xvi INTISARI
Telah dilakukan penelitian tentang efek hepatoprotektif jangka waktu enam jam ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh informasi apakah pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius jangka waktu 6 jam dapat memberikan efek hepatoprotektif, dan berapa dosis efektif ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. yang diperlukan untuk berefek hepatoprotektif.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode pengukuran aktivitas serum Alanin Aminotransferase (ALT) and serum Aspartat Aminotransferase (AST). Sebanyak 30 tikus jantan galur Wistar dibagi acak menjadi 6 kelompok, yaitu kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/Kg BB, kelompok kontrol negatif diberikan olive oil dosis 2 mL/Kg BB, kelompok kontrol ekstrak etanol daun M. tanarius, dan 3 kelompok perlakuan yang diberi dosis ekstrak etanol daun M. tanarius berturut-turut 3840 ; 1280 ; dan 426 mg/Kg BB kemudian diberi karbon tetraklorida pada jangka waktu 6 jam setelah pemberian ekstrak etanol M. tanarius. Pada 24 jam setelah pemberian karbon tetraklorida, diambil cuplikan darah melalui sinus orbitalis mata. Darah yang diambil ditetapkan aktivitas serum ALT dan AST-nya.
xvii ABSTRAC
A study concerning the hepatoprotective effect term of six hours of the ethanol extract M. tanarius leaf in male rats induced by carbon tetrachloride. This study aimed to obtain information whether the administration of ethanol extract of M. tanarius leaves term of 6 hours to give hepatoprotective effects, and how much effective dose required of ethanol extract of M. tanarius leaves for hepatoprotective effect.
This research is a pure experimental design with randomized complete unidirectional pattern. The method used in this research is a method of measuring the activity of serum alanine aminotransferase (ALT) and serum aspartate aminotransferase (AST). A total of 30 male Wistar rats were divided randomly into 6 groups : hepatotoxins control group (carbon tetrachloride dose of 2 mL/Kg BB), negative control group given olive oil dose of 2 mL/Kg BB, control group of ethanol extract of M. tanarius, and 3 treatment groups were given a dose of ethanol extract of M. tanarius 3840 ; 1280 ; and 426 mg/Kg BB then induce carbon tetrachloride to the term of 6 hours after administration of ethanol extract of M. tanarius leaves, respectively. At 24 hours after administration of carbon tetrachloride, blood samples were taken through the eye orbital sinus. Blood serum taken specified ALT activity and AST it.
The result showed that the ethanol extract of M. tanarius leaves at term of 6 hours has hepatoprotective effect in male rats induced by carbon tetrachloride at a dose of 3840 ; 426; and 1280 mg/Kg BB with give hepatoprotective effect for 32,2 ; 54,4 ; and 67,9 %, respectively.
EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA WAKTU ENAM JAM EKSTRAK ETANOL DAUN Macaranga tanarius L. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS JANTAN TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Diajukan Oleh : Christine Herdyana Febrianti
NIM : 098114105
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
i
EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA WAKTU ENAM JAM EKSTRAK ETANOL DAUN Macaranga tanarius L. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS JANTAN TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Diajukan Oleh : Christine Herdyana Febrianti
NIM : 098114105
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA
ii
iii
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Ganjaran kerendahan hati dan takut akan TUHAN adalah
kekayaan, kehormatan, dan kehidupan.
(Amsal 22 : 4)
Kupersembahkan skripsi ini untuk…
v
vi
vii PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas berkatnya yang melimpah, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi berjudul “Efek Hepatoprotektif Jangka Waktu Enam Jam Ekstrak Etanol Daun Macaranga tanarius L. Terhadap Aktivitas ALT-AST pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida” dengan baik.
Skripsi ini dibuat untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam pelaksanaan dan penyusunan skripsi, tidak terlepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Tuhan Yesus Kristus atas tuntunan, berkat, rahmat pertolongan dan penyertaan-Nya selama ini sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.
2. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
3. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Apt. sebagai Dosen Pembimbing skripsi ini atas segala kesabarannya telah memberikan bimbingan, pengarahan, tuntunan, dukungan dan motivasi selama penelitian dan penyusunan skripsi.
viii
5. Ibu dr. Fenty, M.Kes., Sp. PK. sebagai Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberikan masukan dan saran.
6. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt selaku Pimpinan Laboratorium Farmasi yang telah memberikan ijin penggunaan semua fasilitas laboratorium guna penelitian skripsi ini.
7. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah membimbing dalam determinasi tanaman Macaranga tanarius L.
8. Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Kayat, Pak Yuwono, Pak Wagiran, Pak Sigit, Pak Parlan, dan Bu Hartini yang telah banyak membantu menyediakan fasilitas yang dibutuhkan untuk melakukan penelitian ini.
9. Papa, Mama, adik, serta keluarga besar Soebroto dan Martono atas doa, dukungan semangat dan perhatiannya dari awal sampai akhir penelitian ini,.
10.Reza Eka Putra sebagai sahabat terkasih atas doa, kasih sayang, perhatian, kesabaran, bantuan, motivasi dan waktunya.
11.Teman-teman “Tim Macaranga part 3” Nanda Chris, Theresia Garri, Rosalia Kony, Fransisca Devita, Bernadetta Amilia, Inggrid Silli, dan Luluk Rahendra atas kerja sama, bantuan, suka duka, dan perjuangan dalam menyelesaikan penelitian ini sampai akhir.
ix
13.Seluruh warga FKK B angkatan 2009 dan kelas C serta semua teman farmasi USD khususnya angkatan 2009.
14.Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis yang telah membantu selama proses penyusunan skripsi ini berlangsung.
Peneliti menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, karena itu penulis menerima kritik dan saran yang membangun dan bermanfaat khususnya bagi pengembangan ilmu pengetahuan, sehingga dapat menjadi acuan-acuan untuk penelitian selanjutnya. Semoga tulisan ini dapat memberikan manfaat khususnya di bidang farmasi, serta semua pihak baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat.
