LAPORAN PRAKTIKUM MATA KULIAH LAPORAN PRAKTIKUM MATA KULIAH ISOLASI MIKROBA
ISOLASI MIKROBA
Dosen Pengampu: PUJIATI S.Si.,M,Si Dosen Pengampu: PUJIATI S.Si.,M,Si Asisten Dosen: Pina A!" Puspita Asisten Dosen: Pina A!" Puspita
Maiun, #$ Mei #%&' Maiun, #$ Mei #%&' Disusun O(e): Disusun O(e): Je(ang Ba*apana Je(ang Ba*apana &++&%+-B &++&%+-B
PRO/RAM STUDI P0NDIDIKAN BIOLO/I PRO/RAM STUDI P0NDIDIKAN BIOLO/I 1A
1AKULTKULTAS P0NDIAS P0NDIDIKAN DIKAN MATMAT0MATIKA DAN ILMU 0MATIKA DAN ILMU P0N/0TAHUANP0N/0TAHUAN ALAM
ALAM
IKIP P/RI MADIUN IKIP P/RI MADIUN #%&'
#%&'
ISOLASI MIKROBA ISOLASI MIKROBA
A.
A. TTAAN/N///ALAL: Praktikum dilaksanakan pada tanggal 26 Mei 2015 di Laboratorium: Praktikum dilaksanakan pada tanggal 26 Mei 2015 di Laboratorium 2 IKIP PGRI MAI!"
2 IKIP PGRI MAI!" B.
B. TUTUJUJUAN AN PRPRAKAKTITIKUKUMM:: 1#
1# MengaMenga$arkan $arkan Ma%asisMa%asis&a 'ara &a 'ara mengimengisolasi solasi mikromikroba darba dari suati suatu 'ampu 'ampuranuran 2#
2# MengaMenga$arkan $arkan ma%asisma%asis&a men&a mengeta%ugeta%ui 'ara mi 'ara mengisoengisolasi delasi dengan pngan pengenengen'eran'eran
2.
2. DADASASAR TR T0O0ORI RI ::
Populasi mikroorganisme (ang ada di alam sekitar kita ini sangatla% besar Populasi mikroorganisme (ang ada di alam sekitar kita ini sangatla% besar dan 'ukup kompleks# Ratusan spesies mikroba menguasai setiap bagian tubu% dan 'ukup kompleks# Ratusan spesies mikroba menguasai setiap bagian tubu% kita# Mereka terdapat dalam $umla% (ang besar# Mikroorganisme dapat diperole% kita# Mereka terdapat dalam $umla% (ang besar# Mikroorganisme dapat diperole% dari lingkungan air) tana%) udara) substrat (ang berupa ba%an pangan) tanaman dari lingkungan air) tana%) udara) substrat (ang berupa ba%an pangan) tanaman d
dan an %%e&e&anan# # *e*eririkkut ut pepenn$e$elalasasan n ddarari i mimikkroroororggananisismme e ddalalam am aiair r ddanan mikroorganisme dalam tana% :
mikroorganisme dalam tana% : 1# Mikroorganisme dalam Air 1# Mikroorganisme dalam Air
Air merupakan +at (ang mutlak bagi setiap
Air merupakan +at (ang mutlak bagi setiap mak%luk %idup) dan kebersi%anmak%luk %idup) dan kebersi%an air adala% s(arat utama bagi ter$aminn(a kese%atan# Menurut tempatn(a) air dapat air adala% s(arat utama bagi ter$aminn(a kese%atan# Menurut tempatn(a) air dapat berada
berada dipermukaan dipermukaan tana% tana% dan dan selan$utn(a selan$utn(a air air ini ini disebut disebut air air permukaan) permukaan) sertaserta dapat pula berada dalam tana%) dan air ini selan$utn(a disebut air tana%# Air %u$an dapat pula berada dalam tana%) dan air ini selan$utn(a disebut air tana%# Air %u$an (ang $atu% di tana% sebagian meresap ke dalam tana% dan sebagian lain dapat (ang $atu% di tana% sebagian meresap ke dalam tana% dan sebagian lain dapat menggenang di permukaan tana%) %al ini bergantung kepada kondisi tana%# Air menggenang di permukaan tana%) %al ini bergantung kepada kondisi tana%# Air %u
%u$an $an memembmba&a&a a seserta rta mimikrkroooorgrgananismisme,me,mikikroroororgaganinisme sme (a(ang ng sensenanantiatiasasa ber%amburan
ber%amburan di di udara) udara) lebi%,lebi% lebi%,lebi% di di udara udara (ang (ang mengatasi mengatasi tana% tana% (ang (ang berdebu#berdebu# -etiba di tana%) air men$adi lebi% 'emar lagi karena sisa,sisa mak%luk %idup -etiba di tana%) air men$adi lebi% 'emar lagi karena sisa,sisa mak%luk %idup .sam
.sampa%pa%/) /) kotkotoraoran n dardari i %e&%e&an an maumaupun pun manmanusiausia) ) dan dan munmungkigkin n $ug$uga a kotkotoraorann berasal dari pabrik,pabrik .&id$oseputro)1/#
berasal dari pabrik,pabrik .&id$oseputro)1/# Ai
Air r (a(ang ng memengnganandudung ng mimikrkroooorgrgananisisme me ititu u didisesebubut t aiair r ((anang g kekenana kontaminasi) $adi air itu tidak steril# *eberapa pen(akit menular dapat se&aktu, kontaminasi) $adi air itu tidak steril# *eberapa pen(akit menular dapat se&aktu, se&
se&akaktu tu memeluluas as memen$n$adadi i &a&ababa% % .e.epipidedemimi/ / kakarenrena a peperanranan an aiair r (a(ang ng 'em'emar ar .&id$oseputro)1/#
.&id$oseputro)1/#
Air tana% mengandung +at,+at anorganik maupun +at,+at organik dan ole% Air tana% mengandung +at,+at anorganik maupun +at,+at organik dan ole% k
kararenena a ititu u mmererupupakakan an tetemmpapat t babaik ik bbagagi i keke%i%idudupapan n mmikikroroororggananisismme#e# Mikro
Mikroorgaorganisme,mnisme,mikrooikroorganirganisme sme (ang (ang autotautotro ro merupmerupakan akan peng%peng%uni uni pertampertamaa dal
ba%an
ba%an organik organik (ang (ang memungkinkan memungkinkan ke%idupan ke%idupan mikroorganisme,mikroorgmikroorganisme,mikroorganismeanisme (ang %eterotro .&id$oseputro)1/#
(ang %eterotro .&id$oseputro)1/# 2# Mikroorganisme dalam
2# Mikroorganisme dalam 3a3ana%na% 3a
3ana% terdiri na% terdiri atas atas %an'u%an'uran ran batu,bbatu,batuanatuan# # PartikPartikel,partiel,partikel kel itu ada itu ada (ang(ang sebesar butir,butir pasir) ada pula (ang sangat %alus (ang lebi% ke'il
sebesar butir,butir pasir) ada pula (ang sangat %alus (ang lebi% ke'il daripada 0)02daripada 0)02 mm) (aitu (ang merupakan lumpur# 4an'uran (ang %alus itu merupakan suatu mm) (aitu (ang merupakan lumpur# 4an'uran (ang %alus itu merupakan suatu s(stem koloid dalam air) ingat sa$ala% akan air (ang ber&arna keru% .'oklat/ s(stem koloid dalam air) ingat sa$ala% akan air (ang ber&arna keru% .'oklat/ karena mengandung lumpur .&id$oseputro)1/#
karena mengandung lumpur .&id$oseputro)1/#
alam tana% terdapat air kimia) (aitu air (ang bersatu dalam partikel air alam tana% terdapat air kimia) (aitu air (ang bersatu dalam partikel air %igroskopik) (aitu air (ang melekat pada partikel tana% air kapiler) (aitu air (ang %igroskopik) (aitu air (ang melekat pada partikel tana% air kapiler) (aitu air (ang berada
berada di di sela,sela sela,sela partikel,partikel partikel,partikel tana%) tana%) dan dan air air graitasi) graitasi) (aitu (aitu air air (ang(ang berkumpul
berkumpul sebagai sebagai genangan genangan di di atas atas lapisan lapisan tak tak tembus tembus air# air# Ke'uali Ke'uali itu) itu) tana%tana% mengandung mineral# 7lemen,elemen (ang ada dalam tana% dapat berbentuk ion, mengandung mineral# 7lemen,elemen (ang ada dalam tana% dapat berbentuk ion, iioonn) ) ddaan n iioonn,,iioon n mmeemmppeennggaarruu%%i i kkeeaassaammaan n aattaau u kkeebbaassaaaan n ttaannaa%% .&id$oseputro)1/#
.&id$oseputro)1/# Partik
Partikel el tana%tana%) elemen,elem) elemen,elemen) p4) udara) airen) p4) udara) air) sinar adala% komp) sinar adala% komponen,onen, kom
