SNI 2354.10-2016 Uji Histamin

(1)

ICS 67.050 ICS 67.050 ICS 67.050

ICS 67.050 Badan Badan StandBadan Badan StandStandardisaStandardisardisasiardisasiasi Nasionsi NasioNasionalNasionalnalal

Cara

Ca

Cara

ra uj

ujii

uj

ujii ki

kimia –

kimi

mia

a

–

– Bagian

Ba

Bagi

Bagian

gian

an 10

10 : Pen

10 :

10 ::

Pene

Penentua

Penent

entuan

ntuan

uan

n kada

kadar

kadar r

kad

ar his

histam

histamin

tamin

in

dengan

denga

dengan

n Spek

Spektrof

Spekt

Spektroflo

troflorom

rofloromet

lorometri

rometri

etri

ri dan

dan

dan Kro

Kroma

Kromatogr

Kromat

matogr

tografi

ografi

afi

afi Cair

Cair

Cair Kiner

Kinerja

ja

Tinggi

Tin

(2)

Trusted by over 1 million members

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(3)

Hak cik ci ptptaa didill inindudungngii unundadangng-u-undndanang.g. DiDilala rarangng memengngumumumumkakann dd anan memempmpererbabanynyaa k sebk sebagagiaiann atatauau sel

seluruuruhh isiisi dokdokumeumenn iniini dendengangan carcaraa dandan daldalam beam bentuntuk apak apapunpun sersertata dildilaraarangng menmendisdistritribusbusikaikann do

dokukumemenn ininii babaik seik secacaraerae lelektktroroninik mauk maupupunn tetercrcetetaa k tank tanpaizipaizinn tetertrtululii s dars darii BSBSNN BSN

BSN Email

Email:: dokindokinfo@[email protected] www.bsn.go.id

www.bsn.go.id

Di

(4)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(5)

SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 © © BS © © BSNBSNBSN 2016N 202016201616 iiii Daftar isi Daftar isi Daftar isi Daftar isi Daftar

Daftar isi...isi... ii Prakata

Prakata ... iiii Pendahuluan...

Pendahuluan... iiiiii 1

1 Ruang Ruang lingkup lingkup ... 11 2

2 Istilah Istilah dan dan definisi definisi ... 11 3

3 Prinsip Prinsip metode metode pengujian pengujian ... 11 4

4 Penentuan Penentuan histamin histamin secara secara spektrofloromespektroflorometri tri ... 22 5

5 Penentuan Penentuan histamin histamin secara secara KCKT...KCKT... 44 6

6 Pelaporan Pelaporan ... 77 7

7 Keamanan Keamanan dan dan keselamatan keselamatan kerja kerja ... 77 Lampiran

Lampiran AA (informatif(informatif)) Validasi Validasi metode penentuan metode penentuan histamin histamin dengan dengan KCKTKCKT ... 88

Tabel A.1 Hasil uji LOD

Tabel A.1 Hasil uji LOD dan LOQ...dan LOQ... 99 Tabel A.

Tabel A.2 -2 - Data uji akuData uji akurasi spirasi spike sampel 50 mg/kke sampel 50 mg/kg (50 g +g (50 g + 2,5 mL laruta2,5 mL larutan standarn standar histamhistaminin 1000 mg/L)...

1000 mg/L)... 99 Tabel A.

Tabel A.3 -3 - Data uji akuData uji akurasi spirasi spike sampel 100 mg/ke sampel 100 mg/kg (50 g +kg (50 g + 5 ml Standar5 ml Standar Baku HistBaku Histamineamine 1000 mg/l)...

1000 mg/l)... 1010 Tabel A.4

Tabel A.4 Data uji akurasi spike samData uji akurasi spike sampel Spike Sampel 15pel Spike Sampel 150 mg/kg (50 g +0 mg/kg (50 g + 7,5 mL Standar 7,5 mL Standar Baku Histamine

Baku Histamine 1000 mg/L)1000 mg/L) ... 1111 Tabel

Tabel A.5 A.5 -- Nilai Nilai minimumminimum recoveryrecovery metode metode ... 1111 Tabel

Tabel A.6 A.6 -- HorwitzHorwitz Value Value ... 1212 Gambar

Gambar A.1 A.1 -- Kurva Kurva kalibrasi kalibrasi larutan larutan standarstandar histamin histamin ... 88 Gambar

(6)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(7)

SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 © © BS © © BSNBSNBSN 2016 N 2020162016 16 iiiiiiii Prakata Prakata Prakata Prakata Dalam

Dalam rangka memrangka memberikaberikan jaminan mutu dan keamanan jaminan mutu dan keamanan pangan komoditan pangan komoditass hasil perihasil perikanankanan yang a

yang akan dikan dipasarkpasarkan di an di dalamdalam dan luadan luarr negerinegeri,, maka pmaka perlu derlu disusuisusun suatn suatu Standu Standarar NasionNasionalal Indones

Indonesia (SNI)ia (SNI) metode uji yang dapatmetode uji yang dapat memenuhmemenuhi jaminan tersebi jaminan tersebut.ut. Sta

Standarinindarini mermerupakupakanrevisanrevisii dardarii SNISNI 23542354.10.10:20:2009,Ca09,Cara ura uji kji kimiimia -a - BagiBagian 10 an 10 :: PenPenententuanuan kadar

kadar histamhistamin denin dengan spgan spektroektrofloromflorometri etri dan Krdan Kromatogromatografi Cafi Cairair KinerjKinerja Tia Tinggi (nggi (KCKT)KCKT) padapada produk

produk perikperikanan.anan. Peruba

Perubahanyang menhanyang mendasardasar pada stapada standarndar ini antaini antara lain:ra lain: 1.

1. PrePreparparasi casi contontoh pada ujoh pada uji histai histamin memin metodtode KCKTe KCKT,, 2.

2. PenaPenambahmbahan an perperhithitungaungan n hashasil,il, 3.

3. PenPenambaambahan han LamLampirpiran an infinformormatiatif.f. Sta

Standarndar ini diini disussusun oleh Kun oleh Komiomite Tekte Teknisnis 65-65-05:05: ProProdukduk PerPerikaikanan,nan, yanyang telag telah diruh dirumusmuskankan melalu

melalui rai rapatpat teknisteknis,, dan rdan rapatapat konsenkonsensussus pada tpada tanggal anggal 17 S17 Septembereptember 2015 d2015 di Bogori Bogor dihadidihadiriri oleh

oleh anggota anggota Komite Komite TeknisTeknis 65-05:65-05: ProdukProduk PerikPerikanan anan sebagai sebagai upaya upaya untukuntuk meningkmeningkatkanatkan jaminan mutu dan keamanan pangan.

jaminan mutu dan keamanan pangan. Sta

Standarndar ini ini teltelah mah melaelalui lui proprosesses jajjajakak pendpendapatapat pada pada tantanggal ggal 10 D10 Deseesembermber 2015 2015 samsampaipai dengan 10 Februari

(8)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(9)

SNI SNI SNI

SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616

©

Pendahuluan Pendahuluan Pendahuluan Pendahuluan

Pen

Penyusyusunan Sunan SNINI iniini,, mempmemperherhatiatikan kekan ketententuatuan dalan dalamm PerPeratuaturan Meran Mententeri Keri Kelautlautan danan dan Perik

Perikanan anan RIRI NomorNomor PER.1PER.19/MEN/9/MEN/2010 2010 tentantentang Peg Pengendalngendalian ian SisteSistemm JaminaJaminan Mun Mutu tu dandan Keamanan Hasil Perikanan

Keamanan Hasil Perikanan .