Yogyakarta, 19 Desember 2012
Penulis
x DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL……….. i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING……… ii
HALAMAN PENGESAHAN ………. iii
HALAMAN PERSEMBAHAN………. iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA………. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA... vi
PRAKATA……….. vii
DAFTAR ISI………... x
DAFTAR TABEL……….. xiii
DAFTAR GAMBAR... xiv
DAFTAR LAMPIRAN………. xv
INTISARI……….. xvi
ABSTRACT………. xvii
BAB I. PENDAHULUAN……….. 1
A. Latar Belakang………..………. 1
1. Perumusan masalah...………...…….. 4
2. Keaslian penelitian………... 4
3. Manfaat penelitian……….... 6
B. Tujuan Penelitian... 6
BAB II. PENELAHAAN PUSTAKA... 8
A. Anatomi dan Fisiologi Hati... 8
xi
C. Hepatotoksin... 11
D. KARBON TETRAKLORIDA... 12
E. Metode Uji Hepatotoksisitas... 16
F. Macaranga tanarius (L.)... 18
1. Taksonomi... 18
2. Nama Daerah... 19
3. Morfologi... 19
4. Kandungan kimia... 19
5. Khasiat dan kegunaan... 20
6. Ekologi penyebaran dan budidaya... 21
G. Metode Penyarian... 21
H. Landasan Teori... 22
K. Hipotesis ... 24
BAB III. METODE PENELITIAN... 25
A. Jenis dan Rancangan Penelitian... 25
B. Variabel dan Definisi Operasional... 25
1. Variabel penelitian..………... 25
2. Definisi operasional ... 27
C. Bahan Penelitian... 26
D. Alat atau Instrumen Penelitian... 29
E. Tata Cara Penelitian ... 29
F. Tata Cara Analisis Hasil ... 35
xii
A. Hasil Determinasi Tanaman………... 36
B. Hasil Penimbangan Bobot Ekstrak Etanol-Air Daun M. tanarius... 36
C. Orientasi Waktu Pencuplikan Darah Hewan Uji... 37
D. Efek Hepatoprotektif Jangka Waktu 6 jam Ekstrak Etanol Daun M. tanarius Terhadap Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida... 40
1. Kontrol negatif (Olive Oil dosis 2 ml/kgBB)... 43
2. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2ml/Kg BB)... 45
3. Kontrol ekstrak etanol daun M. tanarius 3840 mg/kg BB... 46
4. Perlakuan ekstrak etanol-air daun M. tanarius dosis 3840; 1280; dan 426 mg/kgBB jangka waktu 6 jam pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/Kg BB... 47
E. Rangkuman Pembahasan... 51
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN... 54
A. Kesimpulan... 54
B. Saran... 54
DAFTAR PUSTAKA... 55
LAMPIRAN... 59
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Tingkat relatif peningkatan enzim serum pada beberapa kasus kerusakan hati oleh racun... 16 Tabel II. Aktivitas serum ALT dan perbandingan antar waktu pencuplikan
darah hewan uji pada karbon tetraklorida dosis 2 ml/Kg……... 38
Tabel III. Aktivitas serum AST dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada karbon tetraklorida dosis 2 ml/Kg... 39 Tabel IV. Pengaruh perlakuan jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. tanarius dilihat dari aktivitas serum ALT dan AST pada berbagai variasi
dosis terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida... 41 Tabel V. Hasil statistik jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. tanarius dilihat dari aktivitas serum ALT pada berbagai variasi dosis terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida... 42 Tabel VI. Hasil statistik jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. tanarius dilihat dari aktivitas serum AST pada berbagai variasi dosis terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida... 43 Tabel VII. Aktivitas serum ALT dan perbandingan antar waktu pencuplikan
darah hewan uji pada olive oil 2 ml/Kg BB……... 44
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur mikroskopik hati…... 9
Gambar 2. Struktur karbon tetraklorida... 13
Gambar 3. Jalur metabolik karbon tetraklorida……... 15
Gambar 4. Struktur kandungan senyawa daun M. tanarius……... 20
Gambar 5. Diagram batang aktivitas serum ALT tikus setelah induksi karbontetraklorida 2/kg ml BB pada pencuplikan darah 0 jam, 24 jam, dan 48jam………... 38
Gambar 6. Diagram batang aktivitas serum ALT tikus setelah induksi karbontetraklorida 2/kg ml BB pada pencuplikan darah 0 jam, 24 jam, dan 48jam………... 39
Gambar 7. Diagram batang aktivitas serum ALT tikus praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius pada berbagai variasi dosis……….………... 41
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Foto daun M. tanarius... 60
Lampiran 2. Foto ekstrak etanol-air daun M. tanarius... 60
Lampiran 3. Foto larutan ekstrak etanol-air daun M. tanarius... 60
Lampiran 4. Surat Determinasi Tanaman M. tanarius... 61
Lampiran 5. Analisis statistik aktivitas serum ALT pada uji pendahuluan penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji pada karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB………... 62
Lampiran 6. Analisis statistik aktivitas serum AST pada uji pendahuluan penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji pada karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB………... 65
Lampiran 7. Analisis statistik aktivitas serum ALT pengaruh perlakuan jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. Tanarius pada berbagai variasi dosis terhadap hepatoksisitas karbontetraklorida... 68
Lampiran 8. Analisis statistik aktivitas serum AST pengaruh perlakuan jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. Tanarius pada berbagai variasi dosis terhadap hepatoksisitas karbontetraklorida... 74
Lampiran 9. Perhitungan efek hepatoprotektif... 88
Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius... 89
xvi INTISARI
Telah dilakukan penelitian tentang efek hepatoprotektif jangka waktu enam jam ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh informasi apakah pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius jangka waktu 6 jam dapat memberikan efek hepatoprotektif, dan berapa dosis efektif ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. yang diperlukan untuk berefek hepatoprotektif.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode pengukuran aktivitas serum Alanin Aminotransferase (ALT) and serum Aspartat Aminotransferase (AST). Sebanyak 30 tikus jantan galur Wistar dibagi acak menjadi 6 kelompok, yaitu kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/Kg BB, kelompok kontrol negatif diberikan olive oil dosis 2 mL/Kg BB, kelompok kontrol ekstrak etanol daun M. tanarius, dan 3 kelompok perlakuan yang diberi dosis ekstrak etanol daun M. tanarius berturut-turut 3840 ; 1280 ; dan 426 mg/Kg BB kemudian diberi karbon tetraklorida pada jangka waktu 6 jam setelah pemberian ekstrak etanol M. tanarius. Pada 24 jam setelah pemberian karbon tetraklorida, diambil cuplikan darah melalui sinus orbitalis mata. Darah yang diambil ditetapkan aktivitas serum ALT dan AST-nya.
xvii ABSTRAC
A study concerning the hepatoprotective effect term of six hours of the ethanol extract M. tanarius leaf in male rats induced by carbon tetrachloride. This study aimed to obtain information whether the administration of ethanol extract of M. tanarius leaves term of 6 hours to give hepatoprotective effects, and how much effective dose required of ethanol extract of M. tanarius leaves for hepatoprotective effect.
This research is a pure experimental design with randomized complete unidirectional pattern. The method used in this research is a method of measuring the activity of serum alanine aminotransferase (ALT) and serum aspartate aminotransferase (AST). A total of 30 male Wistar rats were divided randomly into 6 groups : hepatotoxins control group (carbon tetrachloride dose of 2 mL/Kg BB), negative control group given olive oil dose of 2 mL/Kg BB, control group of ethanol extract of M. tanarius, and 3 treatment groups were given a dose of ethanol extract of M. tanarius 3840 ; 1280 ; and 426 mg/Kg BB then induce carbon tetrachloride to the term of 6 hours after administration of ethanol extract of M. tanarius leaves, respectively. At 24 hours after administration of carbon tetrachloride, blood samples were taken through the eye orbital sinus. Blood serum taken specified ALT activity and AST it.
The result showed that the ethanol extract of M. tanarius leaves at term of 6 hours has hepatoprotective effect in male rats induced by carbon tetrachloride at a dose of 3840 ; 426; and 1280 mg/Kg BB with give hepatoprotective effect for 32,2 ; 54,4 ; and 67,9 %, respectively.
1 BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Hati berperan utama dalam metabolisme dari lemak, karbohidrat, dan protein serta dalam detoksifikasi. Aktivitas hati tersebut didukung dengan memiliki kapasitas cadangan yang besar pula serta hanya memerlukan 10%-20% fungsi jaringan untuk mempertahankan kerjanya (Baradero, Daydrit, dan Siswadi, 2008). Kerusakan hati dapat disebabkan oleh berbagai macam substansi kimia (hepatotoksin) dan ditandai dalam dua cara yaitu akumulasi lemak atau steatosis dan kematian sel-sel hati atau nekrosis. Akumulasi lemak dalam hati (steatosis) merupakan tanda-tanda umum toksisitas hati dan mungkin diakibatkan oleh zat kimia yang toksik, termasuk alkohol. Nekrosis hati (kematian sel-sel hati) terjadi akibat paparan terhadap sejumlah zat kimia, antara lain alfatoksin, karbon tetraklorida, klorofom, dan asam tannat. Pada kasus sirosis, suatu kondisi hati yang cukup dikenal, sejumlah besar sel hati hancur akibat penyalahgunaan alkohol secara kronis, hepatitis viral, atau akibat agen kimia yang dapat menyerang sel-sel hati (Anonim, 2012).
Salah satu senyawa yang dapat digunakan sebagai senyawa model yang dapat menimbukan kerusakan hati adalah CCl4. Karbon tetraklorida (CCl4) adalah
bahan kimia yang bersifat toksik. CCl4 sebagai pelarut lipid memudahkan
2
kecil sekalipun dapat menimbulkan efek pada berbagai organ tubuh termasuk susunan saraf pusat, hati, ginjal dan peredaran darah. Efef toksik CCl4 yang paling
terlihat adalah pada hati (toksisitas CCl4 melebihi daripada kloroform) walaupun
keduanya sama-sama merusak organ-organ lain. (Gene, 1999).
Tanaman macaranga adalah salah satu tanaman yang tersebar di daerah Asia Tenggara, Afrika, Madagaskar, Australia dan daerah sekitar Pasifik. Di daerah Malaysia akar tanaman ini dimanfaatkan sebagai dekok yang khasiatnya sebagai antitusif dan antipiretik (Lim, Lim, dan Yule, 2009), sehingga perlu dilakukan penelitian untuk mencari alternatif pengobatan yang baru.
