A.
A. JUJUDUDUL PEL PERCRCOBOBAAAANN
PENENTUAN KADAR ASAM AMINO DALAM SAMPEL PENENTUAN KADAR ASAM AMINO DALAM SAMPEL B.
B. HARHARI, TI, TAANGGNGGAL PAL PERCERCOBAOBAANAN SELASA, 18 OKTOBER 2016
SELASA, 18 OKTOBER 2016 C.
C. TUTUJUJUAN PEAN PERCRCOBOBAAAANN
Menentukan asam amin !an" te#$a%at $a&am sam%e& $en"an k#mat"#a'i ke#tas Menentukan asam amin !an" te#$a%at $a&am sam%e& $en"an k#mat"#a'i ke#tas D.
D. DADASASAR TR TEOEORIRI
P#tein !an" $itemukan ka$an"(ka$an" )e#kn*u"asi $en"an mak#m&eku& P#tein !an" $itemukan ka$an"(ka$an" )e#kn*u"asi $en"an mak#m&eku& atau mik#m&eku& se%e#ti &i%i$, %&isaka#i$a $an mun"kin 's'at+ P#tein te#kn*u"asi atau mik#m&eku& se%e#ti &i%i$, %&isaka#i$a $an mun"kin 's'at+ P#tein te#kn*u"asi !an
!an" " $ik$ikenaena& & antanta#a a#a &ai&ain n nuknuk&e&e%#%#teitein, n, 's''s'%#%#tetein, in, metmeta&a&%#%#teitein, n, &i%&i%%#%#tetein,in, '&a%#tein $an "&ik%#tein+ P#tein !an" $i%e#&ukan #"anisme $a%at $ik&asi'ikasikan '&a%#tein $an "&ik%#tein+ P#tein !an" $i%e#&ukan #"anisme $a%at $ik&asi'ikasikan men
men*a$*a$i i $ua $ua "&"&n"n"an an utautama, ma, ia&aia&a- - %e#%e#tamtama. a. %#%#tein tein se$se$e#-e#-anaana, , !ai!aitu tu %#%#tein tein !an!an"" a%a)i&a te#-i$#&isis -an!a men"-asi&kan asam amin, $an ke$ua %#tein te#kn*u"asi, a%a)i&a te#-i$#&isis -an!a men"-asi&kan asam amin, $an ke$ua %#tein te#kn*u"asi, !ai
!aitu tu %#%#tein tein !an!an" " $a&a$a&am m -i$-i$#&#&isis isis ti$ti$ak ak -an-an!a !a menmen"-a"-asi&ksi&kan an asam asam amiamin, n, tetateta%i%i men"-asi&kan *u"a km%nen #"anik atau%un
men"-asi&kan *u"a km%nen #"anik atau%un km%nen an#"anik !an" $ise)ut /"u"uskm%nen an#"anik !an" $ise)ut /"u"us %#st-eti Suma#n, $kk+, 20023+
%#st-eti Suma#n, $kk+, 20023+
Pa$a umumn!a asam amin $i%e#&e- se)a"ai -asi& -i$#&isis %#tein, )aik Pa$a umumn!a asam amin $i%e#&e- se)a"ai -asi& -i$#&isis %#tein, )aik men""unakan en4im mau%un asam+ Den"an a#a ini $i%e#&e- am%u#an )e#maam( men""unakan en4im mau%un asam+ Den"an a#a ini $i%e#&e- am%u#an )e#maam( maam asam amin $an untuk menentukan *enis asam amin mau%un kuantitas masin"( maam asam amin $an untuk menentukan *enis asam amin mau%un kuantitas masin"( ma
masinsin" " asaasam m amaminin %e%e#&#&u u $i$ia$a$akakan an %e%emimisa-sa-an an anantata#a #a asaasam(m(asasam am amaminin tete#se#se)u)utt Pe$*ia$i, 1553+
Pe$*ia$i, 1553+ Asa
Asam m amaminin a$a$a&aa&a- - sesem)m)a#aa#an" n" sensen!a!a7a 7a ##"a"aninik k !a!an" n" mememimi&ik&iki i "u"u"u"uss 'un"si
'un"sina& ka#)ksi& (OO93 na& ka#)ksi& (OO93 $an $an amina )iasan!a (N923+ amina )iasan!a (N923+ Da&am )ikimia se#in"ka&iDa&am )ikimia se#in"ka&i %en"e#tiann!a
%en"e#tiann!a $i%e#sem%it: $i%e#sem%it: ke$uan!a ke$uan!a te#ikat te#ikat %a$a %a$a satu satu atm atm ka#)n ka#)n 3 3 !an" !an" samasama $ise)ut atm ;a&'a; atau <3+ =u"us ka#)ksi& mem)e#ikan si'at asam $an "u"us amina $ise)ut atm ;a&'a; atau <3+ =u"us ka#)ksi& mem)e#ikan si'at asam $an "u"us amina mem)e#ikan si'at )asa+ Da&am )entuk &a#utan, asam amin )e#si'at am'te#ik: en$e#un" mem)e#ikan si'at )asa+ Da&am )entuk &a#utan, asam amin )e#si'at am'te#ik: en$e#un" men*a$i asam %a$a &a#utan )asa $an men*a$i )asa %a$a &a#utan asam+ Pe#i&aku ini te#*a$i men*a$i asam %a$a &a#utan )asa $an men*a$i )asa %a$a &a#utan asam+ Pe#i&aku ini te#*a$i ka#
sen!a7a !an" %a&in" )an!ak $i%e&a*a#i ka#ena sa&a- satu 'un"sin!a san"at %entin" $a&am sen!a7a !an" %a&in" )an!ak $i%e&a*a#i ka#ena sa&a- satu 'un"sin!a san"at %entin" $a&am #"a
#"anisme, !aitu nisme, !aitu se)a"ase)a"ai i %en!%en!usun %#tein+St#uusun %#tein+St#uktu# asam ktu# asam amin a$a&a- amin a$a&a- se)a"ase)a"ai i )e#iku)e#ikutt Pe$i*a*i > Su%#!anti, 2005 3+