(10)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(11)

(12)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(13)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 Cara u

Cara ujiji kimia kimia --Cara uji

Cara uji kimikimia -a - BagiaBagian 10 Bagian 10 :Bagian 10 : Penentuan kadar histamin 10 :: PenentPenentuan kadar histaPenentuan kadar histamin dengan spektroflorometriuan kadar histamin dengan spektmin dengan spektroflon dengan spektroflorometriroflorometrirometri dan Kromatografi

dan Kromatografi Cair Kinerja Cair Kinerja TinggiTinggi dan Kromatografi

dan Kromatografi Cair Kinerja Cair Kinerja TinggiTinggi(KCKT)(KCKT) pada produk (KCKT)(KCKT) pada produk perikapada produk perikananpada produk perikananperikanannan

1 1

1 Ruang

1 RuangRuangRuang linglingkuplingkuplingkupkup Standa

Standarr ini ini digunakdigunakan an untukuntuk menentumenentukan kan kadarkadar histahistamin min pada pada produkproduk perikaperikanan.nan.

2 2

2 Istilah

2 IstilahIstIstilailahh dandandandan defidefinisidefinisidefinisinisi 2.1 2.1 2.1 2.1 histamin histamin histamin histamin merupa

merupakan senyawkan senyawa turunan dari asaa turunan dari asamm amino histamino histidin yang terbidin yang terbentukentuk karena tinkarena tindakan baktedakan bakteriri yang memiliki

yang memilikienzymenzym dekarbdekarboksiloksilasease 2.2 2.2 2.2 2.2 fluorometri fluorometri fluorometri fluorometri

metode analisa yang didasarkan pada pengukuran

metode analisa yang didasarkan pada pengukuranfluorosensifluorosensi 2.3 2.3 2.3 2.3 metode metode metod

metodee analanalisaanalisaanalisa secaraisasecarasecsecaraara KCKTKCKTKCKTKCKT su

suatatuu teteknknikik ananalalisisaa kukuantantititatatifif dandan kukualalititatatifif yayangng dididadasasarkrkanan papadada pepemimisasahanhan zazatt tetelalarurutt oleh

oleh suatu suatu prosesproses mmigrasigrasi defei deferensirensial dinal dinamisamisdalamdalam sistesistemm yangyangterdirterdiri dari i dari dua fasdua fase.e. SalahSalah satuny

satunya adalaa adalah fase h fase caircair yang byang bergeraergerakk secarsecara berka berkesinamesinambungan bungan dalamdalam arah tarah tertentertentu danu dan did

didalaalamnymnyaa zatzat-za-zatt terterpispisahah menmenunjuunjukkakkann perperbedabedaanan mobimobilitlitasas karkarenaena perperbedabedaananabsorbsiabsorbsi,, parti

partisi,si, kelarkelarutan,utan, tekanan tekanan uap,uap, ukuraukuran moln molekul ekul dan mdan muatan uatan ionion

3 3

3 Prinsip

3 PrinsipPrinPrinsipsip metometodemetode pengujianmetode pengujiandepengujianpengujian 3.1

3.1

3.1 Secara

3.1 SecaraSecara spektrofloromeSecara spektrofloromespektroflorometrispektroflorometritritri Hist

Histamin diekstamin diekstrakrak dari jaringdari jaringan daging contoh menggunaan daging contoh menggunakan metanol dan sekaligkan metanol dan sekaligusus me

mengngkokonvnverersi si hihiststamaminin keke dadalalamm bebentntukuk OHOH.. ZaZat-t-zazatt hihiststamaminin seselalanjnjututnynyaa didimumurnrnikikanan mel

melalualui resii resin penukn penukarar ion daion dan diuban diubah ke bentuh ke bentukk derderivaivatnytnya dengaa dengan senyn senyawa Orawa Orto- to-ptalat

ptalatdikardikarbosildbosildehid (OPT)ehid (OPT).. BesarBesarnya flouresnya flouresensi histamensi histamin diukurin diukur secarsecara flourometa flourometri padari pada panjang gelo

panjang gelombang exitambang exitasi 350 nmsi 350 nm dan emisi 444 nm.dan emisi 444 nm. 3.2

3.2

3.2 Secara 3.2 SecaraSecara KCKTSecara KCKTKCKTKCKT Hist

Histamin amin diekstdiekstrakrak dari dari jarinjaringan gan daging daging contoh contoh menggunamenggunakan kan TCATCA 10% 10% selanjselanjutnyautnya dideri

diderivatisavatisasi dengan senysi dengan senyawa orto-awa orto-ftalalftalaldehid (OPdehid (OPA).A). BesarnBesarnya histamya histamin diukurin diukur secarsecaraa KCK

KCKTT dengdengan dan deteetektoktorr flufluoreoresensenss pada pada panjpanjang ang gelgelombaombang eng eksiksitastasi 35i 350 nm0 nm dan dan emiemisisi 450

450 nmnm dengan dengan menggunamenggunakan kan fase fase gerakgerak campurcampuran an asetoniasetonitril tril :: larutlarutan daan daparpar monosodmonosodiumium fos

fosfatfat (30 (30 :: 70)70) dan dan kolkolomom C-C-18.18. ResRespon pon KCKKCKTT berberupa upa puncpuncak-ak-puncpuncakak krokromatmatogrogramam yangyang me

mempmpunyunyai waai waktktu tamu tambatbat (R(RT)T) yayang speng spesisififik.k. IdIdenentitififikakasi pusi puncncakak didilaklakukukan denan dengagann mem

membandbandingingkan RTkan RT samsampel terpel terhadahadap RTp RT stastandandar.r. LuasLuas punpuncakcak sebsebandianding dengang dengan jumlahn jumlah analit

(14)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(15)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 4 4 4 Penentuan

4 PenentuanPenenPenentuantuan histahistaminhisthistaminamin secaraminsecarasecara spektroflorometrisecara spektroflorometrispektroflorometrispektroflorometri 4.1 Peralatan

4.1 Peralatan 4.1 Peralatan 4.1 Peralatan

a)

a) CorCorong ong dan bdan botootol fil filtrltratat concontohtoh;; b)

b) HoHomomogengenizizerer (b(blelendender)r);; c)

c) KeKertrtasas ssararining g kakasasar,r, plplasastitik,k, kakarerett penpengigikakat;t; d)

d) KoKololomm reresisin n 20 c20 cmm xx 00,8 ,8 cmcm,, rereseservrvoaoarr 2 c2 cmm xx 5 5 cmcm;; e)

e) Labu Labu taktakaarr 25 m25 mL,L, 50 m50 mL,L, 100 100 mL dmL dan an 1.01.000 m00 mL;L; f)

f) PiPipepett vovolulumemetrtricic;; g)

g) SpeSpektrktrofloflourouromeometerter;; h)

h) Stirer Stirer --plateplate;; i)

i) TabTabung ung reareaksi ksi 50 m50 mL bL bertertutuutup;p; j)

j) TiTimbmbangangan an ananalialititis;s; k) k) WaterbathWaterbath.. 4.2 Pereaksi 4.2 Pereaksi 4.2 Pereaksi 4.2 Pereaksi a)

a) MeMetatanonoll;; b)

b) AqAquauadedess;; c)

c) GlGlasasswswooool;l; d

d)) NNaaOOH 1 H 1 NN;; Larutk

Larutkan 4 g NaOH dalaman 4 g NaOH dalam 100 mL aquades.100 mL aquades. e)

e) HHCl Cl 0,0,1 N1 N;; Encer

Encerkan 8 mL HCl 1kan 8 mL HCl 12,5 N (372,5 N (37%)%) dalamdalam 1.000 mL aq1.000 mL aquades.uades. f)

f) OrtOrto-po-ptaltalatdiatdikarkarbbosiosildehldehid (OPTid (OPT)) 0,1%0,1%;; Larutk

