No Parameter R 1 R 2 Rv 1 Rv 2 1 CDW (g/l) 0,3580 0,2923 0,3325 0, PHA (g/l) 0,0160 0,1164 0,0669 0, %PHA(CDW) 4, ,822 20,12 40,564

(1)

Lampiran 1 Tabel hasil analisa dan hasil PHA run I (tanpa penyaringan) pada suhu 41oC, 7 hari waktu inkubasi

RRv1, Rv2= RANUT dengan penambahan nutrisi

No Analisa R1 R2 Rv1 Rv2 Setelah Inkubasi R1 R2 Rv1 Rv2 1 TSS (mg/L) 1000 960 1386 1845 400 600 1700 2150 2 COD (mg/L) 1174 1173,5 1301 1298 1846 2110 3165 4220 No Parameter R1 R2 Rv1 Rv2 1 CDW (g/L) 0,3580 0,2923 0,3325 0,3052 2 PHA (g/L) 0,0160 0,1164 0,0669 0,0938 3 %PHA(CDW) 4,4692 39,822 20,12 40,564

(2)

96

Lampiran 2 Data analisa dan hasil PHA Run II (dilakukan penyaringan) temperatur inkubasi 37 0C untuk waktu inkubasi 5,6 hari

Rv1, Rv2= RANUT dengan penambahan nutrisi

No Parameter R1 R2 Rv1(5H) Rv2(5H) Rv1(6H) Rv2(6H)

1 CDW (g/L) 0,1178 0,2417 0,1975 0,2963 0,3123 0,3311 2 PHA (g/L) 0,0520 0,0276 0,1410 0,1880 0,1910 0,1890 3 %PHA(CDW) 44,142 11,4191 71,392 63,449 71,544 71,767

No Analisa R1 R2 Rv1 Rv2 Rv1 Rv2 Setelah Inkubasi

5 H 5 H 6 H 6 H R1 R2 Rv1 (5H) Rv2(5H) Rv1(6H) Rv2(6H)

1 TSS (mg/L) 108 60 150 140 157 153 188 100 205 207 216 221

2 COD (mg/L) 1406,4 1408,5 1575 1536 1515 1521 1556 1910 3115 2231 2523 2172 R1 , R2 = RANUT tanpa nutrisi

(3)

Lampiran 3 Data absorbansi pada berbagai panjang gelombang

a) Larutan Nutrient Broth

No Panjang Gelombang (nm) Absorbansi

1 470 1,64 2 472 1,66 3 476 1,68 4 478 1,7 5 480 1,72 6 482 1,74 7 486 1,76 8 488 1,74 9 490 1,7 10 492 1,68 11 494 1,65 12 496 1,61 13 498 1,56 b) Limbah RANUT

No Panjang Gelombang (nm) Absorbansi

1 634 1,58 2 636 1,63 3 638 1,65 4 640 1,67 5 642 1,72 6 644 1,78 7 646 1,84 8 648 1,82 9 650 1,8 10 652 1,77 11 654 1,74 12 656 1,72 13 658 1,68

(4)

Lampiran 4 Kurva absorbansi larutan Nutrient Broth dan limbah RANUT pada

berbagai panjang gelombang

(5)

Lampiran 5

Data absorbansi pertumbuhan bakteri L131 dalam Nutrient Broth pada panjang

gelombang 486 nm No Jam Absorbansi 1 0 0,916 2 12 0,986 3 24 1 4 36 1,022 5 48 1,028 6 60 1,08 7 72 1,096 8 84 1,126 9 96 1,14 10 108 1,16 11 120 1,26 13 132 1,46 14 144 1,34 15 156 1,3 16 168 1,24 17 180 1,24 18 192 1,18 19 204 1,16 20 216 1,09 21 228 1,08 22 240 1,08

(6)

Lampiran 6

Kurva absorbansi pertumbuhan bakteri L131 dalam Nutrient Broth pada

(7)