Studi yang dilakukan Phommart, Sutthivaiyakit, Chimnoi, Ruchirawat, dan Sutthivaiyakit (2005) melaporkan adanya konstituen senyawa flavonoid dari ekstrak n-heksana dan kloroform daun M. tanarius yaitu tanariflavanone D, nymphaeol A, dan nymphaeol C yang mempunyai aktivitas antioksidan terhadap DPPH dan nymphaeol B sebagai agen antiinflamasi dalam uji siklooksigenase-2.
3
transferase dalam hati yang berfungsi sebagai enzim penetralisir setiap metabolit reaktif, sehingga dapat dieliminasi dengan mudah oleh tubuh.
Menurut Moyler (1991), beberapa sifat pelarut dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan dalam proses ekstraksi yang diinginkan yang didasarkan pada polaritas. Polaritas metanol (0,73) dan etanol (0,68) yang memiliki selisih 0.05 memungkinkan adanya kesamaan kandungan antara ekstrak metanol-air daun M. tanarius L. dengan ekstrak etanol-air daun M. tanarius L., yaitu macarangiosida A-C dan malofenol B.
4
masih memungkinkan di Indonesia, sangat bagus untuk dikembangkan dan dimanfaatkan.
1. Rumusan masalah
Berdasarkan uraian-uraian di atas, maka dapat dirumuskan permasalahan sebagai berikut :
Berapakah dosis paling efektif hepatoprotektif pemberian ekstrak etanolik daun Macaranga tanarius L. Pada pemberian jangka waktu 6 jam pada tikus jantan yang terinduksi karbontetraklorida ?
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan penulis, studi yang dilakukan Phommart, dkk (2005) melaporkan adanya konstituen senyawa flavonoid, yaitu tanariflavanone D, nymphaeol A, dan nymphaeol C yang mempunyai aktivitas
antioksidan terhadap DPPH dan nymphaeol B sebagai agen antiinflamasi dalam uji siklooksigenase-2 dari ekstrak n-heksana dan kloroform daun M. tanarius. Matsunami, dkk (2006; 2009) juga melakukan penelitian terhadap
kandungan daun M. tanarius yang diisolasi dari ekstrak metanolik berupa kandungan glikosida, yaitu macarangioside A-C dan mallophenol B yang mempunyai aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH.
5
jangka pendek oleh Nugraha (2011) Pada penelitian tersebut dilaporkan bahwa kandungan tanaman Macaranga tanarius L. dapat berfungsi sebagai hepatoprotektif dengan dosis efektif 5g/Kg BB dengan hasil praperlakuan 1 jam infusa daun M. tanarius 5 g/kg BB yang merupakan waktu paling efektif untuk menghasilkan efek hepatoprotektif pada tikus jantan teriduksi parasetamol 2,5 g/kg BB. Selain itu, pernah juga dilakukan penelitian yang menggunakan ekstrak methanol : air daun Macaranga tanarius L. oleh Adrianto (2011). Pada penelitian tersebut dilaporkan bahwa kandungan tanaman Macaranga tanarius L. dapat berfungsi sebagai efek hepatoprotektif dengan dosis efektif 3840 mg/Kg BB.
6
pendek yaitu pada waktu ½, 1, 2, 4, dan 6 jam dengan jangka waktu 6 jam sebagai waktu efektif yang memberikan efek hepatoprotektif paling baik.
Dengan selisih kepolaran yang kecil (0,05) antara metanol dan etanol dimungkinkan adanya senyawa yang sama yang dapat memberikan efek hepatoprotektif pada penelitian ini, yaitu macarangiosida A-C dan malofenol B.
3. Manfaat penelitian 1. Manfaat teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan khususnya ilmu kefarmasian mengenai ekstrak etanol daun M. tanarius yang memiliki efek hepatoprotektif jangka pendek dan dosis efektif.
2. Manfaat praktis
7
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Secara umum penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya efek hepatoprotektif ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. jangka waktu jam ke-6 pada tikus jantan yang terinduksi karbontetraklorida.
2. Tujuan khusus
8 BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Anatomi dan Fisiologi Hati
Hepar adalah kelenjar terbesar yang memiliki berat 1500 g atau 2,5% dari berat tubuh. Permukaan superior dari hepar adalah cembung dan terletak di bawah kubah kanan diafragma. Bagian interior hepar cekung dan dibawahnya terdapat ginjal kanan, lambung, pankreas, dan usus (Baradero dkk., 2008).
Terdapat dua lobus utama yang menyusun hati yaitu lobus kanan dan lobus kiri. Ligament falsiform membagi lobus kanan menjadi segmen anterior dan posterior, sedangkan lobus kiri dibagi menjadi segmen medial dan lateral. Ligamentum farsiforme melintasi diafragma sampai ke. dinding depan abdomen. Permukaan hepar diliputi oleh peritoneum viseralis (Baradero dkk., 2008).
9
Gambar 1. Struktur mikroskopik hati (Baradero dkk., 2008).
Selain cabang-cabang vena porta dan arteria hepatika yang melingkari bagian perifer lobulus hati, juga terdapat saluran empedu seperti ditunjukkan pada gambar 1. Saluran empedu interlobular membentuk kapiler empedu yang sangat kecil dinamakan kanalikuli, yang berjalan ditengah-tengah lempengan sel hati (Price and Wilson, 1984).
Hati memiliki kapasitas fungsi cadangan. Pada hati normal 80% dari bagian hati tersebut bekerja tanpa batas. Hati memiliki fungsi dalam sintesis, ekskretori dan metabolisme. Fungsi pensintesis disini sebagai sumber plasma
albumin, plasma globulin, termasuk α1-antitripsin (α- antiprotease) dan banyak
10
Hati berperan utama dalam metabolisme dari lemak, karbohidrat, dan protein serta dalam detoksifikasi. Pada metabolisme lemak, asam lemak bebas dari jaringan adiposa dan rangkaian medium atau pendek asam lemak yang diabsorbsi oleh usus dibawa menuju hati. Trigliserid, kolesterol, dan fosfolipid disintesis dalam hati dari asam lemak dan kompleksnya dengan protein aseptor lipid spesifik untuk membentuk lipoprotein dengan densitas sangat rendah yang masuk ke dalam plasma. Hati juga memetabolisme lipoprotein dengan densitas intermediet dan rendah (Chandrasoma and Taylor, 1995).
Pada metabolisme karbohidrat, hati merupakan sumber utama glukosa plasma. Setelah makan, glukosa berasal dari absorbsi oleh usus. Pada saat berpuasa, glukosa dihasilkan dari glikogenolisis dan glukonogenesis dalam hati. Hati merupakan tempat penyimpanan utama glikogen tubuh. Ketika terjadi kekurangan glukosa, asam lemak dimetabolisme hati menjadi bentuk keton yang berperan sebagai sumber energi alternatif dari banyak jaringan (Chandrasoma and Taylor, 1995).
Selain itu, hati merupakan organ utama dalam katabolisme dan sintesis urea. Urea akan disekresikan oleh hati ke dalam plasma, yang kemudian akan diekskresi dalam ginjal. Pada detoksifikasi, hati berperan vital dalam detoksifikasi komponen racun nitrogen yang dihasilkan dari usus selain itu banyak obat serta bahan kimia lainnya (Chandrasoma and Taylor, 1995).
11
B. Kerusakan Hati
Kerusakan sel hati akut umumnya diakibatkan nekrosis sel hati yang luas dan akut yang dapat disebabkan oleh virus hepatitis, obat dan bahan kimia yang toksik. Kerusakan hati akut dapat digolongkan menjadi jaundice (kuning), hipoglikemia, kecenderungan untuk perdarahan yang disebabkan kegagalan sintesis faktor pembeku darah dalam hati, gangguan elektrolit dan asam basa, hepatik ensefalopati, sindrom hepatorenal, dan kenaikkan serum enzim yang berhubungan dengan kasus nekrosis sel hati. Kerusakan sel hati akut memiliki angka kematian yang tinggi (Chandrasoma and Taylor, 1995).
Kerusakan sel hati kronis biasanya diakibatkan oleh sirosis, yang berkaitan dengan nekrosis sel hati, fibrosis, dan regenerasi nodular. Efek dari kerusakan hati kronis, yaitu penurunan sintesis albumin, menyebabkan rendahnya serum albumin, edema, dan ascites, penurunan protrombin dan faktor VII, IX, dan X yang menimbulkan perdarahan. Hipertensi portal, hepatik ensefalopati, sindrom hepatorenal, dan perubahan endokrin yang disebabkan kesalahan metabolisme hormon, dan hepatikus fetor (Chandrasoma and Taylor, 1995).
