shikyutaigan ni okeru DNA misumatchi shufuku idenshi ijo to maikurosateraito fuanteisei no kaiseki

Title Sub Title Author Publisher Publication year Jtitle Abstract Notes Genre URL. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org). 子宮体癌におけるDNA ミスマッチ修復遺伝子異常とマイクロサテライト不安定性の解析 阪埜, 浩司(Banno, Koji) 野澤, 志朗 慶應医学会 2004 慶應医学 (Journal of the Keio Medical Society). Vol.81, No.2 (2004. 6) ,p.T87- T100 学位論文 Journal Article http://koara.lib.keio.ac.jp/xoonips/modules/xoonips/detail.php?koara_id=AN00069296-20040601 -0087.

慶應 医 学 ・81(2):T87∼T100,2004. 学位論文. 子 宮 体 癌 に お け るDNAミ. ス マ ッチ修 復 遺 伝 子 異 常 と. マ イ ク ロ サ テ ライ ト不 安 定 性 の解 析 慶應義塾大学医学部産婦人科学教室 (指導:野 澤志朗教授) 阪. 埜. 浩. 司. (平成15年12月15日. Key Words:Revised. Amsterdam. Criteria,DNA. 受 付). mismatch. repair gene, hMLHI,. hMSH2,. Microsatellite. instability 婦 人 科 悪 性 腫 瘍 の 中 で 子宮 体癌 は生 活 様式 の 欧 米 化 と. そ の うち1人. は他 の2名. に対 し第 一 度 近 親 者 で あ る こ. 環 境 の 変 遷 に伴 い近 年 増加 の一 途 を た ど り,我 が 国 にお. と,② 大 腸 癌 の 発 生 が2世. い て も子 宮 癌 全 体 の 約40%に. と も1人. 迫 る勢 いで あ る.本 邦 に. は50歳. 代 に わ た る こ と,③ 少 な く. 未 満 で 大 腸 癌 と診 断 され て い る こ と. お いて 罹 患 実 数 お よ び罹患 率 と もに増 加 傾 向 に あ り,国. とい う古 典 的 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ リア と い わ れ る. 際 的 に もさ らに増 加 が 予想 され て い る.し か しな が ら,. HNPCCの. その 発 癌 機 構,進 展 形式 は い ま な お不 明 な点 が 多 い の も. 臨 床 診 断 基 準 が 示 され た3).. そ の後,1999年. 事 実 で あ る.以 前 よ り,子 宮 体 癌 で は肥 満 や高 エ ス トロ. のICG-HNPCCに. おいて アムステル. ダ ム ク ライ テ リアが 改 訂 され 新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ. ゲ ン状 態 な ど とい った環 境 因 子 が そ の発 癌 に重 要 な役 割. リア(ア. を 担 って い る と考 え られ て い た.し か し,そ の一 方 で,. (第1表).こ. 子 宮 体 癌患 者 に は重 複 癌 が多 い こ と,子 宮 体 癌 患 者 に家. それ まで 大 腸 癌 の み が 診 断 基 準 の 対 象 癌 で あ った の に加. 系 内 に癌 集 積 性 が認 め られ る事 実 か ら,そ の発 癌 に環 境. え,子 宮 体 癌,小 腸 癌,尿. 因子 ば か りで は な く遺 伝 的 素 因 も密 接 に関 与 して い る こ. 関 連 腫 瘍 と して 診 断 の 対 象 癌 と して 含 ま れ るよ うに 改訂. とが推 測 され て い た.近 年,家 族 性 腫 瘍 で あ る遺 伝 性 非. され た.こ の 改 訂 に よ り,子 宮 体 癌 の一 部 に家 族 性 腫 瘍. ポ リ ポ ー シ ス 大 腸 癌(hereditary. と して 発 症 す る症 例 が 存 在 す る こ とが 初 あ て 国 際 的 に も. rectal cancer;HNPCC)の. nonpolyposis. colo-. 女 性 患 者 に お い て,高 率 に. ま た,1993年. して の子 宮 体 癌 が存 在 す る こ とが 明 らか と な っ て き た. にLynchに. 管 癌,腎 臓 癌 な ど もHNPCC. DNAミ. よ り その 概 念 が 提 唱. に は こ のHNPCCの. スマ ッチ修 復(DNA. mismatch. 実 よ り,子 宮 体 癌 の 一 部 はHNPCC同. が進 ん で い る常 染 色 体 優 性 遺 伝 形 式 を と る家 族 性 腫 瘍 の 一 つ で あ る2).1990年 に はHNPCCのInternational. 子 の 候 補 と して特 にMMR遺. に3名. Group(ICG)-HNPCCに. 本 論 文 は,Banno. reditary 平尾 2003の. K, Susumu. of germline nonpolyposis. 健. 岩 田. 卓,平. MSH2. よ り,① 家 系 内. N, Hirao gene. colorectal 澤. 晃,青. T, Yanokura. mutations cancer.. 木 大 輔,野. M,. 細 胞 にお け るDNAの. Cancer. Gent. 伝. 伝 子 群 が 注 目 さ れ て きた.. 突 然 変 異 は放 射 線 や 変 異 原 物 質. な どの 外 的 因 子 の 影 響 ば か りで な く,細 胞 自身 のDNA Hirasawa. in endometrial. 澤 志 朗:遺. 様 のMMR遺. 子 異 常 に よ り発生 す る と推 測 され,子 宮 体 癌 の原 因 遺 伝. 以 上 組 織 学 的 に確 認 され た 大 腸 癌 患 者 が お り,. tification. 原 因遺伝子 が repair;MMR). 酵 素 を コ ー ドす る遺 伝 子 で あ る こ とが判 明 した.こ の事. さ れ た 疾 患 で1),近 年,分 子 遺 伝 学 的 に そ の病 態 の 解 析. Collaborative. 成 立 した4). の新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リア で は,. 認 識 され た.. 子宮 体 癌 が 合併 す る事 実 が明 らか と な り,家 族 性 腫 瘍 と. HNPCCは,1971年. ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リアII)が. cancer. Cytogenet. A, Aoki patients. D, Udagawa not. 146:58・65,2003の. 伝 性 非 腺 腫 症 性 大 腸 癌(HNPCC)と. 一 部 を含 む. 一T87一. Y, Sugano. fulfilling. the new. 一 部,お. K, Nozawa clinical. よ び 阪 埜 浩 司,進. 子宮内膜癌. S:Iden. criteria for he伸 幸,. 家 族 性 腫 瘍3:62-67,.

慶鷹医学. 81巻2号(平. 第1表HNPCCの. 成16年6月). 臨床診断基準. Amsterdam Minimum Criteria(1990) 1.Atleast3 colorectal cancerinrelatives(pathological verified) 2.One isa first degreerelative ofothertwo 3.At leasttwo successive generations shouldbe affected 4.One colorectal cancerdiagnosedbeforetheage of50 years 5.FAP shouldbe excluded RevisedAmsterdam criteria II(1999) 1.Atleast 3 relatives withan HNPCC-associated cancer(cancer ofcolorectum, endometrium,smallbowel,ureter or renalpelvis) 2-5:same 1999年. の 改 訂 に よ り子 宮 体 癌 を 含 む4種. 他:家 族 性 腫瘍,3:62-67,2003の. の 癌 がHNPCC関. 表1よ. 連 腫 瘍 と して 診 断 の対 象 癌 と して追 加 され た.(阪. 埜 浩 司,. り許 可 を得 て転 載). 複 製 時 の エ ラ ー に よ っ て も生 じ る こ と が 知 ら れ て い る.. MSIが. こ の よ う なDNAの. 頻 度 が 上 昇 し,そ の結 果 と して 細 胞 が 癌 化 す る と想 定 さ. 変 異 は蓄 積 す る と 細 胞 に 癌 化 な ど の 復. れ て い る.こ のMSIは. 全 大 腸 癌 の約15%程. 度 に認 め ら. 変 異 を細 胞 自. れ て い る.こ のMSI陽. 性 大 腸 癌 の約25%程. 度 に家 族 性. 腫 瘍 で あ るHNPCCが. 存 在 して い る と推 測 され て お り,. MSI解. 有 用 な ス ク リー ニ ン グ法 と して. 重 大 な 変 化 を 引 き 起 こ す と 推 測 さ れ て い る.DNA修 機 構 と は こ の よ う な 細 胞 に 生 じ たDNAの 身 が 取 り 除 き 修 復 さ せ る 機 構 で あ る.細 DNAの. 胞 にお け る. 修 復 に は 様 々 機 構 が 存 在 す る と 考 え ら れ て お り,. そ の 一 つ がDNA複 DNAミ. 製 時 の エ ラ ー を 検 出 し,修. ス マ ッ チ 修 復(MMR)機. を 担 う の はDNAミ. ス マ ッ チ 修 復 酵 素(MMR. で 最 も 歴 史 が 長 く,以 MMR遺. 伝 子 が 同 定 さ れ て い た.そ. のMMR遺. hMSH6,. の 後,こ. 伝 子 こ そ がHNPCCの と さ れ て い る5).ヒ. hPMS2)が. hMLH 同 定 さ れ,こ. hMSH6蛋 はhMSH2蛋. 白 とhMSH3蛋. さ ら にhMLH1蛋. MMR機. 在 まで. のMMR遺. ﾟtypellR遺. TCF-4遺. 製 時. 伝 子9)MSH310),. 伝 子")な ど の 報 告 もあ る が,子 宮 体 癌 に お け. 関 与 す るMMR機. の 際, 白 と. 構 異 常 の標 的 遺 伝 子 が 異 な り子 宮 体. 癌独 特 の標 的遺 伝 子 が 存 在 す る可能 性 も示 唆 され て い る. HNPCCと. 入 に. 同 様 の 発癌 機 構 に よ り生 じる子 宮 体 癌 に は,. 通 常 の 子 宮 体 癌 の 自然 史 と は異 な る発癌 機 構 と,独 特 な. 修. 生 物 学 的 特 性 の 存 在 が 推 測 され る.す. で にHNPCCに. 関 して は,北 欧 諸 国 や 米 国 を中 心 に国 家 レベ ル で の多 施. 伝 子 に 異 常 が あ る と, DNA複. 設 共 同研 究 の た め の組 織 が構 築 され,質 の 高 い デ ー タの. 製 時 に 生 じた. 塩 基 の ミ ス マ ッ チ を 正 し く修 復 す る こ と が で き ず,長 の 異 な っ たDNA鎖. 遺. る遺 伝 子 異 常 の頻 度 は ど れ も低 く,臓 器 に よ って 発 癌 に. 白 が 認 識 し,. 白 と 結 合 しDNAの. 伝 子 や ア ポ トー シ ス 誘 導 に 関 与 す る:'. 標 的 遺 伝 子 の 候 補 と して は,E2F遺. 白 は複. 基 の 欠 損,挿. お いて 細 胞 増 殖 抑 制 に関 与 す るTGF一. 伝 子 な ど が報 告 さ れ て い る7,8).こ れ ら遺 伝 子 以 外 に も. 復 が 行 わ れ る と考 え ら れ て い る6). MMR遺. 構 異 常 の 標 的 癌 関 連 遺 伝 子 の 候 補 と して は,現. 在 までHNPCCに. 白 の 複 合 体 が 認 識 す る.. 白 やhPMS2蛋. 占 め る と考 え られ て い る が,遺 伝 性 腫. 1, h.MSH3,. 基 の ミ ス マ ッチ に 対 して はhMSH2蛋 ら4塩. 原 因 の 大部. が どの程 度 関与 して い るか につ い て は いま だ不 明 で あ る.. トに お い て こ れ ら のMMR蛋. 白 の 複 合 体 が,2か. 染色体短腕の. れ らの 遺 伝. 白 と 複 合 体 を 形 成 し修 復 を 行 う.そ. 1お よ び2塩. 伝 子 と 第2番. 瘍 と して の子 宮 体 癌 に お いて も同 様 の 機 構 や 遺 伝 子 異 常. Lな. 合 体 を 形 成 し機 能 す る と 推 測 さ れ て い る.DNA複. 他 のMMR蛋. 伝 子 の 中 で も第3番. 伝 子 の生 殖 細 胞 変 異 がHNPCCの. 分(約60%)を. 原 因 遺 伝 子 で あ る こ と が 明 らか. に 生 じ た 塩 基 の ミ ス マ ッ チ をhMSH2蛋. のMMR遺. どの. s, Mut. 伝 子(hMSH2,. hPMSI,. hMSH2遺. enzyme). 子 が 種 を 越 え て 保 存 さ れ て い る事 実 が わ か り,現 に6種. 染 色 体 短 腕 のhMLHI遺. の機 構. 伝 子 の解 析 は大 腸 菌. 前 よ りMut. 析 はHNPCCの. 期 待 され て い る.6種. 復 を行 う. 構 で あ る.こ. 群 と よ ば れ る蛋 白 で あ る.MMR遺. 生 じる と発 癌 に 関 与 す る標 的 遺 伝 子 異 常 の発 生. が 生 じ る こ と に な る.こ. さ. 蓄 積 が進 み12∼18),全大 腸 癌 の約5%程. の 現 象 は,. 在 す る と推 測 され て い る.さ. 度 にHNPCCが. ら にHNPCCに. 存. 関 して は. ヒ トゲ ノ ム の 中 の 数 塩 基 を1単. 位 と す る繰 り返 し配 列. 臨 床 病理 学 的 に① 若 年 発症 で あ る,② 右 側 大 腸 に好 発 す. の 連 続 領 域 に 特 に 生 じ や す く,マ. イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安. る,③ 低 分 化 腺 癌,粘 液 性 腺 癌 が 多 い,④ 予 後 が 良 好 で. 定 性(Microsatellite. insyability;MSI)と. 呼 ば れ る.. あ る,等 の 特 徴 が 明 らか と され て い る.こ れ に対 し,家 ...

