BULETIN VETERINER UDAYANA

(1)

Volume 9 No.2 Agustus 2017 p-ISSN: 2085-2495; e-ISSN: 2477-2712 Online pada : http//ojs.unud.ac.id/index.php/buletinvet Terbit mulai 1 Pebruari 2009

p-ISSN: 2085-2495, e-ISSN: 2477-2712

BULETIN VETERINER UDAYANA

 Infeksi Coccidia dan Strongyloides pada Sapi Bali Pasca Pemberian Mineral

 Karakteristik Fisik Daging Sapi Bali dan Wagyu

 Aktivitas Enzim Tikus Putih yang Diberi Buah Pinang

 Bakteri Non-Coliform pada Feses Sapi Bali

 Total Bakteri pada Air minum di Peternakan Ayam Pedaging

 Sonogram Organ Mata Kucing Liar Indonesia

 Nilai Gizi dan Kualitas Fisik Daging Sapi Bali

 Respon Imun Primer Ayam Petelur Pasca Vaksinasi Egg Drop Syndrome

 Efek Pemberian Viusid

©

_{Pet Terhadap Aktivitas dan Kapasitas Makrofag}

 Pola Pertumbuhan Dimensi Panjang Alat Gerak Tubuh Itik Bali Betina

 Vitamin E terhadap Efek Samping Deksametason pada Paru-Paru Tikus

 Prevalensi Nematoda Gastrointestinal Bibit Sapi Bali di Nusa Penida

 Efektivitas Ekstrak Ethanol, Partisi N-Heksana dan Fraksi Kromatografi

Momordica charantia Dalam Menurunkan Glukosa Darah

 Karakteristik Fisikokimia Bakteriosin Asal Bakteri Asam Laktat Enterococcus

durans

DITERBITKAN OLEH FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN UNIVERSITAS UDAYANA

VOL 9 NO. 2 AGUSTUS 2017

(2)

Publikasi Ilmiah Ini Diterbitkan

Dua Kali Setahun Setiap Bulan Pebruari dan

Agustus Yang Bekerjasama Antara

Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Udayana

Asosiasi Dokter Hewan Praktisi

Hewan Kecil Indonesia (ADHPHKI)

Persatuan Dokter Hewan Indonesia (PDHI)

Cabang Bali

(3)

Trenggiling adalah mamalia dari ordo Pholidota, mempunyai empat spesies yang hidup di Asia. Trenggiling memakan serangga atau semut dengan cara menjulurkan lidah untuk menangkap mangsanya.

Redaksi:

Penanggung Jawab : Dekan Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana. Ketua : Ni Ketut Suwiti, Sekretaris: I Wayan Sudira, Penyunting/editor: I Nengah Kerta Besung, Iwan Harjono Utama, Wayan Bebas, Kadek Karang Agustina Luh Gde Sri Surya Heryani, I Gusti Ayu Agung Suartini, Ida Ayu Pasti Apsari, Ida Bagus Ngurah Swacita, I Nyoman Suartha, Ni Nyoman Werdi Susari, Desak Nyoman Dewi Indira Laksmi, Ida Bagus Oka Winaya, I Gusti Made Krisna Erawan. Copy Editor: I Made Merdana, I Wayan Sudira, Putu Suastika. Layout Editor: I Wayan Nico Fajar Gunawan, Made Kardena, Luh Made Sudimartini. Sekretariat: Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana. Jl. PB Sudirman Denpasar Telp. (0361) 223791. Email:buletinvet@gmail.com. Web: http//www.ojs.unud.ac.id/index,php/buletinvet.

Naskah yang dikirim ke redaksi Buletin Veteriner Udayana tidak

diperkenankan dipublikasikan lagi secara keseluruhan atau

sebagian tanpa seijin Buletin Veteriner Udayana

(4)

Prof. Dr. drh. Fedik Abdul Rantam, DVM Imunologi Molekuler dan Seluler. Lab. Virologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

Prof. Dr. Ir. I Gst Nyoman Gde Bidura, MS

Bioteknologi Pakan Fakultas Peternakan Universitas Udayana Ir. Dahlanuddin, M.Rur.Sc., Ph.D

Lab. Nutrisi dan Makanan Ternak/Herbivora Fakultas Peternakan Universitas Mataram

drh. Made Sriasih, M. Agr. Sc., Ph.D

Lab. Biotechnology and Immunology Fakultas Peternakan, Universitas Mataram.

