x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ...
i
HALAMAN PENGESAHAN ...
ii
HALAMAN PERNYATAAN ...
iii
PRAKATA ...
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ...
ix
DAFTAR ISI ...
x
DAFTAR GAMBAR ...
xiii
DAFTAR TABEL ...
xvii
DAFTAR LAMPIRAN ...
xix
DAFTAR SINGKATAN...
xx
INTISARI... ...
xxi
ABSTRACT... ...
xxii
I.
PENDAHULUAN ...
1
A.
Latar Belakang Masalah ...
1
B.
Perumusan masalah ...
8
C.
Keaslian penelitian ...
10
D.
Manfaat penelitian ...
11
E.
Tujuan Penelitian ...
12
II.
TINJAUAN PUSTAKA ...
14
A.
Telaah Pustaka ...
14
1.
Radiografi di kedokteran gigi ...
14
2.
Mikronukleus ...
20
3.
DNA adduct ...
21
4.
Β-Carotene ...
23
5.
Connexin-43 ...
27
6.
Mukosa mulut ...
29
7.
Sediaan patch mukoadesif ...
31
8.
Hewan coba kelinci ...
34
9.
Reaksi inflamasi ...
36
B.
Landasan Teori ...
38
C.
Kerangka Teori ...
41
xi
III.
METODE PENELITIAN ...
44
A.
Rancang Penelitian ...
44
B.
Identifikasi Variabel Penelitian ...
44
C.
Definisi Operasional ...
45
D.
Bahan dan Cara ...
46
1.
Lokasi penelitian ...
46
2.
Waktu pelaksanaan ...
47
3.
Sampel penelitian ...
47
4.
Besar sampel ...
47
5.
Alat dan bahan penelitian ...
48
E.
Jalannya Penelitian ...
49
1.
Ethical clearance ...
49
2.
Penelitian tahap I ...
49
3.
Penelitian tahap II ...
60
F.
Analisis Data ...
68
G.
Bagan Alur Penelitian ...
69
IV.
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ...
73
A1. Hasil Penelitian Tahap I ...
73
1.
Uji Karakterisasi bahan β-carotene ...
73
2.
Uji permeabilitas β-carotene melewati membran mukosa
palatum secara ex-vivo ...
78
3.
Pembuatan sediaan β-carotene dengan bentuk patch
gingiva mukoadesif β-carotene ...
81
4.
Hasil uji karakterisasi sediaan patch gingiva mukoadesif
β-carotene ...
82
5.
Hasil uji kemampuan difusi β-carotene dari patch
gingiva mukoadesif β-carotene ...
84
6.
Mucoadhesive time secara ex-vivo ...
92
7.
Hasil uji in-vivo lama waktu bertahan di mukosa mulut ...
92
8.
Analisis kadar β-carotene dalam darah ...
93
9.
Efek aplikasi patch
gingiva
mukoadesif
β-caroten terhadap hasil radiograf ...
95
B1. Pembahasan Hasil Penelitian Tahap I ...
98
A2. Hasil Penelitian Tahap II ...
115
1.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap jumlah mikronukleus ...
115
xii
2.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap ekspresi 8-oxo-dG ...
123
3.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap ekspresi Cx-43 ...
131
4.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap gabungan ketiga variabel ...
138
B2. Pembahasan Hasil Penelitian Tahap I ...
147
1.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap jumlah mikronukleus ...
147
2.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap ekspresi 8-oxo-dG ...
152
3.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap ekspresi Cx-43 ...
157
4.
Efek aplikasi patch gingiva mukoadesif β-carotene
terhadap gabungan ketiga variabel ...
160
V.
KESIMPULAN DAN SARAN ...
168
A. Kesimpulan ...
168
B. Saran ...
169
RINGKASAN
...
170
SUMMARY ...