阪埜:子 宮 体 癌 とDNAミ. ス マ ッ チ修 復 遺 伝 子 異 常. 族 性 腫 瘍 と して の子 宮 体 癌 に関 す る解 析 は世 界 的 に も報. 年 齢 ・生 存 期 間等 にっ いて 調 査 した.た だ し,不 確 定 な. 告 が 極 あ て少 な く,遺 伝 浸 透 率 も含 め そ の病 態 や 臨床 病. 内 容 は 除 外 し家 系 図 を 作 成 し た.家. 理 学 的 特 徴 は全 く不 明 で あ る.家 族 性 腫瘍 と して の子 宮. HNPCCの. 体 癌 の病 態 解 明 に は我 が 国 にお け る疾 患 の頻 度 や家 族 歴. を 子 宮 体 癌385例. と い っ た詳 細 な疫 学 的 調 査 のみ な らず,分 子 レベ ル の病. 性 腫瘍 の頻 度 を調 査 した.. 族 性 腫瘍 で あ る. 新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リア を 満 た す 症 例 か ら抽 出 し,子 宮 体 癌 に お け る 家 族. 態 機 構 の 解 析,い わ ゆ る分 子 疫 学 的 解析 が不 可 欠 と考 え られ る.. 2.子. 本 研 究 で は,HNPCCの. 関 連 腫 瘍 と して の視 点 で 子 宮. 宮 体 癌 組 織 お よ び 正 常 組 織 か らのDNAの. 患 者 の 同 意 の も と,当. 抽出. 科 に て 手 術 的 に 摘 出 した 子 宮 体. 体 癌 を と らえ,家 族 性 腫 瘍 と して の子 宮 体 癌 の病 態 を我. 癌 組 織39例. を 無 菌 的 に 液 体 窒 素 中 に 保 存 し た.ま. が 国 で 初 め て 分 子 疫学 的 に解 析 す る こ とを 目的 と した.. 常 組 織 は,同. 一 症 例 の 末 梢 血 を 採 取 し,ロ. 当 科 にて1991年?2002年. を 用 い て 白 血 球 を 単 離 し,マ. 385例. の間 に治 療 を行 っ た子 宮 体 癌. に対 し,詳 細 な 家族 歴,既 往 歴 等 の疫 学 的 調 査 を. 実 施 した.さ. らに,そ. し,DNAミ. ス マ ッ チ 修 復(MMR)遺. hMLH1遺. の 中 で 同意 を 得 られ た39例. 伝 子 とhMSH2遺. DNAの. に対. 抽 出 に っ い て は,子. phenol/chloroformに. 伝 子 の異 常 に着 目 しMSI. イ コプ レ ップ. イ ナ ス20℃. で 保 存 し た.. 宮 体 癌 組 織 お よ び末 梢 血 中. の 白 血 球 をProteinase. 伝子 であ る. Kで. 処 理. し た 後,. SS-. て フ ェ ノ ー ル 抽 出 し,3M酢. ト リ ウ ム お よ び エ タ ノ ー ル を 加 え てDNAを. 解析 を含 む分 子 生 物 学 的解 析 を実 施 し,家 族 性 腫 瘍 と し. ペ レ ッ トを 乾 燥 さ せ た 後TE. て の子 宮 体 癌 の 病 態 とMMR遺. 存 し実 験 に 使 用 し た.. 伝 子 異 常 の関 連 性 を 検. た正. bufferに. 酸 ナ. 沈 殿 さ せ, 溶 解 し4℃. で保. 討 した. 本 研 究 は,文 部 科 学 省 ら3省 庁 合 同 の 「ヒ トゲ ノ ム ・. 3.マ. 遺 伝 子 解 析 研 究 に関 す る倫 理 指 針 」,8学 会 合 同 の 「遺 伝 学 検 査 に関 す る ガ イ ドライ ン(案)」. イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安 定 性(MSI)解. 同 意 が 得 ら れ た 子 宮 体 癌39例. お よ び家 族 性 腫. 抽 出 し たDNAと. に お い て,末. そ れ ぞ れ1)25123・1)3S1284・D5S404・DgS162・. を応 用 した診 療 に関 す る ガ イ ドラ イ ン」 を遵 守 して実 施. hMSH2. した.本 研 究 計 画 は施 設 内 倫 理 委 員 会 に て審 査 さ れ,承. 1)2S123・1)351284・D5S404・1)9S162はCAリ. in tronl2の5領. 域 でPCR増. トを 含 む マ イ ク ロ サ テ ラ イ Research. 実験方法. ス. 鎖. Genetics社 用. の. プ. ラ. 子 宮 体 癌 症 例 にお け る家 系調 査 お よ び既 往歴 調 査 慶'/[-¥義 塾 大 学 病 院 産 婦 人 科 に お い て1991年. 2002年. Taq. か ら. 関. り聴 取 した.発. 近 親者 まで の血縁者 に. 1.25mM. っ い て,性 別 ・悪 性 腫 瘍 の 罹 患部 位 お よ び罹 患 年 齢 ・現. Primer. 第2表. Forward. Locus. primer. ライ マ ー は. イ. マ. ー. の5'端. よ びbufferは 用 い て,以. ンチ セ ン. をCy5. amidite PCRで. す べ てParkin. 下 の プ ロ トコ ー ル で 実 験. し て は,Premixture液24ｵ1(蒸 dNTP. 留 水16.125ｵ1,. 4ｵ1,10xbuffer. O.625ｵ1,0D2.2. Reverse. 2.5ｵ1,0D2.2 Primer. forward O.625ｵ1,. Sequence. Reverse. primer. Size(bp). Sequence. D2S123. 5'AAACAGGATGCCTGCCTTTA. 3'. 5'GGACTTTCCACCTATGGGAC. 3'. 197-227. 5'GGAATTACAGGCCACTGCTC. 3'. 5'GGAATTACAGGCCACTGCTC. 3'. 155-177. D5S404. 5'GATCACCACATTCCACCTAAT. DgS162. 5'GCAATGACTTAAGGTTC intronl2. 5'GATGTTCCACATCATTACTG. 実 験 に 使 用 し た5種 オ チ ドマ ー カ ー,そ. 5'GATCACCACATTCCACCTAAT. 3' C' 3'. 146:58-65,2003のTable1よ. 3'. 172-196. 5'GTGGTTCCACATCATTACTG. 3'. 182. 物 を 示 す.. の マ ー カ ー は ダ イ ヌ ク レ オ チ ドマ ー カ ー で あ る.(Banno り 許 可 を 得 て 転 載). ... .!. 3'. 5'GCAATGACCAGTTAAGGTTC. の マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー の プ ラ イ マ ー 配 列 と そ のPCR産 れ 以 外 の4種. Taq. マ イ ク ロ サ テ ラ イ トマ ー カ ー の プ ラ イ マ ー 配 列. D3S1284. hMSH2. は, Elmer. を 行 っ た.D2S123・D3S1284・D5S404・1)9S162に. よ り,同 意 を得 た上 で詳 細 な家 族 歴 ・既 往 歴 を 面 接 に よ 端 者 か ら第3度. ピー. ト領 域 で あ る.プ. 蛍 光 標 識 し た.. Polymeraseお. 社 のampliTaqを. まで の 間 に治 療 を 実 施 した子 宮 体 癌 患 者385例. 幅 し た(第2表).. 製 の も の を 使 用 し,ア. (indodicarbocyanine)で. 1.. 梢 血 か ら. 子 宮 体 癌 組 織 か ら 抽 出 し たDNAを,. 瘍 研 究 会 の 「家 族 性 腫 瘍 にお け る遺 伝 子 診 断研 究 と これ. 認 を受 け て い る.. 析. K. hMSH2 et al:Cancer. intronl2は Genet. ... モノヌクレ Cytogenet.