C. Hepatotoksin
12
Obat atau senyawa kimia yang dapat menyebabkan kerusakan hati dapat dibedakan menjadi dua, yaitu :
1. Hepatotoksin teramalkan (intrinsik)
Merupakan obat atau senyawa kimia yang pada dasarnya mempunyai sifat toksik terhadap sel hati. Contoh hepatotoksin teramalkan yang dapat menimbulkan kerusakan nekrosis hepatoseluler adalah racun jamur (Amanita phalloides), aflatoksin, karbontetraklorida, kloroform, parasetamol, dan lain
sebagainya (Chandrasoma dan Taylor, 1995). Prosesnya dikenal sebagai toksisitas-intrinsik, dan aksinya dapat terjadi secara langsung atau tidak langsung. Secara langsung, maksudnya obat induk atau bentuk metabolitnya langsung berikatan dengan komponen membran sel dan merusak sel hati beserta seluruh organelnya, seperti ditunjukkan oleh CCl4 dan parasetamol. Secara tidak
langsung, maksudnya obat induk atau bentuk metabolitnya dalam menimbulkan luka hepatik dengan cara mengganggu jalur metabolik-khas (misalnya tetrasiklin), atau mengganggu jalur ekskresi hepatik (misalnya rifampisin) (Donatus,1992). Kerusakan yang ditimbulkan bergantung dosis dan dapat dicobakan pada hewan uji dan menyebabkan lesi yang mirip pada manusia (Zimmerman,1999).
2. Hepatotoksin tak teramalkan (idiosinkratik)
13
(Zimmerman, 1999 ; Donatus, 1992). Kerusakan hati yang ditimbulkan oleh hepatotoksin golongan ini tidak dapat diperkirakan dan tidak tergantung pada dosis (Donatus, 1992).
Hepatotoksin terramalkan dapat dibagi menjadi dua golongan, yakni : (1) hepatotoksin kerja langsung ; (2) hepatotoksin kerja tak langsung. Hepatotoksin kerja langsung meliputi zat beracun (zat induk atau metabolitnya) yang mampu menimbulkan luka secara langsung pada membran plasma, retikuloendoplasma, dan organel lain hepatosit. Prototipenya adalah karbon tetraklorida. Sedangkan hepatotoksin kerja tak langsung meliputi zat beracun yang menimbulkan luka dengan cara mengganggu jalur atau proses metabolic yang khas, yang mengakibatkan kerusakan atau kekacauan struktur sel hati. Prototipenya etionin dan galaktosamina (Zimmerman, 1999).
D. Karbon Tetraklorida (CCl4)
14
Karbon Tetraklorida (CCl4) (gambar 2) merupakan cairan jernih mudah
menguap, tidak berwarna, bau khas. Sangat sukar larut dalam air, dapat bercampur dengan etanol mutlak dan dengan eter (Depkes RI, 1979).
Hepatotoksisitas dari karbon tetraklorida telah banyak dipelajari daripada hepatotoksin lain. Karbon tetraklorida merupakan molekul sederhana, yang jika diberikan kepada berbagai spesies, menyebabkan sentrilobular nekrosis hepatik dan perlemakan di hati. Pemberian atau pemejanan secara kronis menyebabkan sirosis hati, tumor hati dan juga kerusakan ginjal. Hati yang menjadi target utama dari ketoksikan karbon tetraklorida karena ketoksikan ini tergantung pada metabolisme aktivasi oleh CYP450. Oleh karena itu, hati menjadi daerah centrilobulator, dimana terjadi kerusakan terbesar. Dosis rendah karbon tetraklorida menyebabkan perlemakan hati dan destruksi sitokrom P-450 (Timbrel, 2008).
Destruksi sitokrom P-450 terjadi terutama di centrilobular dan daerah tengah hati. Penghancuran CYP450 tampaknya dipengaruhi oleh jumlah oksigen yang tersedia (Timbrel, 2008).
Gambar 3 menjelaskan tentang jalur metabolik dari karbon tetraklorida. Karbon tetraklorida akan mengalami reduksi dehalogenasi di hati dengan adanya katalis enzim sitokrom P-450 sehingga membentuk radikal bebas triklorometil (CCl3-). Radikal bebas ini jika bereaksi dengan oksigen akan membentuk radikal
triklorometilperoksi (OOCCl3-) yang lebih reaktif. Saat konsumsi CCl4 telah
15
transport Ca2+ sehingga menyebabkan ketidakseimbangan antara pemasukan pengeluaran Ca2+ (Gregus dan Klaaseen, 2001).
Gambar 3. Jalur metabolik karbon tetraklorida (Moon, Lee, dan Song, 2010) Mekanisme nekrosis dapat terjadi karena adanya gangguan pada mitikondria dalam sel, dimana mitokondria merupakan penghasil ATP. Gangguan ini terjadi karena meningkatnya Ca2+ di sitoplasma sehingga mengakibatkan pengambilan Ca2+ ke dalam mitokondria meningkat dan sintesis ATP terganggu. Jika gangguan terjadi di seluruh mitokondria, maka dapat mengakibatkan penurunan ATP yang sangat tinggi dan menyebabkan pecahnya sel atau nekrosis (Gregus dan Klaaseen, 2001).
16
6,5 kali lipat dari nilai normal (106,6-693,1 U/L), dan nilai AST naik sekitar 6,1 kali lipat dari nilai normalnya (113,8-693,9 U/L). Hasil ini sesuai dengan level peningkatan relatif nilai enzim serum terhadap induksi beberapa senyawa racun yang disajikan pada tabel dibawah ini yang dapat menjadi patokan dari kenaikan aktivitas serum ALT-AST akibat pemejanan karbontetraklorida.
Tabel 1. Tingkat relatif peningkatan enzim serum pada beberapa kasus kerusakan hati oleh racun (Zimmerman, 1999).
E. Metode Uji Hepatotoksisitas
Studi tentang senyawa-senyawa yang dapat menyebabkan efek toksik pada hati dapat dilakukan secara invivo maupun invitro. Model invivo dapat menunjukkan bahwa senyawa eksogen secara nyata menimbulkan kerugian pada hati berdasarkan pada tanda-tanda fisiologi yang terjadi. Model invitro menjelaskan mekanisme kerusakan yang terjadi.
17
1. Uji enzim serum
Pengukuran enzim serum (atau plasma) dilakukan untuk mendeteksi ketoksikan pada hati yang kemudian didukung dengan analisis histologi. Apabila terjadi kerusakan hati, enzim akan dilepaskan ke dalam darah dari sitosol dan organela subsel, seperti mitokondria, lisosom, dan nukleus (Zimmerman, 1999).
Transaminase terdiri atas glutamate piruvat transaminase (GPT) dan glutamat oksaloasetat transaminase (GOT). Sebagian besar GOT terdapat di hati dan otot rangka, serta tersebar ke seluruh jaringan. Meskipun enzim GPT terdapat pula pada beberapa bagian jaringan, konsentrasi terbesarnya pada semua spesies adalah di hati sehingga GPT merupakan petunjuk yang lebih spesifik terhadap nekrosis hati daripada GOT. Pada keadaan nekrosis, sel hati akan dipecah sehingga enzim GPT yang terdapat di dalam sel hati keluar dan masuk ke dalam aliran darah. Peningkatannya bisa mencapai 10-100 kali lipat dari harga normal (Zimmerman,1999).
2. Pemeriksaan asam amino dan protein
Pemeriksaan asam amino dan protein penting dilakukan karena metabolisme asam amino di hati membentuk ammonia dan ureum terjadi secara lebih lambat dan meningkatkan kadar globulin (Zimmerman, 1999).
3. Perubahan penyusun kimia dalam hati
18
4. Uji ekskretori hati
Kemampuan hati untuk mensintesis urea, kolesterol, plasma protein, dan mempertahankan kadar glukosa darah serta asam amino merupakan sebagian contoh fungsi hati. Adanya ketidaknormalan dari beberapa fungsi hati tersebut dapat menunjukkan terjadinya kerusakan hati. Perubahan kecepatan metabolisme obat yang terjadi di hati dapat dijadikan parameter hepatotoksisitas (Zimmerman, 1999).
