Efek Imunomodulator Fraksi n-Heksan Daun Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa (Scheff) Boerl) Terhadap Respon Hipersensitivitas Dan Titer Antibodi Sel Imun Mencit Jantan

(1)

(2)

(3)

Lampiran 3.

Bagan Alur Penelitian

Uji Hipersensitivitas

Diinduksi dengan SDMS 1% sebanyak 0,1 ml secara i.p

Diberikan perlakuan selama 7 hari secara per oral

Diberikan tanda batas pada sendi kaki mencit sebelah kanan

Dilakukan pengukuran volume kaki mencit (V0) pada kaki

yang telah diberi tanda batas

Diinjeksikan dengan 0,1 ml SDMS 1% secara intraplantar

pada telapak kaki sebelah kanan

Dilakukan pengukuran volume pembengkakan kaki mencit

pada hari kedelapan (setelah 24 jam) (Vt)

25 ekor mencit jantan

FHDMD :

Kontrol negatif :

CMC Na 0,5 %

(5 ekor)

Kontrol positif :

Levamisol 25 mg/kg bb

(5 ekor)

(4)

Lampiran 3.

Lanjutan

Uji Titer Antibodi

Diinduksi dengan SDMS 1% sebanyak 0,1 ml secara i.p

Diberikan perlakuan selama 7 hari secara per oral

Diambil darah melalu vena ekor dan masukkan ke

dalammicrotube

Disentrifus dengan kecepatan 1900 rpm selama 10 menit

Diambil serumnya sebanyak 25 µ l dan diteteskan ke dalam

lubang microtitration plate 96

Ditambahkan larutan PBS dan SDMS 1% sebanyak 25 µl

Dilakukan pengenceran sebanyak dua kali (1:2; 1:4; 1:8; 1:16;

1:32; 1:64; 1:128; 1:256; 1:512; 1:1024; 1:2048; 1:4096)

Diamati penggumpalan yang terjadi

Ditentukan nilai titer antibodi berdasarkan pengenceran yang

terakhir

Ditransformasikan nilai titer antibodi dengan [2log(titer)+1]

25 ekor mencit jantan

FHDMD :

Kontrol negatif :

CMC Na 0,5 %

(5 ekor)

Kontrol positif :

Levamisol 25 mg/kg bb

(5 ekor)

(5)

Lampiran 4.

Perhitungan Serbuk Levamisol Yang ditimbang

Bobot 20 tablet

= 5,97 g

Kandungan Levamisol / Tablet

= 29,46 mg

Serbuk yang ditimbang setara 25 mg Levamisol :

=

25 mg

(6)

Lampiran 5.

Contoh Perhitungan Dosis untuk dosis 100 mg/kg bb

Misalnya BB mencit = 25 gram

-

Konsentrasi EHDMD :

100 ��

10 ��

= 10

��

/

��

-

Jumlah yang diberikan :

100 ��

1000 �

�

25 �

= 2,5

��

-

Jumlah suspensi yang diberikan :

2,5 ��

(7)

Lampiran 6.

Perhitungan federer

(n-1)(t-1)

≥

15 (n-1)(5-1)

≥

15 (n-1) 4

≥ 15

4n-1

≥ 15

4n

≥ 16

n

≥

16

4

n

≥ 4

n = 4

(8)

Lampiran 7.

Gambar alat-alat

(oral sonde & spuit)

(pipet mikro)

(9)

Lampiran 7.

(Lanjutan)

(centrifuge PLC series)

(10)

Lampiran 8.

Gambar Hewan Percobaan

(11)

Lampiran 9.

Pembengkakan Kaki Mencit dan Hemaglutinasi

(sebelum di induksi antigen)

(12)

Lampiran 9.

(Lanjutan)

Hemaglutinasi CMC Na 0,5 %

Hemaglutinasi (+)

(-)

-

Hemaglutinasi Levamisol 25 mg/kg bb

(13)

Lampiran 9.

(Lanjutan)

Hemaglutinasi FHDMD 25 mg/kg bb

Hemaglutinasi (+)

Hemaglutinasi FHDMD 50 mg/kg bb

Hemaglutinasi (+)

Hemaglutinasi FHDMD 100 mg/kg bb

(14)

Test of Homogeneity of Variances

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

CMC-Na 0,5% 4 .0900 .09381 .04690 -.0593 .2393 .03 .23

Lampiran 10.