komponponen en anoanorgrganikanik) ) mermereka eka mermerupaupakan kan akaktortor,a,aktoktor r alamalam# # alalam am tanatana%% ter
terdapdapat at $ug$uga a %an%an'ura'uran n dardari i sisasisa,sis,sisa a makmak%lu%luk k %id%idup) up) baabaagian gian ini ini mermerupaupakankan kom
komponponen,en,komkomponponen en orgorganianik k .&.&id$id$oseoseputputro)ro)11/# /# KumKumpulpulan an dardari i +at,+at,+at+at organik tersebut disebut
organik tersebut disebut %umus# Komponen,komponen anorganik maupun organik %umus# Komponen,komponen anorganik maupun organik mer
merupaupakan kan subsubstrastrata ta tau tau medmedium ium (an(ang g baibaik k bagbagi i ke%ke%iduidupan pan mikmikrooroorgarganisnisme#me# Mik
Mikrooroorgrganianismesme,mi,mikrokroorgorganisanisme me penpeng%ug%uni ni tantana% a% mermerupaupakan kan 'am'ampurpuran an dardarii populasi
populasi dari dari .a/.a/ protozoa protozoa sesepepertrti i amamoeoeba) ba) llagagellellateate) ) 'i'illilliatata) a) .b.b/ / babaktkterieri ..Clostridium, RhizobiumClostridium, Rhizobium/ dan sebagain(a) .'/ alga.ganggang/ seperti alga biru)/ dan sebagain(a) .'/ alga.ganggang/ seperti alga biru) alga %i$au) diatom) dan .d/ $amur) terutama $amur bertingkat renda% seperti $amur alga %i$au) diatom) dan .d/ $amur) terutama $amur bertingkat renda% seperti $amur lleennddiirr) ) bbeerrbbaaggaai i rraaggi i ddaan n bbeerrbbaaggaaii Phycomycetes Phycomycetes dandan Ascomycetes
Ascomycetes.&id$oseputro)1/#.&id$oseputro)1/# !m
!mumumn(n(a a mimikrkroooorgrganianismsme,me,mikikroroororgaganinismsme e tertersebsebut ut lelebibi% % baban(n(ak ak terdapat di atau dekat permukaan tana%# Makin masuk ke dalam tana%) makin terdapat di atau dekat permukaan tana%# Makin masuk ke dalam tana%) makin berkurangla% peng%unin(
berkurangla% peng%unin(a#a# Pen$ela
Pen$elasan di san di atas dapat disimpulkaatas dapat disimpulkan n ba%&a popuba%&a populasi dari lasi dari mikromikroba (ang ba (ang adaada dil
mikroorganisme dalam berbagai %abitat ini memerlukan teknik untuk memisa%kan mikroorganisme dalam berbagai %abitat ini memerlukan teknik untuk memisa%kan atau mengisolasi mikroba dari populasi 'ampuran (ang rumit) atau (ang biasan(a atau mengisolasi mikroba dari populasi 'ampuran (ang rumit) atau (ang biasan(a dikenal dengan istila% biakan 'ampuran) men$adi spesies (ang berbeda,beda (ang dikenal dengan istila% biakan 'ampuran) men$adi spesies (ang berbeda,beda (ang dikenal dengan istila% biakan murni# *iakan murni ini terdiri dari satu populasi sel dikenal dengan istila% biakan murni# *iakan murni ini terdiri dari satu populasi sel (an
(ang g semsemuanuan(a (a berberasal asal dardari i satu satu sel sel indinduk uk .Pe.Pele+ale+ar)r)116/# 6/# IsoIsolasi lasi mikmikrobrobaa ad
adalala%a%mmememisisa%a%kakan n mimikrkroboba a tetersrsebebut ut dadari ri lilingngkukungnganann(n(a a di di alalam am dadann menum
menumbu%kbu%kann(ann(a a sebagasebagai i biakan murni biakan murni dalam medium buatan# dalam medium buatan# 4al,%a4al,%al l (ang(ang %arus diper%atikan dalam proses isolasi mikroba adala% :
%arus diper%atikan dalam proses isolasi mikroba adala% : 1#
1# -i-iat spat spesieesies miks mikrobroba (ana (ang akag akan diin diisolsolasiasi 2#
2# 33emempat pat %id%idup up atau atau asal asal mikmikrobrobaa 8#
8# MedMedium ium (an(ang sesg sesuai uuai untuntuk perk pertumtumbu%bu%anan 9#
9# aara mera menanananam mikm mikroroba teba tersersebubutt 5#
5# aara ra ininkukubabasi si mimikrkrobobaa 6#
6# ara menara mengu$i ba%gu$i ba%&a mikro&a mikroba (ang dba (ang diisolasiisolasi tela% berui tela% berupa biakpa biakan murni dan murni dan sesuaan sesuaii dengan (ang dimaksud
dengan (ang dimaksud ;#
;# ara memara memeli%ara aeli%ara agar mikrgar mikroba (anoba (ang tela% dig tela% diisolasi teisolasi tetap merutap merupakan bpakan biakan miakan murniurni .Pu$iati) 2012/#
.Pu$iati) 2012/#
Peminda%an bakteri dari medium lama ke medium (ang baru atau (ang Peminda%an bakteri dari medium lama ke medium (ang baru atau (ang dik
dikenaenal l dendengan gan inoinokulkulasi asi bakbakteri teri ini ini memmemerluerlukan kan banban(ak (ak ketketelitelitianian# # 33ererleblebi%i% da%ulu kita %arus mengusa%akan agar semua alat,alat (ang akandigunakan untuk da%ulu kita %arus mengusa%akan agar semua alat,alat (ang akandigunakan untuk penger$aan
penger$aan medium medium dan dan inokulasi inokulasi benar,benar benar,benar steril# steril# Meng%indari Meng%indari kontaminasi)kontaminasi) (aitu masukn(a mikroba lain (ang tidak diinginkan se%ingga biakan (ang tumbu% (aitu masukn(a mikroba lain (ang tidak diinginkan se%ingga biakan (ang tumbu% da
dalam lam memedidium um adadalaala% % bebenanar,r,bebenanar r bibiakakan an mumurnrni i ..&i&id$d$ososepepututroro)1)1//## Men(endirikan suatu spesies dikenal beberapa 'ara) (aitu dengan pengen'eran Men(endirikan suatu spesies dikenal beberapa 'ara) (aitu dengan pengen'eran dan penuangan#
dan penuangan# 3e
3eknik Pengambilan knik Pengambilan -ampel-ampel -eb
-ebeluelum m melamelakukkukan an isoisolasi lasi terlterlebiebi% % da%da%ulu ulu dildilakuakukan kan penpengamgambilbilan an samsampelpel## *erikut merupakan prosedur pengambilan sampel#
*erikut merupakan prosedur pengambilan sampel# 1# -ampel tana%
1# -ampel tana%
<ika mikroorganisme (ang diiinginkan kemungkinan berada dalam tana%) <ika mikroorganisme (ang diiinginkan kemungkinan berada dalam tana%) maka 'ara
maka 'ara pengpengambilaambilann(a disesuaiknn(a disesuaikan an dengadengan n tu$uan dan kebutu%antu$uan dan kebutu%an# # <ika (ang<ika (ang diingikan mikroorganisme r%i+oser maka sampel diambil dari sekitar perakaran diingikan mikroorganisme r%i+oser maka sampel diambil dari sekitar perakaran dekat permukaan %ingga u$ung perakaran#
2# -ampel air 2# -ampel air
Pengambilan sampel air bergantung kepada keadaan air itu sendiri# <ika Pengambilan sampel air bergantung kepada keadaan air itu sendiri# <ika berasal
berasal dari dari air air sungai (ang sungai (ang mengalir maka mengalir maka botol di'elupkan botol di'elupkan miring dengan miring dengan bibir bibir botol mela&an arus
botol mela&an arus air# *ila pengambilan sampel dilakukan air# *ila pengambilan sampel dilakukan pada air (ang tenpada air (ang tenang)ang) botol
botol dapat dapat di'elupkan di'elupkan dengan dengan tali) tali) $ika $ika ingin ingin mengambil mengambil sampel sampel dari dari air air krankran maka sebelumn(a keran dialirkan dulu beberapa saat dan mulut kran dibakar maka sebelumn(a keran dialirkan dulu beberapa saat dan mulut kran dibakar .Pu$iati) 2012/#
.Pu$iati) 2012/#
Isolasi engan ara Pengen'eran .