F. Macaranga tanarius L. Tanaman Macaranga tanarius L.
1. Taksonomi
Kingdom : Plantae Subkingdom : Tracheobionta Divisio : Spermatophyta Sub- Divisi : Magnoliophyta Classis : Magnoliopsida Sub-classis : Rosidae
Ordo : Euphorbiales Familia : Euphorbiaceae Genus : Macaranga
Spesies : Macaranga tanarius L. (Plantamor, 2008). 2. Nama daerah
19
3. Morfologi
Merupakan pohon kecil sampai sedang, berdaun hijau memiliki ketinggian 4-5 meter dengan dahan agak besar. Daun berseling, agak membundar, dengan stipula besar yang luruh. Perbungaan bermalai di ketiak, bunga ditutupi oleh daun gagang. Buah kapsul berkokus 2, ada kelenjar kekuningan di luarnya. Biji membulat, menggelembur. Jenis ini juga mengandung tanin yang cukup untuk menyamak jala dan kulit (Wardiyono, 2012).
4. Kandungan kimia
20
2005). Gambar 3 menunjukkan struktur senyawa tanariflavanon C dan D, nymphaeol A, B dan C, malofenol serta macarangiosida A-D.
Tanariflavanon C Tanariflavanon D Nymphaeol A
Nymphaeol B Nymphaeol C Malofenol
Macarangiosida A Macarangiosida B
Macarangiosida C Macarangiosida D
Gambar 4. Struktur kandungan senyawa daun M. tanarius (Phommart, dkk., 2005) dan (Matsunami, 2006)
5. Khasiat dan kegunaan
21
dan untuk penutup luka dapat diambil dari daun segarnya guna mencegah terjadi inflamasi. Di Cina tanaman Macaranga ini menjadi tumbuhan yang komersil, karena dapat dijadikan sebagai produk minuman kesehatan (Lim dkk., 2009). 6. Ekologi penyebaran dan budidaya
M. tanarius tersebar luas, dari Kepulauan Andaman dan Nicobar, Indo-Cina, Cina Selatan, Taiwan dan Kepulauan Ryukyu, seluruh Malesia, sampai ke Australia Utara dan Timur dan Melanesia. Jenis ini umum dijumpai di daratan Asia Tenggara (Thailand Selatan, Semenanjung Malaya), dan pada banyak pulau di Malesia (yaitu Sumatera, Borneo, Kepulauan Sunda Kecil, Sulawesi, Nugini, seluruh Kepulauan Filipina). Selain itu M. tanarius ditemukan di daerah bersemak di sepanjang Asia Selatan dan Timur, khususnya bagian Selatan Cina, Korea, dan Okinawa, Jepang (Anonim, 2010).
G. Metode Penyarian
22
Ekstrak merupakan sediaan pekat yang diperoleh dengan cara mengekstraksi zat aktif yang berasal dari simplisia nabati atau hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Dirjen POM, 1995).
H. Landasan Teori
Kerusakan hati dapat menghasilkan nekrosis maupun sirosis pada sel-sel hati. Pada kerusakan hati ini salah satunya dapat diketahui dari adanya peningkatan aktivitas enzim tertentu yang dilepaskan ke dalam darah. Enzim tersebut seperti alanin aminotransferase (ALT) dan aspartat aminotransaminase (AST) yang menunjukkan adanya nekrosis pada sel hati. Peningkatan aktivitas serum enzim tersebut dapat mencapai 10-100 kali dari normal (Zimmerman, 1999).
Matsunami, dkk (2006) melaporkan adanya senyawa glikosida, yaitu macarangioside A-C dan mallophenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol M. tanarius dan menunjukkan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. Adanya senyawa glikosida yang memiliki aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH, maka dilakukan pendekatan dalam penelitian ini dengan modifikasi pelarut.
23
(nymphaeol A) dari ekstrak etanol buah M. alnifolia yang berfungsi sebagai agen
sitotoksik.
Hasil penelitian Adrianto (2011) mengemukakan bahwa kandungan kimia ekstrak metanol-air daun M. tanarius yang diduga larut dan dapat memberikan efek hepatoprotektif adalah golongan glikosida dari senyawa didalamnya yaitu malofenol B dan macarangiosida A. Kemungkinan mekanisme kerja antioksidan ini dalam memberikan efek hepatoprotektif adalah dengan menghambat oksidasi parasetamol menjadi metabolit reaktifnya yaitu NAPQI oleh sitokrom P-450. Selain sebagai antioksidan, kemungkinan lain senyawa malofenol B dan macarangiosida A mampu meningkatkan jumlah enzim glutation Stransferase dalam hati yang berfungsi sebagai enzim penetralisir setiap metabolit reaktif, sehingga dapat dieliminasi dengan mudah oleh tubuh.
Adapun penelitian tentang kemampuan ekstrak etanol daun M. tanarius L. terhadap tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida telah dilakukan oleh Rahmamurti (2012) menyebutkan bahwa pada ekstrak etanol-air daun M. tanarius memiliki efek hepatoprotektif jangka panjang dengan dosis efektif 1280 mg/Kg BB. Kemudian studi ini dilanjutkan oleh Silli (2012) dengan menggunakan dosis efektif tersebut secara jangka pendek yaitu pada waktu ½, 1, 2, 4, dan 6 jam dengan jangka waktu 6 jam sebagai waktu efektif yang memberikan efek hepatoprotektif paling baik.
24
Adanya kemiripan antara kandungan senyawa flavonoid dalam M. tanarius yang mempunyai aktivitas antioksidan dan kandungan flavonoid dalam M. alnifolia yang memiliki kemampuan sebagai agen sitotoksik, yaitu nymphaeol A. kemampuan penangkapan radikal bebas oleh senyawa ini dimungkinkan
dilakukan dalam jangka waktu 6 jam.
I. Hipotesis
25 BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dimana dilakukan perlakuan terhadap sejumlah variabel penelitian. Rancangan penelitian ini termasuk rancangan acak lengkap pola searah.
B. Variabel Penelitian 1. Variabel penelitian
a. Variabel bebas
Variasi dosis pemberian ekstrak etanol daun M. tanarius jangka waktu tertentu pada tikus jantan terinduksi karbontetraklorida.
b. Variabel tergantung
Efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak etanol daun M. tanarius terhadap sel hati tikus yang terinduksi karbontetraklorida, dengan tolak ukur kuantitatif berdasarkan penurunan aktivitas serum ALT dan AST. c. Variabel pengacau terkendali
26
d. Variabel pengacau tidak terkendali
Variabel pengacau yang tidak dapat dikendalikan adalah kondisi patologis tikus.
2. Definisi operasional
a. Ekstrak daun M. tanarius adalah ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstraksi serbuk kering daun M. tanarius seberat 10,0 gram yang dilarutkan dalam 100 ml pelarut etanol 50% secara maserasi selama 72 jam, dengan putaran 140 rpm. Kemudian disaring dengan kertas saring dan diuapkan di oven selama 72 jam pada suhu 500C, hingga bobot pengeringan tetap dengan susut pengeringan sebesar 0%.
b. Efek hepatoprotektif ekstrak etanol adalah kemampuan ekstrak etanol daun M. tanarius. Dosis tertentu melindungi hati dari hepatotoksin.
c. Jangka waktu 6 jam, yaitu penelitian ini dilakukan dalam selang waktu 6 jam, hasil ini diperoleh sebagai waktu efektif dari penelitian efek hepatoprotektif ekstrak etanol jangka pendek pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.
C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama
27
b. Subyek uji yang digunakan yaitu tikus jantan putih galur Wistar usia 2-3 bulan, berat badan 150-250 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi USD Yogyakarta.
2. Bahan kimia
a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbontetraklorida, yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi USD Yogyakarta.
b. Kontrol negatif berupa olive oil yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD Yogyakarta.
c. Pelarut untuk maserasi berupa etanol-air yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD Yogyakarta.
d. Pelarut untuk hepatotoksin karbontetraklorida berupa olive oil yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD Yogyakarta.
e. Aquabidest yang dipergunakan dalam uji serum darah yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi USD.