184
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Struktur molekul β-carotene ... 23
Gambar 2.2 Ilustrasi efek antioksidan terhadap radikal bebas ... 24
Gambar 2.3 Ilustrasi gap junction ... 27
Gambar 2.4 Potongan melintang mukosa mulut ... 29
Gambar 2.5 Lapisan membran sel yang terdiri dari fosfolipid (phospholipid bilayer) ... 31
Gambar 2.6 Kerangka Teori ... 42
Gambar 3.1 Ussing Chamber Fakultas Farmasi UGM. ... 52
Gambar 3.2 Sel Difusi tipe Franz (Franz type Diffusion Cell) ... 57
Gambar 3.3 Gambar Mikronukleus ... 68
Gambar 3.4 Bagan Alur Penelitian tahap 1(satu) ... 70
Gambar 3.5 Bagan Alur Penelitian tahap 2 (dua) ... 71
Gambar 3.6 Bagan Alur Penelitian tahap 2 (dua) ... 72
Gambar 4.1 Hasil scanning λ maks β-carotene kadar 1 μg/mL menggunakan spektrofotometer UV ... 74
Gambar 4.2 Kurva baku β-carotene dalam PBS pH 7,4 pada λ= 461 nm. ... 76
Gambar 4.3 Kurva baku β-carotene dalam PBS pH 7,4 pada λ = 490 nm ... 76
Gambar 4.4 Kurva hubungan antara kadar kumulatif β-carotene melewati mukosa palatum secara ex-vivo sebagai fungsi waktu yang ditetapkan pada λ = 461 nm. ... 79
Gambar 4.5 Kurva hubungan antara kadar kumulatif β-carotene melewati mukosa palatum secara ex-vivo sebagai fungsi waktu yang ditetapkan pada λ = 490 nm. ... 80
Gambar 4.6 Hasil pembuatan sediaan patch gingiva mukoadesif β-carotene. ... 81
xiv
Gambar 4.7 Kurva indeks mengembangnya patch gingiva mukoadesif
β-carotene terhadap fungsi waktu. ... 84
Gambar 4.8 Kurva hubungan antara kumulatif pelepasan β-carotene secara in-vitro sebagai fungsi waktu pada λ= 461 nm. ... 85
Gambar 4.9. Kurva persentase pelepasan β-carotene secara in-vitro sebagai fungsi waktu pada λ= 461 nm. ... 85
Gambar 4.10. Kurva hubungan antara kumulatif pelepasan β-carotene secara in-vitro sebagai fungsi waktu pada λ= 490 nm. ... 86
Gambar 4.11 Kurva persentase pelepasan β-carotene secara in-vitro sebagai fungsi waktu pada λ= 490 nm. ... 86
Gambar 4.12 Kurva hubungan antara kumulatif pelepasan β-carotene secara ex-vivo sebagai fungsi waktu pada λ= 461 nm. ... 88
Gambar 4.13 Kurva persentase pelepasan β-carotene secara ex-vivo sebagai fungsi waktu pada λ= 461 nm. ... 89
Gambar 4.14 Kurva hubungan antara kumulatif pelepasan β-carotene secara ex-vivo sebagai fungsi waktu pada λ= 490 nm.. ... 90
Gambar 4.15 Kurva persentase pelepasan β-carotene secara ex-vivo sebagai fungsi waktu pada λ= 490 nm. ... 91
Gambar 4.16 Hasil kromatogram kadar β-carotene menggunakan teknik HPLC. ... 94
Gambar 4.17 Hasil radiograf dengan objek gigi dan rahang kelinci.. ... 96
Gambar 4.18 Hasil radiograf dari objek tulang rahang manusia ... 96
Gambar 4.19 Hasil radiograf dari objek mukosa gingiva pasien. ... 97
Gambar 4.20 Persamaan susunan struktur epitel antara mukosa palatum dan mukosa gingiva kelinci. ... 100
Gambar 4.21 Prediksi skema model kompartemen pada transpor patch gingiva mukoadesif β-carotene ... 112
Gambar 4.22 Kurva prediksi kadar kumulatif β-carotene sebagai fungsi waktu aplikasi ... 114
xv
Gambar 4.23 Rerata peningkatan jumlah mikronukleus pada kelompok I, II, III dan IV berdasarkan hari ke-0, 3, 6 dan 9. ... 116 Gambar 4.24 Diagram rerata skor ekspresi 8-oxo-dG dari setiap
kelompok ... 125 Gambar 4.25 Hasil ekspresi imunohistokimiawi 8-oxo-dG untuk
menggambarkan adanya DNA adduct pada Kelompok I. ... 125 Gambar 4.26 Hasil ekspresi imunohistokimiawi 8-oxo-dG untuk
menggambarkan adanya DNA adduct pada Kelompok II... . 126 Gambar 4.27 Hasil ekspresi imunohistokimiawi 8-oxo-dG untuk
menggambarkan adanya DNA adduct pada Kelompok III ... 127 Gambar 4.28 Hasil ekspresi imunohistokimiawi 8-oxo-dG untuk
menggambarkan adanya DNA adduct pada Kelompok IV.. .. 128 Gambar 4.29 Diagram rerata skor ekspresi Cx-43 dari masing-masing
kelompok berdasarkan hari ... 133 Gambar 4.30 Gambaran imunohistokimia ekspresi Cx-43 dari kelompok
I berdasarkan hari.. ... 133 Gambar 4.31 Gambaran imunohistokimia ekspresi Cx-43 dari kelompok
II berdasarkan hari... ... 134 Gambar 4.32 Gambaran imunohistokimia ekspresi Cx-43 dari kelompok