Dr. Drh. Tyas Rini Saraswati,M,Kes

Lab. Ilmu Faal dan Kasiat Obat Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Diponegoro

Ir. I Nengah Sujaya , M.Agr.Sc Ph.D

Intestinal Microbiology, Ilmu Kesehatan Masyarakat, Fakultas Kedokteran Universitas Udayana

dr. Ni Nengah Dwi Fatmawati, S.Ked., SpMK, Ph.D

Medicine, Dentistry, and Pharmaceutical. Bag. Mikrobiologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Univesitas Udayana

Prof. Ir. I Made Anom S. Wijaya, M.App.Sc., Ph.D Jurusan Teknik Pertanian Fakultas Teknologi Pertanian

Universitas Udayana

Prof. Dr. drh I Gusti Ngurah Kade Mahardika Lab. Virologi Veteriner Universitas Udayana

Dr. Drh I Wayan Suardana, MSi

Dairy Sciences Lab. Kesmavet, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

(5)

Buletin Veteriner Udayana

Terbit sejak: 1 Pebruari 2009 Naskah asli

Original article

Infeksi Coccidia dan Strongyloides Pada Sapi Bali Pasca Pemberian Mineral

(THE INFECTION OF COCCIDIA AND STRONGYLOIDES IN BALI CATTLE POST-MINERAL ADMINISTRATION)

Komang Yogie Suryana Putra, Ida Ayu Pasti Apsari, Ni Ketut Suwiti ... 117 Karakteristik Fisik Daging Sapi Bali dan Wagyu

(BEEF PHYSICAL CHARACTERISTICS OF BALI AND WAGYU CATTLE)

Ni Ketut Suwiti, Ni Nyoman Citra Susilawati, Ida Bagus Ngurah Swacita ... 125 Aktivitas Enzim Alanine-Aminotransferase dan Aspartate Aminotransferase pada Tikus Putih Jantan yang Diberi Ekstrak Buah Pinang

(THE ACTIVITIES OF ALANINE AMINOTRANSFERASE AND ASPARTATE

AMINOTRANSFERASE ENZYMES IN MALE WHITE RATS TREATED WITH EXTRACT ARECA NUT TREATMENT)

Anak Agung Sagung Kendran, Anak Agung Gde Arjana, Anak Agung Sagung Istri

Pradnyantari ... 132 Perbandingan Jumlah Bakteri Non-Coliform pada Feses Sapi Bali Berdasarkan Tingkat Kedewasaan dan Tipe Pemeliharan

(COMPARISON OF NON-COLIFORM BACTERIA IN BALI CATTLE FAECES BASED ON LEVEL OF MATURITY AND MAINTENANCE PATTERN)

Kadek Andre Sulaksana, I Gusti Ketut Suarjana, I Nengah Kerta Besung ... 139 Total Bakteri pada Air minum di Peternakan Ayam Pedaging Desa Mengesta Kecamatan Penebel Kabupaten Tabanan

(TOTAL BACTERIA IN BROILER FARMING WATER IN MENGESTA VILLAGE, PENEBEL DISTRICT, TABANAN REGENCY)

I Nengah Kerta Besung, I Putu Yasmanta Primarta Putra, I Gusti Ketut Suarjana ... 145 Sonogram Organ Mata Kucing Liar Indonesia

(OCULAR SONOGRAM OF INDONESIAN STRAY CAT EYES)

Mokhamad Fakhrul Ulum, Deni Noviana ... 150 Nilai Gizi dan Kualitas Fisik Daging Sapi Bali berdasarkan Jenis Kelamin dan Umur

(NUTRITION LEVEL AND PHYSICAL QUALITY OF BALI BEEF ACCORDING TO THE SEX AND AGE OF CATTLE)

Mas Kadek Karang Agustina, I Made Ricky Dwi Cahya, Gusti Made Widyantara, Ida Bagus Ngurah Swacita, Anak Agung Gde Oka Dharmayudha, Mas Djoko Rudyanto ... 156

(6)

Respon Imun Primer Ayam Petelur Pasca Vaksinasi Egg Drop Syndrome

(PRIMARY IMUNE RESPON OF LAYER POST VACCINATED WITH THE EGG DROPS SYNDOME VACCINE)

Gusti Ayu Yuniati Kencana, I Nyoman Suartha,I Putu Wira Adi Wibawa ... 164 Efek Pemberian Viusid©_{Pet Terhadap Aktivitas Dan Kapasitas Makrofag Pada Mencit}

(THE EFFECT OF VIUSID©_{PET TO ACTIVITY AND CAPASITY OF MACROPHAGES IN MICE)}

Yoga Pratama Nuradi, I Nyoman Suartha, Ida Bagus Komang Ardana ... 171 Pola Pertumbuhan Dimensi Panjang Alat Gerak Tubuh Itik Bali Betina

(GROWTH PATTERNS OF THE LOCOMOTOR LENGTH DIMENSIONS THE FEMALE BALI DUCKS)

I Made Edi Suryawan, I Putu Sampurna, I Ketut Suatha ... 178 Pengaruh Suplementasi Vitamin E terhadap Efek Samping Deksametason pada

Paru-Paru Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicus)

(THE EFFECT OF VITAMIN E SUPPLEMENTATION TO THE SIDE EFFECT OF DEXAMETHASONE ON THE LUNG OF MALE WHITE RATS)

Bina Ichsantya, I Ketut Berata, Samsuri, I Made Merdana ... 188 Prevalensi Nematoda Gastrointestinal bibit Sapi Bali Di Nusa Penida