Larutkan 0,1 g Oan 0,1 g OPTPT dalamdalam 100 mL me100 mL metanol,tanol, larutalarutan ini disn ini disiapkan piapkan pada kondada kondisi segisi segar ar dalam

dalam setiasetiap anp analisa.alisa. g)

g) AsAsamam PhPhosospapatt (H(H3P3PO4O4)) 3,3,57 57 N;N; Encer

Encerkan 121,8 mL Hkan 121,8 mL H3PO4 (853PO4 (85%)%) menjadi 1menjadi 1.000 mL aquad.000 mL aquades,es, standarstandarkan larukan larutan initan ini dengan mengambil 5 mL dan

dengan mengambil 5 mL dan titrasi dengan NaOH titrasi dengan NaOH 1 N dengan indikator1 N dengan indikator fenolftalin.fenolftalin. h)

h) ResResin penin penukaukarr ion jeion jenisDnisDoweowexx 1 1 – X8 – X8 50 – 50 – 100 me100 mesh;sh; i)

i) PemPembuatbuatan an larlarutan utan stastandarndar hishistamtamin:in: Laruta

Larutan stokn stok 1 mg/mL (1.1 mg/mL (1.000 ppm)000 ppm) Timbang teliti 169,1 mg hist

Timbang teliti 169,1 mg histamin 2 HCl (Hamin 2 HCl (Histamin dihidroklorid),istamin dihidroklorid), larutkan dan tepatkanlarutkan dan tepatkan menggun

menggunakan HCl 0,akan HCl 0,1 N dalam1 N dalam labu takalabu takarr 100 100 mL sampai bmL sampai batasatas volumevolume.. Siapka

Siapkan larutan ini dalamn larutan ini dalam kondiskondisi segari segar setiasetiap minggu dan disimpan dalamp minggu dan disimpan dalam refrrefrigeratigerator.or. larut

larutan stokan stok 10 µg/mL (10 ppm10 µg/mL (10 ppm)) Pi

Pipepett 1 mL l1 mL lararututkakan stn stocockk (1(1.0.000 pp00 ppm)m) mamasusukkkkan kan ke dale dalamam lalabu tabu takakarr 100 m100 mL danL dan tambahk

tambahkan lan larutan arutan HCl HCl 0,1 0,1 sampai sampai batasbatas volumevolume.. SiapkaSiapkan lan larutan rutan ini ini dalamdalam kondiskondisii segar

segar setiap misetiap minggu dan disinggu dan disimpan dalampan dalamm refrirefrigeratgerator.or. j)

j) LaLarurutatan kn kererjaja;; Buat

Buat larutalarutan kerja 0,1 µg/n kerja 0,1 µg/mL (0,1ppmmL (0,1ppm);); 0,2 µg/mL (00,2 µg/mL (0,2 ppm),2 ppm) dan 0,3 µg/mdan 0,3 µg/mL (0,3 ppm).L (0,3 ppm). Siapkan larutan ker

Siapkan larutan kerja ini setija ini setiap hari (sap hari (setiap akan digunakan).etiap akan digunakan). Apabila larutan kerApabila larutan kerjaja terse

tersebutbut menghasmenghasilkan flilkan fluoreseuoresensinya ynsinya yang maksiang maksimal pada pembmal pada pembacaan dengaacaan dengann instr

instrumen,umen, maka larmaka larutan kerutan kerja terseja tersebutbut dapatdapat diencediencerkan sesrkan sesuai dengan kuai dengan keperlueperluan.an. 4.3

4.3

4.3 Prosedur

4.3 ProsedurProsedur analisisProsedur analisisanalisisanalisis a)

a) BleBlendenderr concontoh toh hinhingga gga homohomogen.gen. b)

b) TimbaTimbang seksama ng seksama lebih kurang lebih kurang 10 g con10 g contoh dalamtoh dalambeakbeakerer glaglassss 250 mL dan tambahkan250 mL dan tambahkan 50 m

(16)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(17)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 c)

c) PaPananaskskan an diadiatatass waterbathwaterbath selama 15 meselama 15 menitnit pada suhu 60 °C dipada suhu 60 °C dijaga sampjaga sampel dalamel dalam kondisi tertutup,

kondisi tertutup, dinginkan hingga suhu dinginkan hingga suhu kamar.kamar. d)

d) TuangkTuangkan contoh ke an contoh ke dalamdalam labu labu takartakar 100 mL 100 mL dan tepatkan hingdan tepatkan hingga ga volume labu dengavolume labu dengann metanol.

metanol. e)

e) SarSaring mengguing menggunaknakan an kerkertassaritassaring ng dan dan filfiltratratnytnya a ditditampuampung dng dalamalam botbotol col contontoh.oh. PadPadaa tahap ini fi

tahap ini filtratltrat contoh dacontoh dapatpat disimdisimpan dalampan dalam refrirefrigeratogerator.r.

4.3.1 Persiapan 4.3.1 Persiapan 4.3.1 Persiapan 4.3.1 Persiapan resin resin

a)

a) Timbang 3 gresinTimbang 3 gresin untuntukuk setsetiap iap kolkolomom daladalammbeakbeakerer glaglassss250 mL.250 mL.

b)

b) Tambahkan 15 mL NaOH 2 N/g resin untukTambahkan 15 mL NaOH 2 N/g resin untuk mengubamengubahresinresin menjadi h menjadi bentukbentuk OH.OH. c)

c) AdAdukuk memengnggugunanakakannstirer-platestirer-plateselama 30 menit.selama 30 menit.

d)

d) Tuang cairan pada bagian atasTuang cairan pada bagian atas dan ulangi penambahan NaOH dan ulangi penambahan NaOH 2 N dengan j2 N dengan jumlah yangumlah yang sama.

sama. e)

e) CuCucici/b/bililasas reresisinndengan aqudengan aquadessebanyak3 adessebanyak3 kali.kali. f)

f) SaSariring ng memelalaluluiikerkertastas sarsaringingNo.No. 588 588 atau atau yang yang setarsetara a dan dan cuci cuci kembalkembaliidengan aquades.dengan aquades.

g)

g) SiapkSiapkan resin setiap minggu dan simpan dalaman resin setiap minggu dan simpan dalam aquadesaquades..