28
Kit-ALAT (GPT) FS* :
R1 TRIS pH 7.15 140 mmol/L
L-Alanine 700 mmol/L
LDH (Lactate dehydrogenase) ≥ 2300 U/L R2 2-Oxoglutarate 85 mmol/L
NADH 1 mmol/L
Pyridoxal-5-phosphate FS :
Good’s buffer pH 9.6 100 mmol/L
Pyridoxal-5-phosphate 13 mmol/L Kit-ASAT (GOT) FS* :
R1 TRIS pH 7.65 110 mmol/L
L-Aspartate 320 mmol/L
MDH (Malate dehydrogenase) ≥ 800 U/L LDH (Lactate dehydrogenase) ≥ 1200 U/L
R2 2-Oxoglutarate 65 mmol/L
NADH 1 mmol/L
Pyridoxal-5-phosphate FS :
Good’s buffer pH 9.6 100 mmol/L
29
D. Alat Penelitian
1. Alat pembuatan ekstrak etanol-air daun M. tanarius
Seperangkat alat gelas, yaitu Bekker glass, gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk, mesin penyerbuk, shaker, oven, dan timbangan analitik.
2. Alat uji hepatoprotektif
Seperangkat alat gelas, yaitu Bekker glass, labu ukur, batang pengaduk, gelas ukur, timbangan analitik (Mettler PM 4600 Delta Range dan Mettler AE 200) , spuit injeksi per oral, mikropipet, pipa kapiler, evendrof, vitalab mikro version 1,0 user manual (E.merck, Darmsadt, Germany), stopwatch, vortex (Genie, Wilten, Holland), dan sentrifuge.
E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi daun M. tanarius
Determinasi daun M. tanarius dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri tanaman M. tanarius pada buku acuan determinasi (Koorders dan Valeton, 1918) dan disesuaikan dengan kunci determinasinya.
2. Pengumpulan bahan uji
30
3. Pembuatan serbuk daun M. tanarius
Daun M. tanarius dicuci dengan air mengalir hingga bersih dan diangin-anginkan hingga kering. Pengoptimalan pengeringan dilakukan dengan oven pada suhu 500C selama 72 jam. Daun yang telah kering diserbuk dengan alat penyerbuk. Setelah didapatkan serbuk kasar daun, kemudian dilakukan pengayakan dengan ayakan no. mesh 40 untuk mendapatkan serbuk daun M. tanarius yang lebih halus.
4. Pembuatan ekstrak etanol daun M. tanarius
Sebelum pembuatan ekstrak, daun M. tanarius dibuat serbuk terlebih dahulu supaya kandungan fitokimia yang terkandung dalam daun M. tanarius lebih mudah terekstrak karena luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut makin besar. Sebanyak 10 g serbuk kering daun M. tanarius diekstraksi secara maserasi dengan melarutkan serbuk dalam 100
31
etanol-air daun M. tanarius yang kental dengan bobot pengeringan ekstrak yang tetap yaitu sebesar 1,92 g (Andini, 2010).
5. Penetapan konsentrasi pekat ekstrak
Menghitung rata-rata randemen ke-6 replikasi ekstrak metanol-air daun M. tanarius kental yang telah dibuat.
Randemen ekstrak = Berat cawan ekstrak kental – berat cawan kosong
���� − ����� = � �.1+� �.2+� �.3+� �.4+� �.5+� �.6
6
Konsentrasi ekstrak didapat dari hasil rata-rata randemen ekstrak. Konsentrasi yang dapat digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat dibuat dimana pada konsentrasi tersebut ekstrak dapat dimasukkan serta dikeluarkan dari spuit per oral. Cara pembuatannya adalah dengan melarutkan ekstrak percawannya, yaitu 1,92 g dalam labu ukur terkecil dengan pelarut yang sesuai, yaitu CMC Na 1%. Labu ukur terkecil yang tersedia adalah labu ukur 5 ml sehingga konsentrasi ekstrak dapat ditetapkan, yaitu sebesar 0,384 g/ml atau 3840 mg/ml atau 38,4% b/v (Andini, 2010).
6. Penetapan dosis ekstrak metanol-air daun M. Tanarius
Dasar penetapan peringkat dosis adalah dari bobot tertinggi tikus dan pemberian cairan secara peroral separuhnya yaitu 2,5 ml. Penetapan dosis tertinggi ekstrak metanol-air daun M. tanarius adalah:
D x BB = C x V
32
Dua dosis lainnya diperoleh dengan menurunkan 3 dan 6 kalinya dari dosis tertinggi sehingga didapatkan dosis 1280 mg/Kg BB dan 426 mg/Kg BB. Dosis yang akan digunakan dalam penelitian adalah 426 ; 1280 ; dan 3840 mg/kg BB.
7. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1%
Suspending agent CMC-Na 1% dibuat dengan cara mendispersikan lebih kurang 1,0 g CMC-Na yang telah ditimbang seksama ke dalam air mendidih sampai volume 100,0 ml dan digunakan untuk membuat suspensi parasetamol.
8. Pembuatan larutan CCl4
Larutan CCl4 dalam olive oil dibuat dengan cara melarutkan 1
bagian CCl4 ke dalam 1 bagian olive oil sehingga didapatkan dosis 2
ml/Kg BB tikus. 9. Uji pendahuluan
a. Penetapan dosis hepatotoksin karbontetraklorida
33
b. Penetapan waktu pencuplikan darah
Menurut Janakat dan Al-Merie (2002), kenaikan serum ALT paling signifikan akan terjadi pada 24 jam setelah ingesti karbontetraklorida. Oleh karena itu akan dilakukan penetapan waktu pencuplikan darah tikus jantan dengan cara membagi tikus jantan dikelompokan dengan jumlah 5 ekor. Diambil darahnya pada jam ke 6 dengan berbagai variasi dosis. Serum darah diambil untuk diukur aktivitas serum ALT dan AST.
10. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji
Hewan percobaan yang dibutuhkan sebanyak 30 ekor tikus jantan dibagi secara acak dalam 6 kelompok sama banyak. Kelompok I merupakan kontrol hepatotoksin karbontetraklorida dengan dosis 2 ml/Kg BB secara intra peritonial. Kelompok II merupakan kontrol negatif, yaitu pemberian olive oil secara intra peritonial. Kelompok III merupakan kontrol ekstrak etanolik daun M. tanarius. Kelompok IV-VI, diberikan ekstrak etanol daun M. tanarius dengan dosis 3840 ; 1280 ; dan 426 mg/Kg BB kemudian pada 6 jam setelah perlakuan diberikan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida 2 ml/Kg BB. Pada jam ke-24 setelah ingesti karbontetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas serum ALT dan AST.
11. Pembuatan serum
34
kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit dan diambil supernatannya (serum).
12. Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST
Alat yang digunakan pada pengukuran aktivitas serum ALT dan AST adalah vitalab-mikro. Pada analisis fotometri ini dengan serum ALT dilakukan dengan reagen, yaitu reagen I dan reagen II. Reagen I berisi TRIS (pH 7,65), L-Alanin, dan LDH (laktat dehidrogenase). Reagen II berisi 2-oksoglutarat dan NADH. Analisis dilakukan dengan reaksi sebagai berikut: reagen I sebanyak 800 μL, dicampur dengan 200 μL reagen II, setelah itu dicampurkan serum sebanyak 100 μL dan dibaca resapan setelah tiga menit.
Pada analisis fotometri dengan serum AST dilakukan reaksi sebagai berikut, yaitu reagen I dan reagen II. Reagen I berisi TRIS (pH 7,65), L-Aspartat, LDH (laktat dehidrogenase), dan MDH (malat dehidrogenase). Reagen II berisi 2-oksoglutarat dan NADH. Analisis dilakukan dengan reaksi sebagai berikut: reagen I sebanyak 800 μL
dicampur dengan 200 μL reagen II. Setelah itu dicampurkan serum
sebanyak 100 μL dan dibaca resapan setelah tiga menit.
35
F. Tata Cara Analisis Hasil
Data aktivitas serum ALT dan AST dianalisis dengan metode Kolmogoro Smirnov untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Jika didapatkan distribusi data yang normal maka dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk
mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Akan tetapi bila didapatkan distribusi tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas serum ALT dan AST antar kelompok. Setelah itu, dilanjutkan uji dengan Mann Whitney untuk melihat perbedaan tiap kelompok.