(THE PREVALENCE OF GASTROINTESTINAL NEMATODES OF BALI CATTLE BREEDERS IN NUSA PENIDA)

I Putu Agus Trisna Kusuma Antara, Ni Ketut Suwiti, Ida Ayu Pasti Apsari ... 195 Efektivitas Ekstrak Ethanol, Partisi N-Heksana dan Fraksi Kromatografi Momordica

charantia Dalam Menurunkan Glukosa Darah

(THE EFFECTIVENES OF ETANOL EXTRACT, PARTITION N-HEKSANA, AND

CROMATHOGRAPHY FRACTION OF MOMORDICA CHARANTIA L. TO LOWER BLOOD GLUCOSE LEVEL)

Ni Luh Putu Kusuma Clara Dewinda, I Nyoman Suartha, Luh Made Sudimartini ... 202 Karakteristik Fisikokimia Bakteriosin Asal Bakteri Asam Laktat Enterococcus durans Hasil Isolasi Kolon Sapi Bali

(PHYSICHOCHEMICAL CHACTERIZATION OF BACTERIOCIN PRODUCING ENTEROCOCCUS DURANS ISOLATED FROM COLON’S BALI CATTLE)

(7)

Dr. Sagung Chandra Yowani,S.Si.,Apt.,M.Si

Lab. Mikrobiologi Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Udayana.

Dr. dra. Tyas Rini Saraswati,M.Kes

Lab. Ilmu Faal dan Khasiat Obat Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Diponegoro.

Dra. Ni Luh Watiniasih, M.Sc., Ph.D.

Lab. Ekofisiologi Hewan Program Studi Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Udayana.

Dr. drh. I Nyoman Suartha, MSi.

Lab. Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Prof. Dr. drh. Gusti Ayu Yuniati Kencana, MP.

Lab. Virologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Dr. drh I Nengah Kerta Besung, MSi

Lab. Bakteriologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Dr.drh. I Gusti Ayu Agung Suartini, MSi.

Lab. Biokimia, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Dr. drh. I Gusti Made Krisna Erawan, MSi.

Lab. Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Drh. Kadek Karang Agustina, MP.

Lab. Kesmavet, Fakutas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Drh. Made Sudimartini, MP

Farmakologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Drh. Wayan Nico Fajar, M.Si

Lab. Radiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Dra. Ni Made Pharmawati, MSc. PhD.

Lab. Bioteknologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Udayana

Dr. drh. Maxs U E Sanam.

Lab. Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Cendana.

Prof. Dr. drh. Pudji Astuti

Lab. Fisiologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gajah Mada.

Prof. Dr.drh. I Nyoman Suarsana, MSi.

Lab. Biokimia Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Prof. Dr. drh Ni Ketut Suwiti, MKes,

Lab. Histologi, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana

Dr.drh. Michael Haryadi, MP.

Lab. Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gajah Mada

Drh. Ni Luh Putu Agustini, MP.

Lab. Bioteknologi Balai Besar Veteriner Denpasar.

Drh. Ni Made Restiati, Mphil.

Klinisi Perhimpunan Dokter Hewan Indonesia Cabang Bali

Dr.drh. AETH Wahyuni, MSi.

Lab. Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gajah Mada

Drh. Siti Komariah

Klinisi Asosiasi Dokter Hewan Praktisi Hewan Kecil Indonesia

(8)

Alamat Redaksi Fakultas Kedokteran Hewan

Jl. PB Sudirman Denpasar, Telp (0361)223791

(9)

209

Karakteristik Fisikokimia Bakteriosin Asal Bakteri Asam Laktat

Enterococcus durans Hasil Isolasi Kolon Sapi Bali

(PHYSICHOCHEMICAL CHACTERIZATION OF BACTERIOCIN PRODUCING ENTEROCOCCUS DURANS ISOLATED FROM COLON’S BALI CATTLE) I Wayan Suardana1, Hana Kristal Alamanda Septiara2, I Nyoman Suarsana3

1_{Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner,}2_Praktisi_{Dokter Hewan di Denpasar,} 3_{Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Udayana}

Jl. PB. Sudirman Denpasar, Bali Tlp. 0361223791. E-mail: wayan_suardana@unud.ac.id

ABSTRAK

Bakteri asam laktat mampu mengeksresikan senyawa antimikroba seperti bakteriosin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakterisasi fisiko-kimia bakteriosin asal bakteri asam laktat Enrerococcus durans isolat 18A hasil isolasi kolon sapi bali. Karakterisasi fisiko-kimia ini diawali dengan pewarnaan Gram dan uji katalase, selanjutnya dilakukan isolasi dan pemurnian bakteriosin. Hasil pemurnian bakteriosin selanjutnya diuji secara kimiawi dengan uji Ninhidrin, uji Molisch, dan uji Lowry. Selain dilakukan uji kimiawi, secara fisik bakteriosin juga diuji menggunakan sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) untuk mengtahui bobot molekulnya.Akhir penelitian dilakukan uji potensi daya hambat antibiotiknya terhadap bakteri indikator Bacillus cereus. Hasil penelitian menunjukkan bakteriosin asal bakteri asam laktat Enterococcus durans18A merupakan senyawa protein dengan konsentrasi protein sebesar 0,272 µg/ml dan tidak mengandung senyawa karbohidrat., Pengujian secara fisik dengan uji SDS-PAGE belum memperlihatkan adanya pita protein. Bakteriosin asal BAL Enterococcus durans isolat 18A juga diketahui memiliki efektivitas penghambatan terhadap Bacillus cereaus sebesar 23,88%.