慶慮医学. Polymerase 1ｵ1を. O.125ｵ1)に0.1ｵg/ｵ1の. 加 え て 計25ｵ1と. 検 体DNA(鋳. し,95℃5分. 型). で一 本 鎖 に解 離 さ. せ た 後,95℃30秒,55℃40秒,72℃40秒 イ ク ル 行 っ て 増 幅 し,更. 81巻2号(平. を 計40サ. に72℃. で7分. intronl2は,. PolyA配. 成 機 にて. amidite(indodicarbocyanine)で. 識 し た.PCR条. 件 は,. 16.125ｵ1,1.25mM forward. Primer. O.625ｵ1, 体DNA(鋳. 留 水. 4ｵ1,10xbuffer. Primer Taq. 蛍 光 標. Premixture液24ｵ1(蒸. dNTP. OD2.2. ｵ1検. 列 を 含 む マ イ ク ロサ. ラ イ マ ー は,DNA合. ンス お よ び ア ンチ セ ンス鎖 用 の プ ラ イ マ ーの. 5'端 をCy5. 2.5ｵ1,. O.625ｵ1,0D2.2. Polymerase. 型)1ｵ1を. を 計40サ. 7分 加 熱 し た 後4℃. O.125ｵ1)に0.1ｵg/. 加 え て 計25ｵ1と. イ ク ル 行 っ て 増 幅 し,更. で. つ い て は増. ホ ル ム ア ミ ド変 性 後7M尿. 素 入 り8%ア. ル ア ミ ド ゲ ル を 用 い てALFred. DNAと. 電 気 泳 動 し,正. DNA. ア,Fragment. に っ い て は 増 幅DNAを. 血 球)由. 社 の解 析 ソフ トウェ. 用 い た.. hMSH2. intronl2. ホ ル ム ア ミ ド変 性 後12%ア. ク. DNA. 電 気 泳 動 し,正. 来DNAと. 子宮体癌. 波 形 の 違 い を 比 較 した.泳. 動結果の解. 常 組 織(白. 血 球)由. 析 に は 同 様 にFragment. managerを. 以 上 の よ う に1症. 例 に っ き 最 大5種. よ び. り解 析 し た. ホ ル マ リ ン固 定 さ れ た 子 宮 体 癌 部 を 含 む パ ラ フ ィ ン包 埋 ブ ロ ッ ク を3ｵmに け た 後60℃. 薄 切 し,ス. ラ イ ドガ ラ ス に 貼 り付. で 一 晩 乾 燥 さ せ た.キ. 脱 パ ラ フ ィ ン し,100%エ レ ン処 理 後,ク. シ レ ン に て15分. 間. タ ノー ル よ り段 階 的 に脱 キ シ. エ ン酸 バ ッ フ ァ ー(pH. 7.0)に. よ り121. 間 オ ー トク レ ー プ処 理 し抗 原 性 の賦 活 化 を行 っ らに内因 性 ペ ル オ キ シ ダー ゼ活性 除 去 の た め 溶 解 した3%H,0、. に て 室 温 で5分. 間 イ ンキ ュベ ー. 次 抗 体 と 反 応 さ せ た.hMLH. 1蛋. hMSH2蛋. 白 に 対 す る 一 次 抗 体 と し て 抗hMLH1抗. (G168-15,. Pharmingen社,. 抗hMSH2抗. San. 体(Polyclonal,. chnology社,. CA,. USA)を. Diego. CA,. Santa. 白 と 体. USA)と. Crutz. Biote-. そ れ ぞ れ30倍,300倍. に. 希 釈 して 実 験 に用 い た.. 社,Burlingame. ABC. zidine(SIGMA社, PBSで. kit(Vector. CA,USA)を St.Louis. 洗 浄 後,. Mayer. Laboratories. 使 用 し, MO,. diaminoben-. USA)で. heatoxylineに. 発 色 さ せ た. て核染色 を行 っ. た.. リ ル ア ミ ド ゲ ル を 用 い てALFred. 組 織 由 来DNAの. 伝 子 が コ ー ド す るhMLH1お. 白 の 発 現 を 抗 体 に よ る免 疫 組 織 化 学 染 色 に よ. 染 色 はVectastain 来. 各 領 域 の波 形 の 違 い. 動 結 果 の 解 析 に は,同 managerを. ク リ. Sequencer. 常 組 織(白. 子 宮 体 癌 組 織 由 来DNAの. を 比 較 した.泳. 用 し,MMR遺. ト し た 後,一 に72℃. 中 同 意 の得 られ た. の 子 宮 体 癌 手 術 検 体 パ ラ フ ィ ン包 埋 ブ ロ ッ ク を 使. PBSに. に 冷 却 して 保 存 した.. D2S123・1)3S1284・D5S404・DgS162に. (Pharmacia)で. 析 を 実 施 し た 子 宮 体 癌39例. た.さ. し,95℃. マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト領 域 の 複 製 エ ラ ー を み る た め,. 幅DNAを. MSI解. 。C10分. Reverse. 5分 で 一 本 鎖 に 解 離 さ せ た 後,95℃30秒,55℃40秒, 72℃40秒. 疫組織化学的解析. hMSH2蛋. テ ラ イ ト領 域 で あ り,プ 作 成 し,セ. 5.免. 28例. 加 熱 し た 後4℃. に 冷 却 し保 存 し た. hMSH2. 成16年6月). Sequencerで. 免 疫 組 織 化 学 的 解 析 は1症. 例 あ た り 複 数 回 実 施 し,. 周 囲 の正常 子 宮 内膜腺 や間質 細胞 の核 の染色 性 を イ ンター. 用 い た. の マ イ ク ロサ テ. ナ ル コ ン トロ ー ル と して 子 宮 体 癌 部 の 染 色 性 を 評 価 し, 陽 性 ま た は 陰 性 と 判 定 し た.hMLH hMSH2蛋. 白 とMSIと. (Fisherの. 直 接 確 率 計 算 法).. 1蛋. 白 お よ び. の 関 連 性 を統 計 学 的 に解 析 した. ラ イ ト領 域 に お い て マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安 定 性 (MSI)を. 解 析 し,1領. はMSI陽. 性(MSI+)と. 域 で も複 製 エ ラ ー を 認 め た も の 判 定 し た.解. 析 したす べ て の. 領 域 で 複 製 エ ラ ー を 認 め な い 症 例 はMSI陰 (Microsatellite. stability;MSSま. た はMSI-)と. 性 判 定. した.. 6.hMLHI遺. 12例. のMSI陽. 検討 MSI陽. 性 症 例 に っ い て はHNPCCの. 遺 伝 子 と さ れ るMMR遺 hMSH2遺. 性 子 宮 体 癌 と臨 床 病 理 学 的情 報 との 関連 性 の. 伝 子 のhMLHI遺. 性 子 宮 体 癌 にお いて 発 症. に て 検 査 し た.本. 審 査 さ れ,承. 球 由 来DNAを. い て 統 計 学 的 手 法(Fisherの. 液24ｵ1(蒸. 用い. 認 の 後 に,十. 実 験 は施 設 内 倫 理 委 員 会 にて 分 な説 明 と書 面 に よ る同 意 の 伝 子 お よ びhMSH2遺. そ れ ぞ れPCR増. 幅 し た.. 留 水16.125ｵ1,1.25mM. て 関連 性 が あ るか 検 討 した.更 に 予後 との相 関 を解 析 す. buffer. 2.5ｵ1,0D2.2. るた め に生 存 率 に差 異 が あ るか に つ い て検 討 した.. Reverse. Primer. 一T90一. 伝子 およ び. の 各 エ ク ソ ン に つ い て プ ラ イ マ ー を 作 成 し,末. 年 齢,分 化 度,臨 床 進 行 期,重 複 癌 の有 無 の各 事 項 にっ 直 接 確 率 計 算 法)を. 主 な原 因. 伝 子 に っ い て 生 殖 細 胞 変 異 の 有 無 をPCR-. も と 実 施 さ れ た.hMLHI遺. 性 子 宮 体 癌 とMSI陰. 伝 子 の生 殖 細 胞 変. 異 解 析(PCR-SSCP法). SSCP法. 4.MSI陽. 伝 子 お よ びhMSH2遺. forward O.625ｵ1,. Taq. dNTP Primer. 伝子 梢 血 白血. Premixture 4ｵ1,10×. O.625ｵ1,0D2.2. Polymerase. O.125ｵ1).

阪埜:子 宮 体 癌 とDNAミ. 第3表. hMSH2遺. 伝 子 のPCR・SSCP解. ス マ ッチ修 復 遺 伝 子 異 常. 析用 の電気 泳動 Structure. 条件. of hMSH. 1 71. Time(h). Exon. Water. 1a. 2軍5. 2. 鋤 ■314. 〔圏 m. m. ,v. 協5. 謝. ・E・ 。n. 鵠7. -一一lnv。・〕. 6凹 737. 脚. "旭. 一■ 一 且 ■ 一巳 ■ ■ ■ 一 畳骨 ■ ■■ 一 ■ 一 ■ 一 恩 ■卜. temperature(°C). 8 8 8 1 1 1 8 8 1 1 0 8 1 1. 11. 6 3. 8 9 10. 3 4. 6 7. 3 4 4. 3 4 5. 4 6 4. 8 8 8 8 1 1 1 1. 4. 1 2. ε竃 。n鱒 ・ 杓 巳bPl. ・ 酪. ・79. Structure C。do【. of. ・四. 147・. h〃. 田13・. 2。。. 乙 」ト ゴ7. 沁・'。,177・15`182'196㎜. 細. 獅346. 4'00. 隅577. 6300. 7。27聞. 一 ■畳1■ 督1一量一1一 畳 ■ 醤 ■■■一 畳 日一 ■畳1一屠 ■ 卜 歓onMo.1 Ezon● セ● 「 ψL. 2. 34567891011 團57YI 99 ∼4 十a YE 43. 39. P'. 113. 91. S. cccsl'orん. m. O]. 94. 19 388. 醐51/2. 濃. ll. 轡1冒i 一 躍 父,・ も川c,rri'. ￡繍. 沓 瑠1。rnrcc?. zx:z.o. TMCG¥T7融c滞1こTA,i¥C譜m. 究}蟹. ㌫. l. 12 13. 4 6. 8 0 1 1. 14 15. 4 4. 6 6 1 1. 16. 4. 6 1. 濃1'帆l. 13¶`15161718 ■w 109 54. in m l瓢. 封:階 邪 礁 臨 丁 一 llミ11CC1呂 ぐくr^。1舖1;鴇 欝,1 藁'・q漕い 鋸. 竃2 37て. 154. no2dn. 艮CAGLb1.C.UIUf"1'AA今AA.¥nr,a(? 森. ncccn.、IIAcc rcc:く¥AAAIAACATGe¥CCCA、3〔 旧. 〒譲. C(frricrrcii. la 2a・ ・. IGIGI rrrccnrrrccn:'CTG IC,¥3. こll:CC}¥C',農fど 融櫻瓢 等. 像. cc,cc,こ 器 獣 盤 捺乱.^、. ミ. 留 器 輪 糀 鍬搬. へ,r騨. 嶺. δG.. 1糞. 罵. 1,CCMTA(iTAC.1TACCTfTCTTCr¥<MACTATGAMACh1.1CTGAC'.1MC, 3Ui'_:2. 隷1:瓢 媒凝照 驚 繍 際. 6b. CCA. Primer semiences. rGGGCACTGACへGTrA八Y. ;IK. for h;NLHI. Scnsc primer sequence. Antixnw. prinur. SI'い,lkRrオ 【 畑L【5. scqucncc. 「1,Pレ ー. 伝 子 の 各 エ ク ソ ンご と の電 気 泳 動 時 間 と温 度 条. 件 を 示 す.(Banno. K. et al:Cancer. 146:58-65,2003のTable. 2よ. Genet. 、旧. hMSH2遺. 章1く5 i. UlIしi(Il. {. }「 口 GG 、1「1〔1⊂(八G. G(iGAAII. ll lil〔1(IU CCAレ ?n an'ACnanc激,AAO. AIi,¥GA. Cytogenet 藁 ・ ・絶 或: ・m lln (q. り 許 可 を 得 て 転 載). 二, ミドcミ i ?u. un on MI. ・ ・・・ 、Crr〔. …(,rc?. l. 、iu. 隷. 体DNA(鋳. 型)1ｵ1を. ll:. 加 え て 計25ｵ1. ¥U11. と し,95℃5分. を 計35サ. 、,。. '. ミ1. ∴氏凝 さ}. ,;1.¥::"fAf(TITiT. I. 、1コfCT「. l. ll-'ACNWC(湘 し爪 、lk湘C dh fi ..^iocinii,winiし xn gh 考澱 隠 呈、帆Au、d、. 謡. 礁. と1. %ア. K. 鮒. 孟. CT、驚;1・ 70皞GAG,1.,1GG 』㌃9 IICC.¥I. l2d. 晶痴 .R9?IJ lこ 二 ll;1. 目い. こ5り. Sa{、■ 賦」K「N. イ ク ル 行 っ て 増 幅 し,. 加 熱 した 後4℃. に 下 げ て 保 存 し た.. 伝 子 の 各 エ ク ソ ン のPCR増. を 電 圧200V,15℃. 下 で2時. hMLHIお. よ びhMSH2遺. ラ イ マ ー 配 列.上. 幅 産 物 は7.5. 段 にDNA構. 間電 気泳動 し. 伝 子 のDNA構 造 を,下. ス 用 の プ ラ イ マ ー 配 列 を 示 す 。hMSH2遺 ク ソ ン か ら,hMLHI遺. ク リ ル ア ミ ド ゲ ル(AA:BIS=30:1,10×Tris-. Glycine)内. 、人、i(i<i1.1.1(il':AG(il、 、.,、"、lk,、 ジ. 、 澄 ll. ¥G、. CG.¥Cl製. q. 第1図. hMLHI遺. 故. 1八A`. で 一 本 鎖 に 解 離 さ せ た 後,95℃30秒,. 55℃30秒,72℃30秒 更 に72。Cで7分. 署 w ,,;:. I(^GGA. ￡. i. ,r,z ?ii?ua. ζ. 訟. ,u・^兎. 1等叉,({II". Oll. に0.1ｵg/ｵ1検. Ac蝋. 融. 、'轡. れ て い る.(Banno. 伝 子 は19の K. 伝 子 は16の. 1よ. エ. エ ク ソ ンか ら 構 成 さ. et al:Cancer. 146:58-65,2003のFig. 造 とプ. 段 に シー ク エ ン. Genet. Cytogenet. り許 可 を 得 て 転 載). た の ち 銀 染 色 し て 異 常 バ ン ド の 出 現 を 解 析 し た. hMSH2遺. 伝 子 に つ い て も 各 エ ク ソ ン のPCR増. は10%ア. ク リ ル ア ミ ドゲ ル(AA:BIS=30:1,10×. Tris-Glycine)内. を 電 気 泳 動 し た 後,銀. ン ドの 出 現 を 解 析 し た.た. 幅産 物. 染 色 して 異 常 バ. だ しhMSH2遺. 伝子 にっ い. 異 の デ ー タベ ー ス上 の登 録 の有 無 を調 査 した. 本 研 究 は,文 部 科 学 省 ら3省 庁 合 同 の 「ヒ トゲ ノ ム ・. て は エ ク ソ ン ご と の 泳 動 温 度 ・時 間 が 異 な る た め,第3. 遺 伝 子 解 析 研 究 に関 す る倫 理 指 針 」,8学 会 合 同 の 「遺. 表 の 条 件 で 電 気 泳 動 を 実 施 し た.. 伝 学 検 査 に関 す るガ イ ドライ ン(案)」. お よ び家 族 性 腫. 瘍 研 究 会 の 「家 族 性 腫 瘍 に お け る遺 伝 子 診 断 研 究 と これ 7.hMLH1遺. 伝 子 お よ びhMSH2遺. 伝 子 の生 殖 細 胞 変. を応 用 した診 療 に関 す るガ イ ドライ ン」 を遵 守 して 実 施 した.. 異の検 出 上 記 のPCR-SSCP法. にて 異 常 バ ン ドが検 出 され た エ. 結. ク ソ ン部 位 につ い て はオ ー トシー クエ ンサ ー にてDNA 塩 基 配 列 を解 析 し,hMLH1遺. 伝 子 お よ びhMSH2遺. 伝. 子 の 既 知 の正 常 配 列 と比 較 す る こ と に よ り,hMLHI遺. 1.新. 伝 子 お よ びhMSH2遺. 体 癌 症 例 の頻 度. (第1図).検. 果. 伝 子 の 生 殖 細 胞 変 異 を検 出 した. 出 された生殖細 胞変異 が機能 的変異 とし. て報 告 さ れ て い る か に っ い て,文 献 検 索 お よ び遺 伝子 変. 一T91一. ア ム ス テル ダ ム ク ラィ テ リア を み た す家 族 性 子 宮. 我 々 は,当 院 に て1991年2002年 療 を行 っ た385例. の 間 に子 宮 体 癌 治. に対 し,詳 細 な家 族 歴,既. 往歴 の調.