Isolasi engan ara Pengen'eran . Dilution Dilution//
1# 3ek
1# 3eknik Preparasi nik Preparasi -uspensi-uspensi
-ampel (ang tela% diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril# -ampel (ang tela% diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril# 3u
3u$ua$uan n dardari i tekteknik nik ini ini padpada a priprinsinsipn(pn(a a adaadala% la% melamelarutrutkan kan ataatau u melmelepaepaskaskann mikroba dari substratn(a ke dal air se%ingga lebi% muda% penanganann(a .Pu$iati) mikroba dari substratn(a ke dal air se%ingga lebi% muda% penanganann(a .Pu$iati) 2012/# Ma'am,ma'am preparasi bergantung kepada bentuk sampel :
2012/# Ma'am,ma'am preparasi bergantung kepada bentuk sampel : a#
a# SwabSwab .ulas/) dilakukan menggunakan 'otton bud steril pada sampel (ang memiliki .ulas/) dilakukan menggunakan 'otton bud steril pada sampel (ang memiliki permukaan
permukaan luas luas dan dan pada pada umumn(a umumn(a sulit sulit dipinda%kan dipinda%kan atau atau sesuatu sesuatu pada pada bendabenda te
tersersebubut# t# oontnto%o%n(n(a a adadalaala% % meme$a) $a) babatutu) ) dadan n babatatang ng ka(ka(u# u# aararan(n(a a dedengnganan mengusapkan 'otton bud memutar se%ingga seluru% permukaan kapas dari 'utton mengusapkan 'otton bud memutar se%ingga seluru% permukaan kapas dari 'utton bud
bud kontak kontak dengan dengan permukaan permukaan sampel#sampel# SwabSwabakan lebi% baik $ika 'otton budakan lebi% baik $ika 'otton bud di'elupkan terlebi% da%ulu ke dalam larutan atraktan semisal
di'elupkan terlebi% da%ulu ke dalam larutan atraktan semisal pepton water pepton water.. b#
b# Rinse Rinse .bilas/ ditu$ukan untuk melarutkan sel,sel mikroba (ang menempel pada .bilas/ ditu$ukan untuk melarutkan sel,sel mikroba (ang menempel pada permukaan
permukaan substrat substrat (ang (ang luas luas tapi tapi relati relati berukuran berukuran ke'il) ke'il) misaln(a misaln(a daundaun bunga#
bunga# Rinse Rinse merupakan prosedur ker$a dengan men'elupkan sampel ke dalam merupakan prosedur ker$a dengan men'elupkan sampel ke dalam akuades dengan perbandingan 1 : .&=/# onto%n(a sampel daun diambil dan akuades dengan perbandingan 1 : .&=/# onto%n(a sampel daun diambil dan ditimbang 5 g kemudian dibilas dengan akuades 95 ml (ang terdapat dalam ditimbang 5 g kemudian dibilas dengan akuades 95 ml (ang terdapat dalam beaker glass#
beaker glass# '#
'# Maseration Maseration .peng.pengan'uranan'uran/) /) sampel (ang terbentuk padat sampel (ang terbentuk padat dapat ditumbudapat ditumbuk k dengadengann mortar dan pestle se%ingga mikroba (ang ada dipermukaan atau dalam dapat mortar dan pestle se%ingga mikroba (ang ada dipermukaan atau dalam dapat terlepas kemudian dilarutkan ke dalam air# onto% sampeln(a antara lain bakso) terlepas kemudian dilarutkan ke dalam air# onto% sampeln(a antara lain bakso) bi$i)
bi$i) bua% bua% dll# dll# Perbandingan Perbandingan antar antar berat berat sampel sampel dari dari tana% tana% tak tak perlu perlu dimaserasidimaserasi .Pu$iati) 2012/#
2# 3ek
2# 3eknik Pengen'eran nik Pengen'eran *ertingkat*ertingkat
3u$uan dari pengen'eran bertingkat (aitu memperke'il atau mengurangi 3u$uan dari pengen'eran bertingkat (aitu memperke'il atau mengurangi $umla%
$umla% mikroba mikroba (ang (ang tersuspensi tersuspensi dalam dalam 'airan# 'airan# Penentuan Penentuan besarn(a besarn(a atauatau ban(akn(a
ban(akn(a tingkat tingkat pengen'eran pengen'eran tergantung tergantung kepada kepada perkiraan perkiraan $umla% $umla% mikrobamikroba dalam sampel# Pengen'eran bertingkat menggunakan perbandingan 1 : untuk dalam sampel# Pengen'eran bertingkat menggunakan perbandingan 1 : untuk sam
sampepel l dadan n pepengngenen'e'eran ran pepertrtamama a dadan n selselanan$u$utn(tn(a) a) se%se%iningggga a pepengngenen'er'eranan berikutn(a
berikutn(a mengandung mengandung 1=10 1=10 sel sel mikroorganisme mikroorganisme dari dari pengen'eran pengen'eran sebelumn(asebelumn(a .Pu$iati) 2012/#
.Pu$iati) 2012/#
8# 3eknik Penanaman 8# 3eknik Penanaman
3eknik penanaman ini merupakan lan$utan dari pengen'eran bertingkat# 3eknik penanaman ini merupakan lan$utan dari pengen'eran bertingkat# Pengambilan suspensi dapat diambil dari pengen'eran mana sa$a tapi biasan(a Pengambilan suspensi dapat diambil dari pengen'eran mana sa$a tapi biasan(a unt
untuk uk tu$tu$uan uan isoisolaslasi i .me.mendandapatpatkan kan kolkolononi i tuntunggaggal/ l/ diamdiambil bil bebbeberaperapa a tabtabungung pengen'eran terak%ir#
pengen'eran terak%ir# 3e
3eknik penanaman dari knik penanaman dari suspensisuspensi a#
a# Spread PlateSpread Plate .agar tabur ulas/ .agar tabur ulas/ Spre
Spread ad plateplate adaadala% la% tekteknik nik menmenanam anam dendengan gan menmen(eb(ebarkaarkan n sussuspenpensese bakteri
bakteri di di permukaan permukaan agar agar diperole% diperole% kultur kultur murni# murni# Adapun Adapun prosedur prosedur ker$a ker$a (ang(ang dapat dilakukan adala% sebagai berikut :
dapat dilakukan adala% sebagai berikut : 1/
1/ MengamMengambil suspebil suspensi 'airan sebnsi 'airan seban(ak 0)an(ak 0)1 ml denga1 ml dengan pipet ukun pipet ukur kemudir kemudian teteskaan teteskann di atas permukaan agar (ang tela% memadat#
di atas permukaan agar (ang tela% memadat# 2/
2/ *atang L *atang L atau batanatau batang drugal dig drugal diambil keambil kemudiamudian disemprn disemprot al'o%ot al'o%ol dan dibol dan dibakar diakar di atas bunsen beberapa saat) kemudian didinginkan dan ditunggu beberapa detik# atas bunsen beberapa saat) kemudian didinginkan dan ditunggu beberapa detik# 8/
8/ KemKemudiudian an disdisebaebarkarkan n dendengan menggan menggosgosokaokann(nn(a a padpada a perpermukmukaan aan agaagar r supsupa(aa(a tetesan suspensi merata) pen(ebaran akan lebi% eekti bila 'a&an ikut diputar# 4al tetesan suspensi merata) pen(ebaran akan lebi% eekti bila 'a&an ikut diputar# 4al (ang perlu diingat ba%&a batang L (ang terlalu panas dapat men(ebabkan sel,sel (ang perlu diingat ba%&a batang L (ang terlalu panas dapat men(ebabkan sel,sel mikroorganisme dapat mati karena panas .Pu$iati) 2012/#
