SKRIPSI
VALIDASI METODE ANALISIS CAMPURAN VITAMIN B
1, B
2,DAN B
6DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN KCKT
MENGGUNAKAN KOLOM RP-18
ULTRA HIGH BASE DEACTIVATED PURITY SILICA
DYAH FOURRISKA RINI
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA BAGIAN KIMIA FARMASI
SURABAYA
2012
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi / karya ilmiah saya, dengan judul : VALIDASI METODE ANALISIS CAMPURAN VITAMIN B1, B2, DAN B6 DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN KCKT MENGGUNAKAN KOLOM RP-18 ULTRA HIGH BASE DEACTIVATED PURITY SILICA untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet, digital library Perpustakaan Universitas Airlangga atau media lain untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan undang-undang Hak Cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi skripsi / karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.
Surabaya, 09 Oktober 2012
Dyah Fourriska R.
NIM : 050810237
LEMBAR PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa sesungguhnya hasil skripsi / tugas akhir ini adalah benar – benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila di kemudian hari diketahui bahwa skripsi ini menggunakan data fiktif atau merupakan hasil dari plagiarism, maka saya bersedia menerima sanksi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh.
Surabaya, 09 Oktober 2012
Dyah Fourriska R.
NIM : 050810237
LEMBAR PENGESAHAN
VALIDASI METODE ANALISIS CAMPURAN VITAMIN B1, B2, DAN B6 DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN KCKT
MENGGUNAKAN KOLOM RP-18
ULTRA HIGH BASE DEACTIAVED PURITY SILICA
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga
2012
Oleh :
DYAH FOURRISKA RINI NIM : 050810237
Disetujui Oleh:
Pembimbing Utama Pembimbing Serta
Prof. Dr. rer. nat. H. Moch. Yuwono, Apt., M.S NIP 196005051986011003
Drs.Achmad Toto Poernomo, Apt., M.Si NIP 195909181987101001
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar sarjana farmasi pada Pakultas Farmasi Universitas Airlangga.
Dalam penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan bebagai pihak, baik moril maupun materil. Oleh karena itu, pada kesempatan ini saya menyampaikan rasa terima kasih yang sedalam- dalamnya kepada :
1. Rektor Universitas Airlangga, Prof. Dr. Fasich, Apt., MS. yang telah memberikan kesempatan untuk menyelesaikan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.
2. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Dr. Hj.
Umi Athijah, Apt., MS. atas kesempatan yang diberikan sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan program sarjana.
3. Prof. Dr. rer. nat. H. Moch. Yuwono, Apt., M.S. selaku pembimbing utama, atas semua bantuan, bimbingan, perhatian, nasehat dan kesabaran serta pengertiannya selama penulis menyelesaikan skripsi ini.
4. Drs.Achmad Toto Poernomo, Apt., M.Si selaku dosen pembimbing serta yang dengan segala kesabaran dan penuh pengertian memberikan dorongan, bimbingan,
pengarahan serta saran-saran selama penulis menyelesaikan skripsi ini.
5. Prof. Dr. GN. Astika dan Dra. Nuzul Wahyuningdyah, Apt. M.Si, selaku dosen penguji yang telah berkenan memberikan masukan dan saran sehingga menjadikan skripsi ini menjadi lebih baik.
6. Bapak dan Ibu Dosen dan Staf Departemen Kimia Farmasi yang telah memberikan dukungan , masukan dan bantuan kepada saya sehingga skripsi ini dapat terselesaikan
7. Papi, bunda, kakak-kakak semua (Yenie, Yayak, Theaz) dan Ade Rizky, serta keluarga besar yang penulis sayangi, terima kasih atas doa, cinta, kasih sayang, pengorbanan, perhatian, dorongan dan semangat yang begitu besar kepada penulis.
8. Seluruh staf di Laboratorium Unit Layanan dan Pengujian Universitas Airlangga, terutama kepada mas Sri Gunarso yang telah banyak memberikan bantuan selama penyelesaian skripsi ini.
9. Terima kasih untuk semua yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu, penulis ucapkan terima kasih sebanyak-banyaknya.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan masukan baik kritik maupun saran dari semua pihak. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan
memberikan tambahan ilmu pengetahuan khususnya dalam bidang kefarmasian.
Surabaya, 09 Oktober 2012
Penulis
RINGKASAN
Validasi Metode Analisis Campuran Vitamin B1, B2, dan B6 Dalam Sediaan Tablet Dengan KCKT Menggunakan Kolom
RP-18 Ultra High Base Deactivated Purity Silica
Vitamin adalah senyawa – senyawa organik yang dibutuhkan untuk pertumbuhan normal dan mempertahankan hidup manusia, yang secara alami tidak mampu mensintesis senyawa – senyawa tersebut. Senyawa-senyawa tersebut diperlukan dan efektif dalam jumlah sedikit, tidak menghasilkan energi dan tidak digunakan sebagai unit pembangunan struktur tubuh organisme, tetapi asupannya harus teratur dan dalam jumlah yang cukup, serta sangat penting untuk transformasi energi dan pengaturan metabolisme tubuh (Andarwulan dan Koswara, 1992).