慶鷹医学. 81巻2号(平. 成16年6月). 査 を 実 施 した 結 果,385例. 中2例(0.5%)がHNPCC. の新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ リアを み た す家 族 性 子 宮 体 1 ー. 癌 症 例 で あ っ だg). 症 例Aは54歳(2妊2経)の. 子 宮 体 癌 症 例 で1998. 1 重 1. 年 に当 科 に て手 術 治 療 を受 けて い る.病 理 学 的 診 断 は類 内膜 腺 癌 の 低 分 化 型(G3)でFIGOの. 手 術 進 行 期 はIb. V l. 期 で あ っ た.彼 女 の 母 親 お よ び2名. の子供 の大腸癌 の. 既 往 歴 が あ り,こ れ らを 含 め る と第 三 度 近 親 者 以 内 に6 Cq3. C(26. (C26. 例 もの 大腸 癌 患 者 を認 め,そ の うち3名. は30歳. い う極 め て 若年 で 発 症 して い た(第2図).症 第2図. 新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リアを 満 た す 症 例Aの. 家 系 図./は 女 性,口. 発 端 者 で あ る 子 宮 体 癌 症 例 で あ る.○ は. は男 性 を 示 す.0お. お よ びCCは 胃癌,Proは. よ びEnは. Btは 脳 腫 瘍, Laは 喉 頭 癌 を 表 す).数 字 は診 断 時 の年 齢 の ロー マ. 数 字 は世 代 を表 す.発 端 者 を 含 め,第 一 度 近 親 者 以 内 に. 42歳 で子 宮 体 癌 に罹 患 して い た.父 親,祖 父 を 含 め, 第 三 度 近 親 者 以 内 に5例. の大 腸 癌 症 例 を認 あ,癌. 集積. 性 の あ る家 系 で あ った(第3図).. 連 腫 瘍 を 認 め た.母 親 も子 宮 体 癌 と大. 腸癌 の重 複 癌 症 例 で あ った.(阪 埜浩 司,他:家 3:62-67,2003の. 症 例 で,1991. 型 子 宮 内 膜 増 殖 症 で あ った.本 症 例 の姉 も比 較 的若 年 の. 大 腸 癌,○ は そ の 他 の 癌 腫 を 示 す(Gは 前 立 腺 癌, Heは 肝 臓 癌, Cxは 子 宮 頸 癌,. 5例 のHNPCC関. 比. 年 に 当科 に て手 術 治 療 を 受 けて い る.病 理学 的診 断 は異. 子 宮 体 癌,○. を 示 す.斜 線 は死 亡 した家 系 構 成 員 を表 す.左. 較 的若 年 発 症 で あ る41歳(2妊2経)の. 以下 と. 例Bは. 図1よ. 族 性 腫 瘍,. り許 可 を得 て 転 載). i _ ー 1. T ー i i. V 第3図. 新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リアを 満 たす 症 例Bの. 家 系 図./は 女性. 発 端 者 で あ る子 宮 体 癌 症 例 で あ る.○ は. 口 は男 性 を 示 す.. ○. お よ びEnは. 子 宮 体 癌,. ○ お よ びCCは 大 腸 癌,○ はそ の他 の癌 腫 を示 す (Leuは 白 血 病 を 表 す).数 字 は 診 断 時 の年 齢 を示 す.斜 線 は死 亡 した家 系 構 成 員 を表 す.左 を表 す.発. 端 者 は41歳. の ロー マ 数 字 は世 代. と い う比 較 的 若 年 で子 宮 体 癌 を. 発 症 して い る.発 端 者 を 含 め,第 一 度 近 親 者 以 内 に3例 のHNPCC関. 連 腫 瘍 を 認 め た.(阪. 腫 瘍,3:62-67,2003の. 図2よ. 埜 浩 司,他:家. 族性. り許 可 を 得 て 転 載). 第4図. 症 例1に. お け るMSI解. 析.腫. 瘍 部 由 来 のDNAに. 認 あ ら れ た 異 常 な 波 形 を 矢 印 で 示 す.最. 大5領. ク ロ サ テ ラ イ トマ ー カ ー に よ り 解 析 し,1領. 域の マイ 域以上 で複. 製 エ ラ ー に よ る 異 常 波 形 を 認 め た 症 例 をMSI陽 し た.(Banno 58-65,2003のFig. 一T92一. K. et al:Cancer 2よ. Genet. Cytogenet. り許 可 を 得 て 転 載). 性 と判 定 146:.

阪埜. 子 宮 体 癌 とDNAミ. 第4表 Age. Case. 子 宮 体癌39例. D3. D9. D5. IN 十 十. 十. 十 十. 十. 十. 十 十. 十 十 十. め. C C C O. 十 十. 恥. 十 十. 十. 1. 十. a. 十. ー. 十 十. a. 十. ■19 ■ー一 守 -ニ. 十. 十. 十 十. 恥. 十. 1. 十 十. 恥. 十. 智 -且. 一1-一. 十 十 D N. c. ぬ 冒曜鳳. ND. 十. BC,. ND. ND. OC. b I 恥 I 翫 I % I b c 冒置占 1 b a 7暫ム τ昌ム c b 7ーム ー b c c 冒1▲ 7■▲ I a 1. BC. 血 7■昌. ㏄. c b b ▼■ム 7■昌 1. ・㏄. b a τ■ム ー 血 7■ユ b ー c 砒 血 7■轟 冒置ゐ 7墨■ 血 ■■二. 8 9 3 3. 以 上 の2症. 3よ. b. 6 7 3 3 2003のTable. のMSI陽. 1. 4 5 3 3. のMSI解. 析 の 結 果,12例. c. 1 2 3 3 3 3 子 宮 体 癌39例. 12, ND:not. ー. 5 6 7 8 9 0 2 2 2 2 2 3 intron. D3:D3S1284,. 恥. 1 2 2 3 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 1 1 1 1 1 1 1 3 1 2 2 G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G. 1 2 3 4 2 2 2 2 IN:hMSH2. D2:D2S123,. a. 2 1 2 3 1 2 3 1 1 2 1 2 G G G G G G G G G G G G. E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E S S. 9 0 1 2. cancer,. 血. E E 胡 酪 E E E E E E E E. 9 8 8 5 2 5 5 6 9 8 4 0 1 7 5 4 6 4 5 3 9 1 8 0 4 6 2 5 4 5 6 7 5 6 5 6 6 3 5 6 5 5 6 5 4 4 5 6 8 5 6 6 6 6. 7 8 1 1 CC:Colorectal. cancer,. OC. CC. AS:Adenosquamous. OC:Ovarian. D2. cancer. Stage ■1需 ■1一 7■ニ. 8 6 5 5 0 2 5 4 0 6 6 4 5 5 5 5 6 6 5 5 5 5 6 4. 3 4 1 1 5 6 1 1. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12. adenocarcinoma,. adenocarcinoma,. 析. Double. Grade. type. S:Serous. に お け るMSI解. Histological. at. operation. E:Endometrioid. ス マ ッチ 修 復 遺 伝 子 異 常. carcinoma, BC:Breast. cancer,. D5:D5S404,. D9:DgS162,. done. 析 の 結 果 と 臨 床 病 理 学 的 情 報(発 性 腫 瘍 を 認 め た(MSI陽. り許 可 を 得 て 転 載,一. 症 年 齢,臨. 床 進 行 期,分. 性 率30.7%).(Banno. K. 化 度,重. et al:Cancer. 複 癌 の 有 無)を Genet. 表 に ま と め た.解. Cytogenet. 146:58-65,. 部 改 変). 例 に 関 して は,遺 伝 子 レ ベ ル の 解 析 に対. す る同 意 が得 られず,そ の後 の解析 は実 施 で きて い な い.. 2.子. 宮 体 癌 に お け る マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安 定 性. (MSI)解 第4図. 析 に示 す よ うに,白. 血 球 由 来DNA(Normal). と子 宮 体 癌 組 織 由来DNA(Tumor)を 一T93一. 最 大5種 類 の マ.

