OLEH : ARDIAN PRASETYA ( ) Dosen Pembimbing Nengah Dwianita Kuswytasari, S.Si., M.Si Kristanti Indah Purwani, S.Si., M.

(1)

OLEH : ARDIAN PRASETYA (1505 100 047)

SIDANG TUGAS AKHIR TUGAS AKHIR - SB 1510

Dosen Pembimbing

Nengah Dwianita Kuswytasari, S.Si., M.Si Kristanti Indah Purwani, S.Si., M.Si

(2)

LATAR BELAKANG

Gracillaria _selulosa _{Bakteri selulolitik}

Molekul dimer dan monomer

(3)

PERMASALAHAN

bakteri selulolitik aerob apa

saja yang terdapat dari

Gracillaria di pertambakan

Jabon , Sidoarjo

mengisolasi dan

mengkarakterisasi bakteri

selulolitik aerob yang terdapat

dari Gracillaria di pertambakan

Jabon, Sidoarjo.

(4)

BATASAN MASALAH

mengisolasi dan

mengkarakterisasi bakteri

selulolitik pada Gracillaria di

pertambakan Jabon , Sidoarjo

MANFAAT PENELITIAN

memberikan informasi tentang

keberadaan bakteri selulolitik aerob dari

Gracillaria di pertambakan Jabon ,

(5)

METODOLOGI

Sampling Pembuatan medium Isolasi Purifikasi Pengamatan mikroskopis Pengamatan makroskopis Uji HC (Hydrolysis Cellulose) Kurva pertumbuhan

Uji degradasi selulosa alami (berat kering)

Uji biokimia Enrichment

(6)

HASIL DAN PEMBAHASAN



Sampling dilakukan 5 km dari arah laut



Lokasi sampling memiliki karakteristik :

>> Salinitas air 20‰

>> temperatur 35

o

C

>> pH 7

>> substrat berlumpur



Sampel diambil dari 5 titik yang berbeda

pada 2 petak tambak yang masih

(7)

Denah tambak lokasi sampling

Petak 1 _{Petak 2}

Keterangan :

(8)

Hasil pengamatan makroskopis

No. Kode Isolat Bentuk Tepi Elevasi Warna 1. 5I₁ II II bundar rata melengkung merah

2. 5H₁ bundar rata melengkung merah

3. 5B₂ bundar rata datar merah

4. 5E₂ I bundar rata melengkung putih

5. 5B₁ I II bundar rata datar merah

6. 5C₁ III bundar rata melengkung merah

7. 5D₁ II II bundar rata datar putih

8. 5D₂ bundar rata datar putih

(9)

Hasil pengamatan mikroskopis

dan uji biokimia

No. Kode isolat Bentuk sel _Gram k atal as e s pora gl uk os a lak tos a s uk rosa oks idas _e moti l Starch hydrolisis Pendugaan genus 1. 5I₁ II II Kokus + + - - - * * * * Micrococcus 2. 5H₁ Kokus + + - + - * * * * Micrococcus 3. 5B₂ Kokus + + - + - * * * * Micrococcus 4. 5E₂ I Kokus + + + - * * * + - Sporosarcina 5. 5B₁ I II Kokus + + + + * * * + - Sporosarcina 6. 5C₁ III Basil + + + * * * * * - Nocardia 7. 5D₁ II II Kokus - + - + - - + * * Neisseria 8. 5D₂ Kokus - + - + - - + * * Neisseria 9. 6F₂ IV Kokus - + - + + + + * * Neisseria

(10)

Penampakan hasil uji biokimia

(11)

No. Kode

isolat katalase glukosa laktosa sukrosa oksidase

1. 5D₁ II II + + - - + 2. 5D₂ + + - - + 3. 6F₂ IV + + + + + 4. Kontrol •Genus Neisseria

(12)

No. Kode

isolat katalase glukosa laktosa

1. 5I₁ II II + - -2. 5H₁ + + -3. 5B₂ + + -4. Kontrol •Genus Micrococcus

(13)