mikroorganisme dapat mati karena panas .Pu$iati) 2012/# b#
b# Pour Plate Pour Plate .agar tuang/ .agar tuang/
3eknik ini memerlukan agar (ang belum padat .>95?/ untuk dituang 3eknik ini memerlukan agar (ang belum padat .>95?/ untuk dituang bersama suspensi
bersama suspensi bakteri ke bakteri ke dalam 'a&an dalam 'a&an petri lalu petri lalu kemudian di%omogenkan dankemudian di%omogenkan dan dibiarkan memadat# 4al ini akan men(ebarkan sel,sel bakteri tidak %an(a pada dibiarkan memadat# 4al ini akan men(ebarkan sel,sel bakteri tidak %an(a pada permukaan agar
permukaan agar sa$a melainkan sa$a melainkan sel tesel terendam agar rendam agar .dalam agar/ .dalam agar/ se%ingga terdapatse%ingga terdapat sel (ang tumbu% dipermukaan agar (ang ka(a @2 dan ada (ang tumbu% dalam sel (ang tumbu% dipermukaan agar (ang ka(a @2 dan ada (ang tumbu% dalam
agar (ang tidak ban(ak begitu ban(ak mengandung oksigen# Adapun prosedur agar (ang tidak ban(ak begitu ban(ak mengandung oksigen# Adapun prosedur ker$a (ang dilakukan adala% sebagai berikut :
ker$a (ang dilakukan adala% sebagai berikut : 1/
1/ MeMen(n(iaiapkpkan an 'a&'a&an an ststerieril) l) tatabubung ng pepengngenen'e'eran ran (a(ang ng akakan an diditatanam nam dadan n memedidiaa padat (ang masi% 'air .>95?/
padat (ang masi% 'air .>95?/ 2/
2/ MenetesMeneteskan 1 kan 1 ml se'ara ml se'ara aseptis aseptis suspensuspensi sel ke si sel ke dalam 'dalam 'a&an ka&an kosongosong 8/
8/ MeMenunuanangkgkan an memedidia a (a(ang ng mamasi% 'air si% 'air ke ke 'a'a&a&an n kemkemududiaian n puputatar r 'a'a&an unt&an untuk uk meng%omogenkan suspense bakteri dan media) kemudian diinkubasi
meng%omogenkan suspense bakteri dan media) kemudian diinkubasi Alasan diteteskann(a bakteri seban(ak 0)1 ml untuk
Alasan diteteskann(a bakteri seban(ak 0)1 ml untuk spread plate spread plate dan 1 ml untuk dan 1 ml untuk pour
pour plate plate karenakarena spread spread plateplate ditu$ukan untuk menumbu%kan dipermukaann(a ditu$ukan untuk menumbu%kan dipermukaann(a sa
sa$a$a# # -e-eddanangkgkanan pour pour plateplate memembmbututu%u%kakan n ruruanang g ((anang g lelebibi% % luluas as ununtutuk k pen(ebarann(a
pen(ebarann(a se%ingga se%ingga diberikan diberikan lebi% lebi% ban(ak ban(ak daripadadaripada spread spread plateplate .Pu$iati) .Pu$iati) 2012/#
2012/# 3e
3eknik Penanaman dengan Goresan knik Penanaman dengan Goresan ..Streak Streak // *er
*ertu$tu$uan uan untuntuk uk menmengisgisolasolasi i mikmikrooroorgrganianisme sme dardari i 'am'ampurpurannann(a (a atauatau merema$akan kultur ke dalam medium baru .Pu$iati) 2012/#
merema$akan kultur ke dalam medium baru .Pu$iati) 2012/# a# Goresan -inambung
a# Goresan -inambung ara Ker$a :
ara Ker$a : 1/
1/ Men(Men(entuentu%ka%kan n inoinokulkulum loop pada koloum loop pada koloni dan ni dan gorgores se'ara kontes se'ara kontin(in(u u samsampaipai setenga% permukaan agar#
setenga% permukaan agar# 2/
2/ <an<angan pi$agan pi$arkarkan loop) lalu putn loop) lalu putar 'a&an 10ar 'a&an 10? lan$u? lan$utkatkan n gogoresaresan sampai %abn sampai %abis#is# Gor
Goresan esan sinsinambambung ung umuumumn(mn(a a digdigunaunakan kan bukbukan an untuntuk uk menmendapdapatkatkan an kolkolonioni tunggal) melainkan untuk perema$aan ke 'a&an atau medium baru#
tunggal) melainkan untuk perema$aan ke 'a&an atau medium baru# b# Goresan 3
b# Goresan 3 ara Ker$a : ara Ker$a : 1/
1/ MembaMembagi 'a&agi 'a&an men$an men$adi 8 bdi 8 bagian magian mengguenggunakan nakan spidospidol markel marker r 2/
2/ menmenginginokuokulasi lasi daedaera% ra% 1 de1 dengangann streak zigzag streak zigzag 8/
8/ MemMemanasanaskan $arukan $arum inokum inokulan dan tunglan dan tunggu dinggu dingin) kemin) kemudiudian lan$uan lan$utkatkann streak streak zigzig zag
zag pada daera% 2# a&an diputar untuk memperole% goresan (ang sempurna pada daera% 2# a&an diputar untuk memperole% goresan (ang sempurna 9/
9/ LakLakukaukan %an %al (anl (ang samg sama pada pada daea daera% 8ra% 8 '# Goresan Kuadran .
'# Goresan Kuadran .Streak !uadrant Streak !uadrant // ara Ker$a :
ara Ker$a :
4ampir sama dengan goresan 3) namun berpola goresan (ang berbeda (aitu dibagi 4ampir sama dengan goresan 3) namun berpola goresan (ang berbeda (aitu dibagi empat# aera% 1 merupakan goresan a&al se%ingga masi% mengandung ban(ak empat# aera% 1 merupakan goresan a&al se%ingga masi% mengandung ban(ak sel
goresan pertama se%ingga $umla% semakin sedikit dan ak%irn(a terpisa%,pisa% goresan pertama se%ingga $umla% semakin sedikit dan ak%irn(a terpisa%,pisa% men$adi koloni tunggal .Pu$iati) 2012/#
men$adi koloni tunggal .Pu$iati) 2012/#
D.
D. ALALAAT T DADAN BAN BAHAHANN 1/
1/ AlAlat at (a(ang ng didigugunanakakann
"o
"o "ama Alat"ama Alat ungsin(aungsin(a <umla%<umla% 1
1 **uunnsseenn !!nnttuuk k mmeemmaannaasskkaan n bbaa%%aan n pprraakkttiikkuumm 2 2 bbuuaa%% 2
2 KKaappaass !!nnttuuk k mmeennuuttuup p bboottool l pprraakkttiikkuum m aaggaar r tteerr%%iinnddaar r dari kontaminasi mikroba (ang ada di luar dari kontaminasi mikroba (ang ada di luar
-e'ukupn(a -e'ukupn(a 8
8 33iissuuee !!nnttuuk k mmeemmbbeerrssii%%kkaan n aallaat t ((aanng g tteerrkkoonnttaammiinnaassii mikroba
mikroba
1 bua% 1 bua% 9
9 33aabbuunng g rreeaakkssii --eebbaaggaai i &&aaddaa% % uunnttuuk k mmeennaarruu% % bbaa%%aann praktikum
praktikum
bua% bua% 5
5 77rrlleennmmee((eerr --eebbaaggaai i &&aaddaa% % uunnttuuk k mmeemmaannaasskkaan n bbaa%%aann praktikum
praktikum
2 bua% 2 bua% 6
6 PPiippeet t oolluummee !!nnttuuk k mmeennggaammbbiil l bbaa%%aan n pprraakkttiikkuum m sseessuuaaii ukuran dan men'ampur larutan agar terlarut ukuran dan men'ampur larutan agar terlarut
1 bua% 1 bua% ; ; RRaak k ttaabbuunngg reaksi reaksi !