Pe$i*a*i > Su%#!anti, 2005 3+ A$a
A$a )e))e)e#a%e#a%a a metmet$e $e anaana&isi&isis s asam asam amiamin, n, mimisa&n!sa&n!a a metmet$e $e "#a"#aimimet#iet#i,, ka&
ka&#im#imet#iet#i, , mikmik#)#)i&i&"i"i, , k#k#matmat"#"#a'i a'i $an $an e&ee&ekt#kt#'#'#esisesis+ + Sa&Sa&a- a- satsatu u metmet$e $e !an!an"" )an!ak
)an!ak mem%e#&e- mem%e#&e- %en"em)an"an %en"em)an"an ia&a- ia&a- met$e met$e k#mat"#a'i+ k#mat"#a'i+ Maam(maamMaam(maam k#
k#matmat"#"#a'i a'i ia&aia&a- - k#k#matmat"#"#a'i a'i ke#ke#tas, tas, k#k#metmet"#"#a'i a'i &a%&a%is is ti%iti%is s $an $an k#k#matmat"#"#a'ia'i %enuka# in Pe$*ia$i, 1553+
%enuka# in Pe$*ia$i, 1553+ K#
K#mamatt"#a"#a'i 'i meme&i&i)a)atktkan an %e%emimisa-sa-an an tete#-#-a$a$a% a% amam%u%u#an #an )e)e#$#$asaasa#k#kanan %e#)e$aan(%e#)e$aan
%e#)e$aan(%e#)e$aan te#tentu te#tentu !an" !an" $imi&iki $imi&iki &e- &e- sen!a7an!a+ sen!a7an!a+ Pe#)e$aan Pe#)e$aan !an" !an" $a%at$a%at $iman'aatkan me&i%uti ke&a#utan $a&am )e#)a"ai %e&a#ut se#ta si'at %&a#+ K#mat"#a'i $iman'aatkan me&i%uti ke&a#utan $a&am )e#)a"ai %e&a#ut se#ta si'at %&a#+ K#mat"#a'i )iasan!a
)iasan!a te#$i#i te#$i#i $a#i $a#i 'ase 'ase $iam $iam 'ase 'ase stasine#3 stasine#3 $an 'a$an 'ase se "e#ak "e#ak 'ase 'ase m)i&e3+ m)i&e3+ ?ase ?ase "e#ak "e#ak mem)a7a km%nen suatu am%u#an me&a&ui 'ase $iam, $an 'se $iam akan )e#ikatan mem)a7a km%nen suatu am%u#an me&a&ui 'ase $iam, $an 'se $iam akan )e#ikatan $en"an km%nen te#se)ut $en"an a'initas !an" )e#)e$a()e$a+ @enis k#mat"#a'i !an" $en"an km%nen te#se)ut $en"an a'initas !an" )e#)e$a()e$a+ @enis k#mat"#a'i !an" )e#&ainan
)e#&ainan )e#"antun" )e#"antun" %a$a %a$a %e#)e$aan %e#)e$aan *enis *enis 'ase, 'ase, namun namun semua semua *enis *enis k#mat"#a'ik#mat"#a'i te#se)ut )e#$asa# %a$a asas !an" sama B#esnik, 2003+
te#se)ut )e#$asa# %a$a asas !an" sama B#esnik, 2003+ Pem
Pemisisa-aa-an n asaasam m amaminin $e$en"n"an an memett$e $e k#k#mmatat"#"#a'i a'i inini i $i$i$a$asasa#i #i &&e- e-kemam%uan suatu *enis asam amin te#&a#ut $a&am suatu am%u#an &a#utan te#tentu %a$a kemam%uan suatu *enis asam amin te#&a#ut $a&am suatu am%u#an &a#utan te#tentu %a$a 'ase stasine#+ Untuk mem%e#&e- %emisa-an asam amin !an" )aik $a%at $i"unakan 'ase stasine#+ Untuk mem%e#&e- %emisa-an asam amin !an" )aik $a%at $i"unakan $ua 'ase %e&a#ut, misa&n!a %asan"an 'en&( ai#, n(Butan&( ai#, atau $en"an ti"a 'ase $ua 'ase %e&a#ut, misa&n!a %asan"an 'en&( ai#, n(Butan&( ai#, atau $en"an ti"a 'ase %e&a#ut
%e&a#ut te#se)ut te#se)ut $imana $imana setia% setia% *enis *enis asam asam amin amin mem%un!ai mem%un!ai ke'isien ke'isien %a#tisi, %a#tisi, ke#taske#tas $i
$i"u"unanakakan n se)se)a"a"ai ai %e%en$n$ukukunun" " ai#ai#+ + amam%u%u#an #an kkm%m%nnen en !a!an" n" akakan an $i$i%i%isasa-k-kanan $item%atkan %a$a 'asa stasine# 4at %a$at3, kemu$ian $i-u)un"kan $en"an 'ase ai#, $item%atkan %a$a 'asa stasine# 4at %a$at3, kemu$ian $i-u)un"kan $en"an 'ase ai#, mak
maka a 'ass'asse e aiai# # akaakan n me&ame&a&ui 'ase stasi&ui 'ase stasine# ne# samsam)i& mem))i& mem)a7a km%a7a km%nenen n te#te#se)use)ut,t, $imana %e#)an$in"an kee%atan %e#%in$a-an km%nen $en"an kee%atan %e#mukaan $imana %e#)an$in"an kee%atan %e#%in$a-an km%nen $en"an kee%atan %e#mukaan
'asa m)i&eai#3 me#u%akan $asa# untuk men"i$enti'ikasikan km%nen !an" $i%isa-kan+ Pe#)an$in"an kee%atan ini $isin"kat $en"an R ' Rate O' ?#nt3 Tim Dsen, 2013+
Menu#ut Ak)a# 20113, Maam(maam k#mat"#a'i:
1
K#mat"#a'i La%is Ti%is !aitu k#mat"#a'i !an" men""unakan &em%en" "e&as atau a&umunium !an" $i&a%isi $en"an &a%isan ti%is a&umina, si&ika "e&, atau )a-an se#)uk &ainn!a+ K#mat"#a'i &a%is ti%is %a$a umumn!a $i*a$ikan met$e %i&i-an %e#tama %a$a %emisa-an $en"an k#mat"#a'i+2