慶鷹医学. 81巻2号(平. 成16年6月). イ ク ロ サ テ ラ イ ト領 域 に お い て マ イ ク ロ サ テ ラ イ トマ ー. 416%(12例. カ ー を 用 い てPCR法. に よ り増 幅 し,電. て あ っ た か,統. 常 組 織 由 来 のPCR産. 物 に は 存 在 しな い 異 常 な ピ ー ク が. 出 現 した と き,マ. の 結 果,解. 析 し た 子 宮 体 癌39例. マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト領 域5領. く と も1領. 学 的 所 見,重 4表).こ. 学 的 特 性 を 検 討 した.発. 認 め た かMSI陽. MSI陰. お い て 卵 巣 癌,大. 複 を 認 め,MSI陽. ま た,病. 理 組 織 学 的 分 化 度 と の 関 連 に つ い て はG2お. ひG3腺. 癌 か そ れ ぞ れ12例. かMSI陰 6%に. 認 め ら れ る に 過 きず,MSI陽 よ びG3腺. FIGO臨. 床 進 行 期 と の 関 連 て は,. 性 子 宮 体 癌12例. 癌 は29.. 白の. 体 に よ る免. 性 子 宮 体癌16例. にお い て はわ ず か1例. 体 の 染 色 性 の 消 失 か 認 め られ ず , 性 子 宮 体癌 とhMLHI蛋. 白 の発 現 低. 下 との 関連 性 か示 され た(p=00012)(第5表) 抗hMSH2抗. 体 の 染 色 性 の 消 失 は, MSI陽. 12例 中2例(167%)に 宮 体癌16例. .. 中8例(667%)に. 体 の 染 色 性 の 消 失 か 認 め られ た の. 統 計 学 的 にMSI陽 よ. 性 子 宮 体 癌 に お いて. はG2お. .-h, 性子 宮体癌. しか認 め られ ず ,MSI陰. にお い て も抗hMSH2抗. 性子. 体 の染色性の消失. は認 め られ なか った.. 癌 か 多 い 傾 向 を 示 し た(p=0.09). MSI陽. hMLH1染. 性 子宮 体癌 の. 色 性(+). hMLH1染. 色 性(一). 鎌蟹 症 例13. G1、. 第5図. Ila期. 、 MSI陰. 色性 か 消 失 して い る 62-67,2003の. 図5よ. G1,. 性 症 例. 白の発現低下. 免 疫 組 織 化 学 染 色 の 結 果 を示 す. 60歳. Endometrioid. Adenocarcinoma. 子 宮 体 癌 に お け るhMLH1蛋. 症 例(症 例5)の. 症 例5. 59歳. Endometrioid. あ. よ ひhMSH2蛋. 体 お よ ひ抗hMSH2抗. て しか 抗hMLH1抗. よ び3. よ びG3腺. は 乳 癌 に て 死 亡)て. 宮 体 癌 に お け るhMLHIお. に 対 し,MSI陰. 過半数 を 占め た. 性 子 宮 体 癌 に お け るG2お. 中5. 3.子. お い て 抗hMLH1抗. 性 子 宮 体 癌(27. 合 計 て7例(58.3%)ど. て は27例. 存 率 に よ る予 後 との 関連 性 は認 め られ なか った.. そ の結 果,MSI陽. も の の 統 計 学 的 に 有 意 差 は 認 め られ な か っ た(p=018).. 例(25%)と. の 死亡. 疫 組 織 化 学 的 に そ れ ぞ れ の 発 現 を解 析 した(第5図). 中4例. 比 べ て 頻 度 か 多 い 印 象 か あ った. 中4例(333%)お. 性(MSS)例 ち1例. 後 との 中1例. り,生. 用 い,抗hMLH1抗. 臓 器 の重. 腸 癌 な ど の他 臓 器 癌 の重. 性 子 宮 体 癌 はMSI陰. 例 中4例,14。8%)に. 死 亡(う. 性 例 て12例. MSI解 析 を 実 施 した39例 中28例 の 子 宮 体 癌 症 例 (MSI陽 性 例12例, MSI陰 性 例16例)の 手術標 本 を. 性 子 宮 体 癌 て5例. 性 子 宮 体 癌 は12例. 性 子 宮 体 癌 と転 移 の有. 免疫組織化学的発現解析. 性 子 宮 体 癌 に お い て有 意 に若 年 発 症 か. 複 癌 に 関 し て,MSI陽. お よ ひIV期. 理組織. 以下 の子宮体癌. 多 い 傾 向 は 認 め ら れ な か っ た(p=063).他. 対 し,MSI陰. 例(18.5%)の. 性子 宮 体 癌 の 臨 床 病 理. 症 年 齢 か50歳. 性 子 宮 体 癌 て2例,. (333%)に. (167%)に. 複 癌 の 有 無 な と を 調 査 し表 に ま と あ た(第. れ ら の 結 果 か らMSI陽. はMSI陽. 中12. 性症 例. て あ る と判 定 さ れ た20).子 宮 体 癌 の 発 症 年 齢,病. 転 移 を 示 すIII期. 計 学 的 にMSI陽. 比 較 に お い て は,MSI陽. 域 中少 な. 域 以 上 の 複 製 エ ラ ー を 認 め,MSI陽. 中5例)か. 無 と の 関 連 は 証 明 さ れ な か っ た(p=086).予. イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安 定 性(MSI)陽. 性 と判 定 し た.こ 例(307%)か. 気 泳 動 に よ り正. 抗hMLH1抗. l b期. Adenocarcinoma. 、 MSI陽. 体 を 用 い たMSI陰. 性 症 例. 性 症 例(症 例13)お. よ ひMSI陽. 右 図 の 症 例5に お いて は子 宮 内 膜 癌 部 の 核 にお け る抗hMLH1抗. なお,両 症例 と も癌 周 囲 の正 常 部 は染 色 され て い る(倍 率X100) り 許 可 を 得 て 転 載). 一T94一. .(阪 埜 浩 司,他. 性. 体 の染. 家 族 性 腫 瘍,3.

阪埜. 第5表. 子 宮 体 癌 とDNAミ. 子 宮 体 癌 に お け るMSIとhMLHI蛋. ス マ ッチ 修 復 遺 伝 子 異 常. 第6表.hMLHI遺. 白の発現低. 抗hMLH1抗. Case. 体 に よ る 癌部 の 染 色 性. i. 9臼 1. Exon. 11 (p=0.0012Fisher's. exact. に お け るhMLHI蛋. probability. Exon. test). ATG. to ATA. Met(688)Ile. 7. CTT. to TTT. Leu(390)Phe. 白 の 発 現 低 下 率=8/12. 12. Exon. 3. CGA. to TGA. Arg(100)Term. (hルfLHI). MSI(一)例. に お け るhMLH1蛋. 白 の 発 現 低 下 率=1/16例. MSI陽. (6.3%). 性 子 宮 体 癌12症. 例 中3例. 胞 変 異 を 検 出 し た.症. 子 宮 体 癌28例. に お け るMSIと. と の 関 連 を 示 す.MSI陽 hMLHI蛋. 抗hMLHI抗. 体の染 色性. 白 発 現 低 下 が 認 め ら れ た(p=o.00iz).(阪 族 性 腫 瘍,3:62-67,2003の. 得 て 転 載,一. 部 改 変). 4.MSI陽. 688に,症. 性 子 宮 体 癌 に お い て 有 意 に. 浩 司,他:家. MSI陽. 13. (hMSH2). 1列 (66.7%). hMSH2遺. predicted effects Ccodon). (hMSH2). ハ0 1. 5 1. 00 1. 4. MSI(一). MSI(+)例. 伝 子の生殖細胞. Exon 計(例) Genomic DNA affected alteration. 十 MSI(+). 伝 子 お よ びhMSH2遺. 変異. 下 と の関 連. れ た.症. 埜. 図4よ. Cytogenet 転 載,一. よび. 伝子生殖細胞変異解析 性 子 宮 体 癌12例. 伝 子 で あ るhMLHIお. ス マ ッチ 修 復. よ びhMSH2遺. の 生 殖 細 胞 変 異 を 解 析 した.そ. の 結 果,12例. (症 例1と 症 例11,16。6%)でhMSH2遺 胞 変 異 を2。),1例(症. は コ ド ン390に1塩 はhMLH1遺. 基 の変異が同定 さ. 伝 子 の コ ド ン100に K. et al:Cancer. l46:58-65,2003のTable. 4よ. ナ ンセ Genet. り許 可 を 得 て. 部 改 変). 1. 中2例. 伝 子 の生 殖 細. 例12,8.3%)でhMLHI遺. 伝子 性子宮 体癌. よ びhMSH2遺. II. 伝子. の 生 殖 細 胞 変 異 を認 め,合 計 と してMSI陽 の25%にhMLHIお. 伝子の生殖細 伝 子 の コ ドン. に お い て,施 設 内 倫理 委 員 会. の 承 認 と書 面 に よ る 同 意 の も とDNAミ (MMR)遺. のMMR遺 はhMSH2遺. ン ス 変 異 が 同 定 さ れ た.(Banno. り許 可 を. 性 子 宮 体 癌 例 に お け るhMLHIお. 例11で 例12で. 例1で. 伝 子 の生 殖 細 胞 変. 皿. 第7図. 症 例1の. 家 系 図.hMSH2遺. 伝 子 の コ ドン688に. 生 殖 細 胞 遺 伝 子 変 異 を認 め た 症 例1の. 家 系 図 を 示 す.矢. 印 は発 端 者 で あ る子 宮 体 癌 症 例 で あ る.○ 男 性 を表 す.∈)お. よ びEnは. は女 性,口. 子 宮 体 癌, Gお. は. よ びcc. は大 腸 癌,○ は そ の他 の癌 腫 を 表 す(Gは 胃 癌,Brは 乳 癌 を表 す).斜 線 は死 亡 した家 系 構 成 員 を示 し,数 字 は 癌 の 発 症 年 齢 又 は死 亡 年 齢 を 示 す.左. のn一. マ 数 字 は世. 代 を 表 す.(Banno. Genet. Cytogenet. K et al:Cancer. 146:58-65,2003のFig. 4よ り許 可 を 得 て 転 載,一. 部. 改 変). 異 を 検 出 し た(第6図).こ Normal. Case. hMSH2. exon. Normal. 1. 13. Case. 1診ル歪5」 砿2exon. 11. PCR-SSCP解. SSCP解. 析 の 結 果.. 析 の 結 果,異. 左 図 に 症 例1の. コ ド ン390のcttがttt(LeuがPhe)へ. 7. 結 果 を 示 す.異. (Banno. K et al:Cancer. 2003のFig. 3よ. 伝 子 のPCR・. 図 に 症 例11の. 伝 子 の コ ド ン100の. (ArgがStopコ の3症. 常 な バ ン ド を 示 し た 症 例 を 示 す.. エ ク ソ ン1を,右. ン7の. hMSH2遺. はhMSH2遺. コ ド ン688のatgがata(MetがIle)へ. お よ びhMLH1遺 第6図. の3例. エ クソ. ド ン)と. の1塩 の1塩. 伝子 の 基 変 異, 基変異. ナ ンセ ンス 変 異. 推 測 さ れ た(第6表).こ. れ ら. 例 は い ず れ も 家 族 内 癌 集 積 傾 向 を 示 し た も の の,. 新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ リア は満 た して い な か っ た. 常 な バ ン ド を 矢 印 で 示 し た. Genet. Cytogenet. (第7図).症. 146:58-65,. 例11で. 罹 患 し て お り,こ. り許 可 を 得 て 転 載). 一T95一. は 発 端 者 の2名. の2名. の 妹 も子宮 体癌 に. に お い て も今 回 検 出 され た コ.