Kata kunci: bakteri asam laktat; bakteriosin; fisikokimia ABSTRACT

Lactic acid bacteria can excrete antimicrobial compounds like bacteriocins. The study aimed to find out the characteristic of physic-chemical of bacteriocin producing Enterococcus durans isolate 18A isolated from colon’s bali cattle. The study initiated by Gram staining and catalase test, followed by isolation and purification of bacteriocin. The result of the research showed that bacteriocins of Enterococcus durans isolate 18A as a protein with it’s concentrationis 0,272μg/ml and it does not contain carbohydrate. On the other hand, the bacteriocins was not showed a band while tested on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The result showed, the bacteriocin producing Enterococcus durans isolate 18A has antimicrobial activity to Bacillus cereus as 23,88%.

Keyword: lactic acid bacteria; bacteriocins; physicochemical

PENDAHULUAN

Bakteri asam laktat (BAL) sudah umum diketahui oleh masyarakat luas memiliki banyak kegunaan seperti berperan dalam proses fermentasi pada beberapa produk makanan misalnya yogurt, yakult, susu asam dan keju.

Bakteri asam laktat juga dapat digunakan sebagai sumber probiotik (Suardana, 2009). Dalam penelitian yang dilakukan Azhar (2014) bakteri sumber probiotik juga mampu berperan sebagai imunostimulan. Menurut Widyastuti et al. (1999) bakteri asam laktat adalah bakteri

(10)

Buletin Veteriner Udayana Suwardana et al.

210

yang memiliki ciri-ciri umum berupa Gram positif, bereaksi negatif terhadap katalase dan tidak membentuk spora. Produk utama dari BAL adalah asam laktat, tetapi banyak laporan ilmiah yang membuktikan bakteri BAL ini mampu menghasilkan zat metabolit asam organik, hidrogen peroksida, dan bakteriosin yang bersifat sebagai antimikroba (Leroy, 2007). Suardana et al., (2016) menyatakan bahwa beberapa isolat BAL memiliki kemampuan sebagai penghasil bakteriosin, seperti isolat 18A yang sudah diidentifikasi secara molekuler sebagai

Enterococcus durans. Isolat tersebut

diketahui memiliki daya anti bakteri terhadap bakteri patogen seperti E.coli, dan S. Aureus dan negatif terhadap uji katalase.

Bakteriosin merupakan senyawa protein yang dieksresikan oleh bakteri yang bersifat dapat menghambat pertumbuhan bakteri lain terutama yang memiliki kekerabatan erat secara filogenik (Suardana, 2013a; Suardana, 2013b). Menurut subagyo (2015) protein memiliki karakteristik yang berbeda satu sama lain. Senyawa protein bakteriosin mudah terdegradasi oleh enzim proteolitik (Kusmiati, 2002). Pernyataan ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Suarsana (2011) dan Klaenhammer (1988) bahwa bakteriosin adalah protein atau kompleks protein yang bersifat bakterisidal terhadap spesies yang biasanya terkait erat dengan bakteri penghasilnya. Sebagai contoh jenis bakteri yang dihambat oleh bakteriosin diantaranya bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif seperti Salmonella

sp., E. coli, Helicobacter pylori, Listeria sp., Shigella sp., Vibrio sp. dan Staphylococcus aureus.

Mekanisme kerja bakteriosin yang dihasilkan oleh bakteri Gram positif terhadap sel target dalam menghambat atau membunuh bakteri patogen telah terbukti beragam. Bakteriosin yang memiliki kemampuan menghambat

pertumbuhan mikroorganisme patogen biasanya digunakan sebagai antibiotik alami dan dapat dimanfaatkan untuk biopreservasi makanan karena bakteriosi memiliki beberapa keuntungan, yaitu tidak bersifat toksik dan mudah mengalami biodegradasi karena bakteriosin ini adalah senyawa protein yang tidak membahayakan mikroflora usus, mudah dicerna oleh enzim-enzim dalam saluran pencernaan, aman bagi lingkungan (Suardana, 2007; Suardana, 2014). Bakteriosin bersifat stabil, tahan terhadap proses pengolahan yang melibatkan asam dan basa, serta suhu panas dan dingin, dapat beradaptasi dengan baik pada lingkungan tempat diproduksinya, mempunyai stabilitas penyimpanan yang lebih baik, tidak mengubah cita rasa, dan mempunyai spektrum yang kecil terhadap aktivitas mikroorganisme (Jay,1992). Penelitian yang dilakukan oleh Van den Berghe et

al. (2006) menjelaskan bahwa bakteriosin

yang dihasilkan oleh BAL mempunyai sifat stabil terhadap pengolahan panas mulai dari kisaran 98°C selama 30 menit sampai 121°C selama 15 menit, dan Aktif pada pH rendah (dibawah pH 6). Selain Norman et al (2005) menyatakan bakterisoin yang dihasilkan oleh