K#mat"#a'i Penuka# Inme#u%akan )i$an" k-usus k#mat"#a'i ai#an( ai#an+ Se%e#ti naman!a, s!stem ini k-usus $i"unakan untuk s%esies in+ Penemuan #esin sintetik $en"an si'at %enuka# in se)e&um %e#an" Dunia II te&a- $a%at men"atasi %emisa-an #umit $a#i &"am tana- *a#an"$an asam amin+ K#mat"#a'i Pen!a#in"an =e& me#u%akan %#ses %emisa-an $en"an "e& !an" te#$i#i $a#i m$i'ikasi $ekst#an(m&eku& %&isaka#i$a &inie# !an" mem%un!ai ikatan si&an"+ Ba-an ini $a%at men!e#a% ai# $an mem)entuk susunan se%e#ti sa#in"an !an" $a%at memisa-kan m&eku&(m&eku& )e#$asa#kan uku#ann!a+ M&eku& $en"an )e#at anta#a 100 sam%ai )e)e#a%a *uta $a%at $i%ekatkan $an $i%isa-kan+ K#mat"#a'i %e#measi "e& me#u%akan teknik se#u%a !an" men""unakan %&isti#ena !an" )e#"una untuk %emisa-an %&ime#+
Pe&aksaanan k#mat"#a'i &a%is ti%is men""unakan se)ua- &a%is ti%is si&ika atau a&umina !an" se#a"am %a$a se)ua- &em%en" "e&as atau &"am atau %&astik !an" ke#as+ Ni&ai R' untuk setia% 7a#na $i-itun" $en"an #umus se)a"ai )e#ikut Ak)a#, 20113 :
Rf =Jarak nodadari tempat pentotolan
Pen"uku#an itu $i&akukan $en"an men"uku# *a#ak $a#i titik %em)e#an"katan %usat 4na am%u#an a7a&3 ke "a#is $e%an %en"em)an" $an %usat #a%atan tia% 4na+ Ni&ai R' -a#us sama )aik %a$a $esen$in" mau%un asen$in"+ Ni&ai R' akan
menun*ukkan i$entitas suatu 4at !an" $ia#i, nt-n!a asam amin $an intensitas 4na itu $a%at $i"unakan se)a"ai uku#an knsent#asi $en"an mem)an$in"kan $en"an n$a( n$a stan$a#+
P#ses %en"e&ua#an asam mine#a& $a#i ke#tas $esa&tin"+ La#utan $item%atkan %a$a ke#tas $en"an men""unakan mik#%i%et %a$a *a#ak 2( m $a#i sa&a- satu u*un"ke#tas $a&am )entuk #etan "a#is -#i4nta&+ Sete&a- ke#tas $ike#in"kan, ia $i&etakan $i$a&am #uan"an !an" su$a- $i*enu-kan $en"an ai# atau $en"an %e&a#ut !an" sesuai+
Dist#i)usi $a%at te#*a$i anta#a 'ase ai# !an" te#se#a% sea#a stasine# $an 4at a&i# )e#"e#ak !an" kntak sea#a ka#i) $en"an 'ase ai# itu+ Da&am k#mat"#a'i %a#tisi ai#an, 'ase ai# !an" )e#"e#ak men"a&i# me&e7ati 'ase ai# stasine# !an" $ise#a%kan %a$a suatu %en$ukun", se$an"kan $a&am k#mat"#a'i &a%isan ti%is a$s#)enn!a
$isa&utkan %a$a &em%en" kaa atau &em)a#an %&astik+
K#mat"#a'i ke#tas $a%at $i&akukan $en"an satu $imensi atau $ua $imensi+ A%a)i&a maam km%nen ti$ak te#&a&u )an!ak maka )iasan!a a#a satu $imensi uku% memuaskan+ Teta%i, *ika -asi&n!a me#a"ukan $an ini )iasan!a $ise)a)kan ka#ena maam km%nenn!a te#&a&u )an!ak, maka a#a 2 $imensi se#in"ka&i $i%e#&ukan+ Untuk ini $i%e#&ukan 2 maam &a#utan e&uen, !an" satu $i%e#&ukan untuk ke satu a#a- $an !an" ke$ua untuk ke a#a- &ain !an" te"ak &u#us %a$a satu e&usi %e#tama, Sete&a- ke#tas k#mat"#a'in!a ke#in"+ Umumn!a ke#tas k#mat"#a'i !an" )e#uku#an C m a$a&a- !an" memenu-i s!a#at
9a#"a(-a#"a R ' untuk sen!a7a(sen!a7a mu#ni $a%at $i)an$in"kan $en"an -a#"a(-a#"a stan$a#+ Sen!a7a stan$a# )iasan!a memi&iki si'at(si'at kimia !an" mi#i% $en"an sen!a7a !an" $i%isa-kan %a$a k#mat"#am+ A$a%un 'akt#('akt# !an" mem%en"a#u-i -a#"a R ' !aitu Da! $an Un$e#7$, 20023:
1+ St#uku# kimia $a#i sen!a7a !an" se$an" $i%isa-kan+ 2+ Si'at $a#i %en!e#a%an $an $e#a*at akti'itasn!a+
+ Te)a& $an ke#ataan $a#i &a%isan %en!e#a%+ + Pe&a#ut $an $e#a*at kemu#niann!a3 'ase "e#ak+
+ De#a*at ke*enu-an $a#i ua% $a&am mana )e*ana %en"em)an"an !an" $i"unakan+ 6+ Teknik %e#)aan+
+ @um&a- u%&ikan !an" $i"unakan+ 8+ Su-u+
Ke&e)i-an %en""unaan k#mat"#a'i &a%is ti%is $i)an$in"kan $en"an k#mat"#a'i ke#tas ia&a- ka#ena $a%at $i-asi&kann!a %emisa-an !an" &e)i- sem%u#na, ke%ekaan !an" &e)i" tin""i, $an $a%at $i&aksanakan $en"a &e)i- e%at+Ban!ak %emisa-an !an" memakan 7aktu )e#*am(*am )i&a $ike#*akan $en"an k#mat"#a'i ke#tas, teta%i $a%at $i&aksanakan -an!a )e)e#a%a menit sa*a )i&a $ike#*akan $en"an TL A$nan, 1553+
