BAB I BAB I
PENDAHULUAN PENDAHULUAN
A.
A. Latar BelakangLatar Belakang
Virus adalah satu set dari satu atau lebih molekul genom berupa asam Virus adalah satu set dari satu atau lebih molekul genom berupa asam nukleat (RNA atau DNA), yang biasanya dibungkus oleh selubung pengaman nukleat (RNA atau DNA), yang biasanya dibungkus oleh selubung pengaman berupa
berupa protein protein selubung selubung atauatau lipoproteinlipoprotein dan hanya dapat memperbanyak diri dan hanya dapat memperbanyak diri dalam sel inang hidup yang sesuai dengan memanfaatkan metabolisme, materi, dan dalam sel inang hidup yang sesuai dengan memanfaatkan metabolisme, materi, dan energi dari sel inang. Virus merupakan unit elemen yang masih menunjukkan energi dari sel inang. Virus merupakan unit elemen yang masih menunjukkan tanda kehidupan, sehingga virus dapat juga didefinisikan sebagai organisme tanda kehidupan, sehingga virus dapat juga didefinisikan sebagai organisme aseluler yang mempunyai genom yang hanya dapat bereplikasi dalam sel inang aseluler yang mempunyai genom yang hanya dapat bereplikasi dalam sel inang dengan menggunakan perangkat metabolism sel inang untuk membentuk seluruh dengan menggunakan perangkat metabolism sel inang untuk membentuk seluruh komponen virus.
komponen virus. Bakteriofag
Bakteriofag merupakan virus yang sel inangnya berupa sel bakteri, merupakan virus yang sel inangnya berupa sel bakteri, contohnya virus bakteri
contohnya virus bakteri E. E. coli.coli. Sebagian besar bakteriofag mempunyai asamSebagian besar bakteriofag mempunyai asam nukleat
nukleat double-strandeddouble-stranded DNA (dsDNA), akan tetapi ada juga yang asamDNA (dsDNA), akan tetapi ada juga yang asam nukleatnya berupa
nukleatnya berupa single-stranded single-stranded DNA (ssDNA) dan virus RNA. BakteriofagDNA (ssDNA) dan virus RNA. Bakteriofag memiliki kapsid yang berbentuk polyhedral dan diselubungi oleh protein. memiliki kapsid yang berbentuk polyhedral dan diselubungi oleh protein. Bakteriofag juga memiliki ekor seperti benang, tersusun atas protein, yang dapat Bakteriofag juga memiliki ekor seperti benang, tersusun atas protein, yang dapat mengenali reseptor pada sel inang pada saat tahap pelakatan.
mengenali reseptor pada sel inang pada saat tahap pelakatan. B.
B. TujuanTujuan
Adapun tujuan dilakukannya praktikum ini adalah agar mahasiswa mampu Adapun tujuan dilakukannya praktikum ini adalah agar mahasiswa mampu mengetahui isolasi
mengetahui isolasi Bakteriofage Bakteriofagedari limbah cair.dari limbah cair. C.
C. ManfaatManfaat
Adapun manfaat dilakukannya praktikum ini adalah mahasiswa mampu Adapun manfaat dilakukannya praktikum ini adalah mahasiswa mampu mengetahui isolasi
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
Virus mulai diketahui keberadaannya oleh Adolf Meyer, seorang ilmuwan Jerman pada tahun 1883. Ketika itu, ia menyelidiki penyakit mozaik pada daun tembakau. Hasil penyelidikannya menunjukkan bahwa jika daun yang terserang itu diambil zatnya kemudian disuntikkan pada daun yang sehat, maka daun tersebut akan menderita penyakit yang sama. Selain itu, diketahui pula bahwa zat yang menyebabkan penyakit itu tetap menembus kertas saring rangkap dua dan tidak dapat ditumbuhkan dalam media agar-agar. Virus sering diperdebatkan statusnya sebagai makhluk hidup karena tidak dapat menjalankan fungsi biologisnya secara bebas. Karakteristik khas virus ini selalu terasosiasi dengan penyakit tertentu, baik pada manusia (misalnya virus influenza dan HIV), hewan (misalnya virus flu burung), atau tanaman (misalnya virus mozaik tembakau atau TMV) (Pelczar and Chan, 2008).
Bakteri adalah organisme bersel tunggal terkecil, beberapa di antaranya hanya memiliki diameter 0,4 mm. Sel berisi massa sitoplasma dan beberapa bahan inti (dia tidak memilki inti sel yang jelas). Sel dibungkus oleh dinding sel dan pada beberapa jenis bakteri dinding sel ini dikelilingi oleh lapisan lendir atau kapsula
(Repley,2005).
Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungan sehingga diperoleh kultur atau biakan murni. ada beberapa cara umum yang dapat dilakukan dengan cara goresan (steak plate), cara
taburan atau tuang (pour plate), serta mikro manipulator (the micro manipulator methods) (Freifelder, 1987).