III berdasarkan hari. ... 134 Gambar 4.33 Gambaran imunohistokimia ekspresi Cx-43 dari kelompok
IV berdasarkan hari. ... 135 Gambar 4.34 Histogram perubahan ketiga variabel pada kelompok I
berdasarkan peningkatan hari. ... 138 Gambar 4.35 Histogram perubahan ketiga variabel pada kelompok II
berdasarkan peningkatan hari. ... 140 Gambar 4.36 Hubungan jumlah β-carotene yang diprediksi masuk
dalam gingiva terhadap perubahan ketiga variabel pada kelompok II ... 141 Gambar 4.37 Histogram perubahan ketiga variabel pada kelompok III
xvi
Gambar 4.38 Hubungan jumlah β-carotene yang diprediksi masuk dalam gingiva terhadap perubahan ketiga variabel pada kelompok III.. ... 143 Gambar 4.39 Histogram perubahan ketiga variabel pada kelompok IV
berdasarkan peningkatan hari .. ... 144 Gambar 4.40 Hubungan jumlah β-carotene yang diprediksi masuk
dalam gingiva terhadap perubahan ketiga variabel pada kelompok III.. ... 145 Gambar 4.41 Hasil pengamatan sel radang pada mukosa gingiva setelah
xvii
DAFTAR TABEL
Tabel 3.1 Formula sediaan patch gingiva mukoadesif β-carotene ... 53
Tabel 4.1 Data absorbansi berdasarkan λ maks β-carotene ... 74
Tabel 4.2 Serial kadar yang digunakan untuk penentuan kurva baku ... 75
Tabel 4.3 Hasil uji karakteristik sediaan patch gingiva mukoadesif β-carotene ukuran 2x2 cm ... 82
Tabel 4.4 Hasil uji pH permukaan sediaan dan indeks swelling patch gingiva mukoadesif β-carotene ... 83
Tabel 4.5 Hasil uji lama waktu bertahan di mukosa mulut ... 93
Tabel 4.6 Hasil analisis penilaian radiograf menggunakan ImageJ ... 98
Tabel 4.7 Rerata dan simpangan baku peningkatan jumlah mikronukleus dari masing-masing kelompok ... 115
Tabel 4.8 Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk ... 117
Tabel 4.9 Hasil paired t-test kelompok I ... 118
Tabel 4.10 Hasil paired t-test kelompok II ... 118
Tabel 4.11 Hasil paired t-test kelompok III ... 119
Tabel 4.12 Hasil paired t-test kelompok IV ... 119
Tabel 4.13 Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk ... 121
Tabel 4.14 Hasil Uji Two Way Anova antara kelompok I, II, III dan IV 121
Tabel 4.15 Hasil analisis Post hoc LSD berdasarkan kelompok ... 121
Tabel 4.16 Uji normalitas jumlah β-carotene yang diprediksi masuk dalam gingiva ... 122
Tabel 4.17 Korelasi antara jumlah β-carotene yang diprediksi masuk dalam gingiva dan mikronukleus ... 122
xviii
Tabel 4.19 Hasil rerata skoring IHC 8-oxo-dG ... 124 Tabel 4.20 Hasil analisis statistik two way anova dari masing-masing
kelompok ... 129 Tabel 4.21 Hasil analisis post hoc LSD ... 130 Tabel 4.22 Korelasi antara jumlah β-carotene yang diprediksi masuk
dalam gingiva dengan skor 8-oxo-dG ... 130
Tabel 4.23 Hasil analisis indeks kappa antar-pengamat skoring ekspresi Cx-43 ... 131 Tabel 4.24 Rerata dan simpangan baku hasil skoring Cx-43 ... 132 Tabel 4.25 Hasil analisis statistik two way anova skor Cx-43
antar kelompok berdasarkan hari. ... 136 Tabel 4.26 Hasil analisis post hoc LSD ... 136 Tabel 4.27 Korelasi antara jumlah β-carotene yang diprediksi masuk
dalam gingiva dengan skor Cx-43 ... 137 Tabel 4.28 Hasil Pearson Correlation Kelompok I ... 139 Tabel 4.29 Hasil Pearson Correlation Kelompok II ... 140
Tabel 4.30 Hasil Pearson Correlation Kelompok III ... 142 Tabel 4.31 Hasil Pearson Correlation Kelompok IV ... 144 Tabel 4.32 Persentase kemunculan sel radang berdasarkan kelompok
hari ... 146 Tabel 4.33 Hasil analisis statistik Kruskal-Wallis ... 146
xix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Ethical Clearance ... 207
Lampiran 2. Surat Keterangan Selesai Penelitian di Farmasi ... 208
Lampiran 3. Laporan Hasil Uji HPLC ... 209
Lampiran 4. Surat Keterangan Selesai Penelitian di LPPT ... 210
Lampiran 5. Data Hasil Perhitungan Mikronukleus ... 211
Lampiran 6. Data Hasil Skoring IHC 8-oxo-dG ... 212
Lampiran 7. Data Hasil Skoring IHC Cx-43... 213
Lampiran 8. Data Rerata Perhitungan dari Masing-masing Parameter ... 214
Lampiran 9. Hasil Perbandingan Slope Kurva Baku ... 215
Lampiran 10. Hasil Penilaian ImageJ Hasil Radiograf ... 216
Lampiran 11. Dokumentasi Jalannya Penelitian ... 217