Ke&e)i-an $a#i k#mat"#a'i &a%is ti%is !an" &ain ia&a- %emakaian %e&a#ut $an u%&ikan !an" *um&a-n!a se$ikit, kemun"kinan %ent&an u%&ikan )e#"an$a sa&in" mem)an$in"kan &an"sun" u%&ikan %#aktis3 $an te#se$ian!a )e)e#a%a met$e =#itte#, 15513+
Pemu#nian ?R $an #eaksin!a, -asi& a#i ?AOD $i&etakkan $i RP(18 %&at KLT !an" te#$i#i $a#i n()utan&, asam asetat $an ai# : 1 : 3+ Pemu#nian ?R $i$eteksi &e-nin-i$#in n$a un"u3+Du"aan )a-7a ?R te#$i#i $a#i "u&a $an amina te#masuk asam amin+ Pa$a su)st#at ?AOD, a&in menun*ukkan ka#akte# !an" sama %a$a KLT+ Ketika %e#munian $a&am inku)at# $en"an ?AOD, n$a un"u munu& Ak)a#, 20113+
Pa$a %e#)aan ini %en!em%#tan $en"an &a#utan nin-i$#in $i&akukan untuk %e7a#naan n$a(n$a asam amin %a$a ke#tas k#mat"#a'i !an" te&a- ke#in"+ Asam( asam amin !an" )e#eaksi $en"an nin-i$#in mem)entuk suatu %#$uk !an" $ise)ut un"u Ru-mann+ Reaksi ini )iasan!a $i"unakan se)a "ai u*i )e#ak untuk men$eteksi a$an!a asam amin %a$a ke#tas k#mat"#a'i+
U*i Nin-i$#in te#*a$i a%a)i&a nin-i$#in $i%anaskan )e#sama asam amin maka akan te#)entuk km%&eks )e#7a#na+ Asam amin $a%at $itentukan sea#a kuntitati' $en"an *a&an men""unakan intensitas 7a#na !an" te#)entuk se)an$in" $en"an knsent#asi asam amin te#se)ut+Pa$a #eaksi ini $i&e%askan O2$an N9se-in""a asam amin $a%at $itentukan sea#a kuantitati' $en"an men"uku# *um&a- O2$an N9!an"
$i&e%askan+P#&in $an -i$#ksi %#&in men"-asi&kan 7a#na km%&eks !an" )e#)e$a 7a#nan!a $en"an asam amin &ainn!a+Km%&eks )e#7a#na !an" te#)entuk men"an$un" $ua m&eku& nin-i$#in !an" )e#eaksi $en"an ammnia !an" $i&e%askan %a$a ksi$asi asam amin+9asi& u*i %siti' %a$a u*i nin-i$#in $i)e#ikan %a$a asam amin !an" men"an$un" asam <(amin $an %e%ti$a !an" memi&iki "u"us <(amin !an" )e)as A&imu$$in, 20113+
Den"an nin-i$#in, se)a"ai ksi$at# &unak, asam amin )e#eaksi se)a"ai )e#ikut+
Nin-i$#in asam amin -i$#in$antin F N9 F O2
Dan se&an*utn!a nin-i$#in )e#eaksi $en"an -i$#in$antin $an ammnia mem)entuk suatu -asi& #eaksi !an" )e#7a#na )i#u+
F N9 F G
Nin-i$#in -i$#in$antin )i#u
Pe$*ia$i,20053
Reaksi nin-i$#in !an" $i"unakan untuk men$eteksi $an men$u"a asam amin sea#a kuantitati' $a&am *um&a- kei&+ Pemanasan $en"an nin-i$#in )e#&e)i-men"-asi&kan %#$uk )e#7a#na un"u %a$a semua asam amin !an" mem%un!ai "u"us < amin )e)as, se$an"kan %#$uk !an" $i-asi&kan &e- %#tein )e#7a#na kunin", ka#ena %a$a m&eku& ini te#*a$i su)stitusi "u"us < amin+ Pa$a kn$isi !an" sesuai intensits
7a#na !an" $i-asi&kan $a%at $i%e#"unakan untuk men"uku# asam amin sea#a k&#imet#ik+ Met$e ini amat sensiti' )a"i %en"uku#an knsent#asi asam amin Le-nin"e#, 15823+
Be#ikut a$a&a- $a'ta# R' stan$a# asam amin Re$iatnin", 1583
No Asam Amino Nilai Rf
1 9isti$in 0+11 2 =&utamin 0+1 Lisin 0+1 A#"inin 0+20 Asam as%a#tat 0+2 6 =&isin 0+26 Se#in 0+2 8 Asam "&utamat 0+0 5 T#enin 0+ 10 A&anin 0+8 11 Sistein 0+0 12 P#&in 0+ 1 Ti#sin 0+ 1 As%a#a"in 0+0 1 Metinin 0+ 16 Ha&in 0+61 1 T#i%t'an 0+66 18 ?eni&a&anin 0+68 15 Is&eusin 0+2 20 Leusin 0+
E. ALAT DAN BAHAN a. Alat:
• Ke#tas k#mat"#a'i 1
)ua-• -am)e# 1
)ua-• Kaa ka%i&e#
)ua-• Be*ana "e&as kimia )esa# 1
)ua-• Bt& sem%#t 1
)ua-• Oen 1
)ua-b. Baan:
Asam asetat "&asia& 6 mL
n(Butan& 2 mL
AJua$es seuku%n!a
La#utan asam amin stan$a# 1 mL
La#utan sam%e& 1 mL
25 mL n-butanol
6 mL asam asetat glasial
25 mL aquades
dicampur sambil dikocok
ditempatkan dalam lemari kromatograf
dijenuhkan dengan uapnya
Eluen
!. ALUR PERCOBAAN
". P#mb$atan la%$tan &#n'#m$lsi (!asa G#%a)* G. H. I. J. +. L. . -. P#%sia&an &lat +LT N. O. P. . R. S. T. U. /. 0. 1. 2. 3. AA. AB. AC.
4. #n#nt$)an )om&os#n asam amino AD.
AE.
