BAB I
dari berbagai tanaman tersebut, memiliki banyak potensi untuk dijadikan obat-obat yang berasal dari alam.Pengobatan tradisional yang menggunakan bahan-bahan alam telah sangat berkembang hingga saat ini, dan sangat menarik minat
masyarakat pada umumnya untuk kembali menggunakan bahan-bahan alam sebagai obat karena mempunyai beberapa kelebihan dibandingkan dengan obat-obat sintesis. Oleh sebab itu perlu dilakukan pemisahan
senyawa bermanfaat dari tamanan untuk dapat di manfaatkan secara maksimal.
Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan komponen-komponen campuran dimana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan
cuplikan secara selektif. Bila fasa gerak berupa gas, disebut kromatografi gas, dan sebaliknya kalau fasa gerak berupa zat cair, disebut kromatografi
Kromatografi Suction Column atau Kromatografi Cair Vakum adalah bentuk kromatografi kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi
kasar yang cepat terhadap suatu ekstrak. Kolom dapat berupa kolom dengan adsorben grade-KLT normal atau fase-terbalik ini relatif bermutu dan fase gerak terhisap dengan adanya penurunan tekanan. Fraksi
biasanya dikoleksi dengan alikuot eluen dengan satu kepolaran.
Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan
senyawa metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai absorben dan berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan
eluen.
Senyawa kimia yang terkandung dalam tumbuhan merupakan hasil
metabolisme dari tumbuhan itu sendiri. Dari hasil penelitian banyak ahli tak jarang senyawa kimia ini memiliki efek fisiologi dan farmakologi yang bermanfaat bagi manusia. Senyawa kimia tersebut lebih dikenal dengan
senyawa metabolit sekunder yang merupakan hasil dari penyimpangan metabolit primer tumuhan. Senyawa tersebut adalah golongan alkaloid,
steroid, terpenoid, fenol, flavonoid, dan saponin dan antioksidan.
B. Maksud praktikum
Adapun maksud dari praktikum ini adalah untuk mengetahui proses
pemisahan senyawa kimia fraksi kasar ekstrak daun paku hata (Lygodium circinnatum) menggunakan kromatografi kolom cair vakum berdasarkan
C. Tujuan praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah untuk memisahkan senyawa kimia fraksi kasar ekstrak daun paku hata (Lygodium circinnatum)
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A.
Uraian Tanaman
1. Klasifikasi Tanaman (Integrated Taxonomic Information Syestem)
Regnum : Plantae
Spesies : Lygodium circinatum (Burm.) Sw.
2. Nama Lain
Daerah pasundan sering di sebut paku hata, daerah pangkep
sering disebut caweng.
3. Morfologi Tanaman ( Holtum, 1966; van Steenis & Holtum, 1982)
Rhizom menjalar dibawah permukaan tanah, rachis memanjat,
rachis steril; percabangan dikotom, warna rachis hijau kecoklatan, panjang ruas rachis primer 24 cm, panjang ruas rachis sekunder 6,5
cara tumbuh melilit, arah putaran kanan, panjang ruas rachis primer 13,4 cm, panjang ruas rachis sekunder 3 cm. Pinna steril; susunan
pinna pada rachis oppositus jumlah pinna 1 dengan 4-5 lobus, bentuk pinna palmatus, basis attenuatus, vena bebas, apex pinna acutus, margo integer, panjang pinna 18 cm, panjang bagian basis pinna 1 cm,
panjang bagian tengah pinna 15,2 cm, rasio panjang dan lebar pinna 1,18 cm. Pinna fertil; susunan pinna pada rachis oppositus, jumlah
pinna 2 dengan 2 lobus, bentuk pinna palmatus, basis attenuatus, vena bebas, apex pinna acutus, panjang pinna 17 cm, panjang tangkai pinna 1 cm, panjang bagian basis 1 cm, panjang bagian tengah pinna 6 cm,
rasio panjang dan lebar pinna 2,83. Spora; marginal berada di ujung pertulangan pinna.
4. Kandungan Kimia (Jurnal Identification of Antheridiogens in
Lygodium círcinnatum and Lygodium flexuosum, 1996)
Kandungan kimia yang terdapat pada paku hata ini adalah Metil
ester GA7,Me.
5. Kegunaan Tanaman
Kegunaan paku ini yaitu batangnya untuk pembuatan tas tangan, topi, sebagai obat luka dari sengatan binatang melata seperti ular, lipan dan laba-laba yaitu dengan menggunakan getah yang terdapat pada
B. Teori Umum
Istilah kromatografi mula-mula ditemukan oleh Michael Tswett
(1908), seorang ahli botani Rusia. Nama kromatografi diambil dari bahasa Yunani (chromato = penulisan dan grafe = warna). Kromatografi berarti
penulisan dengan warna. Kromatografi adalah cara pemisahan campuran yang didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam (stationary) dan fasa bergerak
(mobile). Fasa diam dapat berupa zat padat atau zat cair, sedangkan fasa bergerak dapat berupa zat cair atau gas (Yazid, 2005).