No. Kode

isolat katalase glukosa

Starch hydrolisis Motilitas 1. 5E₂ I + - - + 2. 5B₁ I II + + - + 3. Kontrol •Genus Sporosarcina

(14)

Genus Micrococcus

 kokus  Gram positif  katalase positif  spora negatif  laktosa negatif

 Halotoleran (Paul & Varma, 1993)

 dapat menghasilkan endoglukanase, xylanase,

β-glukanase, dan β-xylanase

 merombak CMC optimum pada temperatur 40o_{C dan}

aktivitas CMCase akan hilang pada temperatur 50o_C

(15)

a _b _c

(16)

a b

Yt = -0,00807519 + 0,0120670*t - 0,000420993*t**2 Yt = -0,0207173 + 0,0238394*t -0,000899076*t**2

a

(17)

Genus Sporosarcina

 Gram positif

 spora positif

 katalase positif

 glukosa negatif

 Starch hydrolisis negatif

 Motil

 halofil (DasSarma and Arora, 2001)

 dapat menghasilkan enzim endoglukanase untuk

mendegradasi crystalline cellulose (Paul and Varma, 1993)

 Dapat membentuk zona bening setelah ditambahkan congo

red pada medium selektif yang mengandung 1% Whatman

powdered cellulose, 0,5% CMC atau 0,5% cellobiose (Paul

(18)

a b

(19)

Yt = -0,0299624 + 0,0236884*t - 0,000963699*t**2

(20)

Genus Nocardia



basil



Gram positif



katalase positif



starch hydrolysis negatif



endospora positif



_{Halofil (Freitas and Bhat, 1958)}



Mampu merombak selobiosa, dextrin,

starch, selulosa, dan agar (Freitas and

Bhat, 1958)

(21)

(22)

Yt = -0,0165850 + 0,0143860*t - 0,000469613*t**2

(23)

Genus Neisseria

 kokus

 Gram negatif

 katalase positif

 uji oksidase positif

 spora negatif

 memiliki aktivitas enzim hidrolitik pada substrat

cellulose acetate, CMC, dan xylan (Moriyoshi et al.,

2001)

 pH optimum enzim endo-1,4-β-glucanase 6,0-7,0

 Temperatur optimum pada pH 6,0 adalah 60o_C

(24)

a b c

(25)

Yt = -0,0127504 + 0,0279408*t - 0,00119377*t**2

a _b

Yt = -0,00751429 + 0,0226182*t - 0,000935065*t**2

Yt = -0,00892932 + 0,0242737*t - 0,00100837*t**2

Gambar Kurva pertumbuhan (a) 5D2, (b) 6F2 IV

(26)

Uji degradasi selulosa

Uji degradasi

selulosa

• Rasio diameter koloni dan diameter zona bening

• Medium CCRA

• Selisih berat kering Gracilaria sebelum dan sesudah degradasi

• Medium minimum (NaCl, MgSO4, K2HPO4

Uji HC

Uji degradasi Selulosa alami

(27)



_{Isolat Nocardia 5C1 III memiliki kemampuan}

terbesar dalam mendegradasi selulosa

berdasarkan uji berat kering (67,01%)



Isolat Sporosarcina 5E2 I memiliki kemampuan

terendah dalam mendegradasi selulosa

berdasarkan uji berat kering (59,12%)



Namun secara statistik (uji Anova one way)

kemampuan seluruh isolat dalam mendegradasi

selulosa (berat kering) tidak berbeda secara

(28)

Degr ada si se lulosa (%) isolat isolat

(29)



isolat 5C

1

III memiliki kemampuan degradasi

CMC terkecil pada uji HC (1 : 1,53)



isolat 6F

2

IV memiliki kemampuan degradasi

CMC tebesar pada uji HC (1 : 17,39)

kode isolat Pendugaan

genus rasio HC Kemampuan degradasi CMC 5I1 II II Micrococcus 1 : 14 5H1 Micrococcus 1 : 6,49 5B2 Micrococcus 1 : 5,74 6F2 IV Neisseria 1 : 17,39 tertinggi 5C1 III Nocardia 1 : 1,53 terendah 5D1 II II Neisseria 1 : 10,87