Analisis kuantitatif multivitamin secara simultan sulit untuk dilakukan karena terdapat senyawa beragam, sehingga membutuhkan suatu proses pemisahan. Metode kromatografi pada dasarnya adalah seatu teknik pemisahan, sehingga sesuai untuk analisis multivitamin. Metode yang digunakan dalam analisis ini adalah Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Dari data literatur, untuk analisis kuantitatif multivitamin secara simultan dapat digunakan kolom RP-18 Ultra High Base Deactivated Purity Silica (150 mm x 4,6 mm, ukuran partikel 3 µm), fase gerak yang terdiri dari Trifluoroacetic Acid (TFA) 0,01% pH = 3,9 (pelarut A)
dan methanol (pelarut B), dan eluasi yang digunakan adalah gradien (Mandiola, 2007). Pengamatan dilakukan pada panjang gelombang 280 nm (Kledjus, 2004). Setelah dilakukan optimasi, diperoleh kondisi KCKT yang sesuai untuk analisis kuantitatif multivitamin secara simultan, yakni pengamatan dilakukan pada suhu 15°C, dan elusi yang digunakan adalah elusi gradien.
Tahap pertama uji validasi metode adalah uji selektivitas.
Harga Rs dan α masing – masing vitamin memenuhi persyaratan yakni harga Rs ≥ 1,5 dan harga α > 1 yaitu, untuk Rs vitamin B 1
sebesar 3,65 dan α sebesar 1,34. Untuk Rs vitamin B2 sebesar 29,96 dan α sebesar 1,95. Untuk Rs vitamin B6sebesar 4,55 dan α sebesar 1,29. Pada penentuan batas deteksi (BD) dan batas kuantitasi (BK) diperoleh hasil, yaitu untuk vitamin B1 harga BD sebesar 1,1 µg/mL dan harga BK sebesar 3,4 µg/mL. untuk vitamin B2 harga BD sebesar 0,7 µg/mL dan harga BK sebesar 2,3 µg/mL. Dan untuk vitamin B6 harga BD sebesar 1,7 µg/mL dan harga BK sebesar 5,2 µg/mL. Hasil penentuan linieritas diperoleh persamaan regresi vitamin B1, Y = 8,57873x – 4,28421 (r hitung = 0,9994; r tabel = 0,754; VXo = 2,52 %). Persamaan regresi vitamin B6, Y = 14,38781x + 1,33948 (r hitung = 0,9998; r tabel = 0,754; VXo = 4,89%). Dan persamaan regresi untuk vitamin B2, Y = 24,12112x + 3,93074 (r hitung = 0,9999; r tabel = 0,754; VXo = 1,57 %). Dari data tersebut dapat dinyatakan bahwa hasil regresi linear memenuhi persyaratan vaidasi metode.
Dari tahap akurasi dan presisi metode diperoleh harga rata- rata persentase recovery vitamin B1 adalah 82,98% ± 3,56 dengan
koefisien variasi (4,41%-6,58%). Harga rata-rata persentase recovery vitamin B2 adalah 104,26% + 0,80 dengan koefisien variasi (0,80%-1,36%). Dan harga rata-rata persentase recovery vitamin B6 adalah B6 99,52% ± 3,75 dengan koefisien variasi (0,73-1,14%).
Dari data tersebut dapat dinyatakan bahwa hasil akurasi memenuhi persyaratan vaidasi metode yaitu nilai persen recovery antara 80 – 110 % dan % KV tidak lebih dari atau sama dengan 7,3 %. Tahap selanjutnya dari validasi metode yaitu presisi atau ketelitian dari instrumen yang digunakan. Hasilnya didapatkan koefisien variasi (KV) vitamin B1 sebesar 0,71%, vitamin B2 sebesar 1,40%, dan vitamin B6 sebesar 0,33%. Berdasarkan data tersebut presisi dari penelitian ini memenuhi persyaratan validasi yang telah di tentukan.
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa validasi metode untuk vitamin B1, B2, dan B6 dengan menggunakan KCKT yang digunakan memenuhi persyaratan validasi untuk selektivitas, linieritas, batas deteksi dan batas kuantitasi, presisi dan akurasi.
ABSTRACT
METHOD VALIDATION FOR SIMULTANEOUS ANALYSIS OF B1, B2, AND B6 VITAMINS BY HPLC USING ULTRA HIGH BASE
DEACTIVATED PURITY SILICA COLUMN
Dyah Fourriska Rini
The objective of the present study was to optimize and validate the method for the simultaneous analysis of B1, B2, and B6 vitamins by HPLC using RP-18 Ultra High Purity Silica column (150 mm x 4.6 mm, 3 µm particle size). The best separation was achieved by linear gradient elution with a mobile phase consisting of 0.01% trifluoroacetic acid of pH 3.9 (solvent A) and methanol (solvent B) at the flow rate of 0.5 ml min-1 with UV detection set at 280 nm. The separation showed symmetrical peaks and good resolution of the vitamins. The method demonstrated good accuracy, precision and linearity of area responses within the concentration range used, with r ≥ 0.999. The method was successfully applied for the analysis of vitamin in samples.
Keywords: B1, B2, and B6 vitamin, HPLC, method validation,