Paenibacillus polymixa mampu

menghambat bakteri Campulobacter, yang merupakan bakteri penyebab penyakit foodborne.

METODE PENELITIAN

Adapun beberapa prosedur yang dilakukan dalam penelitian ini yaitu:

Rekultivasi isolate Enterococcus durans

Sebanyak 20 mikro isolat bakteri

Enterococcus durans isolate 18A yang

telah diencerkan diambil menggunakan mikropipet ditanam pada media MRS

broth yang telah disiapkan. Selanjutnya

diinkubasikan pada suhu 37oC dalam inkubator selama 24 jam.

Pewarnaan Gram

(11)

211

durans dibuat ulasan pada preparat,

kemudian dikeringkan dan diwarnai dengan kristal violet 2% selama 1 menit, selajutnya dicuci dengan air mengalir. Langkah berikutnya ulasan preparat ditetesi dengan lugol selama 1 menit, kemudian dicuci kembali dengan air mengalir. Preparat isolat yang telah bersih ditetesi dengan alkohol aseton selama 1 menit, kemudian dicuci dengan air mengalir. Setelah itu, preparat isolat diwarnai dengan Safranin selama 5 detik, kemudian dicuci kembali dengan air mengalir. Selanjutnya preparat isolat bakteri Enterococcus durans dilihat dibawah mikroskop (Lay, 1994)

Uji Katalase

Pada uji katalase dua tetes isolat bakteri Enterococcus durans ditambahkan dua tetes H2O2 10%. Apabila terdapat

gelembung gas maka hasil uji katalase menunjukkan hasil positif. sebaliknya, bila tidak terbentuk gelembung gas pada reaksi uji katalase, maka hasil uji menunjukkan hasil negatif (Lay, 1994)

Isolasi dan Produksi Bakteriosin BAL

Spesies BAL isolat 18A hasil rekultivasi ditanam dalam 5 ml media MRS broth dan diinkubasikan pada suhu 37oC selama 24 jam. Selanjutnya disentrifugasi pada 7000 rpm selama 10 menit. Supernatan yang diperoleh dipresipitasi dengan amonium sulfat. Untuk mendapatkan presipitat bakteriosin tersebut supernatan bebas sel sebanyak yang dibutuhkan ditambah amonium sulfat sebanyak 9,05 gram dengan persen kejenuhan 70% secara perlahan-lahan sambil diaduk, selanjutnya disentrifius dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit. Endapan yang didapatkan kemudian dilarutkan dengan NaCl fisiologis pada perbandingan 1:1 (v/v) dan dimasukkan ke dalam tabung. Tabung digantung dan dicelupkan kedalan larutan NaCl fisiologis selama 24 jam. Larutan bakteriosin murni yang diperoleh digunakan untuk uji berikutnya (Sudirman

et al, 1993) Uji Ninhidrin

Sebanyak 1 ml larutan bakteriosin diberi dua tetes ninhidrin 0,1% (dalam aseton), kemudian dipanaskan dalam penangas air mendidih selam 5 menit. Apabila reaksi positif maka akan terlihat warna ungu (Harborne 1984).

Uji Molisch

Sebanyak 1 ml larutan bakteriosin yang diuji dicampur dengan Reagen Molisch (α-naphthol yang terlarut dalam etanol) hingga homogen, kemudian H2SO4

pekat perlahan-lahan dituangkan melalui dinding tabung reaksi agar tidak sampai bercampur dengan larutan atau hanya membentuk lapisan (Harborne 1984).

Uji Lowry

Uji lowry dalam penelitian ini dilakukan sesuai prosedur yang ditulis oleh Lowry et al. (1951).