Ke#tas k#mat"#a"i C 10 m
( $i"a#is $a#i te%i atas 0, m $an te%i )a7a- 1 m
( $i)e#i tan$a untuk %enentuan n$a A, B, $an D $en"an *a#ak 1 m $an 0, m $a#i te%i %&at
$ien se&ama menit P&at KLT sia% $i
"unakan
Ke#tas k#mat"#a'i C 10 m
( $itt&kan maam &a#utan A, B, $an D3 %a$a tan$a !an" su$a- a$a $i %&at KLT
( setia% satu tetesan $ike#in"kan te#&e)i-$a-u&u se)e&um tetesan )e#ikutn!a $i&etakkan $i atasn!a
25 mL n-butanol + 6 mL asam asetat glasial + 25 mL aquades
Dicampur sambil dikocok
Ditempatkan dalam lemari kromatograf
Dijenuhkan dengan uapnya
A!. A=+ A9+ AI+ A@+ AK+ AL+ AM+ AN+ AO+ AP+ A+ AR+ AS+ AT+ AU+ AH+ A0.
N A1. P%os#5$% P#%6obaan
A2. Hasil P#n'amatan
A3. BD. S#b #l$m BE. S#s $5a B9+ 1
BI+ Pem)uatan &a#utan %en"emu&si ?asa =e#ak3 BJ. B+. BL. B. 1n()utan&: &a#utan tak )e#7a#na 2asam asetat "&asia&:
&a#utan tak )e#7a#na
aJua$es: ai#an tak
1 n()utan& F asam Asetat "&asia& F mL aJua$es: &a#utan tak )e#7a#na $i"unakan
-
E&ue-
Reak + 9 9 92O Ke#tas k#mat"#a'i( $i"antun" $a&am &ema#i k#mat"#a'i se&ama )e)e#a%a *am untuk $i*enu-kan $en"an ua% e&uen
( $imu&ai e&usi se&ama 1, *am
( $ete&a- e&usi )e#*a&an ke#tas k#mat"#a'i $ike&ua#kan $an )atas &a#utan $itan$ai $en"an %ensi&
( $ike#in"kan %a$a su-i 10 ( 110 se&ama menit
( $isem%#t $en"an nin-i$#in $ike#in"kan
N$a n$a asam amin !an"
( $i-itun" -a#"a R' tia% tia% n$a ( $iatat 7a#nan!a
$iteta%kan km%nen km%nen asam amin $a&am &a#utan sam%e& $en"an mem)an$in"kan -a#"a R'n!a $en"an -a#"a R' asam asam amin stan$a# Km%nen asam
amin G. HASIL PENGAATAN
ertas kromatograf !"#$ cm
ri tepi atas $%5 cm dan dari tepi ba&ah # cm
da untuk penotolan noda '% (% )% dan * dengan jarak # cm dan $%5 cm dari tepi plat
lama 5 menit
Eluen
A B C S BN. BO. BP. B. BR. BS. BT. BU. B/. B0. B1. B2. B3. CA. CB.)e#7a#na se)a"ai e&uen+
E+ 2 ?+Pe#sia%an %&at KLT =+ 9+ I+ @+ K+ L+ M+ N+ O+ P+ + R+ S+ T+ U+ H+ + + 1Ke#tas k#mat"#a'i C10 m: )e#7a#na %uti-+ 2La#utan stan$a# A: &a#utan tak )e#7a#na La#utan stan$a# B: &a#utan tak )e#7a#na La#utan stan$a# : &a#utan tak )e#7a#na La#utan sam%e& 1: &a#utan tak )e#7a#na DB+ D+ 1 Ke#tas k#mat"#a'i $i"a#is $a#i te%i atas 0, m $an $a#i te%i )a7a-1 m $an $i)e#i tan$a untuk %ent&an sam%e&+ DD+
-
Si&ia )e#siertas kromatograf !"#$ cm
lkan ! macam larutan ,'% (% )% dan * pada tanda yang sudah ada di plat L.
p satu tetesan dikeringkan terlebih dahulu sebelum tetesan berikutnya diletakkan diatasnya tetesan tidak boleh lebih dari $%! cm diameternya
ertas kromatigraf bernoda
ntung dalam lemari kromatograf selama beberapa jam untuk dijenuhkan dengan uap eluen lai elusi selama #%5 jam
ah elusi berjalan kertas kromatograf dikeluarkan dan batas larutan ditandai dengan pensil ingkan pada suhu #$5 / #$$$) selama # menit
0oda-noda asam amino
#$5 / #$$$) selama # menit
noda
asam amino dalam sampel dengan dibandingkan harga 34-nya dengan 34 asam amino standar
0oda-noda asam amino
+ + DA+ D?+
D=+ Menentukan km%nen asam amin DH. DI. DJ. D+. DL. D. DN. DO. DP. D. DR. DS. DT. DU. D/. D0. D1. D2. D3. EA. EB. 1Ke#tas k#mat"#a'i: )e#7a#na %uti-2La#utan stan$a# A: &a#utan tak )e#7a#na La#utan stan$a# B: &a#utan tak )e#7a#na La#utan stan$a# : &a#utan tak )e#7a#na La#utan sam%e& 1: &a#utan tak )e#7a#na 6Nin-i$#in: &a#utan tak )e#7a#na+ 1 Ke#tas k#mat"#a'i $itt&i stan$a# A, B, , $an sam%e& 1 se)an!ak 2 tt&an: %&at KLT )e#7a#na %uti-+ 2 P&at KLT !an" su$a- $itt&i &a#utan A, B, , $an sam%e& 1 $i"antun" $a&am -am)e# $an e&uen )e#*a&an sam%ai tan$a )atas se&ama 1, *am E&uen su$a- )e#*a&an KLT $ike&ua#kan $an $ien %a$a su-u 10(1100: KLT )e#7a#na %uti- Disem%#t nin-i$#in 2 $an $ike#in"kan &a"i: te#)entuk s%t n$a )e#7a#na *in""a
-
a#a E=+ Rf-