Kromatografi Suction Column and Vacuum liquid chromatography (VLC) atau kromatografi cair vakum (KCV) adalah bentuk kromatografi kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat
terhadap suatu ekstrak. Kondisi vakuma adalah alternatif untuk mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah. Metode ini sering
digunakan untuk fraksinasi awal dari suatu ekstrak non-polar atau ekstrak semipolar (Raymond, 2006).
Suction coloumn merupakan alat kromatografi yang merupakan
modifikasi kromatografi kolom serapan. Prinsip pemisahannya sama dengan kromatografi kolom serapan. Bedanya terletak pada adanya
berdasarkan adsorpsi dan partisi serta dipercepat dengan isapan pompa vakum. Seperti halnya kromatografi kolom serapan, senyawa yang akan
dipisahkan dilarutkan dengan pelarut yang cocok kemudian dimasukkan dalam kolom isap, selanjutnya ditambahkan eluen, eluen yang mengalir turun yang disebabkan oleh isapan pompa vakum. Hasil pemisahan
ditampung dalam setiap fraksi. Volume penampungan 25 ml/fraksi dan untuk berat sampel q 10 - 30 gram volume penampungan 50 ml/fraksi.
Adsorben yang digunakan sedikit lebih berbeda yaitu 35 gram silica gel 7733 dan 10 gram silika gel 7731 (Gritter, 1991).
Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan
dalam KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom terbagi menjadi dua macam, yaitu (Sarker , 2006):
a. Cara Basah
Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan melarutkan fasa diam dalam fase gerak yang akan digunakan.
Campuran kemudian dimasukkan ke dalam kolom dan dibuat merata. Fase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan fase diam yang
tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan.
b. Cara kering
Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara
memasukkan fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi. Fase diam tersebut selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan
Manfaat dari kromatografi ini yaitu menentukan ciri senyawa aktif penyebab efek racun atau efek yang bermanfaat, yang ditunjukkan oleh
ekstrak tumbuhan kasar bila diuji dengan sistem biologi. Dalam hal ini kita harus memantau cara ekstraksi dan pemisahan pada setiap tahap, yaitu untuk melacak senyawa aktif tersebut sewaktu dimurnihkan.
Kadang-kadang keaktifan hilang selama proses fraksinasi akibat ketidakmantapan senyawa itu, dan akhirnya mungkin saja diperoleh senyawa berupa kristal
BAB III
METODE PRAKTIKUM
A.
Alat
Adapun alat yang digunakan yaitu batang pengaduk, botol you C, gelas kimia, gelas ukur, kolom kaca, pipa kapiler, pipet tetes, pompa
vakum, statif, dan timbangan analitik.
B. Bahan
Adapun bahan yang digunakan yaitu aluminium foil, ekstrak daun
paku hata (Lygodium circinnatum), etil asetat, kertas saring, metanol, n-heksan, silica gel kasar dan halus, dan tissue.
C. Prosedur Kerja
a. Penyiapan Sampel
Kolom dibersihkan dan dibilas dengan menggunakan metanol.
Dimasukkan silika gel kasar dan halus dengan perbandingan 30:10 ke dalam kolom dan dimampatkan. Setelah itu, dipasang tegak lurus pada statif. Kemudian dimasukkan n-heksan ke dalam kolom agar diperoleh
kerapatan yang maksimal. Dan dimasukkan kertas saring dan ditempatkan diatas silika.
b. Isolasi Sampel
Ekstrak ditimbang sebanyak 1 gram. Kemudian ditambahkan sedikit campuran silika kasar dan halus (30:10) dan dicampur hingga
atas kertas saring. Dimasukkan eluen 10 : 0 ke dalam kolom. Kemudian dinyalakan pompa vakum. Ditampung fraksi di dalam botol you C.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari praktikum Kromatografi Kolom Cair Vakum didapatkan hasil
sebagai berikut : a. Berdasarkan eluen
Fraksi Fase gerak ( eluen ) Warna
1. n-heksan (10) : etil asetat (0) Bening 2. n-heksan (9) : etil asetat (1) Bening 3. n-heksan (8) : etil asetat (2) Kuning muda 4. n-heksan (7) : etil asetat (3) Kuning 5. n-heksan (6) : etil asetat (4) Hijau lumut 6. n-heksan (5) : etil asetat (5) Hijau 7. n-heksan (4) : etil asetat (6) Hijau lime 8. n-heksan (3) : etil asetat (7) Hijau kekuningan 9. n-heksan (2) : etil asetat (1) Hijau kekuningan 10. n-heksan (1) : etil asetat (9) Hijau kekuningan 11. n-heksan (0) : etil asetat (10) Hijau kekuningan
Kromatografi kolom cair vakum merupakan kromatografi kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat terhadap suatu ekstrak. Kondisi vakum merupakan alternatif untuk mempercepat aliran
Prinsip kromatografi kolom cair vakum pada umumnya sama dengan prinsip kromatografi lainnya yaitu adsorbsi dan partisi, hanya saja KCV ini
menggunakan pompa vakum untuk mempercepat fraksinasi. Tujuan dilakukannya percobaan ini adalah untuk mendapatkan dan memisahkan kandungan senyawa kimia dalam tanaman dari fraksi daun paku hata
(Lygodium circinnatum) dengan menggunakan kromatografi kolom cair vakum berdasarkan tingkat kepolaran.