Selain melakukan serangkaian uji statistik, dilakukan juga perhitungan efek hepatoprotektif dari ekstrak etanol daun M. tanarius.
Rumus perhitungan efek hepatoprotektif :
36 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dan membuktikan khasiat dari ekstrak etanol-air daun M.tanarius sebagai agen hepatoprotektif pada tikus jantan terinduksi karbontetraklorida pada jangka waktu 6 jam. Untuk membuktikan hal tersebut, dilakukan serangkaian pengujian. Aktivitas ALT-AST serum menjadi tolak ukur kuantitatif dalam pengujian tersebut.
A. Hasil Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman dilakukan bertujuan menetapkan kebenaran sampel yang digunakan berkaitan dengan ciri-ciri morfologis tanaman berdasarkan kepustakaan dan menghindari kesalahan dalam proses pengumpulan bahan. Bagian tanaman yang digunakan dalam determinasi adalah daun, batang, biji, bunga, dan buah. Dari hasil determinasi dinyatakn bahwa tanaman yang digunakan adalah benar M. tanarius.
37
Sebelum dilakukan proses maserasi, simplisia diserbukkan terlebih dahulu lalu kemudian diayak dengan pengayak No. Mesh 40. Serbuk tersebut kemudian dihitung kadar airnya menggunakan metode gravimetri dan dilakukan sebanyak 3 replikasi hingga didapatkan rerata rendemen sebesar 7,59%. Pada standarisasi ekstrak etanol-air daun M. tanarius yang menjadi parameter bobot pengeringan tetap dengan susut pengeringan 0%, tujuannya untuk menghitung sisa zat setelah dilakukan pengeringan pada temperature 500C. Ekstrak yang berada dalam cawan ditimbang 1 jam sekali selama 24 jam atau hingga berat menjadi tetap. Tujuannya adalah untuk menentukan batasan atau rentang seberapa senyawa yang hilang selama pengeringan, dimana akan mempengaruhi bobot ekstrak yang diperoleh karena akan mempengaruhi konsentrasi dan dosis ekstrak.
Hasil dari proses pengeringan didapatkan bahwa tidak ada perubahan bobot ekstrak sehingga bobot ekstrak tetap yaitu sebesar 1,92 g diperoleh pada jam ke-72. Untuk susut pengeringan ekstrak sebesar 0% pada jam ke-72 sehingga dapat diketahui bahwa pada ekstrak tidak ada lagi pelarut yang masih tersisa.
C. Orientasi Waktu Pencuplikan Darah Hewan Uji
38
Berikut merupakan hasil orientasi waktu pencuplikan darah hewan uji yang disajikan dalam tabel dan diagram batang :
Tabel 2. Aktivitas serum ALT dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada karbon tetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
Waktu pencuplikan
(jam)
Purata aktivitas serum ALT ±
SE (U/L)
Kebermaknaan terhadap
0 jam 24 jam 48 jam
0 jam 73,2 ± 12,9 - BB BTB
24 jam 246,4 ± 17,0 BB - BB
48 jam 102 ± 14,6 BTB BB -
Keterangan: BB = berbeda bermakna ; BTB = berbeda tidak bermakna (p<0,05) ; SE = Standar error
Gambar 5. Diagram batang aktivitas serum ALT tikus setelah induksi karbontetraklorida 2/kg ml BB pada pencuplikan darah
0 jam, 24 jam, dan 48jam
39
Tabel 3. Aktivitas serum AST dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
Waktu
Keterangan: BB = berbeda bermakna ; BTB = berbeda tidak bermakna (p<0,05) ; SE = Standar error
Gambar 6. Diagram batang aktivitas serum AST tikus setelah induksi karbontetraklorida 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah
0 jam, 24 jam, dan 48jam
Keterangan : 1 = pencuplikan darah 0 jam ; 2 = pencuplikan darah 24 jam ; 3 = pencuplikan darah 48 jam
40
jam didapatkan 1,4 kali lipat kenaikan nilai ALT dari nilai normal (dari 73,2 ke 102 U/L), namun sudah terjadi penurunan bila dibandingkan terhadap jam ke-24. Maka, peningkatan aktivitas serum ALT pada waktu 24 jam telah memenuhi syarat hepatotoksisitas yang telah ditentukan.
Pada tabel II dan gambar 5 juga dapat dilihat bahwa nilai aktivitas serum AST pada jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48 berturut-turut adalah 157,2 ± 18,8 ; 596,2 ± 25,3 ; dan 188,6 ± 3,3 U/L. Nilai aktivitas AST paling tinggi terjadi pada selang waktu 24 jam. Secara statistik, didapat bahwa kedua data pada nilai ALT dan AST menunjukkan perbedaan yang bermakna pada pencuplikan darah jam ke-24 dibandingkan dengan jam ke-0 dan jam ke-48 (p<0,05). Oleh sebab itu, waktu pencuplikan pada jam ke-24 dipilih setelah induksi karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB.
41
Berikut merupakan hasil penelitian yang disajikan dalam tabel dan diagram batang :
Tabel 4. Pengaruh perlakuan jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. Tanarius dlihat dari aktivitas serum ALT dan AST pada berbagai variasi
dosis terhadap hepatoksisitas karbon tetraklorida
Kelompok Purata nilai ALT ± SE (U/L)
I : Kelompok kontrol hepatotoksin karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB II : Kelompok kontrol negatif (olive oil) dosis 2 ml/Kg BB
III : Kelompok kontrol perlakuan EEDM 6 jam (dosis 3840 mg/Kg BB)
IV : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 3840 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
V : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 1280 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
VI : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 426 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
EEDM = ekstrak etanol daun M. tanarius ; SE = Standar Error
Gambar 7. Diagram batang aktivitas serum ALT tikus praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius pada berbagai variasi dosis
42
Gambar 8. Diagram batang aktivitas serum AST tikus praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius pada berbagai variasi dosis
Keterangan : 1 = Kelompok kontrol hepatotoksin ; 2 = Kelompok kontrol negatif ; 3 = Kelompok kontrol perlakuan dosis 3840 mg/Kg BB ; 4 = Kelompok praperlakuan dosis 3840 mg/Kg BB ; 5 = Kelompok praperlakuan dosis 1280 mg/Kg BB ; 6 = Kelompok praperlakuan dosis 426 mg/Kg
Tabel 5. Hasil statistik jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. Tanarius dlihat dari aktivitas serum ALT pada berbagai variasi dosis terhadap
hepatoksisitas karbontetraklorida
I : Kelompok kontrol hepatotoksin karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB II : Kelompok kontrol negatif (olive oil) dosis 2 ml/Kg BB
III : Kelompok kontrol perlakuan EEDM 6 jam (dosis 3840 mg/Kg BB)
IV : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 3840 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
V : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 1280 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
VI : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 426 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
43
Tabel 6. Hasil statistik jangka waktu 6 jam ekstrak etanol daun M. Tanarius dlihat dari aktivitas serum AST pada berbagai variasi dosis terhadap
hepatoksisitas karbontetraklorida
I : Kelompok kontrol hepatotoksin karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB II : Kelompok kontrol negatif (olive oil) dosis 2 ml/Kg BB
III : Kelompok kontrol perlakuan EEDM 6 jam (dosis 3840 mg/Kg BB) IV : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 3840 mg/Kg BB 6 jam +
karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
V : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 1280 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
VI : Kelompok praperlakuan EEDM dosis 426 mg/Kg BB 6 jam + karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB
EEDM = ekstrak etanol daun M. tanarius ; BB = berbeda bermakna (p <0,05) ; BTB = tidak berbeda bermakna (p>0,05)
1. Kontrol negatif (Olive Oil dosis 2 ml/Kg BB)
44
Berikut merupakan hasil orientasi waktu pencuplikan darah hewan uji yang disajikan dalam tabel:
Tabel 7. Aktivitas serum ALT dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada olive oil dosis 2 ml/Kg BB
Waktu bermakna (p<0,05) ; SE = Standar error
Tabel 8. Aktivitas serum AST dan perbandingan antar waktu pencuplikan darah hewan uji pada olive oil dosis 2 ml/Kg BB
Waktu bermakna (p<0,05) ; SE = Standar error
45
AST kontrol negatif pada jam ke-0, kedua data tersebut menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna (p>0,05). Pada kontrol hepatotoksin, kedua data tersebut menunjukkan hasil berbeda bermakna (p<0,05). Hal ini dapat disebabkan karena sebagian besar enzim aspartate tidak spesifik berada di dalam hati, melainkan berada dalam otot rangka, jantung, hati, serta tersebar ke seluruh jaringan sehingga belum dapat digunakan sebagai patokan kerusakan hati. Selain itu, kombinasi dari kedua enzim tersebut lebih sensitif dibandingkan dengan enzim dehidrogenase lainnya seperti laktat dehidrogenase, glutamate dehidrogenase, isositrat dehidrogenase, dan malat dehidrogenase dalam menunjukkan adanya kerusakan sel hati pada tikus jantan yang terinduksi hepatotoksin karbontetraklorida.
2. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/Kg BB)
Kontrol hepatotoksin bertujuan untuk mengetahui pengaruh induksi karbontetraklorida 2 ml/Kg BB terhadap sel hati tikus sekaligus sebagai patokan dalam menganalisa efek hepatoprotektif ekstrak etanol daun M. tanarius. Aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksin karbontetraklorida 2 ml/Kg BB (kelompok I) sebesar 246,4 ± 17,0 U/L sedangkan aktivitas serum AST kontrol hepatotoksin karbontetraklorida 2 ml/Kg BB (kelompok I) sebesar 596,2 ± 25,3 U/L.
46
lebih kurang 2,99 kalinya sedangkan presentase perbedaan sebesar 199,8 % dibandingkan dengan kontrol negatif.
Pada serum AST bila dibandingkan dengan aktivitas serum AST kontrol negatif olive oil sebesar 118,6 ± 5,1 U/L maka terlihat adanya kenaikan aktivitas AST-serum lebih kurang 5,03 kalinya sedangkan presentase perbedaan sebesar 402,7 % dibandingkan dengan kontrol negatif.
Hasil analisis statistik baik aktivitas serum ALT maupun aktivitas serum AST kontrol hepatotoksin karbontetraklorida berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif olive oil. Aktivitas AST-serum menunjukkan kenaikan yang lebih tinggi daripada aktivitas ALT-serum karena pada aktivitas AST-serum tidak hanya melibatkan sel hati sehingga yang menjadi patokan terutama adalah nilai aktivitas serum. Kenaikan aktivitas ALT-serum cukup signifikan, sehingga dapat dikatakan telah terjadi kerusakan pada hati dengan adanya kenaikan tersebut. Kenaikan dari serum ALT dan AST menegaskan bahwa karbontetraklorida dosis 2 ml/Kg BB memberikan efek hepatotoksik pada tikus jantan.
3. Kontrol ekstrak etanol daun M. tanarius 3840 mg/Kg BB
47
satu arah dan dilanjutkan dengan uji Scheffe menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna. Hal ini menggambarkan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius tidak memberikan pengaruh hepatotoksik pada sel hati tikus sehingga dapat diartikan kondisi sama seperti normal. Pada tabel 4 nilai AST kontrol ekstrak sebesar 180,6 ± 6,5 U/L kemudian setelah dianalisis menggunakan uji Mann-Whitney menunjukkan hasil berbeda bermakna terhadap kontrol hepatotoksin.
Tetapi nilai AST tidak dapat menjadi patokan bahwa hati mengalami kerusakan sel. Hal ini dapat disebabkan karena sebagian besar enzim aspartate tidak spesifik berada di dalam hati saja, melainkan berada dalam otot rangka, jantung, hati, serta tersebar ke seluruh jaringan sehingga belum dapat digunakan sebagai patokan kerusakan hati. Untuk itu dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius ini tidak menaikkan aktivitas serum ALT maupun AST.
4. Perlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 3840 ; 1280 ; dan 426 mg/Kg BB jangka waktu 6 jam pada tikus jantan terinduksi karbontetraklorida 2 ml/Kg BB
48
serum ALT dan AST akibat praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius terhadap nilai aktivitas serum ALT dan AST kontrol hepatotoksin karbontetraklorida.
Kelompok IV adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 3840 mg/Kg BB. Aktivitas serum ALT pada kelompok ini
sebesar 167,0 ± 7,7 U/L. Dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbontetraklorida, terjadi penurunan sebesar 1,45 kalinya atau 32,2 % dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 3840 mg/Kg BB memiliki efek penghambatan terhadap peningkatan aktivitas serum ALT yang terinduksi karbontetraklorida sebesar 32,2 %. Aktivitas serum ALT pada kelompok IV ini jika dibandingkan dengan kontrol negatif menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik.
49
mempunyai efek hepatoprotektif, namun kondisi hepar belum kembali seperti normal.
Kelompok V adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 1280 mg/Kg BB. Aktivitas serum ALT pada kelompok ini
sebesar 79,0 ± 3,1 U/L. jika dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida, terjadi penurunan sebesar 3,12 kalinya atau 67,9 % dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 1280 mg/Kg BB memiliki efek penghambatan terhadap peningkatan aktivitas serum ALT yang terinduksi karbontetraklorida sebesar 67,9 %. Aktivitas serum ALT pada kelompok V ini jika dibandingkan dengan kontrol olive oil menunjukkan perbedaan tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik.
Aktivitas serum AST pada kelompok V sebesar 130,6 ± 3,7 U/L. Dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbontetaklorida menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dibandingkan dengan kontrol negatif, aktivitas serum AST pada kelompok ini menunjukkan perbedaan tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik. Dapat diartikan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 1280 mg/Kg BB memiliki efek penghambatan terhadap peningkatan aktivitas serum AST yang terinduksi karbontetraklorida. Hal ini menunjukkan bahwa praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 1280 mg/Kg BB pada tikus jantan terinduksi CCl4
50
Kelompok VI adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 426 mg/Kg BB. Aktivitas serum ALT pada kelompok ini
sebesar 112,4 ± 2,8 U/L. jika dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbontetraklorida, terjadi penurunan sebesar 2,19 kalinya atau 54,4 % dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 426 mg/Kg BB memiliki efek penghambatan terhadap peningkatan aktivitas serum ALT yang terinduksi karbontetraklorida sebesar 54,38 %. Aktivitas serum ALT pada kelompok VI ini jika dibandingkan dengan kontrol negatif menunjukkan perbedaan tidak bermakna (p>0,05) pada uji statistik.
Aktivitas serum AST pada kelompok VI sebesar 467,8 ± 7,0 U/L. Dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin karbontetaklorida menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dibandingkan dengan kontrol negatif, aktivitas serum AST pada kelompok ini menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) pada uji statistik. Dapat diartikan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 426 mg/Kg BB memiliki efek penghambatan terhadap peningkatan aktivitas serum AST yang terinduksi karbontetraklorida. Hal ini menunjukkan bahwa praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 426 mg/Kg BB pada tikus jantan terinduksi hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 ml/Kg BB mempunyai efek hepatoprotektif.
51
(p<0,05). Pada kelompok V terhadap kelompok VI menunjukkan perbedaan tidak bermakna (p>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa praperlakuan ekstrak etanol daun M. tanarius dosis 426 mg/Kg BB selama selang waktu 6 jam merupakan dosis efektif hepatoprotektif pada tikus terinduksi CCl4. Jika
dibandingkan dengan penelitian yang dilakukan oleh Silli (2012), pada jangka waktu 6 jam dosis hepatoprotektif ekstrak etanol daun M. tanarius yang efektif sebesar 1280 mg/Kg BB.
E. Rangkuman Pembahasan
Penelitian ini menggunakan 3 peringkat dosis ekstrak etanol daun M. tanarius yaitu 3840, 1280, dan 426 mg/Kg BB untuk melihat efek
hepatoprotektif yang dihasilkan (%). Jika dilihat dari nilai aktivitas ALT, kelompok ekstrak etanol M. tanarius dosis 3840, 1280, dan 426 mg/Kg BB memiliki efek hepatoprotektif berturut-turut 32,2 ; 67,9 ; dan 54,38 %. Hasil pengujian membuktikan bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius memiliki efek hepatoprotektif terhadap induksi karbontetraklorida. Hal ini sesuai dengan hipotesis bahwa ekstrak etanol daun M. tanarius memiliki efek hepatoprotektif praperlakuan jangka waktu 6 jam terhadap tikus jantan terinduksi karbontetraklorida.
