PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN
FRAKSI ETIL ASETAT BUNGA JERUJU (Acanthus ilicifolius
L.) MENGGUNAKAN METODE YES ASSAY
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada
Program Studi Farmasi
Oleh: HARI JOHARI
1008010025
Fakultas Farmasi
HALAMAN PERSETUJUAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR DAN
FRAKSI ETIL ASETAT BUNGA JERUJU (Acanthus ilicifolius
L.) MENGGUNAKAN METODE YES ASSAY
Oleh: HARI JOHARI
1008010025
Diperiksa dan disetujui oleh :
Pembimbing I Pembimbing II
Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt. Susanti, M.Phil.,Apt.
HALAMAN PENGESAHAN
PENENTUAN AKTIVITAS ESTROGENIK FRAKSI AIR
DAN FRAKSI ETIL ASETAT BUNGA JERUJU (Acanthus
ilicifolius L.) MENGGUNAKAN METODE YES ASSAY
HARI JOHARI
1008010025
Telah dipertahankan di depan Panitia Ujian Skripsi
Pada hari Senin tanggal 25 Agustus 2014
SUSUNAN PANITIA
Mengetahui, Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Dr. Nunuk Aries Nurulita, S.Si., M.Si., Apt NIK. 2160217
Ketua
Retno Wahyuningrum, M.Si., Apt NIK. 2160387
Sekretaris
Suparman, M.Sc., Apt NIK. 2160446
Penguji I
Binar Asrining Dhiani, M.Sc., Apt NIK. 2160392
Penguji II
SURAT PERNYATAAN
Yang bertandatangan dibawah ini, saya: Nama : Hari Johari
NIM : 1008010025
Program Studi : Farmasi
Fakultas/Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Menyatakan dngan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari proses penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian yang benar dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan dari hasil karya orang lain. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun yang tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka dibagian akhir skripsi ini.
Demikian pernyataan ini, dan apabila kelak dikemudian hari terbukti ada unsur penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggung jawabkan sesuai dengan ketentuan yang berlaku.
Purwokerto, Agustus 2014 Yang menyatakan,
PERSEMBAHAN
Puji syukur saya panjatkan kepada Allah subhanallahu wata’ala atas segala nikmat dan rahmatnya sehingga saya dapat menyelesaikan tugas akhir skripsi saya Alhamdulillah dengan diberikan kemudahan dan kelancaran.
Skripsi ini saya persembahkan untuk :
Bapa (Jumali) dan Ema (Nining Rukmini) tercinta yang tak pernah
lelah dan henti-hentinya selalu senantiasa mendo’akan setiap langkah yang kujalani dalam menuntut ilmu dan mencari ridho Allah SWT serta tak pernah putus untuk mmberikan kasih sayangnya kepadaku sejak aku masih dalam kandungan sampai saat ini yang semua kebaikannya tidak akan pernah terbalas olehku.
Keluarga dirumah aa, teteh, dini, zaskia dan semuanya yang sudah
memberi semangat dan menjadi motivasi untuku yang tanpa mereka sadari walapun sedikit kata yang mereka ucapkan tapi begitu besar maknanya bagiku.
Dinar Kussetiawati yang sudah menjadi pacar, adik, sahabat, dan teman
terbaik saya yang selalu menjadi sumber semangat dan motivasi dalam menjalani kehidupan kedepannya serta ketulusan dan kebaikannya dalam mendapingi saya yang tak akan pernah saya dapatkan dari orang lain.
Teman-teman PLAT E, CELTIC FC, SUNDA DI KOTA SATRIA Ergi, agil,
MOTTO
“BERBUAT BAIK DAN SELALU BERSIKAP JUJUR KEPADA SEMUA ORANG MAKA TAK AKAN PERNAH SULIT HIDUP KITA
DI KEMUDIAN HARI”
“SELALU BERSYUKUR ATAS SEGALA NIKMAT YANG ALLAH SWT BERIKAN SETIAP DETIKNYA KEPADA HAMBANYA MAKA
ABSTRAK
HARI JOHARI. Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air Dan Fraksi Etil Asetat Bunga Jeruju (Acanthus Ilicifolius L.) Menggunakan Metode YESAssay. Di bawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan SUSANTI
Latar Belakang : Mangrove menghasilkan metabolit sekunder diperkirakan bahwa ada 100.000-200.000 metabolit sekunder dan sekitar 20% dari karbon. Senyawa yang terkandung dalam Acanthus ilicifolius yaitu saponin, flavonoid, polifenol, senyawa verbaskosida dan asam fenolat (asam vanilat, asam siringat, asam ferulat, asam p-hidroksibenzoat dan asam p-kumarat) yang beberapa diantaranya merupakan fitoestrogen. Dengan kandungan senyawa tersebut memungkinkan interaksi dengan reseptor estrogen sehingga dapat ditentukan aktivitas estrogeniknya.