Lampiran 7

Data absorbansi pertumbuhan bakteri L131 dalam limbah RANUT pada

panjang gelombang 646 nm No Jam Absorbansi 1 0 1,18 2 12 1,58 3 24 1,76 4 36 26,875 5 48 27 6 60 27,125 7 72 28,125 8 84 28,375 9 96 28,5 10 108 28,75 11 120 28,875 13 132 29,125 14 144 29,625 15 156 31,25 16 168 29,75 17 180 29,375 18 192 28,375 19 204 28,25 20 216 27,12 21 228 26,4 22 240 26

(8)

Lampiran 8

Kurva absorbansi pertumbuhan bakteri L131 dalam limbah RANUT pada

(9)

Lampiran 9

Data pertumbuhan bakteri L131 berdasarkan sel kering (CDW)

a) Pada Nutrient Broth No Hari CDW (%) 1 1 0,161 2 2 0,232 3 3 0,244 4 4 0,25 5 5 0,33 6 6 0,67 7 7 0,663 8 8 0,619 9 9 0,606 10 10 0,437

b) Pada limbah RANUT No Hari CDW (%) 1 1 0,661 2 2 0,677 3 3 0,724 4 4 0,73 5 5 0,744 6 6 1,258 7 7 1,219 8 8 1,031 9 9 0,996 10 10 0,761

(10)

Lampiran 10

Kurva pertumbuhan bakteri L131 dalam Nutrient Broth dan limbah RANUT

berdasarkan sel kering (CDW)

(11)

Lampiran 11

Data respon tanggap permukaan pertama

RANUT

Setelah diberi nutrisi

Setelah

diinkubasi CDW PHA

No Percobaan COD TSS COD TSS COD TSS (%) (g/L)

(mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) 1 1082,3 676 8823,15 860 8332,98 5900 1,853 0,135 2 1082,3 676 5882,1 1120 6862,45 14700 2,427 0,162 3 2548,9 548 6862,45 568 4901,75 652 0,773 0,099 4 2548,9 548 4901,75 668 8332,98 1268 0,865 0,088 5 1082,3 676 9313,33 868 7352,63 8100 1,976 0,095 6 1082,3 676 5882,10 1127 6372,28 1750 0,992 0,156 7 2548,9 548 5391,93 568 4411,58 2136 0,828 0,129 8 2548,9 548 5882,10 624 10783,85 1680 0,711 0,136 9 3019,8 716 5882,10 950 3921,40 1340 1,328 0,149 10 3019,8 716 3921,40 2970 3431,23 4140 1,137 0,146 11 3048,7 464 4411,58 1036 10783 1940 0,637 0,058 12 2509,7 512 4901,75 992 6372,28 3660 1,004 0,135 13 3019,8 716 4411,57 1080 5391,93 1320 1,320 0,250 14 3019,8 716 4901,75 1480 6862,45 3140 1,165 0,159 15 3019,8 716 4411,57 1780 5391,93 3640 1,144 0,141 16 3019,8 716 5391,92 1970 5882,10 3340 1,080 0,134 17 3019,8 716 5211,25 1670 3710,50 3190 0,997 0,101 18 3019,8 716 4780,15 1778 2356,70 2788 0,988 0,102 19 3019,8 716 4701,75 1960 2917,50 3017 1,095 0,114 20 3019,8 716 4511,35 1890 3098,80 3079 1,125 0,109

(12)

Lampiran 12

Data respon tanggap permukaan kedua

RANUT

Setelah diberi nutrisi

Setelah

diinkubasi CDW PHA

No Percobaan COD TSS COD TSS COD TSS (%) (g/L)

(mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) (mg/L) 1 1031 632 5727,5 1973 10121 3011 2,351 0,289 2 1031 632 6098 2021 3218 3872 3,716 0,310 3 1127 672 5819 1939 10430 3102 2,422 0,298 4 1127 672 6100 2109 3370 3909 3,903 0,287 5 1031 632 5747 1998 3876 2986 2,521 0,285 6 1031 632 6011 2014 3019 4225 3,945 0,298 7 1127 672 5810 1899 4413 2991 2,139 0,273 8 1127 672 6020 2093 2979 4176 3,895 0,287 9 994 464 5371 1927 3419 2211 2,137 0,211 10 994 464 6103 2018 2521 4171 3,875 0,277 11 1025 543 5970 1891 4072,5 3478 3,178 0,292 12 1052 656 5980 1935 3971 3787 3,317 0,321 13 994 464 5964 1930 10437 2768 1,078 0,270 14 994 464 5991 1963 2785 3535 4,172 0,350 15 994 464 5930 1970 3019,5 3712 3,043 0,382 16 994 464 5955 1960 3031,5 3640 3,121 0,371 17 994 464 5973 1937 3022,7 3651 2,971 0,331 18 994 464 5787 1897 3125,5 3432 3,211 0,342 19 994 464 5537 1913 3118,7 3211 3,057 0,355 20 994 464 5431 1925 3073,9 3378 3,171 0,321

(13)

Lampiran 13

Data pengamatan dan prediksi pemodelan CDW (%) tanggap permukaan pertama berdasarkan analisa statistik (STATSOFT 6.0)

No. Percobaan Data Pengamatan Data Prediksi

1 1,853 1,672 2 2,427 1,902 3 0,773 0,762 4 0,865 1,184 5 1,976 1,547 6 0,992 0,893 7 0,828 1,244 8 0,711 0,783 9 1,328 1,416 10 1,137 1,243 11 0,637 1,325 12 1,004 0,474 13 1,320 1,537 14 1,165 1,142 15 1,144 1,053 16 1,080 1,053 17 0,997 1,053 18 0,988 1,053 19 1,095 1,053 20 1,125 1,053

(14)

2,086854 -3,12801 -3,20299 6,044373 6,264084 6,578199 -7,13325 -9,57568 -14,40 p=,05

Effect Estimate (Absolute Value) 1Lby2L

(1)konsentrasi gula (g/L)(L) temperatur inkubasi (Celcius)(Q) konsentrasi gula (g/L)(Q) waktu inkubasi (hari)(Q) 2Lby3L (3)waktu inkubasi (hari)(L) 1Lby3L (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L)

Lampiran 14 Data ANOVA dan grafik Pareto untuk CDW (%) tanggap permukaa pertama

ANOVA; Var.:CDW (%) A; R-sqr=,5659; Adj:,1752 (CDW dan PHA1.sta) 3 factors, 1 Blocks, 20 Runs; MS Pure Error=,0042545 DV: CDW (%)

Term SS df MS F P

(1)konsentrasi gula (g/L)(L) 0,041628 1 0,041628 9,7844 0,026016 konsentrasi gula (g/L)(Q) 0,155435 1 0,155435 36,5344 0,001786 (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L) 0,882470 1 0,882470 207,4211 0,000029 temperatur inkubasi (Celcius)(Q) 0,043647 1 0,043647 10,2591 0,023915 (3)waktu inkubasi (hari)(L) 0,216482 1 0,216482 50,8832 0,000840 waktu inkubasi (hari)(Q) 0,166941 1 0,166941 39,2388 0,001521 1L by 2L 0,018528 1 0,018528 4,3550 0,091264 1L by 3L 0,390109 1 0,390109 91,6937 0,000210 2L by 3L 0,184103 1 0,184103 43,2727 0,001219 Lack of Fit 1,604247 5 0,320849 75,4144 0,000105 Pure Error 0,021272 5 0,004254 Total SS 3,744544 19

(15)

2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 2,5 2 1,5 1 0,5 Lampiran 15 Grafik tanggap permukaan pertama CDW (%)

a) Terhadap temperatur inkubasi (oC) dan konsentrasi glukosa (g/L)

(16)

Lampiran 16 Data pengamatan dan prediksi pemodelan CDW (%) tanggap permukaan

kedua berdasarkan analisa statistik (STATSOFT 6.0)

1 2,351 1,982 2 3,716 3,168 3 2,422 2,051 4 3,903 3,461 5 2,521 2,831 6 3,945 4,184 7 2,139 2,555 8 3,895 4,132 9 2,137 2,088 10 3,875 4,159 11 3,178 3,336 12 3,317 3,350 13 1,078 2,173 14 4,172 3,312 15 3,043 3,074 16 3,121 3,074 17 2,971 3,074 18 3,211 3,074 19 3,057 3,074 20 3,171 3,074