4.3.2 4.3.2

4.3.2 Persiapan

4.3.2 PersiapanPersiapanPersiapan kolokolomkolomkolom resinm resin a)

a) MaMasusukkkkanan glasswoolglasswoolke dake dalamlam kolkolomomresinresin setsetinginggi ±gi ± 1,5 cm1,5 cm.. b)

b) MasMasukkukkan resian resin dalamn dalam medmediumiumairair ke ke kolkolomom resresin setiin setingginggi±± 8 c8 cm,m, perpertahatahankankan volumn volumee air

air yang yang berada berada diatasdiatas resin resin ±± 1 c1 cm,m, jangan jangan dibiardibiarkan kan kerinkering.g. c)

c) LeLetatakkkkan lan lababuu ttaakkaarr 5500 mmLL yyaanngg ssuuddaahh bbeerriissii 55 mmLL HHCCll 11 NN ddi i bbaawwaah h kkoolloomm rreessiinn guna menampung

guna menampungelusielusi contoh contoh yang dyang dilewatilewatkan pakan pada kolda kolomom resinresin.. DiperDiperlihatklihatkan dalan dalamam Ga

Gambambarr 1.1.

Gambar 1

Gambar 1 – Persiapan– Persiapan kolomkolom Gambar 1

Gambar 1 – Persiapan– Persiapan kolom resinkolom resinresinresin

4.3.3 4.3.3

4.3.3 Pemurnian

4.3.3 PemurnianPemurnianPemurnian contcontohcontohcontohoh a)

a) PiPipepett 1 m1 mL fL fililtrtratat cocontntoh,oh, mamasusukkkkan an dadalalamm kokololomm reresisin,n, krkran an kokololomm reressin in daldalamam poposisisisi terbuk

(18)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(19)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 b)

b) TaTambmbahkahkan an aquaquadadeses padpada sa saataat titinggnggi i cacairiran an ±± 11cmcm di atasdi atas resresin dan in dan biarbiarkan cakan cairairann terel

terelusi.usi. LakukaLakukan setern seterusnya husnya hingga hasingga hasil elusil elusi dalami dalam labu taklabu takarar tepattepat 50 mL.50 mL. Hasil Hasil elusielusi (cont

(contoh)oh) dapatdapat disimpdisimpan an dalamdalam refrrefrigeratigerator.or.

4.3.4 4.3.4

4.3.4 Pembentukan

4.3.4 PembentukPembentukanPembentukanan senyawsenyawa turunansenyawa turunansenyawaaturuturunannan (deri(derivatisas(derivatisasi)(derivatisasi)vatisasi)i) Siapk

Siapkan tabung reaksan tabung reaksi 50 mL masing-masi 50 mL masing-masing untuking untuk contohcontoh,, standastandarr dan blanko.dan blanko. a)

a) PipetPipet masingmasing-masi-masing 5 mL ng 5 mL filtrfiltratat contohcontoh,, larutlarutan san standartandar kerja kerja dadan blankn blanko (HCo (HCl l 0.1 N0.1 N)) b)

b) TambahTambahkan kan kedalamkedalam tabung tabung reaksreaksi di diatasiatas bebertururturut-turt-turut:ut:



 10 mL HCl 10 mL HCl 0,1 N,0,1 N, kocokkocok.. 

 3 mL NaOH 1 N,3 mL NaOH 1 N, kockocok,ok, daladalamm wakwaktu 5 menitu 5 menitt harharusus sudsudah diah ditamtambah 1 mL OPbah 1 mL OPTT 0,1%0,1%,,

kocok

kocok dan biarkan seladan biarkan selama 4 menit.ma 4 menit.



 3 mL H3PO4 3 mL H3PO4 3,57 N,3,57 N, kocok.kocok.

c)

c) LakLakukan ukan pengpengukurukuran flan fluoruoroseosence tnce terherhadap cadap contoontoh,h, stastandarndar dan bdan blanklanko seso sesegeegerara mungki

mungkin dengan an dengan alatlat spektrspektrofluorofluorometerometer pada panjpada panjang geloang gelombang exmbang exsitassitasi:i: 350 nm350 nm dandan emisi:

emisi: 444 444 nmnm dalamdalam jangka jangka waktu waktu 90 menit.90 menit. 4.4 Perhitungan

4.4 Perhitungan 4.4 Perhitungan 4.4 Perhitungan

a)

a) MasukkMasukkan hargan harga konsea konsentrasi ntrasi dan fludan fluoresenoresensi darsi dari laruti larutan stanan standardar kerja kerja ke dalamke dalam pro

progragramm linlinierier kalkalkulkulatoator.r. NilNilai:ai: koekoefisfisien korien korelaselasi regrei regresi (r)si (r),, sloslope (b)pe (b) dardari interi intersep (a)sep (a) digunakan untuk

digunakan untuk menghitung konsentrasi menghitung konsentrasi contoh.contoh. Masukkan harga Masukkan harga fluoresensi contoh fluoresensi contoh keke persamaan regresi standar:

persamaan regresi standar: y = a + b x

y = a + b x keterangan: keterangan: y

y :: flufluoreoresensensi contsi contoh;oh; a :

a : interintersep;sep; b:

b: slslopope;e; x

x :: konsenkonsentrasi trasi contoh ycontoh yang akan dang akan dihitungihitung.. b)

b) SetSetelah didapelah didapatat harharga ga x,x, kalkalikaikan n dengdengan an fakfaktortor pengpengencenceraeran n dan dan kemkembalbalikaikan n ke ke berberatat contoh

contoh.. NyataNyatakan kandungkan kandungan histamian histamin dalamn dalam (µg/(µg/g)g) atau mg/kg contoh.atau mg/kg contoh. Kons

Konsentrentrasi asi hishistamtamin (µin (µg/gg/g)) contcontoh =oh = AA ×× vovolulume akhme akhirir (m(mL)L) -- fpfp gra

gramm concontohtoh Keterangan:

Keterangan: A

A :: KonKonsensenttrasrasii (X)(X) yanyangg didadidapatdalapatdalamm perperhithitungaungan(µgn(µg/mL/mL))

5 5

5 Penentuan

5 PenentuanPenenPenentuantuan histahistaminhisthistaminamin secaraminsecarasecara KCKTsecara KCKTKCKTKCKT 5.1 Peralatan

5.1 Peralatan 5.1 Peralatan 5.1 Peralatan a

a)) HHoommooggeenniizzeerr;; b

b)) MMeemmbbrraan fn fiilltteerr 00,,445 µ5 µmm;; c)

c) PePeraralalatatan gen gelalas.s. GeGelalass pipialala,a, tatabubung rng reaeaksksi 50 mi 50 mL,L, pipipepet,t, lalabu tbu takakarar;; d)

d) SeSepeperarangngkakatt perperalalatatan an KCKCKTKT didilelengkngkapi api dendengagan dn detetekektotorr flfluoruoresesenen;; e

(20)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(21)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 g)

g) UltrUltrasonicasonickk bath;bath; h) h) VortexVortex.. 5.2 Pereaksi 5.2 Pereaksi 5.2 Pereaksi 5.2 Pereaksi a)

a) LaLarurutatan n AsAsamam TrTrikiklolororoasasetetatat (T(TCACA)) 10% 10% ununtutukk menmengekgekststraraksksi i cocontntohoh,, 100 100 g g TCTCAA larut

larutkan dengkan dengan 1 L aquabidesan 1 L aquabides (sedi(sedikitkit demi seddemi sedikitikit hingga lhingga larutarut sempursempurna);na); b)

b) LarLarutautan n AsaAsamm TrTrikliklooroaroasetsetatat (TC(TCA)A) 10% 10% daldalamam aairir pro pro KCKKCKT;T; Larutk