Kebutuhan bakteri terhadap unsur N dapat di pengaruhi oleh sumber N yang terdapat dalam berbagai senyawa organik maupun dari N udara. Peranan nitrogen secara biologis oleh sejumlah spesies bakteri endofit diazotrof memiliki keunggulan di bandingkan rhizosfer, karena keberadaanya di dalam jaringan interseluler tanaman
yang tidak mudah hilang, sementara hara nitrogen yang berada di alam sangat bersifat labil, mudah tercuci air dan erosi, dan mudah nguap ke udara.Selain itu sejumlah bakteri endofit juga mampu menghasilkan asam indol asetat (AIA) yang merupakan
fitohormon golongan auksin yang berperan dalam memperpanjang sel dan organ (Suriawirnia,1995).
Bakteriofage merupakan virus yang menginfeksi bakteri dan mampu membunuh sel bakteri tersebut secara langsung atau mengintegrasikan DNA virus kedalam kromosom bakteri inang (Budzik, 2003).
Layaknya virus lainnya, bakteriofage juga mempunyai penyusun yang serupa berupa mantel protein dan asam nukleat, yang berupa ssRNA, dsDNA dan dsRNA
(ss: untai tunggal, ds: untai ganda), bentuk untaian asam nukleat tersebut umumnya linier, circular maupun segmented. Dilihat dari perilaku bakteriofag, beberapa bakteriofag dapat menyisipkan asam nukleatnya dengan asam nukleat bakteri inang
dan dapat juga langsung menyebabkan lisisnya bakteri inang dengan menghasilkan beberapa enzim yang berperan dalam peli-sisan tersebut. Enzim ini disebut dengan
enzim endolisin (Addy, 2011).
Kemampuan membunuh tersebut berpotensi untuk terus digali dan dimanfaatkan untuk mengontrol bakteri pembentuk biofilm. Dengan memanfaatkan kemampuan bakteriofag, maka penggunaan sanitizer dapat dikurangi ataupun diintegrasikan dengan bakteriofag sebagai upaya pengontrolan biofilm yang lebih aman (Nurizkiawan, 2011).
BAB III
METODE PRAKTIKUM
A. Waktu dan Tempat
Adapun waktu dan tempat dilaksanakannya praktikum ini adalah : Hari / Tanggal : Senin / 04 Januari 2016
Pukul : 13.00
–
14.00 WITATempat : Laboratorium Mikrobiologi Lantai II Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar Samata, Gowa.
B. Alat dan Bahan 1. Alat
Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini adalah LAF( Laminar Air Flow), inkubator, tabung reaksi, cawan petri, Vortex, jarum inokulasi/ose,
rak tabung,lampu spiritus dan korek api. 2. Bahan
Adapun bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah limbah cair, kultur Escherichia coli, Nutrient Agar semi padat (agar 0,7%), media NA ( Nutrient Agar)aquadest , alkohol 70%, kapas, label dan tissue.
C. Cara Kerja
Adapun prosedur kerja di dalam melakukan praktikum ini adalah sebagai berikut :
1. Melakukan pengenceran sampel limbah cair 10-1 dan 10-2 dengan menggunakan aquadest.
2. Menyiapkan media agar semi padat dalam 4 tabung reaksi, memberi label pada masing-masing tabung dengan 1,2,3 dan 4.
3. Mengikulasikan 1 ml limbah cair yang tidak diencerkan dan 1 ml kultur Escherichia coli pada tabumg 1. Menuang media NA(Nutrient Agar) dan sebar
dengan memutar cawan petri membentuk angka 8.
4. Menginokulasikan 1 ml limbah cair yang telah diencerkan (10-1 dan 10-2) pada tabung 2 dan 3.
5. Membuat kontrol pada tabung 4 dengan aquadest tanpa limbahcair. Menuang pada media NA dan sebar dengan cara memutar cawan petrimembentuk angka
8.
6. Membiarkan medium memadat. Kemudian menginkubasi selama 48 jam dengan suhu 37°C.
7. Menghitung jumlah plak yang terbentuk pada setiap cawan, mencatat ukuran dan bentuk plak yang terdapat pada permukaan media.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Pengamatan
Adapun hasil pengamatan pada praktikum ini adalah sebagai berikut :
NO Perlakuan Gambar Keterangan
1 Tanpa
2 Pengenceran 10-1 Tidak ada plak
4 Kontrol Tidak ada plak
B. Pembahasan
Sebagian besar bakteriofage mempunyai asam nukleat double-stranded DNA (dsDNA), akan tetapi ada juga yang asam nukleatnya berupa single-stranded DNA (ssDNA) dan virus RNA. Bakteriofag memiliki kapsid yang berbentuk polyhedral dan diselubungi oleh protein. Bakteriofag juga memiliki ekor seperti benang, tersusun atas protein, yang dapat mengenali reseptor pada sel inang pada
saat tahap pelakatan.