慶慮医学. 81巻2号(平. 成16年6月). 癌 の病 態解 析 は重 要 な意 味 を持 っ と考 え られ て い るが,. 1. 分 子 疫学 的 な アプ ロー チ に よ る病 態 の解 析 は い まだ な さ れ て い な い. 今 回,著 者 は報 告 と して は現 時 点 で 国 内最 大 数 の 子 宮 体 癌385例 II. を 対 象 と した家 系 調 査 を 実 施 し,HNPCC. の新 ア ム ス テル ダ ム ク ラィ テ リア を満 た す2例(0.5%) 60CC 66En. 40 En 60 CC. 55 En. の家 族 性 子 宮 体 癌 家 系 を発 見 した.現 在 まで,我 が 国 の 家 族 性 腫 瘍 と して の子 宮 体 癌 の頻 度 に関 して は本 研 究 以. 第8図. 症 例11の. 家 系 図.hMSH2遺. 伝 子 の コ ドン390. に生 殖 細 胞 遺 伝 子 変 異 を 認 め た症 例11の. 家 系 図 を 示 す.. 矢 印 は発 端 者 で あ る子 宮 体 癌 症 例 で あ る.○. しか 報 告 さ れ て い な い.Sagawaら. は 本 研 究 よ り少 な い 子 宮 体 癌161例. は女 性,口. (L5%)が. は男 性 を 表 す.∈)お よ びEnは 子 宮 体 癌Gお よ びcc は 大 腸 癌 を 表 す.斜 線 は死 亡 した 家 系 構 成 員 を 示 し,数 字 は 癌 の 発 症 年 齢 又 は 死 亡 年 齢 を 示 す.左. 外 に は わ ず か1件. を 調 査 し2例. 新 ア ムス テ ル ダム ク ライ テ リアを 満 た した と. 報 告 して い る23).い ず れ の 結 果 も5%程. の ロ ー マ数 字. は世 代 を 表 す.発 端 者 を 含 め3姉 妹 が 子 宮 体 癌 に罹 患 し. 度 にHNPCCが. 存 在 す る と報 告 され て い る大 腸 癌 に比 べ る と は るか に 低. て お り,発 端 者 も大 腸 癌 の 重 複 癌 を 認 め て い る.(Banno. 頻 度 で あ った.こ の新 ア ム ス テル ダ ム ク ラ イ テ リアに は. Ket. HNPCCと. al:Cancer. Genet. Cytogenet. 146:58-65,2003. のFig 5よ り許 可 を 得 て転 載,一 部 改 変). 関連 す る と報 告 さ れ て い る卵 巣 癌 や 胃 癌 が 診. 断 基 準 の対 象 癌 に含 まれ て い な い と い う問 題 点 が 指 摘 さ れ て お り,こ の よ うな理 由 に よ り新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ リアで は家 族 性 子 宮 体 癌 の ご く一 部 の症 例 しか 抽 出. ドン390のcttがtttへ(LeuがPhe)の 生 殖 細 胞 変 異 を認 め た(第8図).症. 変 異 と同 様 の 例12は. 子宮体 癌. で きて い な い可 能 性 が あ る.今 後,我 が 国 に お け る家 族 性 腫 瘍 と して の子 宮 体 癌 の頻 度 を明 らか にす るた め には. の手 術 時 に 回 盲 部 大 腸 癌 の 重 複 癌 が 発 見 され た。 症 例. 地 域 性 に よ る発生 頻 度 の差 が 生 じて い る可 能 性 も含 め,. 12で は抗hMLH1抗. 大 規 模 か つ全 国 的 な子 宮 体 癌 症 例 の 家 系 調 査 が 必 要 で あ. 体 を 用 い た免 疫 染 色 に よ り子 宮 体. 癌 部 のみ な らず,重 複 癌 の 回盲 部 大 腸 癌 の粘 液 性 腺 癌 部 に お いて も染 色 性 の 消失 を認 あ,子 宮 体 癌 部 お よ び回 盲 部 癌 部 にお け るhMLH. 1蛋 白 の 発 現 低 下 を 確 認 した.. る と考 え られ た. 家 族 性 腫 瘍 で あ るHNPCCの チ 修 復(MMR)機. 発 癌 はDNAの. り,こ れ は 原 因 遺 伝 子 と され るMMR酵. 考. 察. ミス マ ッ. 構 の 異 常 に よ り生 じ る と考 え られ お 素遺伝子 の生. 殖 細 胞 変 異 に起 因 す る と推 測 さ れ て い る.こ. のMMR. 機 構 の 異 常 は マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト不 安 定 性(MSI)と HNPCCは. 常 染 色 体 優 性 遺 伝 形 式 を と る家 族 性 大 腸 癌. て 検 出 す る こ とが で き る.実 際 にHNPCCで. し. は90%以. で あ り,従 来 は大 腸 癌 患 者 を発 端 者 と して 分 子 遺 伝 学 的. 上 でMSIを. ア プ ローチ に よ る解析 が 実 施 され て き た.し か しな が ら,. ニ ン グ法 と して も期 待 さ れ て い る24).本 研 究 に お いて 著. HNPCC患. 者 は,子 宮 体 癌38例. 者 に お け る第 一 度 近 親 者 内 の大 腸 癌 以 外 の癌. 示 す た め, MSI解. 析 はHNPCCの. を 対 象 と して 最 大5種. 腫 の発 生 頻 度 と して は子 宮 体癌 が最 も多 く,欧 米 で は約. ロサ テ ライ トマ ー カ ー を用 い てMSI解. 9∼19%と. 解 析 した38例. 報 告 され て い る21).我 が 国 に お け る1994年. まで のHNPCC34家. 系167例. の解 析 で も10例(6.0%). に子 宮 体 癌 の発 生 を認 め て い る22).1999年. 30.7%と. の アムステ. た.こ. 中12例. い う高 いMSI陽. にMSI陽. のMSI陽. (14%),乳. あ り,子 宮 体 癌 の 発 癌 にMMR異. 子 宮 体 癌 にお い て以 前 よ りそ の発 生 に遺 伝 的 素 因 の 関与. 性 を 認 め,子 宮 体 癌 が. 性 率 の 結 果 は 大 腸 癌(19%),肝. 性 腫 瘍 で あ る こ と,そ の発 癌 機 構 はHNPCC同. 遺 伝 子 の異 常 が 関与 して い る事 実 が 明 らか とな って きた.. 類 のマイク. 析 を実 施 した.. 性 率 を示 す 事 実 が 明 らか に な っ. ル ダ ム ク ラ イ テ リアの 改訂 に よ り子 宮 体 癌 の一 部 が 家 族 様MMR. ス ク リー. 癌(4%)な. 癌. ど の報 告25)と比 較 して も高 率 で 常 が深 く関 与 して い. る こ とを 示 唆 して い る. 高 率 にMSI陽. 性 を示 すHNPCCの. 臨床病理学 的特徴. が 指 摘 さ れ て い た こ と,家 族 性 腫 瘍 で あ るHNPCCに. は近 年 の 解 析 に よ り明 らか と な りっ つ あ る.一 般 的 に そ. お い て子 宮 体 癌 の発 生 率 が 高 い こ と,罹 患 後 の 生 存率 も. の 特 徴 は ① 若 年 に発 症 す る(平 均42歳),②. 比 較 的 高 い癌 腫 で あ る こ と な どを 考 え る と,二 次発 癌 へ. に発 生 す る,③ 同 時 性,異 時 性 に大 腸癌 が好 発 す る,④. の予 防対 策 や家 系 内 の血 縁 者 へ の サ ーベ イ ラ ンス とい っ. 低 分 化 型 腺 癌 が 多 い,⑤ 粘 液 性 腺 癌 が 多 い,⑥ 予 後 良 好. た 家族 性 腫 瘍 独 特 な治 療戦 略 の視 点 か ら も家族 性 子 宮 体. で あ る,と の6項. 一T96一. 右側 大腸. 目に ま とめ る こ とが で き る26).一 方,.