Penentuan Bobot Molekul Bakteriosin

Penentuan bobot molekul bakteriosin dengan menggunakan metode SDS-PAGE mengacu pada Walker (1984) yang dimodifikasi sebagai berikut. Terlebih dahulu dibuat gel discontinous yang terdiri dari 12,5 % resolving gel dan 4% stalking

gel. Gel dimasukkan kedalam cetakan

menggunakan pipet, ditunggu hingga padat kemudian dibuat sumuran menggunakan cetakan gel. Selanjutnya 10 μl bakteriosin dan 30 μl larutan loading buffer ke dalam ependorf, inokulasikan pada suhu 90˚C selama 5 menit. Tahap berikutnya memasukkan marker protein ke dalam sumuran. Marker yang digunakan Bio Rad Precision Plus protein Standart 10-250 kDa. Kemudian masukkan bakteriosin ke dalam sumuran sebanyak 5 μl selanjutnya dirunning selama 1 jam. Gel diangkat dan diletakkan dalam wadah yang berisi coomasie briliant blue lalu simpan pada suhu kamar selama 24 jam. Uji Efektivitas Hambatan Antimikroba Bakteriosin

Bakteriosin Enterococcus durans yang telah diisolasi dan dimurnikan

(12)

212

diuji kemampuannya dalam uji efektivitas hambatan antimikroba terhadap bakteri Gram positif Bacillus

cereus. Uji ini dilakukan dengan metode

difusi cakram menurut Brooks et al (2005).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil penanaman bakteri asam laktat isolat bakteri Enterococcus durans dalam kondisi anaerob menunjukkan isolat

Enterococcus durans yang ditanam

tumbuh. Selanjutnya isolat bakteri

Enterococcus durans diuji dengan

pewarnaan Gram dan uji Katalase. Hasil uji pewarnaan Gram memberikan hasil isolat Enterococcus durans mrupakan bakteri Gram positif. Pengujian katalase menunjukkan hasil negatif sebab tidak ada gelembung- gelembung gas dari reaksi uji katalase. Kemudian isolat bakteri

Enterococcus durans diisolasi untuk

menghasilkan senyawa bakteriosin, senyawa tersebut kemudian di uji secara fisika dan kimiawi.. Hasil uji bakteriosin

Enterococcus durans secara kimiawi dapat

dilihat pada Tabel 1.

Tabel 1.Hasil uji Karakterisasi kimiawi bakteriosin Enterococcus durans

Uji Kimia Keterangan

Ninhidrin Positif (berwarna ungu) Molisch Negatif (tidak terbentuk cincin furfural berwarna Lowry 0,274 µg/ml

Pada uji fisika dilakukan pengujian untuk mengetahui bobot molekul bakteriosin dengan menggunakan metode SDS-PAGE. Namun hasil uji tersebut belum menunjukkan bobot molekul dari bakteriosin Enterococcus durans.Senyawa bakteriosin yang dihasilkan isolat bakteri

Enterococcus durans selanjutnya diuji

aktivitas antimikrobanya terhadap bakteri

B.cereus. Hasil yang didapatkan yaitu

bakteriosin memiliki efektivitas hambatan

sebesar 23,88% terhadap pertumbuhan B.

cereus. Data diameter zona hambatnya

seperti tersaji pada pada Tabel 2.

Hasil tersebut menunjukkan bahwa isolat 18A merupakan bakteri Gram positif dan menunjukkan hasil negatif terhadap uji katalase. Hasil tersebut sesuai dengan jurnal Widyastuti et al. (1999) bahwa bakteri asam laktat adalah bakteri yang memiliki ciri-ciri umum berupa Garam positif, bereaksi negatif terhadap katalase dan tidak membentuk spora.

Tabel.2. Uji daya hambat bakteriosin

Enterococcus durans terhadap bakteri Bacillus cereus

Keterangan Diameter killing zone (cm) I II III IV Bakteriosin 0,96 0,94 0,87 0,71 0,83 0,98 0,61 0,73 1,05 0,76 1,05 0,93 0,76 0,83 0,76 1,08 0,83 0,76 0,76 0,83 Rataan 0,85 Kontrol positif 3,51 3,59 3,56 3,58 Rataan 3,56 Kontrol negatif 0 0 0 0 Rataan 0 Persentase daya hambat BAL 76,12 Efektivitas penghambatan BAL 23,88%

Pada uji ninhidrin menunjukkan hasil positif dimana saat proses pemanasan menunjukkan perubahan warna yaitu perubahan warna menjadi warna ungu. Hasil ini sesuai dengan deskripsi Garneau

et al (2002) bahwa bakteriosin asal

bakteri asam laktat merupakan protein yang diproduksi oleh ribosom yang menunjukkan aktivitas antimikroba yang kuat terhadap organisme Gram-positif tertentu lainnya. Pada uji molisch yang telah dilakukan didapatkan hasil negatif. Hasil negatif ini menunjukkan bahwa

(13)

213

bakteriosin Enterococcus durans bukan merupakan jenis glikoprotein. Hasil uji molisch menunjukkan positif apabila terbentuk cincin furfural berwarna ungu. karena senyawa H2SO4 akan membantu

dalam menghidrolisis karbohidrat sehingga mengalami dehidrasi menjadi gugus furfural dan α-napthol yang digunakan pada uji molisch akan membantu dalam memberikan warna ungu /violet pada suatu senyawa karbohidrat (Nigam dan Ayyagari, 2007). Uji lowry didapatkan hasil kadar protein bakteriosin

Enterococcus durans sebesar 0,274 μg/ml.