(17)

,1763768 ,7986099 1,329771 1,783645 -2,74713 4,108331 -5,31939 15,12594 27,49679 p=,05

Effect Estimate (Absolute Value) (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L)

konsentrasi gula (g/L)(Q) 1Lby3L 1Lby2L 2Lby3L temperatur inkubasi (Celcius)(Q) waktu inkubasi (hari)(Q) (3)waktu inkubasi (hari)(L) (1)konsentrasi gula (g/L)(L)

Lampiran 17 Data ANOVA dan grafik Pareto untuk CDW (%) tanggap permukaa kedua

ANOVA; Var.:CDW (%); R-sqr=,71769; Adj:,46361 (Spreadsheet1) 3 factors, 1 Blocks, 20 Runs; MS Pure Error=,0078859 DV: CDW (%)

(1)konsentrasi gula (g/L)(L) 5,96230 1 5,962295 756,0735 0,000001 konsentrasi gula (g/L)(Q) 0,00503 1 0,005029 0,6378 0,460750 (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L) 0,00025 1 0,000245 0,0311 0,866919 temperatur inkubasi (Celcius)(Q) 0,13310 1 0,133101 16,8784 0,009279 (3)waktu inkubasi (hari)(L) 1,80424 1 1,804240 228,7941 0,000023 waktu inkubasi (hari)(Q) 0,22314 1 0,223138 28,2959 0,003142 1L by 2L 0,02509 1 0,025088 3,1814 0,134562 1L by 3L 0,01394 1 0,013945 1,7683 0,241027 2L by 3L 0,05951 1 0,059513 7,5467 0,040448 Lack of Fit 3,20090 5 0,640180 81,1807 0,000088 Pure Error 0,03943 5 0,007886 Total SS 11,47795 19

(18)

3,5 3 2,5 2 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 Lampiran 18 Grafik tanggap permukaan kedua CDW (%)

(19)

Lampiran 19 Data pengamatan dan prediksi pemodelan PHA (g/L) tanggap permukaan

pertama berdasarkan analisa statistik (STATSOFT 6.0)

1 0,135 0,146 2 0,162 0,170 3 0,099 0,143 4 0,088 0,120 5 0,095 0,086 6 0,156 0,135 7 0,130 0,145 8 0,136 0,147 9 0,149 0,117 10 0,146 0,136 11 0,058 0,076 12 0,135 0,084 13 0,250 0,197 14 0,159 0,172 15 0,141 0,121 16 0,134 0,121 17 0,101 0,121 18 0,102 0,121 19 0,114 0,121 20 0,109 0,121

(20)

,4981321 ,5161208 1,039185 1,327475 -1,74147 -1,94428 2,606343 -3,30385 5,3569 p=,05

Effect Estimate (Absolute Value) konsentrasi gula (g/L)(Q)

(2)temperatur inkubasi (Celcius)(L) 1Lby3L (1)konsentrasi gula (g/L)(L) (3)waktu inkubasi (hari)(L) 1Lby2L 2Lby3L temperatur inkubasi (Celcius)(Q) waktu inkubasi (hari)(Q)

Lampiran 20 Data ANOVA dan grafik Pareto untuk PHA (g/L) tanggap permukaa pertama

ANOVA; Var.:PHA (g/L) A; R-sqr=,56638; Adj:,17613 (CDW dan PHA1.sta) 3 factors, 1 Blocks, 20 Runs; MS Pure Error=,0002848 DV: PHA (g/L)