阪 埜:子 宮 体癌 とDNAミ. MSI陽. 性 子 宮 体 癌 の 臨 床 病 理 学 的 特 徴 に 関 して,我. が. ス マ ッチ修 復 遺 伝子 異 常. archive.uwcm.ac.uk/uwcm/mg/hgmdO.htm)に. 登録. 国 にお け る報 告 はわ ず か で,統 一 され た 結 論 は得 られ て. され て お り,今 回検 出 さ れ た もの と 同様 の生 殖 細 胞 変 異. い な い.本 研 究 に お い てMSI陽. が 国 際 的 に はHNPCC症. 性 子 宮 体 癌 と臨 床 病 理. 例 に お い て 既 に報 告 さ れ て い. 学 的 特 徴 との 関 連 を統 計 学 的 に解 析 した が,家 族 性 腫 瘍. る27^29).また現 存 す る遺 伝 子 多 型 の デ ー タ ベ ー ス上 に も. で 一 般 的 に認 あ られ る若 年 発 症 や 重 複 癌 の 傾 向 は認 め ら. 登録 され て お らず,機 能 的 な遺 伝 子 変 異 と推 測 され る. 一 方 ,2例 のhMSH2遺 伝 子 の1塩 基 の変 異 は遺 伝 子 多. れ な か った.又,病 て はHNPCC同. 理 組 織 学 的 な分 化 度 との 関連 に っ い. お よ びG3腺. 様,. MSI陽. 性 子 宮 体 癌 に お いて はG2. 癌 と い っ た低 分 化 腺 癌 が多 い傾 向 を示 す と. い う知 見 を 得 た(p=0.09).一. 般 的 に,子. 宮体癌 で最. 型 で あ る とい う可 能 性 も完 全 に否 定 で き な い.我 が国 を は じめ と してhMLHIお MMR遺. よ びhMSH2遺. 伝子 などの. 伝 子 の健 常 人 に お け る遺 伝 子 多 型 解 析 の報 告 と. も高頻 度 な 高 分 化 型 子 宮 内 膜 癌 は肥 満 や 高 エ ス トロゲ ン. デ ー タの 蓄 積 が 非 常 に少 な い 状 況 で は正 確 な判 断 は難 し. 状 態 な どの環 境 因 子 が 発 癌 に密 接 に関与 して い る と考 え. い と い え る.最. られ て お り,こ. Nomuraら. の 結 果 はMMR異. 常 に よ る発 癌 機 構 が. 近,症. 例1と. 同 様 の生 殖細 胞 変異 は. に よ って 日本 人 のHNPCC症. 例 において も. 通 常 の子 宮 体癌 と は明 らか に 異 な る機 序 と生 物 学 的 特 性. 検 出 され た'8).こ の報 告 にお い て,コ. を有 して い る こ とを 示 唆 して お り興 味深 い.今 後 さ らな. 人158例. る症 例 数 を検 討 す る こ とで,MMR異. 型 を 示 し,変 異 を 認 め な か った と報告 して お り,断 定 は. 常 と低 分 化 型 腺 癌. の発 癌 機 構 の 関連 を 明 らか に で き る可 能 性 が示 され た. HNPCCに MMR酵. お け るMMR異. 常 の主 た る原因 遺伝子 は. 素 を コ ー ドす るhMLHIお. よ びhMSH2遺. 伝. で はhMSH2遺. ン トロー ル の 日本. 伝 子 の コ ド ン688は. 全て野生. で き な い もの の 機 能 的 な ミス セ ンス 変異 の可 能 性 を指 摘 して い る.症 例11に. お い て は,発 端 者 の妹2名. に も子. 宮 体 癌 の 罹 患 歴 が 確 認 さ れ た ば か りで な く,そ の 妹2. 子 と推 測 さ れ て い る.本 研 究 に お い て著 者 は子 宮 体 癌 と. 名 に も同 一 のhMSH2遺. MMR異. が 同 定 され た.こ の1塩 基 変 異 が 遺 伝 子 多 型 とす れ ば,. 常 と の 関 連 を免 疫 染 色 に よ るhMLH. よ びhMSH2蛋. 白 の 発 現 とhMLHIお. 1蛋 白 お. よ びhMSH2遺. う こ と に な る.こ の 発 端 者 お よ び妹 の1名. 癌12例. 中8例(66.7%)と. 高 率 にhMLH. に も大 腸 癌. 1蛋 白 お. が 発 症 した と い う強 い癌 集 積 性 を もっ 家 族 歴 か ら推 測 す. 性子 宮体. る と機 能 的 な変 異 で あ る可 能 性 も否 定 はで きず,今 後 さ. 免 疫 染 色 に よ る子 宮 体 癌 部 に お け るhMLH 白 の 発 現 を 検 討 で は, MSI陽. 基 変異. 日本 人 に お いて 極 めて 高 率 に生 じて い る遺伝 子 多型 と い. 伝 子 の生 殖 細 胞 変 異 に よ り解 析 した. よ びhMSH2蛋. 伝 子 コ ドン390の1塩. 1蛋 白 の発 現. らに症 例 を検 討 して い く必 要 が あ る.hMLHI遺. 伝子 の. 低 下 が 認 め られ,子 宮 体 癌 で 高 率 に認 め られ るMSIの. ナ ンセ ンス 変 異 が 認 め られ た 症 例12に. 多 く はhMLH1蛋. 部 大 腸 の粘 液 性 腺 癌 が重 複 して い た こ と,子 宮 体 癌 部 お. 示 唆 さ れ た.さ hMLH1蛋. 白 の 発 現 低 下 に 起 因 して い る こ とが ら に統 計 学 的 にMSI陽. 性子 宮 体癌 と. 白 の 発 現 低 下 が 強 く相 関 した こ と よ り(p=. 0.0012),hMLH1蛋 MSIの. 白の 免 疫 染 色 が 子 宮 体 癌 に お け る. 性 子 宮 内 膜 癌12例. ス マ ッ チ 修 復(MMR)酵. hMLH1お. よ びhMSH2遺. た.そ. の結 果,12例. hMSH2遺 hMSH2遺. にお い て,. 素 遺伝子 で ある. 伝 子 の 生 殖 細 胞 変 異 を解 析 し. 中3例(25%)でhMLH1お. よび. 伝 子 の 生 殖 細 胞 変 異 を 認 め た.2例 伝 子 の1塩. 基 の変 異 で あ り, hMSH2遺. の コ ド ン688のatgがata(MetがIle)に,コ 390のcttがttt(LeuがPhe)に はhMLH. れ た こ とか ら も明 らか な機 能 的遺 伝 子 変 異 で あ る と考 え られ た.hMLHI遺 MMR機. 示 した. 著 者 は さ らにMSI陽. が. 1遺 伝 子 の コ ド ン100のcgaがtgaへ. 伝 子 の生 殖 細 胞 変 異 に起 因 す る. 構 の異 常 に よ り子 宮 内 膜 や腸 管 に癌 腫 が 発 生 し. た症 例 と推 察 さ れ る. 1999年. ま で にICG・HNPCCに. 遺 伝 子 変 異 が,87例. は134例. のhMSH2遺. て い る.変 異 の 種 類 と してhMLHI遺 ス変 異 が多 く,hMSH2遺. のhMLHl. 伝 子 変 異 が 集 計 され 伝 子 は ミス セ ン. 伝 子 で は フ レー ム シ フ ト変 異. 伝子. が 多 い と報 告 さ れ て い る30).本 研 究 によ り子 宮 体 癌 で は. ドン. HNPCCで. は頻 度 が 比 較 的 低 い とさ れ るhMLHI遺. の ナ ン セ ン ス変 異 とhMSH2遺. 変 異 して い た.1例. る ナ ンセ ンス変 異(ArgがStopコ. 白 の 発 現 が 低 下 して. い た こ と,発 端 者 の妹 に も同様 の生 殖 細 胞 変 異 が 検 出 さ. 簡 便 な検 出 法 と して 代 用 で き る 可 能 性 を 初 め て. DNAミ. よ び 回 盲 部 大 腸 癌 部 でhMLH1蛋. お い て は,回 盲. 変異 す. ドン)で あ った.本. 伝子. 伝 子 の ミス セ ンス変 異. が 検 出 され た と い う事 実 は,MMR遺. 伝 子 の 遺 伝子 変異. 型 に よ り発 生 す る癌 腫 の表 現 型 が異 な る可 能 性 を示 して. 研 究 に よ り検 出 され た これ らの 生 殖 細 胞 変 異 は ア メ リカ. い る.今 後,解 析 を進 め,子 宮 体 癌 の発 生 と特 異 的 に関. の遺 伝 子 変 異 の デ ー タベ ー スで あ る. 連 す るMMR遺. Human. Genome. か と した い.. Database(HGMD)(http:// 一T97一. 伝子 の種 類 および遺伝 子変異 型を明 ら.

慶 慮 医学. 本 研 究 に お い てMMR遺 お よ びhMSH2遺. 伝 子 で あ るhMLH1遺. 81巻2号(平. 伝子. 伝 子 で 生 殖 細 胞 変 異 を認 め た3例. 成16年6月). は 現 在 ま でhMLHI遺. は. hMSH3遺. 家系 内癌 集 積 傾 向 を認 め た もの の,い ず れ の症 例 も新 ア. PMS2遺. 伝 子,. 伝 子, hMSH6遺 伝 子 の 計6種. hMSH2遺. 伝子以外 に. 伝 子, PMSI遺. 伝子 お よび. が 同 定 さ れ て い る.そ. のなかで. ムス テ ル ダム ク ライ テ リアを 満 た して い な か った.こ の. も最 近hMSH6遺. 結 果 か ら も新 ア ム ス テ ル ダム ク ライ テ リア で は我 が 国 の. 定 され た.hMSH6遺. 家 族 性 子 宮 体 癌 の一 部 しか抽 出 で きな い事 実 を確 認 し,. を 合 併 す る と報 告 され32.33),特に子 宮 体 癌 の 発 癌 と の関. この診 断基 準 を満 た す症 例 以 外 に も さ らに多 くの家 族 性. 連 性 でhMSH6遺. 子 宮 体 癌 の存 在 が推 察 され た.現 在 の臨 床 的 診 断 基 準 で. の研 究 に お い て重 要 な遺 伝 子 と して位 置 づ け られ る.. あ る新 アム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リアに代 わ る精度 の高 い,. 伝 子 の 生 殖 細 胞 変 異 がHNPCCで. 同. 伝 子 変 異 例 で は子 宮 体 癌,卵 巣 癌. 伝 子 は注 目 さ れ は じあ て お り,今 後. 子 宮 体 癌 の 一 部 が 家 族 性 腫 瘍 で あ り,そ. の 発癌 に. 我 が国 独 自 の家 族 性 子 宮 体 癌 の診 断基 準 の確 立 が 必 要 で. MMR遺. あ る と考 え られ た.ま. が一 部 不 明 で あ った子 宮 体 癌 の生 物 学 的特 徴 を理 解 す る. MMR遺. た,MSI陽. 性 子 宮 体 癌 の25%に. 伝 子 の生 殖 細 胞 変 異 を 認 め た と い う事 実 は,家. 族 性 子 宮 体 癌 症 例 の ス ク リー ニ ン グ法 と してMSI解. 伝 子 異 常 が 深 く関 与 して い る事 実 は,発 癌 機 構. うえ で貴 重 な知 見 と考 え られ,本 研 究 の よ うな この種 の. 析. 子 宮 体 癌 症 例 の 抽 出 と解 析 は重 要 な意 義 が あ る と考 え ら. が大 腸 癌 と同 様 に有 用 で あ る可 能 性 を示 した.家 族 性 子. れ る.今 後,本 研 究 で得 られ た知 見 を基 盤 と して家 族 性. 宮 体 癌 の診 断 と して,仮 に新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リ. 子 宮 体 癌 の精 度 の 高 い 臨床 診 断基 準 や サ ー ベ イ ラ ンス法. ァを 満 た さ な い 症 例 で あ って もMSI陽. 性 で あ り,か っ. が確 立 され れ ば 本 疾 患 の早 期発 見 や早 期 治 療 が可 能 と な. 家 族 内 癌 集 積 傾 向 を 認 め る 症 例 に 対 して は 積 極 的 に. る.ま た家 族 性 子 宮 体癌 の遺 伝 子診 断 法 が 確 立 さ れれ ば,. MMR遺. 発 症 前 診 断 が可 能 とな り,患 者 本 人 の み な らず広 く家 系. 伝 子 を対 象 と した 遺 伝 子 解 析 を 実 施 す るべ きで. あ ろ う.. 構 成 員 の癌 予 防 に も寄 与 で きる.さ らに本 研 究 が発 展 し,. 前 述 し た よ う にMSI陽 hMLH1蛋. 性 子宮 体 癌 に高 頻 度 に. 白 の発 現 低 下 が 認 め られ た. hMLHI蛋. 発 現 低 下 が 認 め られ た8例. 中hMLHI遺. 伝子 の生殖細. 胞 遺 伝 子 変 異 は わ ず か1例. で あ った.こ. の 結 果 よ り,. 子 宮 体 癌 で 生 じて い る高 頻 度 のhMLH1蛋. 将 来 的 にMMR遺. 白の. 伝 子 変 異 型 と表 現 型 と の 関 連 よ り子. 宮 体 癌 の 臨床 病 態 が 予 測 で き るよ うに な れ ば,症 例 に応 じた子 宮 体 癌 治 療 個 別 化 の 実 現 も期 待 され る.. 総. 白の発現 低. 括. 下 は生 殖 細 胞 変 異 に起 因 しな い遺 伝 子 の不 活 化 機 序 に よ る もの と推 測 され た.最 近 に な ってDNAの. プ ロモ ー ター. 我 が 国 にお け る家 族 性 腫 瘍 と して の 子 宮 体 癌 の 病 態 を. 領 域 の メ チ ル化 異 常 とい った エ ピ ジ ェネ テ ィ ッ クな変 化. 分 子 疫 学 的 手 法 に て 解 析 す る た あ,当. に よ る 遺 伝 子 発 現 の 消 失 機 構 が 注 目 さ れ て お り,. 2002年. hMLH1遺. 的 調 査 を 実 施 し,さ ら にイ ンフ ォ ー ム ド ・コ ンセ ン トの. 伝 子 の プ ロモ ー ター 領 域 に高 頻 度 に異 常 メ チ. 科 に て1991年. の間 に治 療 を行 った 子 宮 体 癌385例. ル化 が生 じて い る事 実 が 報 告 され た3').こ の 報 告 か ら も. 得 られ た39例. 子 宮 体 癌 に お け るMSIに. 検 討 す るた め 分 子 生 物 学 的 解 析 を 行 い,以 下 の 事項 を 明. はhMLH1遺. 伝 子 の エ ピ ジェ. 回,MSI陽. 性子宮 体癌 にお い. 1.新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ラ イ テ リア を満 た す 家 族 性 子 宮 体 癌 は全子 宮 体癌 の0.5%に. て 家 族 性 腫 瘍 で 一 般 的 に認 あ られ る若 年 発 症 や 重 複 癌 と い っ た傾 向 が 証 明 され な か った 事 実 も この 可 能 性 を 支 持. 子 宮 体 癌 の 発 癌 に 関 与 す るMMR遺 て 本 研 究 で は多 くのHNPCCに 生 じて い るhMLHI遺. 2.子 宮 体 癌 症 例 に お い て30.7%と. おいて生殖 細胞 変異 が. 伝 子 お よ びhMSH2遺. 3.MSI陽 hMLH1蛋. 伝 子 に着. 性 子 宮 体 癌12例. の2種. 色 が 子 宮 体 癌 にお け るMSIの. の 遺 伝 子 異 常 は確 か に存 在 し関 与 して い る もの. 機 序 だ けで はMMR異. る.HNPCC遺. 伝 子 の異 常 とい う. 4.MSI陽. 伝 子 の 関 与 も予 測 さ れ. 伝 子 の原 因 遺 伝 子 と して, MMR遺. 中8例(66.7%)に. ってhMLH. 1蛋 白 の 免 疫 染. 簡 便 な検 出法 と して 代 用. で き る可 能 性 が あ る.. 常 の す べ て を 説 明 で き る もの で. ら な る別 のMMR遺. 性を. 白の 発 現 低 下 が 認 め られ,統 計 学 的 に も強 く. 相 関 した(・1.0012).よ. 伝 子 お よびhMSH2遺. 高 率 にMSI陽. 常 が 密 接 に 関 与 して. い る.. 伝 子 の候補 と し. 目 し解 析 した.し か しな が ら,本 研究 結 果 に お い て,こ. は な く,さ. 存 在 す る.. 認 め,子 宮 体 癌 の 発 癌 にMMR異. して い る.. の,hMLHI遺. 伝 子 異 常 との 関連 性 を. らか と した.. ネ テ ィ ック な変 化 で あ る異 常 メ チル 化 異 常 が 深 く関 与 し て い る可 能 性 が 高 い.今. に対 してMMR遺. に 対 し疫 学. 性 子 宮 体 癌 はG2やG3と. 腺 癌 が 多 い 傾 向 を 示 し,MMR異. い っ た低 分 化 型. 常 に よ る子 宮 体 癌 は高. エ ス トロゲ ン状 態 な どの 環 境 因 子 が 発 生 に寄 与 す る とさ. 伝子. .・.