!nnttuuk k mmeennaarruu% % ttaabbuunng g rreeaakkssii 1 1 bbuuaa%%
--pprraa((eerr --eebbaaggaai i &&aaddaa% % aallkkoo%%ool l uunnttuuk k mmeennsstteerriillkkaan n aallaatt dan me$a praktikum
dan me$a praktikum
1 bua% 1 bua%
**oottool l IInnuuss !!nnttuuk k mmeennaarruu% % ssiissa a bbaa%%aan n ((aanng g bbeerrlleebbii%% 1 1 bbuuaa%% 10
10 KoKoraran n !n!ntutuk k memembmbunungkgkus us alalat at prprakaktiktikum um agagar ar titidadak k terkontaminasi bakteri
terkontaminasi bakteri
1 bendel 1 bendel 1
111 KKoommppoorr !!nnttuuk k mmeemmaannaasskkaan n bbaa%%aan n pprraakkttiikkuumm 1 1 uunniitt 1
122 AAuuttookkllaa BBaaddaa% % uunnttuuk k mmeennsstteerriilliissaassiikkaan n **aa%%aan n uu$$ii 1 1 uunniitt 1
188 aa&&aan n PPeettrrii -eeb- baaggaai i tteemmppaat t mmeeddiia a ppeerrttuummbbuu%%aan n mmiikkrroobbaa 6 6 bbuuaa%% 1
199 33iimmbbaannggaann Analik Analik
!
!nnttuuk k mmeenniimmbbaanng g bbaa%%aan n pprraakkttiikkuumm 1 u1 unniitt 1
155 KKoorreek k AAppii !!nnttuuk k mmeenn%%iidduuppkkaan n aappi i ppaadda a bbuunnsseenn 1 1 bbuuaa%% 1
166 AAlluummuunniiuumm oil
oil
!ntuk menutupi botol agar steril dan ter%indar !ntuk menutupi botol agar steril dan ter%indar dari kontaminasi mikroba
dari kontaminasi mikroba
lembar lembar 1
1;; GGeellaas *s *eekkeerr --eebbaaggaai ti teemmppaat ut unnttuuk k mmeennaarruu% l% laarruuttaann==aaCCuuaaddeess 1 1 bbuuaa%% 1
1 KKeerrttaas Ls Laabbeell !!nnttuuk mk meellaabbeelli ti taabbuunng rg reeaakkssi si seessuuaai li laarruuttaannnn((aa ssee''uukkuuppnn((aa 1
1 lliinng g &&rraapp !!nnttuuk k mmeennuuttuuppi i tteeppii,,tteeppi i ''aa&&aan n ppeettrri i aaggaar r rapat dan tidak terkontaminasi mikroba
rapat dan tidak terkontaminasi mikroba
se'ukupn(a se'ukupn(a
2/
2/ *a*a%a%an (n (ang ang didigugunanakakann
"o
"o "ama *a%an"ama *a%an !kuran!kuran 1
2
2 LLiimmbbaa% % aaiir r ppaabbrriik k tteebbuu 2 2 mmll 8
8 MMeeddiia a ""A A rriitteerriioonn 115 5 mmll 9
9 MMeeddiia a PPA A rriitteerriioonn 115 5 mmll 5
5 LLaarruuttaan n %%lloorraammpp%%eennii''ooll 6 6 mmll 6
6 LLaarruuttaan n GGrriisseeoouulliinn 6 6 mmll ;
; AAiir r iissiioollooggiiss 11226 6 mmll
AAllkkoo%%ool l ;0;0DD 11000 0 mmll
0.
0. 2A2ARA RA K0K0RJRJAA
Langka% pertama men(iapkan semua alat dan ba%an (ang akan digunakan Langka% pertama men(iapkan semua alat dan ba%an (ang akan digunakan pada
pada saat saat praktikum praktikum serta serta mensterilkan mensterilkan semua semua alat alat dan dan me$a me$a ker$a) ker$a) kemudiankemudian melakukan :
melakukan : 1#
1# IsoIsolasi blasi baktakteri daeri dari samri sampel aipel air limr limba% tba% tebuebu a#
a# isisiapiapkan kan alat alat dan dan ba%ba%an an prapraktiktikumkum## b#
b# isterilkan alat praktikum) me$a praktikum dan tangan#isterilkan alat praktikum) me$a praktikum dan tangan# '#
'# ibukibuka pipet a pipet olume dolume dengan pengan posisi deosisi dekat padkat pada api) kema api) kemudian mudian memasanemasangkan pgkan padaada pompa (ang lubang
pompa (ang lubangn(a suda% disterilkan dengan men(emprotkan alkon(a suda% disterilkan dengan men(emprotkan alko%ol#%ol# d#
d# iamiambil sabil sampempel air liml air limba% tba% tebu seebu sebanban(ak 1(ak 1ml#ml# e#
e# iimamasusukkkkan sampan sampel el aiair r limlimbaba% % tebtebu u papada 5 da 5 tabtabunung g rereakaksi si (a(ang telang tela% % teteririsi si aiair r isiologi seban(ak ml pada tabung reaksi 1 sampai tabung reaksi 5) kemudian isiologi seban(ak ml pada tabung reaksi 1 sampai tabung reaksi 5) kemudian meng%omogenkann(a#
meng%omogenkann(a# #
# iamiambil larubil larutan dartan dari tabuni tabung reaksi 1 sebang reaksi 1 seban(a(ak 1ml dengk 1ml dengan mengan menggungunakaakan pipetn pipet olume) kemudian memasukkann(a ke dalam tabung reaksi 2 (ang tela% berisi olume) kemudian memasukkann(a ke dalam tabung reaksi 2 (ang tela% berisi ml air isiologi#
ml air isiologi# g#
g# iiululanangi 'ara ker$gi 'ara ker$a a sasampmpai dengai dengan taban tabunung g reareaksksi i ke 5 ke 5 (a(ang telang tela% % beberirisi air si air isiologi seban(ak ml#
isiologi seban(ak ml# %#
%# ibibuka 'uka 'a&aa&an petn petri deri dengangan pon posisi dsisi dekat ekat apiapi## i#
i# iambil laruiambil larutan dartan dari tabuni tabung pengg pengen'en'eran 8 terakeran 8 terak%ir den%ir dengan mengan mengguggunaknakan pipean pipett o
olulumeme) ) seseteltela% a% ititu u mememamasusukkkkan an ke ke dadalam lam 'a'a&a&an n pepetritri) ) kekemumudidian an setsetelaela%% me
memamasusukkkkan an lalarurutatan n ke ke dadalalam m 'a'a&a&an n pepetrtri i lalalu lu memenanambmba%a%kakan n lalarurutatann griseoulin seban(ak 1ml dan menamba% media "A 15ml# Pada saat menamba% griseoulin seban(ak 1ml dan menamba% media "A 15ml# Pada saat menamba% larutan) posisi 'a&an petri berada tepat di dekat api#
larutan) posisi 'a&an petri berada tepat di dekat api# $#
$# iputar iputar 'a&an 'a&an petri petri tersebut tersebut seara% seara% angka angka seban(ak seban(ak kali) kali) lalu lalu mendiamkanmendiamkan media sampai memadat# -etela% memadat) praktikan melapisi tepi 'a&an petri media sampai memadat# -etela% memadat) praktikan melapisi tepi 'a&an petri menggunakan 'ling&arp#
menggunakan 'ling&arp# k#
k# iambiambil larutail larutan dari tabn dari tabung reakung reaksi pengsi pengen'eran 8 ten'eran 8 terak%ierak%ir seban(r seban(ak 1ml paak 1ml pada tiapda tiap tabung reaksi dengan menggunakan pipet olume# Kemudian memasukkan ke tabung reaksi dengan menggunakan pipet olume# Kemudian memasukkan ke
dalam 'a&an petri dengan posisi di dekat api# -etela% itu menamba%kan larutan dalam 'a&an petri dengan posisi di dekat api# -etela% itu menamba%kan larutan 'loraeni'ol seban(ak 1ml dan
'loraeni'ol seban(ak 1ml dan menamba%kan media PA 15ml#menamba%kan media PA 15ml# 2#
2# PrPrakaktitikakan n mememmututar ar 'a'a&a&an n pepetrtri i sesearara% a% anangkgka a sesebaban(n(ak ak kakali li lalalulu mendiamkan media sampai memadat# -etela% memadat praktikan melapisi tepi mendiamkan media sampai memadat# -etela% memadat praktikan melapisi tepi 'a&an petri menggunakan 'ling&arp#
'a&an petri menggunakan 'ling&arp# Isolasi bakteri dari sampel tana% kebun te% Isolasi bakteri dari sampel tana% kebun te% a#
a# isisiapiapkan kan alat alat dan dan ba%ba%an pan prakraktiktikum#um# b#
b# isterilkan alat praktikum) me$a praktikum) dan tangan#isterilkan alat praktikum) me$a praktikum) dan tangan# '#