R' as 1 A& 2 Si =& E9+ EI+ EK+ EO+ EP. E. ER. ES. ET. EU. E/. E0. E1. ?I+E2. E3. !A. !B. !C. !D. !E. !!. !G. !H. 9a#"a R' : E+ Stan$a#t A: 0,1 ED+ Stan$a#t B: 0,0 EE+ Stan$a#t : 0,1 EM+
H. ANALISIS DAN PEBAHASAN
". P#mb$atan La%$tan P#n'#m$lsi (!asa G#%a)*
?M+ Pa$a ta-a% %e#)aan ini !akni mem)uat 'asa "e#ak atau %en"emu&si atau )iasa $ise)ut *u"a se)a"ai e&uen+ 9a& %e#tama !an" $i&akukan ia&a- men!ia%kan &autan !akni 2mL n()utan&, 6mL asam asetat "&sia&, $an 2mL aJua$es+ Keti"a &a#utan te#se)ut kemu$ian $iam%u#kan $an $imasukkan ke $a&am chamber + Kemu$ian $i*enu-kan $en"an a#a menutu% -am)e#+ Se&ain )e#tu*uan untuk memisa-kan sam%e& $a#i sen!a7a(sen!a7a &ain, %en*enu-an ini *u"a )e#tu*uan a"a# %e&a#ut ti$ak mu$a-men"ua%+ Di"unakan am%u#an n()utan&, asam asetat, $an ai# se)a"ai e&uen ka#ena keti"a )a-an te#se)ut memi&iki ke%&a#an, $an memi&iki %e#)e$aan titik $ie&ekt#ik+ Ai# &e)i- %&a# $a#i %a$a n()utan& $an n()utan& &e)i- %&a# *ika $i)an$in"kan $en"an asam asetat+ P#insi% %e#)aan KLT ini $i$asa#kan %a$a si'at 'isik $an kimia asam amin+ Si'at 'isik $itun*ukkan &e- kee%atan )e#"e#ak %a$a 'ase $iam $a#i ke#tas k#mat"#a'i+ Reaksi !an" te#*a$i !aitu #eaksi este#i'ikasi $en"an #eaksi se)a"ai )e#ikut+
?N+ ?O+ F 89A 892 CH2 CH2 O C 89A O F 92O ?P+ -. P#%sia&an Plat +LT
?+ Pa$a ta-a% %e#)aan ini, !akni ta-a% %e#sia%an %&at KLT+ Lan"ka- %e#tama !akni men!ia%kan %&at KLT $en"an uku#an C10 m+ Kemu$ian $i)e#i "a#is
te%i atas $en"an *a#ak 0, m $an "a#is te%i )a7a- $en"an *a#ak 1 m+ Se&an*utn!a $i)e#i tan$a untuk %ent&an n$a !aitu A A&anin3, B L(!stein3, "&isin3, $an D sam%e& 13 $en"an *a#ak masin"(masin" 1 m $an 0,m $a#i te%i+ Pem)e#ian "a#is )atas $an titik -a#us $i)uat $en"an men""unakan %ensi&, *ika men""unakan tinta )&%in akan mem)uat n$a sam%e& ti$ak te#$eteksi, ka#ena akan te#*a$i %enum%ukan n$a+ Ka#ena tinta te#$i#i atas )an!ak km%sisi sen!a7a !an" )e#)e$a()e$a+ P&at !an" su$a- $isia%kan se&an*utn!a $ien se&ama menit+ Tu*uan $a#i %en"enan ini
!aitu untuk %en"e#in"an $an %en"akti'an &a%isan KLT a"a# ke#tas te#se)ut )ena#()ena# ke#in" ka#ena sus%ensi a)s#)ann!a te#)uat $a#i ai# 'asa $iam3+
?R+ ?S+
4. #n#nt$)an +om&on#n
?T+ Pa$a ta-a% %e#)aan ini, !ani menentukan km%nen asam amin !an" te#kan$un" $a&am sam%e&+ 9a& %e#tama !an" $i&akukan ia&a- ment&kan &a#utan stan$a# A A&anin3, B L(!stein3, $an "&isin3, kemu$ian $iikuti $en"a mentkan sam%e& 1 %a$a -u#u' D $en"an *a#ak anta# sam%e# se)esa# 1m+ Semua sam%e& !an" $itt&kan me#u%akan ai#an ti$ak )e#7a#na+ Pent&an $i&akukan se)an!ak $ua ka&i $en"an )esa# tetesan ti$ak &e)i- $a#i 0, m+ P&at !an" te&a- $itt&i n$a kemu$ian $i"antun" $a&am -am)e# -in""a $asa# %&at men!entu- $asa# -am)e# $an $imu&ai e&usi se&ama )e)e#a%a *am -in""a e&uen naik -in""a )atas atas %&at+
?U+ Ketika ke#tas k#mat"#a'i !an" te&a- $itt&kan sam%e& asam amin, maka akan te#*a$i %emisa-an, $imana %e&a#ut #"anik me#am)at ke atas me&a&ui ka%i&e# ke#tas men"an"kut am%u#an asam amin !an" a$a $itt&kan %a$a ke#tas k#mat"#a'i+ Asam amin !an" %a&in" &a#ut $i $a&am %e&a#ut #"anik, akan $ian"kut %a&in" e%at $an asam amin !an" %a&in" ku#an" &a#ut akan te#tin""a& %a&in" )a7a-+
Pe&a#ut !an" $i"unakan a$a&a- 1()utan& : asam asetat : ai# $an 'en& : ai# )e#si'at nn%&a#, maka $a#i sam%e& asam amin !an" $i"unakan $a%at $i&i-at si'at ke%&a#ann!a+
?H+ M&eku&(m&eku& nn%&a# $a&am am%u#an akan memi&iki se$ikit inte#aksi $en"an m&eku&(m&eku& ai# $an m&eku&(m&eku& !an" me&ekat %a$a se&u&sa, $an ka#ena akan men"-a)isakan )an!ak 7aktun!a untuk &a#ut $a&am %e&a#ut !an" )e#"e#ak+ Maka sam%e& !an" %a&in" atas me#u%akan sam%e& !an" %a&in" &a#ut $a&am %e&a#ut !an" a#tin!a )e#si'at %a&in" nn %&a# $i)an$in"kan sam%e& asam amin &ainn!a+ M&eku&(m&eku& se%e#ti ini akan )e#"e#ak se%an*an" ke#tas $ian"kut &e- %e&a#ut+ Me#eka akan memi&iki ni&ai R ' !an" #e&ati' tin""i+