Adapun proses pengemasan silika dibuat dalam cara kering dengan perbandingan silika kasar dan silika halus yaitu 30 : 10 dengan tujuan agar silica halus dapat menutupi rongga-rongga pada silica kasar
sehingga memperlama waktu kontak eluen dengan silika dan saat fraksi melewati fase diam pemisahannya lebih baik. Kombinasi antara silica
halus dan silica kasar agar memudahkan dalam pemisahan dan penyerapan.
Pengemasan kering dilakukan dengan cara memasukkan 30 gram
silika kasar kedalam kolom yang telah dimasukkan kaca masir pada kolom primer, dan pada kolom sekunder dipasangkan pompa vakum. Tujuan
dibuat vakum pada kolom agar eluen yang berkontak pada silika dapat dengan cepat turun melewati silika menuju kolom sekunder. Setelah itu dimasukkan kertas saring, setelah itu dimasukkan 1 gram fraksi daun
paku hata (Lygodium circinnatum) lalu dimasukkan eluen mulai dari perbandingan 10 : 0 sampai 0:10. Digunakan eluen dengan perbandingan
penggunaan eluen dengan tingkat kepolaran yang rendah terlebih dahulu dimasukkan ke dalam kolom yaitu karena jika yang dimasukkan terlebih
dahulu adalah pelarut polar maka ditakutkan senyawa non polar pada sampel akan tertarik juga sementara kita akan melakukan proses pemisahan antara senyawa polar dan polar. Dan pada akhir dari proses
isolasi tidak ada lagi senyawa non polar yang akan ditarik jika pelarut non polar digunakan lebih akhir.
Pada hasil praktikum yang kita lakukan menggunakan eluen dan ditampung dalam botol you C yang digunakan untuk menampung hasil fraksinasi (fraksi). Sehingga diperoleh fraksi yang dipisahkan berdasarkan
tingkat kepolaran dari masing-masing eluen dengan perbandingan yang berbeda-beda didapatkan 11 fraksi yaitu eluen 10:0 berwarna bening,
eluen 9:1 berwarna bening, eluen 8:2 berwarna kuning muda, eluen 7:3 berwarna kuning, eluen 6:4 berwarna hijau lumut, 5:5 berwarna hijau, eluen 4:6 berwarna hijau lime, eluen 3:7 berwarna hijau kekuningan, eluen
2:8 berwarna hijau kekuningan, eluen 1:9 berwarna hijau kekuningan, dan eluen 0:10 berwarna hijau kekuningan. Perbedaan warna pada
masing-masing fraksi dikarenakan perbedaan kepolaran dari masing-masing-masing-masing senyawa yang terkandung dalam fraksi daun paku hata (Lygodium circinnatum), sedangkan tingkat kepekatan warna disebabkan banyaknya
BAB V
PENUTUP
A.
Kesimpulan
Dari hasil praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa isolasi pada daun paku hata (Lygodium circinnatum) menggunakan
kromatografi kolom cair vakum berdasarkan tingkat kepolaran diperoleh 11 fraksi.
B. Saran
Diharapkan agar bahan dan alat yang akan digunakan dapat
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2017, Penuntun dan Buku Kerja Praktikum Fitokimia II, Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia, Makassar.
Gritter J.R, dkk., 1991, Pengantar Kromatografi, Penerbit ITB, Bandung.
Harborne, J.B, 1987,Metode Fitokimia, ITB, Bandung.
Integrated Taxonomic Information System, 2016, Lygodium circinnatum, Diakses tanggal 20 oktober 2016.
Raymod G. Reid and Satyajit D. Sarker, 2006, Isolation of Natural Products by Low-Pressure Colomn Chromatography. In Sarker, SD., Latif, Z., and Gray, AI. (Ed), Natural Produts Isolation, Humana Press Inc. Totowa, New Jersey.
Sarker, SD., Latif, Z and Gray, Al., 2006, Natural Product Isolation, Humana Press inc, Totowa New jersey.
Kolom Kromatografi
Fraksi
Beragam Fraksi berdasarkan warna
LAMPIRAN
Skema Kerja
Dipasang di statif
o Dimasukkan kaca masir pada dasar kolom primer
o Dimasukkan silica gel (30 gram silika kasar dan 10 gram silika halus)
o Diletakkan kertas saring diatas silika gel
o Dimasukkan ekstrak sampel (1 gram)
o Dimasukkan eluen yang telah ditentukan perbandingannya
o Dinyalakan pompa vakum
o Dibuka kran kolom sekunder