Berdasarkan sifatnya dalam menginfeksi bakteri, terdapat 2 jenis bakteriofage yaitu lytic dan lysogenic bacteriophage. Ciri virus bakteriofag yang dapat digunakan sebagai terapi adalah memiliki kapabilitas dasar sebagai lytic phages, yaitu menginfeksi dan membunuh sel bakteri dengan melisiskan bakteri. Lysogenic phages merupakan jenis virus yang berintegrasi dengan asam nukleat bakteri terinfeksi. Pada saat ini jenis faga tersebut belum dapat digunakan sebagai
terapi, karena akan mengalami fase dorman di dalam sel pejamu; dapat menghambat bakteriofag jenis yang sama masuk; serta seringkali memiliki gen toksik didalam genomnya. Penelitian untuk mengatasi hal tersebut sedang
dikembangkan, sehingga diharapkan lysogenic phages nantinya dapat digunakan sebagai terapi.
Ketidakmampuan beberapa isolat inang untuk menjadi jernih dalam media cair tetapi mampu menunjukkan plaque pada media padat disebabkan oleh beberapa kemungkinan diantaranya, terdapat bakteriofag yang hanya mampu melisiskan bakteri inang pada media agar sebagai akibat perbedaan kondisi lingkungan antara media padat dengan cair, pertumbuhan host yang terlalu cepat, dan sistem pertahanan terhadap infeksi bakteriofag secara alami. Namun demikian, diduga kuat bahwa penyebab utama ketidakmampuan isolat inang untuk menjadi jernih dalam media cair lebih disebabkan oleh kondisi lingkungan media yang berbeda dan pertumbuhan host yang terlalu cepat. Alasan berupa sistem pertahanan alami dari inangakan menyebabkan ketidakmampuan isolate inang untuk menjadi jernih di media cair dan tidak menunjukkan plaque di media padat, sehingga alasan ini tidak dapat digunakan.
Berdasarkan hasil pengamatan pada cawan petri pertama di inokulasi dari limbah cair tanpa dilakukannya pengenceran dan hasilnya tidak ada plaq yang terbentuk. Cawan petri kedua di inokulasi dari limbah cair dengan pengenceran 10 -1 dan hasilnya tidak ada plaq yang terbentuk. Cawan petri ketiga di inokulasi dari limbah cair dengan pengenceran 10-2 dan hasilnya tidak ada plaq yang terbentuk. Terakhir cawan petri sebagai kontrol dan hasilnya tidak ada plaq yang terbentuk. Ada tidaknya plaq yang terbentuk dikarenakan adanya aktivitas virus karena plaque merupakan hasil infeksi dari satu sel per satu virus diikuti oleh replikasi
BAB V PENUTUP
A. Kesimpulan
Adapun kesimpulan pada praktikum ini yaitu Bakterifage adalah virus yang menginfeksi bakteri. Seperti halnya semua virus lain, fage merupakan parasit interseluler obligat yang tidak memiliki kemampuan untuk mensintesis protein dan sistem konversi energi. Bakteriofage membutuhkan inang berupa bakteri hidup untuk melakukan siklus reproduksinya.
Isolasi bakteriofage dapat dilakukan dari limbah cair, misalanya dari limbah domestik contohnya kotoran dari masyarakat dan rumah tangga dan juga yang berasal dari industri, air tanah, air permukaan serta buangan lainnya. Dan di kultur bersama dengan biakan bakteri Escherichia coli pada media NA (Nutrient Agar) yang merupakan media yang sangat cocok untuk pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
Adapun hasil yang diperoleh setelah di inkubasi yaitu pada keempat cawan petri hasilnya sama yaitu tidak ada plak maupun koloni bakteri yang terlihat, hal ini menandakan tidak adanya proses lisis yang dilakukan oleh bakteriofage dan tidak terjadi siklus litik . Berdasarkan teori adanya plak pada media menandakan terjadinya sikluslitik yang ujungnya adalah proseslisis.
B. Saran
Adapun saran pada praktikum ini yaitu sebaiknya praktikan satu persatu melakukan proses agar semua praktikan aktif dalam praktikum. Dan sebaiknya secara bergantian perkelompok melakukan proses pengamatan agar lebih teratur.
DAFTAR PUSTAKA
Budzik, J.M. 2003. Phage Isolation and Investigation. Dartmouth Undergraduate Journal of SciencesVol. III No. 1, 37
–
43.Freifelder, David. Molecular Biology. Boston: Jones and Bartlett Publishers Inc, 1987.
Nurizkiawan, Z. 2011. Isolasi Bakteriofag dan Aplikasinya Dalam Mengendalikan
Bakteri Patogen Untuk Meningkatkan Keamanan Pangan. Skripsi.
Universitas Brawijaya. Malang.
Rapley, R. Medical Biomedical Handbook , New Jersey: Humana Press, 2005.
Pelczar, Michael dan Chan. Dasar-Dasar Mikrobiologi.Jakarta: UI-Press, 2008. Stansfield, William D. Biologi Molekuler dan Sel . Jakarta: Erlangga, 2006. Suriawiria. Pengantar Mikrobiologi. Jogjakarta: UGM Press, 2005.