Larutkan 10 an 10 g TCg TCAA dalamdalam 100 mL 100 mL airair pro KCpro KCKTKT kemudiakemudian sarn saring deing dengan mengan membran mbran filtefilter r 0,4

0,45 µm.5 µm. LarLarutan iutan ini dini digunagunakan unkan untuktuk memmembuatbuat dan medan mengenngencercerkan lakan larutrutan bakan bakuu histamin.

histamin. c

c)) AiAirr prpro Ko KCCKTKT;; d)

d) LarLarutautan OPAn OPA (or(orto-to-ftaftalallaldehdehid)id);; Larutk

Larutkan 20 mg an 20 mg OPAOPA dalamdalam 2 mL metanol,2 mL metanol, dalamdalam setiap setiap analisanalisa larua larutan ini tan ini dibuatdibuat segar.segar. e)

e) NNaOaOH H 1 N1 N,, larut

larutkan 4 g Nkan 4 g NaOH dalaOH dalamam 100 mL ai100 mL airr pro KCKpro KCKT;T; ff)) HHCCl l 3 3 NN;;

Encer

Encerkan 12 kan 12 mL HCmL HCl 12,5 l 12,5 N (37%N (37%)) dalamdalam labu talabu takarkar 50 mL.50 mL. g)

g) AsetoAsetonitrinitril l pro KCpro KCKKTT saring saring dengan mdengan membran embran fifilterlter PTFEPTFE;; h)

h) LarLarutautan Natrin Natriumum dihdihidridrogen foogen fosfasfatt (N(NaH2aH2PO4PO4);); Larutk

Larutkan 0,34an 0,3449 g N49 g NaH2POaH2PO4.H2O4.H2O dalamdalam 300 mL 300 mL airair pro Kpro KCKTCKT sarinsaring dengag dengan membn membranran filte

filterr 0,45 µ0,45 µm,m, dalamdalam setiap setiap analisanalisa lara larutan iutan ini dibni dibuatuat segar.segar. i)

i) MeMetatanonol pl pro ro KCKCKTKT;; j)

j) LaLarurutatan ban baku ku hihiststamiamin;n; k)

k) LarutaLarutan n stokstok hihistamistamin 1 n 1 mmg/mL (g/mL (1.000 1.000 ppm);ppm); Timbang seksama lebih kur

Timbang seksama lebih kurang 169,1 mg histamin 2HCl (histamin dihidroklorid)ang 169,1 mg histamin 2HCl (histamin dihidroklorid) larutkanlarutkan dan te

dan tepatkan patkan menggunamenggunakan lkan larutan arutan TCATCA 10% da10% dalamlam labu tlabu takarakar 100 mL 100 mL sampai sampai batas.batas. Simpan dalam

Simpan dalam refrirefrigeratogerator.r. l)

l) LaLarurutatan bn bakaku 1u 10 µ0 µg/g/mLmL;; Pip

Pipetet 1 m1 mL lL laruarutkatkan sn stoktok (1.(1.000 000 ppmppm)) masmasukkukkan an ke ke daladalamm lablabu tu takaakarr 100 100 mL mL dandan tambahk

tambahkan larutan TCan larutan TCAA 10% sampai ba10% sampai batas.tas. LarutaLarutan ini dapatn ini dapat digunakdigunakan maksiman maksimal satual satu minggu setelah dibuat.

minggu setelah dibuat. m)

m) LarutaLarutan baku n baku kerjakerja.. BuatBuat larutlarutan keran kerja 2,5 ja 2,5 µg/mLµg/mL,, 5 µg/5 µg/mL,mL, 10 µg/10 µg/mL dan mL dan 20 µg/20 µg/mL;mL; Siapkan larutan

Siapkan larutan baku kerbaku kerja ini dalamja ini dalam keadaan segarkeadaan segar setiap akan digunakan.setiap akan digunakan. 5.3

5.3

5.3 Prosedur

5.3 ProsedurProsedur analisisProsedur analisisanalisisanalisis a)

a) BleBlendenderr concontoh toh hinhingga gga homohomogen.gen. b)

b) TimTimbang sbang sekseksama leama lebbih kurih kurang 50 g conang 50 g contoh ke datoh ke dalalamm gelagelass pialpiala,a, tamtambahbahkan 10kan 100 mL0 mL TCA

TCA 10% kemudian blen10% kemudian blender.der. c)

c) PindahkPindahkan kean kedalamdalam tabung tabung rreaksi eaksi 50 mL,50 mL, sesentrifntrifugal paugal pada da 3.500 3.500 rpmrpm selaselama 10 ma 10 menit.menit. Saring

Saring supersupernatan natan dengan dengan membramembran filn filterter 0,45 0,45 µmµm kemudikemudian sian simpan pmpan pada suada suhuhu ref

refrigrigeraeratortor (±(± 4 4 °C)°C).. d)

d) DeDeririvavatitisasasisi.. e)

e) PipetPipet masing-masing-mamasing sing 135 135 µL µL larutalarutan ban baku kku kerja erja dan fdan filtratiltrat contohcontoh,, masukmasukkan kan kedalakedalamm tabung reaksi 10 mL.

tabung reaksi 10 mL. f)

f) TambahTambahkan kan masingmasing-masi-masing kedng kedalamalam lalarutan barutan baku kerja ku kerja dan fildan filtrattrat contoh contoh berturberturut-turut-turut:ut:



 1,86 mL air1,86 mL air pro KCKTpro KCKT kemudikemudian divan divortex.ortex. 

 0,4 mL NaOH 1 N0,4 mL NaOH 1 N,, biarkan biarkan selama 1 menit.selama 1 menit. 

 0,1 mL laru0,1 mL larutan OPA,tan OPA, vortexvortex dan biarkan dan biarkan selama 4 meselama 4 menit.nit. 

 0,2 mL HC0,2 mL HCl 3 N,l 3 N, vortexvortex..

g)

g) MasukMasukkan kkan ke vial dan se vial dan siap untukiap untuk diinjediinjeksikaksikan ke krn ke kromatogromatograf.af. h)

(22)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(23)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 i)

i) InjInjekseksikaikan kedn kedalaalamm krokromatmatogrografaf secsecaara berurra berurutautan larutn larutan blan blanko baanko baku,ku, bakbaku keru kerja darija dari konsen

konsentrasi trasi terendterendah,ah, blanko blanko pereakpereaksi si dan dan contoh.contoh. RekamRekam area area puncakpuncak kromakromatogramtogram utama dari masing-masing larutan yang diinjeksikan.