Uji Statistik

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

a. Lilliefors Significance Correction

(15)

Multiple Comparisons

Dependent Variable:VolumeKakiMencit

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Tukey HSD CMC-Na 0,5% Dosis25mg/kgbb -.16600 .06584 .127 -.3640 .0320

Dosis50mg/kgbb -.43600* .06584 .000 -.6340 -.2380

Dosis100mg/kgbb -.63800* .06584 .000 -.8360 -.4400

Levamisol25mg/kgbb -.47400* .06584 .000 -.6720 -.2760

Dosis25mg/kgbb CMC-Na 0,5% .16600 .06584 .127 -.0320 .3640

Dosis50mg/kgbb -.27000* .06208 .003 -.4567 -.0833

Dosis100mg/kgbb -.47200* .06208 .000 -.6587 -.2853

Dosis50mg/kgbb CMC-Na 0,5% .43600* .06584 .000 .2380 .6340

Dosis25mg/kgbb .27000* .06208 .003 .0833 .4567

Dosis100mg/kgbb -.20200* .06208 .030 -.3887 -.0153

Levamisol25mg/kgbb -.03800 .06208 .971 -.2247 .1487

Dosis25mg/kgbb .47200* .06208 .000 .2853 .6587

Dosis50mg/kgbb .20200* .06208 .030 .0153 .3887

Levamisol25mg/kgbb .16400 .06208 .102 -.0227 .3507

Levamisol25mg/kgbb CMC-Na 0,5% .47400* .06584 .000 .2760 .6720

Dosis25mg/kgbb .30800* .06208 .001 .1213 .4947

Dosis50mg/kgbb -.27000* .06208 .000 -.3999 -.1401

Dosis100mg/kgbb -.47200* .06208 .000 -.6019 -.3421

Dosis25mg/kgbb .27000* .06208 .000 .1401 .3999

(16)

Levamisol25mg/kgbb -.03800 .06208 .548 -.1679 .0919

Dosis25mg/kgbb .47200* .06208 .000 .3421 .6019

Dosis50mg/kgbb .20200* .06208 .004 .0721 .3319

Levamisol25mg/kgbb .16400* .06208 .016 .0341 .2939

Levamisol25mg/kgbb CMC-Na 0,5% .47400* .06584 .000 .3362 .6118

Dosis25mg/kgbb .30800* .06208 .000 .1781 .4379

Dosis50mg/kgbb .03800 .06208 .548 -.0919 .1679

Dosis100mg/kgbb -.16400* .06208 .016 -.2939 -.0341

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets

Dosis25mg/kgbb 5 .2560

Levamisol25mg/kgbb 5 .5640 .5640

Sig. .108 .974 .115

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,762.

b. The group sizes are unequal. The harmonic mean of the group sizes is used. Type I error levels are not

(17)

Kruskal-Wallis Test

Ranks

Kelompok N Mean Rank

TiterAntibodi CMC-Na 0,5% 5 3.00

Dosis25mg/kgbb 5 10.80

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

a. Lilliefors Significance Correction

Test of Homogeneity of Variances

TiterAntibodi

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

(18)

Levamisol25mg/kgbb 5 10.80

Total 25

Test Statisticsa,b

TiterAntibodi

Chi-Square 20.718

df 4

Asymp. Sig. .000

a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable:

Kelompok

MANN WHITNEY

a.

Kelompok CMC-Na dan dosis 25 mg/kgbb

Ranks

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.694

Asymp. Sig. (2-tailed) .007

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .008a

a. Not corrected for ties.

b. Grouping Variable: Kelompok

b.

Kelompok CMC-Na dan dosis 50 mg/kgbb

Ranks

Kelompok N Mean Rank Sum of Ranks

(19)

Ranks

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.685

c.

Kelompok CMC-Na dan dosis 100 mg/kgbb

Ranks

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.694

(20)

d.

Kelompok CMC-Na dan levamisol 25 mg/kgbb

Ranks

TiterAntibodi CMC-Na 0,5% 5 3.00 15.00

Levamisol25mg/kgbb 5 8.00 40.00

Total 10

Test Statisticsb

TiterAntibodi

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.694

e.

Kelompok dosis 25 mg/kgbb dan dosis 50 mg/kgbb

Ranks

TiterAntibodi CMC-Na 0,5% 5 3.00 15.00

Total 10

TiterAntibodi

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.694

(21)

f.

Kelompok dosis 25 mg/kgbb dan dosis 100 mg/kgbb

Ranks

TiterAntibodi Dosis25mg/kgbb 5 3.00 15.00

Dosis100mg/kgbb 5 8.00 40.00

Total 10

TiterAntibodi

Mann-Whitney U .000

Wilcoxon W 15.000

Z -2.694

g.

Kelompok dosis 25 mg/kgbb dan levamisol 25 mg/kgbb

Ranks

Total 10

TiterAntibodi

Mann-Whitney U 12.500

Wilcoxon W 27.500

Z .000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1.000

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000a

(22)

h.

Kelompok dosis 50 mg/kgbb dan dosis 100 mg/kgbb

Ranks

Dosis100mg/kgbb 5 6.60 33.00

Total 10

TiterAntibodi

Wilcoxon W 22.000

Z -1.193

i.

Kelompok dosis 50 mg/kgbb dan levamisol 25 mg/kgbb

Ranks

Total 10

TiterAntibodi

Wilcoxon W 16.500

Z -2.410