阪埜:子 宮 体 癌 とDNAミ. ス マ ッチ修 復 遺 伝子 異常. れ る高 分 化 型 子 宮 内 膜 癌 と は異 な る発 癌 機 構 と生 物 学 特. the. 性 を有 す る. 5.MSI陽. International. 性 子 宮 体 癌12例. 遺 伝 子 で あ るhMLHIお. 5)阪. 中3例(25%)でMMR. よ びhMSH2遺. 伝子 の生殖 細. ライ テ リアを 満 た して お らず,家 族 性 子 宮 体 癌 に関 して. 田 川 康. 河 田 雅 信,平 博,野. (HNPCC)と. 埜 浩 司,進. S,. 伝子. N,. M,. H, R,. of. Mibu. and. Y,. colon. Sun. L, KW,. II TGF一ﾟreinsta-. Li. Y,. Sawai. H,. mutation. cancers. of. Science. Moriyama. microsatellite. H, N,. the 275. genes. in. instability.. Nakajima. Shimada. correlation. hMSH3. between. Kimura. mutation. colorectal. Cancer. E,. T,. cancers. Res. with. 58:594-598,. 1998 RF,. Yin. Rhyu L,. J, Smolinski. MG,. Cottrell. Leggett. B,. H,. Young. 日本 産 科婦 人科 学 会学 術講 演. Meltzer. cell. 日本 癌学 会 学術 講 演会. cycle. mors.. gene. M,. Somatic. 度文 部 科 学 省科 学 研. JF,. 献. pair. A,. Genet G,. and. with. tal cancer. 15)Wu. Y,. Y,. Lanspa. rean. Genes. SJ,. Lynch. CR:Genetics, and. in. pathology. of cancer.. AL, HJ,. Hofstra. Leisti. 55. RM,. J, Buys. P:DNA. CH,. mismatch. kindreds. with. non-polyposis. re-. verified. colorectal. or. cancer.. 5:763-769,1996. analysis sporadic, Hum. Moisio. Jarvinen. Peltomaki. Thibodeau. mutation. tients. M. from. colorectal. D1,. JM>French P,. Nilbert. types. Boland. spectrum,. Wu. Tester. Cunningham Goretzki. H,. mutation.. P,. RJ,. JP,. hereditary Mol. tu-. 104:1535-1549,1993. mutations. 14)Moslein. E2F-4. mononucleotide. MSH2. Watson. tumor. Chapelle. putative. K,. the. 29:33-39,2000. J, Mecklin. Hum. Olsson. tumor. germline. M,. gene. SM,. Shimizu of. in. nonpolyposis. Gastroenterology. la. A,. Cavalieri. 13)Nystrom-Lahti. de. K,. Powell. gastrointestinal. different. TC,. history,. Osinga. S, Shi Biden. T, N,. human. in. with. hereditary. Frank. Harpaz. E, Borg. PM,. natural. GS,. alterations. Smyrk. Lynch. Wang JM,. SJ:mutation. Cancer HT,. TT,. 57:2350-2353,1997. genes. chromosome 12)Lynch. 宮 内膜 癌 の病態 解 明 と遺 伝子 診断 」 に よ った.. Bova. Wenngern. family. Zou. Abraham. J,. frameshift. HNPCC. KN, J,. primary. Res. peat-coating. 費 補 助金,特 定 領 域C「 分 子 疫学 的 解 析 に.よる遺 伝 性子 宮. in. Cancer. 11)Planck. 度 文部 科 学 省 科学 研 究. 一T99一. R,. frameshift. Tanaka. K:Close. E2F. N,. 1)Lynch HT, Krush AJ:The cancerfamilysyndrome and cancer control.Surg Gynecol Obstet 132:247250,1971 2)Vasen HF, Mecklin JP, Khan PM, Lynch HT:The InternationalCollaborativeGroup on Hereditary Nonpolyposis ColorectalCancer. Dis Colon Rectum 34:424-425,1991 3)Lynch HT, Lynch JF:Hereditary nonpolyposiscolorectalcancer.Semin Surg Oncol 18:305-313,2000 4)Vasen HF, Watson P, Mecklin JP, Lynch HT:New clinical criteria for hereditarynonpolyposiscolorectalcancer(HNPCC, Lynch syndrome)proposed by. 婦 人 科. Kinaler. Type. phenotype.. Orimo. Matsubara. 内膜 癌 の病 態 解 明」 お よ び平 成15年. 卓,. microsatellite. Ionov. in. N,. Sugimura. 究 費 補助 金,特 定 領域 「分子 疫 学 的手 法 を用 いた家 族性 子. the. with. H,. 日本 産 科婦 人 科学 会 学 術講 演. な お,本 研 究 の一部 は平 成13年. 田. Parsons E,. M:Somatic gene. A,Shimizu. 伸 幸 専任 講. 古 屋)に お いて 発表 した.. L,. of cells. mutator. Matsubara. Simms. 岡)お よ び第62回. 健,岩. 967-969,1997. YQ,. 京)第55回. 尾. Zborowska. Yamamoto. BAX. 10)Souza. 文. RS,. Perucho. the. 9)Ikeda. きま した慶鷹 義 塾大 学 医 学部 産 婦人 科 学教 室 の諸 先生 方 に. 会(2003年,福. 腸 癌. 268:1336-1338,1995. microsatellite. らに本 研 究 に多 大 な御 協力 をい ただ. 会(2002年,東. 性 大. 伝 性 子 宮 内 膜 癌 と は 一. J, Myeroff. cancer. Science. JC,. in. 野康 吉博 士,藤 田保健 衛 生大 学 医学 部 産 婦人 科宇 田川康 博. 本研二 究 の一 部 は,第54回. 野 倉 恵,平. Fan. colon. 8)Rompino. 義塾 大学 医 学部 産 婦人 科 学 教室 野 澤志 朗 教授 に深 謝 致 しま. 厚 く御 礼 申 し上 げます.. 木 大 輔,. 腺 腫. 婦 人 科 の 実 際,50:1819-. B:Inactivation in. bility.. 稿 を終 え るにあ た り,御 指導,御 校 閲 を賜 り ま した慶 慮. 師 に感謝 致 します.さ. 伸 幸,青 性 非. 澤 志 朗:遺. Wang J,. Vogelstein. Reed. 教 授,慶 慮 義塾 大 学 医学 部産 婦 人科 学 教 室進. HNPCC.. ス マ ッ チ 修 復 遺 伝 子 に っ い て 一.産. Lutterbaugh. ceptor. す.ま た,御 指導 いた だ き ま した栃木 県 立 がん セ ンター菅. 伝. 木 大 輔,野. 7)Markowitz. 性 およ び. を対 象 と した 遺 伝子 診 断 の 実 施 は有 意 義 と考 え られ る.. on. の 世 界,55:863-870,2003. アムス テルダム クラ. 家 系 内 癌 集 積 傾 向 が あ る症 例 に 対 して はMMR遺. 晃,進. 伸 幸,矢. 晃,青. 特 にDNAミ. 6.家 族 性 子 宮 体 癌 に関 して,新. 澤. 志 朗:遺. 澤. 婦 人 科 癌.産. 平 澤. 我 が 国 にお いて は新 ア ム ス テ ル ダ ム ク ライ テ リア を満 た. イ テ リアを 満 た さ な い症 例 で あ って もMSI陽. Group. 1825,2001 6)阪. この診 断 基 準 の 問 題 点 を具 体 的 に明 らか と した.ま た,. さ ない さ らに多 くの家 族 性 子宮 体 癌 の存 在 が推 測 され た.. llaborative. 116:1453-1456,1999. 埜 浩 司,二 宇. 胞 変 異 を検 出 した.い ず れ の症 例 も新 ア ム ス テ ル ダ ム ク. (2003年,名. C. Gastroenterology. Mol. Nystrom-Lahti. Lindor AJ,. NM,. Halling. Honchel KC,. SN:Microsatellite of. hMSH2. familial Genet. M,. instability and. and. R,. Schwab. hMLHI. hereditary. in. pa-. colorec-. 5:1245-1252,1996 M,. Osinga. J:MSH2. and.

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