utama dari masing-masing larutan yang diinjeksikan. 5.4

5.4

5.4 Kondisi 5.4 KondisiKondKondisiisi KCKTKCKTKCKTKCKT a)

a) DeDetetektktoror :: flfluouoreresesensns (h(higigh ph preressssurure e xexenonon ln lamamp)p).. b

b)) EEkkssiittaassi :i : 33550 0 nnmm.. c

c)) EEmmiissi i :: 44550 0 nnmm.. d)

d) KoKololomm :: C-C-18 18 (4(4,6 ,6 mmmm xx 22220 0 mmmm)) teterkrkememasas dedengngan an ukukururan an papartrtikikel el 5 µ5 µm.m. e)

e) FaFase gse gererakak :: asasetetonionitrtril il :: NaNatrtriuiumm didihidhidrorogen gen fofosfsfatat 50 m50 mmomol/l/l (l (30 :30 : 770)0).. ff)) LLaajju u aalliirr :: 00,,7 7 mmLL//mmeenniitt..

g)

g) VoluVolume me ininjejeksksi:i: 20 20 µµl.l. h)

h) PastikPastikan peran peralatalatan KCan KCKTKT berberfunfungsi dgsi dengengan baian baikk dan ladan lakukkukan uji kan uji keseesesuasuaian sian sististemem 5.5 Perhitungan 5.5 Perhitungan 5.5 Perhitungan 5.5 Perhitungan 5.5.1 5.5.1 5.5.1 Perhitungan

5.5.1 PerhitunganPerhitungan menggunakanPerhitunganmenggunakanmengmenggungunakanakan 11 (satu)1 (satu)1(satu) titik(satu) titiktitik konsentrasititik konsentrasikonsekonsentrasntrasii standstandar standar standar ar

Kan

Kandungdungan han hististamiamin (n ( g/gg/g))==

(( AACC-- AABPr BPr )) (( AASS-- AA ABS ABS)) x x CCstdstdxx VV A A W W Keterangan: Keterangan: A

ACC :: Area Area contohcontoh;;

A

ABPrBPr :: Area blankArea blanko pereakso pereaksi;i;

A

ASS :: AreArea baka baku;u;

A

A ABS ABS _{:: Area}_{Area blanko}_{blanko baku;}_baku;

C

Cstdstd :: KonsenKonsentrasi baku (µg/trasi baku (µg/mL);mL);

V

V A A :: VolVolume aume akhikhirr (mL(mL););

W

W : B: Beerraat ct coonnttooh h ((gg)).. 5.5.2

5.5.2

5.5.2 Perhitungan

5.5.2 PerhitunganPerhitungan menggunakanPerhitunganmenggunakanmengmenggungunakanakan kurvakurvakurva standar kurva standar standar standar Masuk

Masukkan harkan harga konsga konsentrasentrasi dan li dan luasuas area darea dari lari larutan arutan standastandarr kerja kerja ke dalke dalamam prograprogramm linear

linear.. Nilai Nilai koefikoefisien sien korekorelasi lasi regresregresi (ri (r),), kemirkemiringan ingan (slo(slope)pe) (b)(b) dan idan intersntersep (aep (a)) digunakdigunakanan untuk

untuk menghitmenghitung konung konsentrasentrasi consi contoh.toh. MasukMasukkan luakan luass area coarea contoh ke ntoh ke persampersamaan regaan regresiresi standar:

standar:

y

(24)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(25)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI 23542354.10:.10:20162016 SNI SNI 23542354.10.10:20:201616 Keterangan: Keterangan: A

A :: KKoonnsseentn trraassi i ((xx)) yyaanng dg diidad appaatt ddaallaamm ppeerrhhiittuunnggaan (n (µµgg//mmLL)) V

V A A :: VolVolume aume akhikhirr (mL(mL););

W W : B: Beerraat ct coonnttooh h ((gg)).. 6 Pelaporan 6 Pelaporan 6 Pelaporan 6 Pelaporan a)

a) Jika angka desJika angka desimal kuraimal kurang ng dari 5 dari 5 maka pembulmaka pembulatan kebawatan kebawah,ah, tetapi biltetapi bila lebih daria lebih dari55 pembulatan keatas. pembulatan keatas. CONTOH: CONTOH: 14,454 dibulatkan menjadi 14,45 14,454 dibulatkan menjadi 14,45 14,466 dibulatkan menjadi 14,47 14,466 dibulatkan menjadi 14,47 b)

b) Jika angka ke Jika angka ke tiga di belakatiga di belakang ng koma 5,koma 5, dan dan angka kedua genaangka kedua genap,p, maka maka angka 5 tersebangka 5 tersebutut menjadi hilang tetapi bila angka kedua ganjil maka pembulatan keatas.

menjadi hilang tetapi bila angka kedua ganjil maka pembulatan keatas. CONTOH: CONTOH: 14,765 dibulatkan menjadi 14,76 14,765 dibulatkan menjadi 14,76 14,475 dibulatkan menjadi 14,48 14,475 dibulatkan menjadi 14,48 7 7 7 Keamanan

7 KeamananKeamanKeamananan dandandandan keselamkeselamatankeselamkeselamatanatanatan kerjakerjakerjakerja Untuk

Untuk menjaga keamamenjaga keamanan dan keselamatan kernan dan keselamatan kerja selama melakukja selama melakukan analisa maka perluan analisa maka perlu diperhatikan hal-hal sebagai berikut:

diperhatikan hal-hal sebagai berikut: a)

a) Cuci taCuci tangan sebengan sebelumlum dan sesudan sesudah melakdah melakukan analukan analisa.isa. b)

(26)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(27)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 Lampi Lampiranran AA Lamp Lampiraniran AA (informatif) (informatif) Valid

Validasiasi metometode de penepenentuantuann histahistaminmin dengdenganan KCKTKCKT Valid

Validasiasi metometode de penenpenentuantuan histhistaminamin dengdenganan KCKTKCKT

A.1 A.1 A.1 Uji

A.1 UjiUjiUji linealinearitaslinearitaslinearitasritas A.1.1

A.1.1

A.1.1 Linearitas

A.1.1 LinearitasLinearitas KurvaLinearitas KurvaKurva Standar Kurva Standar Standar Standar

Gambar A.1 - Kurva kalibrasi Gambar A.1 - Kurva kalibrasi Gamb

Gambar A.1 - Kurva kalibrasiar A.1 - Kurva kalibrasi larutlarutanlarutanlarutan standar an standstandar histamstandar histaminar histaminhistaminin Kurva s

Kurva standartandar menunjukkan linearitasmenunjukkan linearitas dengan koefisien dengan koefisien korelasi regresi korelasi regresi 0,9938 – 0,9993.0,9938 – 0,9993. A.1.2 Linearitas

A.1.2 Linearitas A.1.2 Linearitas

A.1.2 Linearitas Spike Spike sampel sampelsampelsampel Uji linieritas

Uji linieritas dilakukan dari data spike dilakukan dari data spike sampel yang berasal dari sampel yang berasal dari data tabel uji akurasi,data tabel uji akurasi, sel

selanjuanjutnytnya diba dibuatuat kurkurva antva antara kara konsonsententrasrasi spii spike (0ke (0;; spispike loke lod;d; 0,5 M0,5 MRL;RL; 1 MRL d1 MRL danan 1,5 MRL)

1,5 MRL) versuversuss area sampelarea sampel.. Nilai koefNilai koefisien korelisien korelasi regresasi regresi adalah 0,9913 – 0,9957 sepertii adalah 0,9913 – 0,9957 seperti pada ga

(28)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(29)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 A.2 A.2 A.2 Uji

A.2 UjiUjiUji batbatasbatas deteksibatas deteksiasdeteksdeteksii histahistaminhistaminhistaminmin Tab