(1)konsentrasi gula (g/L)(L) 0,000502 1 0,000502 1,76219 0,241731 konsentrasi gula (g/L)(Q) 0,000071 1 0,000071 0,24814 0,639525 (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L)0,000076 1 0,000076 0,26638 0,627775 temperatur inkubasi (Celcius)(Q) 0,003108 1 0,003108 10,91542 0,021385 (3)waktu inkubasi (hari)(L) 0,000864 1 0,000864 3,03273 0,142075 waktu inkubasi (hari)(Q) 0,008172 1 0,008172 28,69721 0,003047 1L by 2L 0,001076 1 0,001076 3,78023 0,109469 1L by 3L 0,000308 1 0,000308 1,07991 0,346337 2L by 3L 0,001934 1 0,001934 6,79302 0,047881 Lack of Fit 0,011279 5 0,002256 7,92186 0,020165 Pure Error 0,001424 5 0,000285 Total SS 0,029296 19

(21)

0,151196 0,11 0,06 0,01 0,26 0,22 0,18 0,14 0,1 0,06 Lampiran 21 Grafik tanggap permukaan pertama PHA (g/L)

(22)

Lampiran 22 Data pengamatan dan prediksi pemodelan PHA (g/L) tanggap permukaan

kedua berdasarkan analisa statistik (STATSOFT 6.0)

1 0,289 0,263 2 0,310 0,288 3 0,298 0,275 4 0,287 0,285 5 0,285 0,274 6 0,298 0,308 7 0,273 0,281 8 0,287 0,299 9 0,211 0,240 10 0,277 0,272 11 0,292 0,315 12 0,321 0,318 13 0,270 0,313 14 0,350 0,331 15 0,382 0,348 16 0,371 0,348 17 0,331 0,348 18 0,342 0,348 19 0,355 0,348 20 0,321 0,348

(23)

,1322855 -,137055 ,2545304 -,465384 ,9506484 -1,58317 1,639838 -1,84057 -5,59231 p=,05

Effect Estimate (Absolute Value) (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L)

2Lby3L 1Lby3L 1Lby2L (3)waktu inkubasi (hari)(L) waktu inkubasi (hari)(Q) (1)konsentrasi gula (g/L)(L) temperatur inkubasi (Celcius)(Q) konsentrasi gula (g/L)(Q)

Lampiran 23 Data ANOVA dan grafik Pareto untuk PHA (g/L) tanggap permukaa kedua

ANOVA; Var.:PHA (g/L); R-sqr=,72584; Adj:,47909 (Spreadsheet1) 3 factors, 1 Blocks, 20 Runs; MS Pure Error=,0005511 DV: PHA (g/L)

(1)konsentrasi gula (g/L)(L) 0,001482 1 0,001482 2,68907 0,161963 konsentrasi gula (g/L)(Q) 0,017234 1 0,017234 31,27396 0,002523 (2)temperatur inkubasi (Celcius)(L)0,000010 1 0,000010 0,01750 0,899917 temperatur inkubasi (Celcius)(Q) 0,001867 1 0,001867 3,38771 0,125055 (3)waktu inkubasi (hari)(L) 0,000498 1 0,000498 0,90373 0,385438 waktu inkubasi (hari)(Q) 0,001381 1 0,001381 2,50644 0,174230 1L by 2L 0,000119 1 0,000119 0,21658 0,661223 1L by 3L 0,000036 1 0,000036 0,06479 0,809223 2L by 3L 0,000010 1 0,000010 0,01878 0,896335 Lack of Fit 0,005662 5 0,001132 2,05500 0,224031 Pure Error 0,002755 5 0,000551 Total SS 0,030703 19

(24)

0,31 0,26 0,21 0,16 0,11 0,34 0,32 0,3 0,28 0,26 0,24 Lampiran 24 Grafik tanggap permukaan kedua PHA (g/L)

(25)

Lampiran 25 Analisa mikroskopis granula PHA

Sel PHA 7 g/L glukosa; 3 hari inkubasi; 33o_C

temperatur inkubasi Sel PHA 3 g/L glukosa; 3 hari

inkubasi; 33o_{C temperatur}

inkubasi Sel PHA 7 g/L glukosa; 7

hari inkubasi; 33o_C

temperatur inkubasi

Sel PHA 7 g/L glukosa; 3 hari inkubasi; 27o_{C temperatur}

inkubasi

Sel PHA 3 g/L glukosa; 3 hari inkubasi; 27o_{C temperatur}

inkubasi Sel PHA 7 g/L glukosa; 7

hari inkubasi; 27o_C

(26)