Pada uji SDS-PAGE untuk menentukan bobot molekul sampel bakteriosin Enterococcus durans belum menunjukkan hasil. Kemungkin hasil tersebut dipengaruhi oleh bobot molekul bakteriosin yang sangat kecil. Hasil penelitian Ness et al (2007) memperlihatkan besar bobot molekul dari bacteriosin asal bakteri asam laktat

Enterococcus > 2,0 kDa pada tipe

bakteriosin kelas I dan >4,8 kDa pada bakteriosin tipe kelas II. Pada uji ini Persentase resolving gel yang digunakan terlalu kecil yaitu 12,5% sehingga angka bobot molekul bakteriosin Enterococcus

durans tidak diketahui secara spesifik.

Sedangkan penelitian yang dilakukan Karthikeyan et al. (2009) untuk menentukan berat molekul bakteriosin

L.acidophillus menggunakan resolving gel

dengan konsentrasi 15%. Uji potensi antimikroba bakteriosin Enterococcus durans terhadap bakteri Bacillus cereus

diperoleh hasil penghitungan zona hambat terendah 0,61 cm dan zona hambat tertinggi 1,08 cm dengan rata-rata efektivitas penghambatannya sebesar 23,88%. Klaenhammer (1988) menyatakan kisaran aktivitas penghambatan bakteriosin oleh bakteri asam laktat bersifat sempit atau spesifik, bakteriosin hanya menghambat strain yang terkait erat dengan organisme penghasilnya, dan menghambat berbagai

kelompok bakteri Gram positif. Menurut Tagg et al. (1979) beberapa bakteriosin yang dihasilkan bakteri Gram positif umumnya tidak terbatas pada bakteri Gram positif saja, beberapa bakteri Gram negatif telah dilaporkan dihambat oleh bakteriosin yang dihasilkan oleh bakteri Gram positif. De Vuyst (2007) dalam Hafsan 2012) menjelaskan mekanisme penghambatan bakteriosin terhadap bakteri patogen karena terjadinya perubahan gradien potensial membran dan pelepasan molekul intraseluler maupun masuknya substansi ekstraseluler. Menurut Gonzaller

et al. (1996) bakteriosin berpengaruh pada

gangguan potensial membran. Gangguan ini menjadi awal pembentukan pori-pori sehingga substrat intraseluler keluar sel.

SIMPULAN DAN SARAN Simpulan

Hasil penelitian menunjukkan

Enterococcus durans menghasilkan

senyawa protein yang diduga sebagai senyawa bakteriosin yang memiliki konsentrasi 0.274 µg/ml dengan bobot molekul yang sangat kecil. Bakteriosin yang dihasilkan diketahui mampu menghambat bakteri indikator Bacillus

cereus sebesar 23,88%.

Saran

Perlu di lakukan pengujian kembali menggunakan SDS-PAGE dengan menggunakan konsentrasi protein dan persentase gel yang lebih besar. Disamping itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menguji senyawa bakteriosin yang didapat sebagai kandidat biopreservatif bahan pangan.

UCAPAN TERIMAKASIH

Peneliti mengucapkan terimakasih kepada Kepala Balai Besar Veteriner Denpasar beserta staf dan Kepala Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan yang telah memberikan fasilitas penelitian.

(14)

214 DAFTAR PUSTAKA

Azhar F. 2014. Pengaruh Pemberian Probiotik dan Prebiotik Terhadap Performan Juvenile Ikan Kerapu

Bebek (Comileptes altivelis). Buletin

Veteriner. 6 (1) : 1-9.

Brooks G, Butel JS, Morse SA. 2005.

Mikrobiologi kedokteran. Alih

Bahasa. Mudihardi E, Kuntaman,WasitoEB et al. Jakarta: Salemba Medika: 317-27.

De Vuyst L. 2007. Bakteriosins from Lactic Acid Bacteria: Production, Purification, and Food Apllication. J

of Microbial and Biotech.13 (4):

194-199.

Garneau S, Martin NI, Vederas JC. 2002. Two – Peptide Bacteriocins Produced by Lactic Acid Bacteria.

Biochimie. 84 : 557-592

Gonzallez B, Glaasker E, Kinji ERS, Driessen AJM, Suares JE, Konings WN. 1996. Bacterial Mode of Action of Plantaricin C. App Environ

Microbiol. 62 : 2701-2709

Hafsan. 2014. Bakteriosin Asal Bakteri Asam Laktat Sebagai Biopreservatif Pangan. J Teknosis. 8 (2) : 175-184 Harborne JB. 1984. Phytochemical

Methods. Ed ke-2. New York:

Chapman and Hall.

Jay M, James. 1992. Modern Food

Microbiology. Fourth Edition. New

York: Michigan publising.

Klaenhammer TR. 1998. Bacteriocins of Lactic Acid Bacteria. Departments of Food Science and Microbiology, North Carolina State University, Raleigh, NC 27695-7624, USA.

Biochimie. 70 : 337-349.