Tabelel A.1 A.1 HasiHasill ujiuji LOLOD D dandan LOQLOQ Tab

Tabelel A.1 A.1 HasiHasill ujiuji LOD LOD dandan LOLOQQ

No. Uraian

No. Uraian Luas AreaLuas AreaLuas AreaLuas Area

1

1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 77

1

1 Spiked Spiked 10 10 µg/g µg/g 1884200 1884200 1886056 1886056 2000579 2000579 1732191 1732191 1807526 1807526 1769741 1769741 19177591917759 2 Blanko

2 Blanko Sampel Sampel 196567 196567 203321 203321 193708 193708 198069 198069 200348 200348 194063 194063 197922197922

Kadar Spiked Sampel (µg/g) dan Kadar Blanko Sampel (µg/g) Kadar Spiked Sampel (µg/g) dan Kadar Blanko Sampel (µg/g) Kadar Spiked Sampel (µg/g) dan Kadar Blanko Sampel (µg/g) Kadar Spiked Sampel (µg/g) dan Kadar Blanko Sampel (µg/g)

3

3 Kadar Kadar Spiked Spiked SampelSampel 99,,9966 99,,9977 1100,,5588 99,,1166 99,,5555 99,,3355 1100,,1133

4

4 Kadar Kadar Blanko Blanko SampelSampel 11,,4422 11,,4466 11,,4400 11,,4433 11,,4444 11,,4400 11,,4433

5

5 Rerata Rerata LuasLuas Area Area Blanko Blanko Sempel Sempel 197714,000197714,000

6

6 Rerata Rerata LuasLuas Area Area Spiked Spiked 10 10 µg/g µg/g 1856864,5711856864,571 7

7 Rerata Rerata Kadar Kadar Spiked Spiked SampelSampel 9,819,819,819,81 µg/gµg/gµg/gµg/g 8

8 Rerata Rerata Kadar Kadar Blanko Blanko SampelSampel 1,431,431,431,43 µg/gµg/gµg/gµg/g 9

9 SDSD Blanko Blanko Sampel Sampel 0,0240,024

10

10 SDSD Spiked Spiked Sampel Sampel 0,4900,490

1 111 3 3SSDD 00,,007733 1 122 6 6SSDD 00,,114466 13 LOD 13 LOD 1,50 1,50 1,50 1,50 µg/gµg/gµg/gµg/g 14 LOQ 14 LOQ 1,57 1,57 1,57 1,57 µg/gµg/gµg/gµg/g Uji batas

Uji batas deteksi dilakukan deteksi dilakukan dengan pengujian terhadap dengan pengujian terhadap blanko sampel blanko sampel sebanya tujuh sebanya tujuh kalikali ulangan

ulangan (replik(replikat),at), menghasilkan menghasilkan rata-rata rata-rata konsentrasi konsentrasi 1,43 1,43 mg/kg mg/kg dengan dengan standarstandar deviasideviasi 0,0

0,024.24. DarDari rata-i rata-ratrata tersea tersebutbut makmaka dapata dapat ditditententukan batukan batasas dedetekteksi (LOsi (LOD =D = 1,51,50 mg/kg0 mg/kg)) dandan batas

batas determdeterminasi inasi (LOQ(LOQ == 1,57 1,57 mg/kg)mg/kg).. A.3

A.3 A.3 Uji

A.3 UjiUjiUji akuakurasakuakurasirasi (%rasii(%(% recovery(% recovery ) dan) dan presis) dan) dan presispresisii (stanpresisii (stan(standar de(standar devdar deviasi)dar deviasi)viasi)iasi)

Uji akurasi dilakukan dengan pengujian terhadap blanko sampel yang telah diperkaya Uji akurasi dilakukan dengan pengujian terhadap blanko sampel yang telah diperkaya (disp

(dispike)ike) larutlarutan stanan standardar histamhistamin 50 µin 50 µg/g (2g/g (2,5 mL dar,5 mL dari 1000 mi 1000 mg/L)g/L) dilakudilakukan 7 ulkan 7 ulanganangan (repl

(replikat)ikat),, disajidisajikan dalamkan dalam Tabel A.2:Tabel A.2: Tabel

Tabel A.2 - DatA.2 - Data ujia uji Tab

Tabelel A.2 - DA.2 - Data uata ujiji akuakurasiakurasakurasii spirasi spispike saspike samke sampelke sampempell 50 mgpel 50 mg50 mg/kg50 mg/kg/kg (50 g/kg (50 g(50 g + 2,5(50 g + 2,5 mL+ 2,5+ 2,5 mL larmL larmLlarutalarututanutanan stan stastandstandandar ndar ar r hista histaminmin 1000 mg/L)1000 mg/L) hist histaminamin 1000 mg/L)1000 mg/L) Standar Baku Standar Baku Standar Baku Standar Baku Luas Area Luas Area Luas Area Luas Area µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL 0 0 00 2.5 737250 2.5 737250 5 1211639 5 1211639 10 2594909 10 2594909 25 6249436 25 6249436

(30)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(31)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

SNI SNI SNI

SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616

Dari hasil uji akurasi

Dari hasil uji akurasi diperoleh % recoverydiperoleh % recovery rata – rata 85,99%.rata – rata 85,99%.

(dispike)ike) larutlarutan stanan standardar histamhistamin 100 µin 100 µg/g (5 g/g (5 mL darmL dari 1000 mi 1000 mg/L)g/L) dilakudilakukan 7 ulkan 7 ulanganangan (repl

(replikat)ikat),, disajidisajikan dalamkan dalam Tabel A.3Tabel A.3 Tabe

Tabell A.3 - Data ujA.3 - Data ujii Tab

Tabelel A.3 - DA.3 - Data uata ujiji akuakuakurasakurasirasi spirasii spispike saspike samke sampelke sampempell 100 mpel 100 m100 mg/k100 mg/kg/kgg/kgg (50 gg (50 g(50 g + 5(50 g + 5 mL+ 5+ 5 mL StamLmL StandStandStandar Bakundar Bakar Bakuar Bakuu Histamine 1000 mg/L) Histamine 1000 mg/L) Histamine 1000 mg/L) Histamine 1000 mg/L) Standar Standar Standar Baku

Standar BakuBBaakkuu LLuLuas AreaLuas AreauaassAreaArea µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL 0 0 00 5 1793099 5 1793099 10 3510049 10 3510049 25 7224836 25 7224836 50 12968622 50 12968622

IInntteerrcceepptt ((aa)) 525255556644,,552211 S Sllooppe e ((bb)) 225544009977,,559933 R R22 _0,9938_0,9938 No. No. No. Nama

No. NamaNama SampelNama SampelSampelSampel BobotBobotBobotBobot _Area_Area_AreaLuas_AreaLuasLuasLuas Volume Volume Volume Volume KonsentrasiKonsentrasiKonsentrasiKonsentrasi Kadar Kadar Kadar Kadar Histamine Histamine Histamine Histamine Kadar Kadar Kadar Kadar Blanko Blanko Blanko

Blanko Kadar Kadar Kadar Kadar Histamine Histamine Histamine Histamine (µg/g) (µg/g) (µg/g) (µg/g) Recovery Recovery Recovery Recovery (%) (%) (%) (%) (g) (g) (g) (g) Akhir Akhir Akhir Akhir (mL) (mL) (mL) (mL) Sampel Sampel Sampel Sampel