Sel PHA 5 g/L glukosa; 5 hari inkubasi; 30o_{C temperatur inkubasi}

Sel PHA 5 g/L glukosa; 5 hari inkubasi;

(27)

Lampiran 26 Penentuan nilai COD, TSS, CDW, PHA

1. Penentuan Nilai COD PHA dengan perlakuan (nutrisi glukosa 5 g/L, temperatur inkubasi 25 oC dan waktu inkubasi 5 hari)

Volume titrasi blanko (B) = 5,55 ml Volume titrasi sampel (C) = 5,1 ml

N FeSO4 = 0,1055 N

Fp = 25

Maka nilai COD

2. Penentuan Nilai TSS PHA dengan perlakuan (nutrisi glukosa 5 g/L, temperatur inkubasi 25 oC dan waktu inkubasi 5 hari)

Berat kertas saring (A) = 0,0888 g Berat kertas saring + contoh kering (B) = 0,1139 g

3. Penentuan CDW dengan perlakuan (nutrisi glukosa 5 g/L, temperatur inkubasi 25 o_{C dan waktu inkubasi 5 hari)}

Berat cawan kosong beserta tutup (W1) = 140,887 g

Berat cawan + sel basah (W2) = 170,108 g

Berat cawan + sel kering setelah dioven pada suhu 105oC (W3) = 141,073 g

CDW =

4. Penentuan PHA dengan perlakuan (nutrisi glukosa 5 g/L, temperatur inkubasi 25 o_{C dan waktu inkubasi 5 hari)}

(28)

Berat cawan + sel PHA (W1) = 13,1248 g Berat cawan kosong (W2) = 13,0958 g

(29)

Lampiran 27 Penentuan berat molekul PHA

η = η* (1 + [ c)

η = viskositas larutan (mPa.s) η* = viskositas pelarut murni (mPa.s) c = konsentrasi larutan (% w/v) 0,54816 = 0,50217 (1 + [ 0,1) [ = 0,9158

Untuk mencari nilai K = Konstanta pelarut (cm3/g)

=

cm3/g Dikonversikan dalam persamaan Mark-Houwink:

[η] = KMa M =

a = Konstanta pelarut chlorofom dalam kondisi theta (viskositas dinamik pada 40 0C) = 0,78

M =

(30)

OH C-H C=O C-O CH₂ CH₃ C=O OH C-H CH₂ _C=C C-O CH₃ Lampiran 28 Spektrum FT-IR bioplastik PHA

a) Media sintetik

(31)

OH C-H C-H C-O CH₂ CH₃ c) Menurut Mumtaz dkk (2009) d) Limbah RANUT OH C=O C-O CH₂

(32)

e) Menurut Otari dkk (2009) C-H C=O CH₂ C-O OH

(33)

Lampiran 29 Hasil uji sifat termal material dengan DSC untuk perlakuan nutrisi 5 g/L

(34)

(35)

Lampiran 30 Analisa SEM bioplastik PHA untuk perlakuan nutrisi 5 g/L glukosa,

temperatur inkubasi 30oC, dan waktu inkubasi 5 hari

A. Foto SEM dari Permukaan PH

B. Foto SEM dari Permukaan PHA

Perbesaran 750 Perbesaran 3000x

C. Foto SEM Penampang PHA D. Foto SEM Penampang PHA

(36)

Lampiran 31 Dokumentasi rute penelitian

a) Pengambilan sampel

b) Pengisolasian Bakteri

Kolam deoiling RANUT

Pengamatan gram Pemurnian Bakteri

(37)

c) Penyeleksian Bakteri

d) Penelitian Utama Proses pada penelitian

pendahuluan (penelitian pendahuluan)Bioplastik PHA inkubator

Proses inkubasi pada

penelitian utama Sel kering Ekstraksi PHA

Bioplastik PHA Perlakuan 5 g/L glukosa, 30oC temperatur Inkubasi dan 5 hari waktu inkubasi