'# ibukibuka pia pipet pet olumolume dee dengan ngan posisi posisi dekat dekat dengadengan apn api#i# d
d## iippaasasannggkkaan n ppaadda a ppoommppa a ((anang g lluubbaannggn(n(a a ssuuddaa% % ddiiststeerrililkkaan n ddeennggaann men(emprotkan alko%ol# Mengambil sampel tana% kebun te%
men(emprotkan alko%ol# Mengambil sampel tana% kebun te% seban(ak 1 gram#seban(ak 1 gram# e#
e# imimasuasukkakkan tana% kebn tana% kebun te% sebaun te% seban(an(ak 1 k 1 gragram kedalm kedalam tabuam tabung reakng reaksi (ang telsi (ang tela%a% berisi air isiologi seban(ak ml) kemudian meng%om
berisi air isiologi seban(ak ml) kemudian meng%omogenkann(a#ogenkann(a# #
# imimasuasukkakkan tana% ken tana% kebun tebun te% seban% seban(a(ak 1 k 1 gragram kedam kedalam tablam tabung reaung reaksi (aksi (ang telang tela%% berisi air isiologi seban(ak ml) kemudian meng%om
berisi air isiologi seban(ak ml) kemudian meng%omogenkann(a#ogenkann(a# g#
g# iambiambil larutan til larutan tabung rabung reaksi sebeaksi seban(ak 1an(ak 1ml kedaml kedalam tabulam tabung reaksi 2 ng reaksi 2 (ang be(ang berisirisi ml air isiologi)
ml air isiologi) kemudian meng%omogenkann(kemudian meng%omogenkann(a#a# %#
%# iuiulanlangi pegi per'or'obaan sbaan sampampai penai pengengen'era'eran ke 1n ke 100## i#
i# iibubuka ka 'a'a&a&an n pepetrtri i dedengngan an poposisisi si dedekakat t apapi) i) sesetetelala% % ititu u memengngamambibil l lalarurutatann pengen'er 8 terak%ir seban(ak 1ml dengan menggunakan pipet olume) kemudian pengen'er 8 terak%ir seban(ak 1ml dengan menggunakan pipet olume) kemudian memasukkan kedalam 'a&an petri dengan menamba%kan larutan '%rolaeni'ol memasukkan kedalam 'a&an petri dengan menamba%kan larutan '%rolaeni'ol seban(ak 1ml dan menamba%kan media PA 1ml#
seban(ak 1ml dan menamba%kan media PA 1ml#
8# Praktikan memutar 'a&an petri dengan ara% angka seban(ak kali) kemudian 8# Praktikan memutar 'a&an petri dengan ara% angka seban(ak kali) kemudian me
menunungnggu gu memedidia a samsampapai i mememamadadat) t) setsetelela% a% mememamadat dat 'a&'a&an an pepetri tri didilaplapisisii menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an petri#
menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an petri# a#
a# MeMengngamambibil l lalarurutan dari tan dari tatabubung ng pepengngn'n'er er 8 8 teterakrak%i%ir r sebseban(an(ak ak 1m1ml l tiatiap p tatabubungng reak
reaksi si dendengan gan menmengguggunaknakan an pippipet et ololumeume# # KemKemudiudian an memmemasuasukkakkan n larlarutanutan griseoulin 15ml#
griseoulin 15ml# b#
b# Praktikan memutar Praktikan memutar 'a&an petri 'a&an petri dengan ara% dengan ara% angkan seban(ak angkan seban(ak kali# kali# KemudianKemudian me
menunungnggu gu memedidia a samsampapai i mememamadadat) t) setsetelela% a% mememamadat dat 'a&'a&an an pepetri tri didilaplapisisii menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an petri#
1.
1. DADATTA A HASIHASIL P0NL P0N/AMA/AMATTANAN
Praktikum isolasi bakteri %ari ini menggunakan dua ba%an) (aitu ba%an Praktikum isolasi bakteri %ari ini menggunakan dua ba%an) (aitu ba%an 'air (ang merupakan air dari limba% tebu) dan ba%an padat) (aitu tana% (ang 'air (ang merupakan air dari limba% tebu) dan ba%an padat) (aitu tana% (ang diambil dari perkebunan te%#
diambil dari perkebunan te%# 1#
1# PraPraktiktikum kali ini mempelkum kali ini mempela$ara$ari i tententantang g isoisolasi mikrlasi mikrooroorganganismisme e dardari i ba%ba%an air an air lim
limba% ba% tebtebu# u# IsoIsolasi lasi kali kali ini ini menmengidgidententiikiikasi asi adaadan(a n(a mikmikrooroorgrganisanisme me berberupaupa kapang dan bakteri# Isolasi menggunakan teknik pengen'eran bertingkat# !ntuk kapang dan bakteri# Isolasi menggunakan teknik pengen'eran bertingkat# !ntuk mengisolasi digunakan antibiotik berupa griseoulin sebagai anti kapang dan mengisolasi digunakan antibiotik berupa griseoulin sebagai anti kapang dan 'lora%meni'ol sebagai anti bakteri# Pada ta%ap ini $uga menggunakan "A dan 'lora%meni'ol sebagai anti bakteri# Pada ta%ap ini $uga menggunakan "A dan PA sebaga
PA sebagai i medmedia ia tumtumbu% bu% mikmikrooroorgarganisnisme# me# amampurpuran an larularutan tan (an(ang g telatela%% dien'erkan) "A dan antibiotik griseoulin sebelum memadat ber&arna kuning dien'erkan) "A dan antibiotik griseoulin sebelum memadat ber&arna kuning $erno%# -etela% memadat ber&arna puti% keru%# -edangkan 'ampuran larutan (ang $erno%# -etela% memadat ber&arna puti% keru%# -edangkan 'ampuran larutan (ang tela% dien'erkan) PA dan antibiotik 'lora%meni'ol sebelum memadat ber&arna tela% dien'erkan) PA dan antibiotik 'lora%meni'ol sebelum memadat ber&arna kun
kuning ing tua tua dan dan setsetela% ela% memmemadaadat t berber&arn&arna a kunkuning ing benbeninging# # MedMedia ia diddidiamiamkankan selama 1 %ari) $ika ber%asil maka akan tumbu% $enis kapang=bakteri#
selama 1 %ari) $ika ber%asil maka akan tumbu% $enis kapang=bakteri# 2#
2# IsoIsolasi mikrlasi mikroba pada sampoba pada sampel el tantana% kebun te% menga% kebun te% menggungunakaakan n tekteknik pengnik pengen'en'eraneran bertingkat
bertingkat dengan dengan tu$uan tu$uan memperke'il memperke'il atau atau mengurangi mengurangi $umla% $umla% mikroba mikroba (ang(ang tersuspensi dalam 'airan dengan perbandingan 1: untuk sampel dan pengen'eran tersuspensi dalam 'airan dengan perbandingan 1: untuk sampel dan pengen'eran pertama
pertama dan dan selan$utn(a# selan$utn(a# alam alam praktikum praktikum ini ini terdapat terdapat penamba%anpenamba%an '%
'%lolora%ra%mmenieni'o'ol l papada da memedidia a PPA A (a(ang ng beberurungngsi si sebsebagagai ai ananti ti babaktkteri eri dadann penamba%an griseoulin pada media "A
penamba%an griseoulin pada media "A (ang beungsi sebagai anti kapang#(ang beungsi sebagai anti kapang# Praktikum ini alat dan ba%an (ang digunakan %arus dalam keadaan steril agar Praktikum ini alat dan ba%an (ang digunakan %arus dalam keadaan steril agar biakan
biakan mikroba mikroba terbebas terbebas dari dari kontaminasi kontaminasi dan dan %asiln(a %asiln(a optimal# optimal# PenggunaanPenggunaan bunsen
bunsen (ang (ang men(ala men(ala bertu$uan bertu$uan untuk untuk men$aga men$aga alat alat dan dan ba%an ba%an agar agar tetap tetap steril#steril# Pengambilan mikroba diambil dari 8 tabung pengen'eran terak%ir (aitu 1
Pengambilan mikroba diambil dari 8 tabung pengen'eran terak%ir (aitu 100;);) 1100)) 1
/.