((((µµµµg/mL)g/mL)g/mL)g/mL) Awal (µg/g)Awal (µg/g)Awal (µg/g)Awal (µg/g) (µg/g)(µg/g)(µg/g)(µg/g) 1

1

1 Blanko

1 BlankoBlanko SampelBlanko SampelSampelSampel 50,0714 50,0714 50,0714 50,0714 353310353310353310353310 100 100 100 100 0,90830,90830,90830,9083 ---- 1,81 1,81 1,81 1,81 ---- ----2

2

2 Spike

2 Spike Sampel-1SpikeSpike Sampel-1Sampel-1 Sampel-1 50,0528 50,0528 50,052850,0528 11995583 11995583 1199558311995583 100 100 100100 45,1402 45,1402 45,140245,1402 90,1990,1990,1990,19 - - - - 88,3788,3788,3788,37 88,3788,3788,3788,37 3

3

3 Spike

4

4 Spike

5

5 Spike

6

6 Spike

7

7 Spike

8

8 Spike

8 Spike Sampel-7SpikeSpike Sampel-7Sampel-7 Sampel-7 50,0417 50,0417 50,041750,0417 11159326 11159326 1115932611159326 100 100 100100 41,8491 41,8491 41,849141,8491 83,6383,6383,6383,63 - - - - 81,8181,8181,8181,81 81,8181,8181,8181,81 Rata-rata Rata-rata Rata-rata 86,17 Rata-rata 86,17 86,17 86,17 86,1786,1786,1786,17 SD SD SD 2,9306 SD 2,9306 2,9306 2,9306 2,93062,93062,93062,9306 % % % RSD % RSDRSD RSD 3,403,40 3,40 3,40 3,403,403,403,40

Dari hasil uji akurasi

Dari hasil uji akurasi diperoleh % recoverydiperoleh % recovery rata – rata 86,17%.rata – rata 86,17%.

(dispike)ike) larutlarutan standaan standarr histamhistamin 150 µg/in 150 µg/g (7,5 mL dg (7,5 mL dari 1000 mari 1000 mg/L)g/L) dilakudilakukan 7 ulangkan 7 ulanganan (repl

(32)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

(33)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:20162354.10.10:20:201616 Tab Tabelel A.4A.4 Tab

Tabelel A.4 A.4 DatData Data Data ujia ujiuji akuuji akurasiakurasiakurasi spike rasi spispike sampespikekesampell Spike sampelsampel SpiSpike SaSpike Samke SamSammpelpelpel 150 pel 150 m150 mg/k150 mg/mg/kgg/kgkg (50 g (50 g(50 g + 7,5(50 gg + 7,+ 7,5+ 7,5 5 mLmLmLmL Standar

Standar BakuBaku Histamine 1000 Histamine 1000 mg/L)mg/L) Standar Baku

Standar Baku Histamine 1000 Histamine 1000 mg/L)mg/L) Standar Baku Standar Baku Standar Baku Standar Baku Luas Area Luas Area Luas Area Luas Area µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL 0 0 00 10 3891751 10 3891751 25 7127640 25 7127640 50 13928487 50 13928487 75 19694147 75 19694147

IInntteerrcceeppt (t (aa)) 676744990000,,778866 S Sllooppe e ((bb)) 225577992222,,000077 R R22 _0,9956_0,9956 No. No. No. Nama

No. Nama SampelNama SampelNamaSampel Sampel BobotBobotBobot (g)Bobot (g)(g)(g) LuasLuasLuasLuas Area Area Area Area Volume Volume Volume Volume Akhir Akhir Akhir Akhir (mL) (mL) (mL) (mL) Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Sampel Sampel Sampel Sampel (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) Kadar Kadar Kadar Kadar Histamine Histamine Histamine Histamine awal (µg/g) awal (µg/g) awal (µg/g) awal (µg/g) Kadar Kadar Kadar Kadar Blanko Blanko Blanko

Blanko _Histamine_Histamine_Histamine_HistamineKadar Kadar Kadar Kadar (µg/g) (µg/g) (µg/g) (µg/g) Recovery Recovery RecoveryRecovery (%) (%) (%) (%) (µg/g) (µg/g) (µg/g) (µg/g) 1 1 1 Blanko

1 Blanko SpikeBlanko SpikeBlankoSpikeSpike 50,0473 50,0473 50,0473 50,0473 315746315746315746315746 100 100100 100 0.9168 0.9168 0.91680.9168 1,83 1,83 1,831,83 --- - ----2

2

2 Spike

2 Spike Sampel-1Spike Sampel-1SpikeSampel-1 Sampel-1 50,0237 50,0237 50,023750,0237 19201838 19201838 1920183819201838 100 100 100100 71.8315 71.8315 71.831571.8315 143,60143,60143,60143,60 - --- 141,76141,76141,76 141,76 94,5194,5194,5194,51 3

3

3 Spike

4

4 Spike

5

5 Spike

6

6 Spike

7

7 Spike

8

8 Spike

8 Spike Sampel-7Spike Sampel-7SpikeSampel-7 Sampel-7 50,0613 50,0613 50,061350,0613 18124113 18124113 1812411318124113 100 100 100100 67.6531 67.6531 67.653167.6531 135,14135,14135,14135,14 - --- 133,31133,31133,31 133,31 88,8788,8788,8788,87 Rata-rata Rata-rataRata-rata 138,13 Rata-rata 138,13 138,13 138,13 92,0892,0892,0892,08 SD SD SD 5,6983 SD 5,6983 5,6983 5,6983 3,79893,79893,79893,7989

(34)

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime.

Try Scribd

FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions!

Start Free Trial

Cancel Anytime. SNI SNI SNI SNI 23542354.10:20162354.10:2354.10:2016.10:20201616 Nilai presisi (

Nilai presisi (relative standard deviationrelative standard deviation/RSD/RSD)) memenuhi persymemenuhi persyaratan kebertaratan keberterimaaerimaan n sesuaisesuai dalam

dalam Tabel Tabel HorwiHorwitztz Value Value dibawadibawah ini.h ini. Tabel

Tabel A.6 - HorwitA.6 - Horwitz Valuez Value Tabel

Tabel A.6 - Horwitz ValA.6 - Horwitz Valueue Kisaran

Kisaran Kisaran

Kisaran KonsenKKoKonsentrasionnsseennttrratrasiassii RRSRSD (%)RSD (%)SDD(%)(%) 1 1((110000%%)) 22 0,1 2,8 0,1 2,8 0 0,,0011((%%)) 44 0 0,,00001 1 ((gg//kkgg)) 55,,66 0,00001 8 0,00001 8 0,00001 11 0,00001 11 1 1 mmgg//kkg g ((ppppmm)) 1166 50 50 mg/kg mg/kg 8,888,88 100 100 mg/kg mg/kg 88 150 150 mg/kg mg/kg 7,527,52 0,1 0,1 mg/kg mg/kg 2,32,3 0,01 0,01 mg/kg mg/kg 3232 µ µg/kg (ppb)g/kg (ppb) 4545 Sum

Sumber ber :: CDCD 20022002/65/657/E7/ECC

Ru