Kusmiati, Malik A. 2002. Aktivitas Bakteriosin Bakteri Leuconostoc mesenteroides Pbac 1 pada Berbagai

Media. Makara Kesehatan. 6 (1):1-7

Karthikeyan V, Santhosh SW. 2009. Study of Bacteriocin as a Food Preservative and the L. acidophilus Strain as Probiotic. Pakistan J of

Nutrition 8 (4) : 335-340

Lay BW. 1994. Analisa Mikroba di

Laboratorium. Jakarta: Raja Grafi

ndo Persada. Hlm 168.

Leroy LDVF. 2007. Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Production, Purification, and Food Applications.

J Mol Microbiol Biotechnol. 13 :

194–199

Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. 1951. Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193 : 265– 275.

Ness IF, Diep DB, Holo H. 2007. Bacteriocin Diversity in

Streptococcus and Entericoccus J of Bact. 189 (4) : 1189-1198.

Nigam A, Ayyagari A. 2007. Lab

Manual in Biochemistry,

Immunology, and Biotechnology.

Tata MCGraw-Hill Publishing Company Limited : New Delhi. Norman SJ, Edward SA, Boris EV, Yuri

KN, Larisa VI, Vladimir PV. 2005.

Paenibacillus polymyxa Purified

Bacteriocin To Control

Campylobacter jejuni in Chickens. J of Food Protection. 2005; 68 (7) :

1450-1453.

Pingitore EV, Salvucci E, Sesma F, Nader-Macias ME. 2007. Different

strategies for purification of antimicrobial peptides from lactic acid bacteria (LAB). Dalam: Vilas

AM (Ed.) Communicating Current Research and Educational Topics and Trend in Apl. Microb: 557-568. Suarsana IN. 2011. Karakterisasi

Fisikokimia Bakteriosin Yang Diekstrak Dari Yoghurt. Buletin

(15)

215

Veteriner. 3 (1) : 1-8.

Suardana IW, Suada IK, Sukada IM, Suarsana IN. 2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat SR9 Asal Cairan Rumen Sapi Bali Sebagai Kandidat Unggul Probiotik.

J. Ilmiah Kedokteran. 8 (2) : 100.

Suardana IW, Suarsana IN, Sujaya IN, Wiryawan KG. 2007. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat dari Cairan Rumen Sapi Bali Sebagai Kandidat Biopreservatif J

Veteriner. 8 (4) : 155-159.

Suardana IW. 2013a_{. Potensi Isolat}

Lactobacillus brevis Asal Cairan

Rumen Sapi Bali sebagai Sumber Senyawa Antimikroba dalam Prosiding Seminar Nasional Sapi Bali. Bali 24 September 2013:87-97.

Suardana IW. 2013b. Kajian Pola

Pertumbuhan dan Aktivitas

Antimikroba Isolat Lactococcus

lactis spp lactis 1 Asal Cairan

Rumen Sapi Bali dalam “Buku Karya Unud untuk Anak Bangsa”: 50-57.

Suardana IW. 2014. Aplikasi Bakteriosin Asal Yoghurt sebagai Biopreservatif Daging Ayam pada Penyimpanan Suhu Dingin. Prosiding Seminar

Nasional Sains dan Teknologi 2014.

Denpasar, 18-19 September 2014.: 362-372

Suardana IW, Cahyani AP, Pinatih KJP. 2016. Probiotic Potency and Molecular Identification of Lactic Acid Bacteria Isolated from Bali Cattle’s Colon, Indonesia.

Glo.Adv.J.Med.Med.Sci. 5(5):

143-149

Subagyo WC, Suwiti NK, Suarsana IN. 2015. Karakteristik Protein Daging Sapi Bali Dan Wagyu Setelah Direbus. Buletin Veteriner. 7 (1) : 1-25.

Sudirman I, Mathiau F, Michael M, Lefebvre G. 1993. Detection and Properties of Curvaticin 13, a Bacteriocin Like Substance Produced by Lactobacillus curvatus SB 13. Current Microbiol 27 : 35-40.

Tagg JR, Dajani AS, Wannamaker LW. 1979. Bacteriocins of Gram-Positive Bacteria. Bacteriological Reviews. 40 (3) : 722-756

Van den Berghe E, Skourtas G, Tsakalidou E, De Vuyst L. 2006.

Streptococcus macedonicus ACADC

198 produces the lantibiotic, macedocin, at temperature and pH conditions that prevail during cheese manufacture. Int J Food Microbiol. 107 : 138–147.

Walker JM. 1984. Gradient SDS polyacrylamine gel electrophoresis, Methods in Molecular Biology,

Vol.1, The Humana Press Inc., Clifton, NJ. Hlm 57–61.

Widyastuti Y, Sofarianawati E. 1999. Karakter Bakteri Asam Laktat

Enterococcus sp. yang Diisolasi dari

Saluran Pencernaan Ternak. Jurnal

Mikrobiologi Indonesia. 4 (2) :