/. DODOKUKUM0M0NTNTAASISI 1#
1# MeMedidia La Limimbaba% a% air ir 33eebubu "o
"o GambarGambar keteranganketerangan
1
1## MMeenn((iiaappkkaan n aallaat t ddaan n bbaa%%aan n pprraakkttiikkuumm
2
2## MMeenn((eetteerriillkkaan an allaat pt prraakkttiikkuumm) m) mee$$aa praktikum dan tangan
praktikum dan tangan
8
8## MMeemmbbuukka a ppiippeet t oolluumme e ddeennggaan n ppoossiissii dek
dekat at apiapi) ) kemkemudiaudian n memmemasaasangkngkan an padpadaa pompa
pompa (ang (ang lubangn(a lubangn(a suda% suda% disterilkandisterilkan dengan men(emprotkan alko%ol
dengan men(emprotkan alko%ol
9#
9# MemMemasuasukkkkan an samsampepel l aiair r limlimbaba% % papada da 55 tabung reaksi (ang tela% terisi dengan air tabung reaksi (ang tela% terisi dengan air isiologi seban(ak ml pada tabung reaksi 1 isiologi seban(ak ml pada tabung reaksi 1 ssamamppaai i ttaabbuunng g rreeaakksi si 55) ) kkememuuddiiaann meng%omogenkann(a
meng%omogenkann(a 5
5## MMeennggaammbbiil l llaarruuttaan n ddaarri i ttaabbuunng g rreeaakkssi i 11 seban(ak 1ml dengan menggunakan pipet seban(ak 1ml dengan menggunakan pipet o
olulumme) e) kekemmududiian an mmememasasukukkakannnn((aa kedalam tabung reaksi 2 (ang tela% berisi kedalam tabung reaksi 2 (ang tela% berisi ml air isiologi
ml air isiologi 6
6## MMeenngguullaannggi i kkeerr$$a a ssaammppaai i ddeennggaan n ttaabbuunngg reaksi ke 5 (ang tela% berisi air isiologi reaksi ke 5 (ang tela% berisi air isiologi seban(ak ml
;
;## MMeemmbbuukka a ''aa&&aan n ppeettrri i ddeennggaan n ppoossiissi i ddeekkaatt api
api
## MMeennggaammbbiil l llaarruuttaan n ddaarri i ttaabbuunngg pengen'eran
pengen'eran 8 8 terak%ir terak%ir dengandengan me
mengnggugunanakakan n pipipepet t oolumlume) e) sesetetela% la% ituitu m
mememasasuukkkkan an kke e ddalalam am 'a'a&a&an n ppetetrri)i) kemudian setela% memasukkan larutan ke kemudian setela% memasukkan larutan ke da
dalalam m 'a'a&a&an n pepetrtri i lalalu lu memenanambmba%a%kakann la
larurutatan n grgriseiseooululiin n sesebaban(n(ak ak 1m1ml l dadann me
menanammbaba% % memedidia a "A "A 1515mlml# # PaPada da sasaatat me
menamnamba% ba% lalarurutatan) n) poposissisi i 'a'a&a&an n pepetrtrii berada tepat di dekat api
berada tepat di dekat api
## MMeemmuuttaar r ''aa&&aan n ppeettrri i tteerrsseebbuut t sseeaarraa% % aannggkkaa seban(ak kali) lalu mendiamkan media seban(ak kali) lalu mendiamkan media sa
sammppai ai mmememadadatat# # -e-etetelala% % mmememadadatat)) praktikan
praktikan melapisi melapisi tepi tepi 'a&an 'a&an petripetri menggunakan 'ling&arp
menggunakan 'ling&arp 1
100## MMeennggaammbbiil l llaarruuttaan n ddaarri i ttaabbuunng g rreeaakkssii pengen'eran
pengen'eran 8 8 terak%ir terak%ir seban(ak seban(ak 1ml 1ml padapada tia
tiap p tabtabung ung reareaksi ksi dendengan gan menmengguggunaknakanan pipet
pipet olume# olume# Kemudian Kemudian memasukkan memasukkan keke dalam 'a&an petri dengan posisi di dekat dalam 'a&an petri dengan posisi di dekat ap
api# i# -e-eteltela% a% ititu u memenamnamba%ba%kakan n lalarurutantan ''lloorraaeennii''ool l sseebbaann((aak k 11mml l ddaann menamba%kan media PA 15ml
menamba%kan media PA 15ml 1
111## PPrraakkttiikkaan n mmeemmuuttaar r ''aa&&aan n ppeettrri i sseeaarraa%% angka seban(ak kali lalu mendiamkan angka seban(ak kali lalu mendiamkan media sampai memadat# -etela% memadat media sampai memadat# -etela% memadat praktikan
praktikan melapisi melapisi tepi tepi 'a&an 'a&an petripetri menggunakan 'ling&arp
1
122## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,8,8
1
188## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,9,9
1
199## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,5,5
1
155## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan PA 10
dan larutan PA 10,8,8
1
166## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan PA 10
1
1;;## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m lliimmbbaa% % aaiir r tteebbuu dan larutan PA 10
dan larutan PA 10,5,5
2#
2# MeMedidia 3a 3aanana% K% Kebebun un 3e3e%% "o
"o GambarGambar KeteranganKeterangan
1
1## MMeenn((iiaappkkaan n aallaat t ddaan n bbaa%%aan n pprraakkttiikkuumm
2
2## MMeenn((eetteerriillkkaan an allaat pt prraakkttiikkuumm) m) mee$$aa praktikum dan tangan
praktikum dan tangan
8
8## MMeemmbbuukka a ppiippeet t oolluumme e ddeennggaan n ppoossiissii dekat dengan api
dekat dengan api
9
9## MMeemmaassaannggkkaan pn paadda pa poommppa (a (aanngg lu
lubabangngn(n(a a susudada% % didiststererililkakan n dedengnganan me
men(n(empemprorotktkan an alalkoko%o%ol# l# MeMengngamambibill sampel tana% kebun te% seban(ak 1 gram sampel tana% kebun te% seban(ak 1 gram 5
5## MMeemmaassuukkkkaan n ttaannaa% % kkeebbuun n ttee% % sseebbaann((aak k 11 gra
gram m kedkedalaalam m tabtabung ung reareaksi ksi (an(ang g teltela%a% berisi
berisi air air isiologi isiologi seban(ak seban(ak ml)ml) kemudian
6
6## MMeennggaammbbiil l llaarruuttaan n ttaabbuunng g rreeaakkssii seb
seban(an(ak ak 1ml 1ml kedkedalam tabunalam tabung g reareaksi ksi 22 (an
(ang g berberisi isi ml ml air air isiisioloologi) gi) kemkemudiudianan meng%omogenkann(a
meng%omogenkann(a ;
;## MMeenngguullaannggi i ppeerr''oobbaaaan n ssaammppaaii pengen'eran ke 1
pengen'eran ke 1 00
## MMeemmbbuukka a ''aa&&aan n ppeettrri i ddeennggaan n ppoossiissi i ddeekkaatt ap
api) i) sesetetelala% % ititu u mmenengagammbibil l lalarurutatann pengen'er 8 terak%ir seban(ak 1ml dengan pengen'er 8 terak%ir seban(ak 1ml dengan
men
mengguggunaknakan an pippipet et ololumeume) ) kemkemudiudianan memasukkan kedalam 'a&an petri dengan memasukkan kedalam 'a&an petri dengan me
menanammbaba%k%kan an lalarurutatan n '%'%rorolalaeenini'o'oll seb
seban(an(ak ak 1ml 1ml dan dan menmenambamba%ka%kan an medmediaia PA 1ml
PA 1ml