?+ Den"an kata &ain, m&eku&(m&eku& %&a# akan memi&iki at#aksi !an" tin""i untuk m&eku&(m&eku& ai# $an ku#an" untuk %e&a#ut !an" nn %&a#+ Dan ka#enan!a, en$e#un" untuk &a#ut $a&am &a%isan ti%is ai# sekita# se#at &e)i- )esa# $a#i%a$a %e&a#ut !an" )e#"e#ak+ Ka#ena m&eku&(m&eku& ini men"-a)iskan 7aktu untuk &a#ut $a&am 'ase $iam $an ku#an" $a&am 'ase "e#ak, m&eku&(m&eku& ti$ak akan )e#"e#ak san"at e%at %a$a ke#tas+
?+ Sete&a- emu&si )e#*a&an mena%ai tan$a )atas emu&si $i-entikan $en"an a#a men"e&ua#kan ke#tas k#mat"#a'i $a#i $a&am chamber + La&u $i&akukan
+
%en"e#in"an $i$a&am en se&ama Q menit+ Namun ti$ak a$a n$a !an" tam%ak %a$a ke#tas se-in""a ke#tas k#mat"#a'i $isem%#t $en"an &a#utan nin-i$#in+ 9a& ini )e#tu*uan )a-7a %en!em%#tan $en"an &a#utan nin-i$#in $i&akukan untuk %e7a#naan n$a(n$a asam amin %a$a ke#tas k#mat"#a'i !an" te&a- ke#in"+ Dan $imasukkan kem)a&i ke $a&am en -in""a n$a te#&i-at+ Nin-i$#in $i"unakan ka#ena $a%at mem)e#ikan #eaksi s%esi'ik te#-a$a% asam amin $en"an mem)entuk 7a#na te#tentu )a"i asam amin te#tentu+ Reaksi sea#a umum nin-i$#in:
?+
?+ Sete&a- n$a te#)entuk, n$a $itan$ai men""unakan %ensi& $an $iuku# untuk men"eta-ui ni&ai R' n!a+ Pa$a %&at KLT !an" menun*ukkan %a$a titik A A&anin3, munu& n$a )e#7a#na *in""a(3 $en"an *a#ak n$a 1, m $a#i )atas )a7a-+ Pa$a titik B L(!stein3 munu& n$a )e#7a#na *in""a(3 $en"an *a#ak n$a 0,m+ Se$an"kan, %a$a titik "&isin3, munu& n$a )e#7a#na kunin"(3 $en"an *a#ak 1,2 m $an &a#utan sam%e& 1 munu& n$a )e#7a#na *in"a(3 $en"an *a#ak 1,
m $a#i "a#is )atas )a7a-+ 9a& ini menun*ukkan )a-7a &a#utan sam%e& te#$eteksi km%nen asam aminn!a+
=A+ =B+ =+
Reaksi nin-i$#in $en"an a&anine
+
+ )7 + )72 + 27 + +
++ *)2)7 + )72 + 27 + +
=E+ =?+ ==+ =9+ Reaksi nin-i$#in $en"an "&isin
=I+ =@+ =K+ =L+ =M+ =N+ =O+ =P+
Reaksi nin-i$#in $en"an sistein
G. GR. =S+ =T+ =U+ =H+
=+ Pe#-itun"an R' men""unakan %e#samaan :
=+ Rf =
jarak tempuh noda jarak tempuh eluen
=+ Se-in""a $i%e#&e- -asi& se)a"i )e#ikut: =+ Ni&ai R' &a#utan A A&anin3 0,1
9A+ Ni&ai R' &a#utan B !stein3 0,0 9B+ Ni&ai R' &a#utan "&isin3 0,1 9+ Ni&ai R' sam%e& D sam%e& 13 0,1
9D+ Da#i -asi& te#se)ut $a%at $isim%u&kan )a-7a asam amin %a$a sam%e& D sam%e& 13 !akni )e#u%a asam amin "&isin $en"an ni&ai R' !an" -am%i# men$ekati ni&ai R' &a#utan stan$a# + Ni&ai R' !an" $i%e#&e- %a$a %e#)aan ini )e#)e$a $en"an ni&ai stan$a# !an" a$a %a$a &ite#atu#+ 9a& ini ka#ena -a#"a R' $i%en"a#u-i &e- e&uen, se$an"kan %a$a -a#"a R' stan$a# ti$ak $iketa-ui e&uen !an" $i"unakan, te#$a%at kemun"kinan e&uen !an" $i"unakan )e#)e$a se-in""a -asi& $a#i%a$a -a#"a R' *u"a )e#)e$a+
9E+
I. +ESIPULAN
9=+ Be#$asa#kan %e#)aan Penentuan Ka$a# Asam Amin $a&am Sam%e& $a%at $isim%u&kan )a-7a:
1+ K#mat"#a'i ke#tas $a%at $i"unakan untuk memisa-kan atau men"i$enti'ikasi asam amin $a&am suatu am%u#an+
2+ Asam amin !an" te#kan$un" $a&am sam%e& 1 titik D3 a$a&a- "&isin $en"an ni&ai R' !an" men$ekati $en"an &a#utan stan$a# =&isin3 !an" te&a- $iketa-ui !aitu, 0,1, namun )e#)e$a $en"an ni&ai R' stan$a# te#i $ika#enakan %e#)e$aan e&uen !an" $i"unakan+
HH. DA!TAR PUSTA+A 9I+
9@+ A$nan M+, 155, Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan, An$i, "!aka#ta+
9K+
L8 Ak)a#, +, 2011, Pemisahan dan Identifikasi Asam Amino n&ine3, -tt%:ak)a#)an*a#+7#$%#ess+m201101&a%#an()ikimia3, $iakses %a$a tan""a& 2 Okt)e# 2016 %uku& 15+0 IB+
98 B#esnik, S+, 200, Intisari Kimia Organik , 9i%k#ates, @aka#ta+
9N+ Da!, R+A+, $an Un$e#7$, A+L+, 2001, Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam, Pene#)it E#&an""a, @aka#ta+
