan yang begit7,r

ir~dah.

6. Adilc kecillcu "34" Uji, Ida, Sito dan Cyn-fe atas bantuan dan kekompaltan

Italian. Serriogn cepe/ qatsztl jndi "Cyclcn " gerlera.si ko-hrrr.

7. Buat "Wong Jolvo" Like, Mugi, Anni, Rali~na, Maya, Alun, Onny.

Iswahanik, Icang Agung, I b n g Anto' dan I<ang Ag~ts "Rahadi", Mttgo-i~in,.~

ietep fa~tgge~zg.

8. Tenla11 baikbu Boedy San " thanksfor ozrrfriendship".

9. lmhel dan Rornathio "temen jalan, telnen berbagi BT, temen rliakan dan temen

apapun jadi. "Maka.~ih ye ... ".

10. Ajanlc ynng zrdah nenzenin begadang, Yadi " Dion" yang trdah clibangztnin tiap

janz limn pngi, Edy "bapaknya kucing" yang udah nganrerin niaka~mn, Arie-

Jo, Atun, Desire, Susi, Anak I<acang, Anak Tape dan Ragil "Mcttur lzrrwrir~

(7)

11. Para Laboran : Pale Dunung, Mbalc Nafi, Pak Moel, Pak Koko, Pak Sidik, Pak

Sob, Mbalc Ida, Bu Rub, Pak Gatot, Pale Adi, Palc Rozalc, Pak Yono, Pak Edy,

Palc lwa-Ice dan Mbak Fat terima kasih atas bantuannya.

12. Tetangga-tetangga ltamarlcu"22" di Wislno A ~ L I : Luluk, Heppy, Sari, llnllel

lugi, Mbak Ocha, Deasy, Yuge, Mbak Arnis, Mbak Ervin, Thio "barbir",

Rahul, Cikul, Timy, Uce', Dwi, lpit, Lala, Fitri, Titik, Ane, Nanda, Didi,

Sophie, Ulfa, Umi dan Yu' Ni yung udcrh ngusih ivurnu di kost-~III tercintcr.

13. Ex Paleni : Mas Agus, Mas Elco, Mas Asep dan Mas lkra " ~ I ~ I I I ~ n1r11~u11

nggih ,170s ".

14. Mencit-mencitku tersayang yang telah berjasa dalaln penelitian ini.

(8)

DAFTAR IS1

Halaman

KATA PENGANTAR

...

i

DAFTAR IS1 .. iii

DAFTAR TABEL

.

...

.

vi

... ...

DAFTAR GAMBAR

.

vii

DAFTAR LAMPIRAN ... vii

I. PENDAFIULUAN

A. Latar Belakang ... 1

B. Tujua 3

C. Hasil Yang diharapkan 3

11. TINJAUAN PUSTAKA

A. Botani dan Klasifikasi ...

.

... 4

... ...

B. Pemanfaatan Khasiat Biologis

.

5

. .

C. Fagositos~s ... 8

D. Makrofag ...

.

...

9

1. Struktur makrofag

2. Fungsi makrofa

E. Kultur Sel. ... 14

... F. Bahan Pangan Yang Dapat Meningkatkan Aktivitas Makrofag .16

1. Alga merah (Porphyra Yezoensis) ... 16 2. Maharisli Amrit Kalash (MAK) 5 ... ..I7

...

(9)

111. METODOLOGI PENELITIAN

A. Bahan Dan Alat

1. Bahan ... 19

2. Alat

..

...

.. ... ... ..

..,., ,.

20

B. Waktu Dan Tempat Peneliti 20

C. Metode Penelitian

1. Ekstraksi ...

.

... .... . . 20 2. Pengujian ekstrak terhadap produksi radikal bebas peritoneal

makrofag mencit 22

D. Rancangan Percobaan 25

E. Singkatan

...

.

. . . 26

F. Penentuan Konsentrasi 26

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Ekstraksi ... 28

B. Kadar Air 30

C. Kadar Prote 3 1

D. TotdFenol 3 3

E. Pembuatan Kurva Standar Penetapan Jumlah Radikal Bebas ... 34

F. Analisa Radikal Bebas Pada Ekstrak Awa . 3 7

G. Pengujian Pengaruh Residu Pelamt Terhadap Produksi Radikal

Bebas Makrofag ...

... ... ....

... ...

... . . . .. . .

. . . . . .

. . 39

H. Pengujian Pengaruh Ekstrak Cicau Hijau Terhadap Produksi

Radikal Bebas Makrofag ... 40

1. Pengaruh ekstrak air daun, batang dan akar terhadap produksi

radikal bebasmMakrofag mencit secaraIn vitro

.

...

... ...

...

. ... . 42 2. Pengaruh ekstrak etanol Etd, Etb dan Eta terhadap produksi

(10)

3. Pengaruh ekstrak heksan Hed, Heb dan Hea terhadap produksi radikal bebas makrofag mencit secara in vitro

...

45

4. Pengaruh ekstrak Aid, Etd dan Hed terhadap produksi radikal

...

bebas makrofag mencit secara in vitro

.

46

5. Pengaruh ekstrak Aib, Etb dan Heb terhadap produksi radikal

...

bebas makrofag mencit secara in vitro 48

6. Pengaruh ekstrak Aia, Eta dan Hea terhadap produksi radikal

...

.

49

7. Pengaruh antara keseluruhan ekstrak akar, batang dan daun

terhadap produksi radikal bebas makrofag mencit

. .

...

secara in vltro 50

I. Pengaruh Ekstrak Cyclea barbafa L. Miers Terhadap Proliferasi

Makrofag Mencit Secara In Vitro ... 52

V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 55

(11)

(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)

(27)

(28)

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

(39)

(40)

(41)

(42)

(43)

(44)

(45)

(46)

(47)

(48)

(49)

(50)

(51)

(52)

(53)

(54)

(55)

(56)

(57)

(58)

(59)

(60)

(61)

(62)

(63)

(64)

(65)

(66)

(67)

(68)

(69)

(70)

(71)

(72)

(73)

(74)

(75)

(76)

(77)

(78)

(79)

(80)

(81)

(82)

(83)

(84)

(85)

(86)

(87)

(88)

(89)

(90)

(91)

(92)

(93)

(94)

(95)

(96)

(97)

MEMPELAJARI PENGARUH EIGSTRAIC CINCAU lIIJAU

(Cyclea barbata

L.

Miers)

TERHADAP PRODUIGI

RADIIOiL BEBAS MAICROFAG PERITONEAL MENCIT

SECARA

IN

VITRO

Oleh :

DINA MARIA 13ANDAYANI

F02496033

2000

PAIWLTAS TEI(NOLOG1 PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(98)

MEMPELAJARI PENGARUH EICSTRAK CINCAU HIJAU

(Cyclen bnrbntn L. Miers) TERHADAP PRODUKSI RADIIUL BEBAS

MAIaROFAG PERITONEAL MENCIT SECARA IN U T R O

Oleh :

DINA MARIA HANDAYANI

PO2496033

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN

Pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian

2000

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

(99)