## PPrraakkttiikkaan n mmeemmuuttaar r ''aa&&aan n ppeettrri i ddeennggaann ara% angka seban(ak kali) kemudian ara% angka seban(ak kali) kemudian m
menenuungngggu u mmededia ia sasammpapai i mmememadadatat)) se
setetela% la% mememamadadat t 'a'a&a&an n pepetrtri i didilalapipisisi menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an petri
petri 1
100## MMeennggaammbbiil l llaarruuttaan n ddaarri i ttaabbuunng g ppeennggnn''eer r 88 terak%ir seban(ak 1ml tiap tabung reaksi terak%ir seban(ak 1ml tiap tabung reaksi de
dengngan an memengnggugunanakakan n pipipepet t oolulumeme## K
Keemmuuddiiaan n mmeemmaassuukkkkaan n llaarruuttaann griseoulin 15ml
griseoulin 15ml 1
111## PPrraakkttiikkaan n mmeemmuuttaar r ''aa&&aan n ppeettrri i ddeennggaann ara% angkan seban(ak kali# Kemudian ara% angkan seban(ak kali# Kemudian m
menenuungngggu u mmededia ia sasammpapai i mmememadadatat)) se
setetela% la% mememamadadat t 'a'a&a&an n pepetrtri i didilalapipisisi menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an menggunakan 'ling&arp pada tepi 'a&an petri
1
122## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,;,;
1
188## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,,
1
199## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan "A 10
dan larutan "A 10,,
1
155## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan PA 10
dan larutan PA 10,;,;
1
166## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan PA 10
1
1;;## 44aassiil l llaappoorraan n pprraakkttiikkuum m ttaannaa% % kkeebbuun n ttee%% dan larutan PA 10
dan larutan PA 10,,
H.
H. P0P0MMBABAHAHASASANN
Isolasi bakteri merupakan pemisa%an mikroba dari lingkungann(a di alam Isolasi bakteri merupakan pemisa%an mikroba dari lingkungann(a di alam dan
dan menmenumbumbu%ku%kannann(a (a sebsebagaagai i biabiakan kan murmurni ni daldalam am medmedium ium buabuatantan# # IsolaIsolasisi bakteri
bakteri ini ini memerlukan memerlukan ban(ak ban(ak ketelitian# ketelitian# 3e3erlebi% rlebi% da%ulu da%ulu kita kita %arus%arus men
mengusgusa%aa%akan kan agaagar r semsemua ua alatalat, , alat alat (a(ang ng akaakan n digdigunaunakan kan untuntuk uk penpengerger$aan$aan medium dan penger$aan inokulasi benar,benar steril# -terilisas
medium dan penger$aan inokulasi benar,benar steril# -terilisas i untuk meng%indarii untuk meng%indari ter
ter$adi$adin(a n(a konkontamtaminainasi) si) (ai(aitu tu masumasukn(kn(a a mikmikrobroba a lain lain (an(ang g tidtidak ak diidiinginginkankann se%ingga biakan (ang tumbu% dalam medium adala% benar, benar biakan murni se%ingga biakan (ang tumbu% dalam medium adala% benar, benar biakan murni .&id
.&id$osepu$oseputro) tro) 1010/#Pada praktikum ini /#Pada praktikum ini isolasi mikroba isolasi mikroba menggmenggunakunakan an 'ara'ara pengen'eran
pengen'eran dan dan penuangan# penuangan# Pengen'eran Pengen'eran bertu$uan bertu$uan untuk untuk memperke'il memperke'il atauatau mengurangi $umla% mikroba (ang tersuspensi dalam 'airan# Pengen'eran limba% mengurangi $umla% mikroba (ang tersuspensi dalam 'airan# Pengen'eran limba% ai
air r tebtebu u didilalakukukakan n %i%ingnggaga 1010−−55 dan pengedan pengen'en'eran ran (an(ang g sudsuda% a% benbening padaing pada li
limbmba% a% aiair r tetebu bu (a(aituitu 1010−−33 sasammppaaii 1010−−55 ) ) se%se%ingingga ga penpengengen'era'eran n terstersebuebutt di
digugunanakakan n ununtutuk k memedidia# a# -e-edadangngkakan) n) pepengngenen'er'eran an papada da tatanana% % kekebubun n tete%% dien'erkan sampai pengen'eran
dien'erkan sampai pengen'eran 1010−−99 dan (ang digunakan sebagai media (aitudan (ang digunakan sebagai media (aitu pengen'eran
pengen'eran 1010−−77
sampai
sampai1010−−99 #-e#-elanlan$ut$utn(n(a a melamelakukkukan an tekteknik nik penpenanaanamanman dengan pour plate# Pengen'eran sampel,sampel tersebut di'ampurkan dengan "A dengan pour plate# Pengen'eran sampel,sampel tersebut di'ampurkan dengan "A
da
dan n PPA A serserta ta lalarurutan tan GrGriseiseooululiin n dadan n larlarututan an %l%lororamamp%p%eneni'i'olol) ) larlarututanan Gri
Griseoseoululin in dan dan larlarutautan n %l%loraoramp%mp%enieni'ol 'ol berberunungsi gsi sebsebagaagai i antanti i bakbakterteri#i# Kemudian 'a&an petri diputar dan didiamkan %ingga men$adi padat#
Kemudian 'a&an petri diputar dan didiamkan %ingga men$adi padat# II.. KK00SSIIMMPPUULLAANN
*erdasarkan %asil pengamatan) dapat disimpulkan sebagai berikut : *erdasarkan %asil pengamatan) dapat disimpulkan sebagai berikut : 1#
1# Pada penPada pengen'eragen'eran bertinn bertingkat) tigkat) tingkat pengkat pengen'ngen'eran tiap sameran tiap sampel berbpel berbeda tergeda tergantungantung seberapa pekat atau $erni% $erni% sampel (ang di dapat
seberapa pekat atau $erni% $erni% sampel (ang di dapat 2#
2# 33aanana% % dadan n aiair r memerurupapakakan n sasala% la% sasatu tu memedidia a peperkrkemembabangngbibiakakan an mimikrkroboba a ((angang alami
alami 8#
8# 33eeknknik ik isoisolaslasi i babaktkteri eri dadan n kakapapang ng (a(ang ng beberasrasal al dadari ri tatanana% % (a(ang ng sesesusuai ai (a(aitituu dengan menggunakan teknik pengen'eran bertingkat dengan teknik penanaman dengan menggunakan teknik pengen'eran bertingkat dengan teknik penanaman pour plate
pour plate 9#
9# PenPengengen'era'eran n berbertintingkagkat t berberunungsi untuk mempgsi untuk memperkerke'il atau e'il atau menmengurgurangangi i $um$umla%la% mikroba (ang tersuspensi dalam 'airan
mikroba (ang tersuspensi dalam 'airan 5#
5# Media Media "A "A diberi diberi griseogriseouliulin karen karena sebna sebagai anagai anti kapti kapangang 6#
DA1TAR PUSTAKA DA1TAR PUSTAKA
&id$oseputro#1#
&id$oseputro#1# DasarDasar Mikro DasarDasar Mikrobiologibiologi#<akarta:$ambatan##<akarta:$ambatan# Pu$iati#2012#