9O+ ?essen$en, R+@+, $an ?essen$en, @+S+, 155, Dasar- Dasar Kimia Organik , E#&an""a, @aka#ta+
:8 =#itte#, A+, 1551, Biokimia , PT+ =#ame$ia, @aka#ta+
9+ 9u"-es, A+B+, 2005, Amino Acids! Pe"tides and Proteins in Organic #hemistr$! ILE(H9, Aust#a&ia+
9R+ Pe$*ia$i, A+, 155, Dasar-dasar Biokimia, UI(P#ess, @aka#ta+
9S+ Re$iatnin", +, $an Ka#tini, N+, 158, Ana&isis Asam Amin Den"an K#mat"#a'i ai#an Kine#*a Tin""i Sea#a De#iatisasi P#ak&m $an Pasak&m, Proceedings ITB, -71,23: 1(5+
9T+ Su$*ana, E+, A)$u#a-man, M+, $an u&iasa#i, +, 2002, Ka#akte#iSasi Sen!a7a Km%&eks L"am T#ansisi #, Mn, $an A" Den"an =&isin Me&a&ui S%ekt#'tmet#i U&t#aun"u $an Sina# Tam%ak, %urnal Bonatura, 823: 65(86+
9U+ T-a, A+, $an 9ami$, A+, 2001, Biokimia & Metabolisme Biomolekul! A&'a)eta, Ban$un"+
9H+ 9+
H1. JA0ABAN PERTAN2AAN
1 A%a keuntun"an $an ke#u"ian met$e %emisa-an $en"an k#mat"#a'i ke#tas
9+ @a7a)an :
9+ Satu keuntun"an utama k#mat"#a'i ke#tas ia&a- kemu$a-an $an kese$e#-anaann!a %a$a %e&aksanaan %emisa-an, !aitu -an!a %a$a &em)a#an ke#tas sa#in" !an" )e#&aku se)a"ai me$ium %emisa-an $an %en!an""a+ Untuk k#mat"#a'i ke#tas %#e%a#ati' $i%e#&ukan ke#tas !an" &e)i- )esa# $a#i %a$a untuk ana&isis+ Keuntun"an !aitu )e)an &an"an )i&an"an R' !an" )esa# se-in""a %en"uku#an R' me#u%akan %a#amete#
!an" )e#-a#"a $a&am mema%a#kan sen!a7a tum)u-an )a#u+ Se$an"kan ke#u"ian atau ke&ema-an $a#i met$e %emisa-an $en"an k#mat"#a'i ke#tas a$a&a- ti$ak )isa me&akukan ana&isis kuantitati' %a$a km%nen(km%nen sam%e& -na!a te#)atas %a$a ana&isis kua&itati' sa*a+
2 A%aka- met$e k#mat"#a'i ke#tas $a%at $i"unakan untuk ana&isis kuantitati'
IA+ @a7a)an :
IB+ Den"an met$e k#mat"#a'i ke#tas ini ti$ak $a%at me&akukan ana&isis !an" )e#si'at kuantittai', teta%i -an!a $a%at $i"unakan untuk ana&isis kua&itati' te#-a$a% suatu &a#utan !an" )e#isi )e#maam(maam km%nen, misa&n!a se%e#ti %a$a %e#)aan ini !aitu ana&isi kua&ittai' te#-a$a% suatu &a#utan !an" )e#isi )e#maam(maam asam amin, $an -a& ini semua $itan$ai $en"an a$an!a 7a#na un"u se#ta $a#i -a#"a R' sam%e& !an" $ise&i$iki &a&u $i)an$in"kan $en"an -a#"a R' stan$a#n!a+
I+
?akt# a%a sa*a !an" mem%en"a#u-i ni&ai R' ID+ @a7a)an :
IE+ A$a )e)e#a%a 'akt# !an" menentukan -a#"a R' !aitu:
a+ Pe&a#ut, $ise)a)kan %entin"n!a ke'isien %a#tisi, maka %e#u)a-an(%e#u)a-an !an" san"at kei& $a&am km%sisi %e&a#ut $a%at men!e)a)kan %e#u)a-an(%e#u)a-an -a#"a R'+
)+ Su-u, %e#u)a-an $a&am su-u me#u)a- ke'isien %a#tisi $an *u"a kee%atan a&i#an+
+ Uku#an $a#i )e*ana, &ume $a#i )e*ana mem%en"a#u-i -m"enitas $a#i atms'e# *a$i mem%en"a#u-i kee%atan %en"ua%an $a#i km%nen(km%nen %e&a#ut $a#i ke#tas+ @ika )e*ana )esa# $i"unakan, a$a ten$ensi %e#am)atan &e)i- &ama, se%e#ti %e#u)a-an
km%sisi %e&a#ut se%an*an" ke#tas, maka ke'isien %a#tisi akan )e#u)a- *u"a+ Dua 'akt# !aitu %en"ua%an $an km%isisi mem%en"a#u-i -a#"a R'+
$+ Ke#tas, %en"a#u- utama ke#tas %a$a -a#"a R' tim)u& $a#i %e#u)a-an in $an se#a%an, !an" )e#)e$a untuk maam(maam ke#tas+ Ke#tas mem%en"a#u-i kee%atan a&i#an *u"a mem%en"a#u-i kesetim)an"an %a#tisi+
e+ Si'at $a#i am%u#an, )e#)a"ai sen!a7a men"a&ami %a#tisi $ianta#a &ume(&ume !an" sama $a#i 'asa teta% $an )e#"e#ak+ Me#eka -am%i# se&a&u mem%en"a#u-i ka#akte#istik $a#i ke&a#utan satu te#-a$a% &ainn!a -in""a te#-a$a% -a#"a R' me#eka+
I!. LAPIRAN PERHITUNGAN I=+ Penentuan R' :
I9+ Rf =
Jarak yangditempuh senyawa jarak yang ditempuh eluen
II+ La#utan Stan$a# A A&anin3
I@+ Rf Alanin=
1,5cm
8,5cm=0,17
IK+ La#utan Stan$a# B L(!stein3
IL+ Rf Glisin=
0,3cm
8,5cm=0,03
IM+La#utan Stan$a# =&isin3
IN+ Rf Alanin=
1,2cm
8,5cm=0,14
IO+ La#utan Sam%e& 13
IP+ Rf Alanin=
1,3cm
8,5cm=0,15
I+ ;38