Tujan Penelitian : Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan aktivitas estrogenik fraksi air dan fraksi etil asetat dari bunga jeruju Acanthus ilicifolius dengan metode YES assay yang mengandung reseptor estrogen alfa dan beta dan untuk menentukan profil senyawa yang terdapat pada fraksi air dan fraksi etil asetat bunga jeruju Acanthus ilicifolius.
Metode Penelitian : Penelitian dilakukan dengan menggunakan Yeast Estrogen Screen (YES) Assay. Uji ini dilakukan secara in vitro, kontrol yang digunakan 17-β-estradiol dengan konsentrasi 10-4 M, 10-6 M, 10-8 M, 10-10 M, 10-12 M, 10-14 M, dan 10-16 M dalam DMSO dan genistein dengan konsentrasi 10-5 M, 10-7 M, 10-9 M, 10-11 M, 10-13 M, 10-15 M, dan 10-17 M. Sampel fraksi etil asetat dan fraksi air bunga jeruju (Acanthus ilicifolius L.) dengan konsentrasi 50 µg/ml, 100 µg/ml, 200 µg/ml, 400 µg/ml, 800 µg/ml, 1000 µg/ml, 1200 µg/ml, 1600 µg/ml, dan 2000 µg/ml dalam DMSO. Untuk menentukan profil senyawa yang terdapat pada fraksi air dan fraksi etil asetat menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil : Hasil uji aktivitas estrogenik EC50 17-β-estradiol YES-hERα yaitu no response, sedangkan pada YES-hERβ yaitu 2,0094x109 M. EC50 genistein pada YES-hERα yaitu 7,8219x10-17 M, sedangkan YES-hERβ yaitu no response. EC50 fraksi etil asetat terhadap YES-hERα yaitu 335,9 μg/ml dan fraksi etil asetat terhadap YES-hERβ yaitu 1943 μg/ml. Fraksi air terhadap YES-hERα yaitu 764 μg/ml dan fraksi air terhadap YES-hERβ yaitu 0.0 μg/ml atau no response. Kandungan senyawa pada fraksi etil asetat bunga jeruju meliputi tannin, alkaloid, flavonoid, saponin dan terpenoid sedangkan kandungan senyawa pada fraksi air yaitu alkaloid, flavonoid dan tanin.
Kesimpulan : Fraksi etil asetat bunga jeruju (Acanthus ilicifolius L.) memiliki aktivitas estrogenik lebih besar dibandingkan aktivitas estrogen dari fraksi air bunga jeruju baik yang ditentukan dengan hERα maupun YES-hERβ.
ABSTRACT
HARI JOHARI. Estrogenic activity determination of Water And Ethyl Acetate Fraction of Jeruju (Acanthus Ilicifolius L.) Flowers Using YES Assay Method. Under supervision of BINAR ASRINING DHIANI and SUSANTI
Background : Mangroves produce secondary metabolites is estimated that there are 100,000-200,000 secondary metabolites and approximately 20% of the carbon. The compounds contained in Acanthus ilicifolius was saponins, flavonoids, polyphenols, compounds verbaskosida and phenolic acids (acid vanilat, siringat acid, ferulic acid, p-hydroxybenzoic acid and p-kumarat acid) which some of phytoestrogens. The content of these compounds allows interaction with the estrogen receptor so can be determine estrogenic activity.
Objective : The purpose of this study was to determine the estrogenic activity of water fraction and ethyl acetate fraction of jeruju flower using YES assay methods that contain estrogen receptors alpha and beta and to determine the profile of the compounds found in the water fraction and ethyl acetate fraction of jeruju flower.
Methods : The study was conducted using by Yeast Estrogen Screen (YES) Assay. The test is performed in vitro, the controls used 17-β-estradiol and g enistein were made with a concentration 10-4 M, 10-6 M, 10-8 M, 10-10 M, 10-12 M, 10-14 M, 10-16 M in DMSO and genistein with a concentration 10-5 M, 10-7 M, 10-9 M, 10-11 M, 10-13 M, 10-15 M, dan 10-17 M. Samples ethyl acetate fraction and water fraction flowers Acanthus ilicifolius is made with a concentration of 50 ug/ml, 100 ug/ml, 200 µg/ml, 400 ug/ml, 800 ug/mL, 1000 µg/mL, 1200 µg/mL, 1600 µg/mL and 2000µg/ml in DMSO. The screening compounds found in the water fraction and ethyl acetate fraction was carried out using thin layer chromatography (TLC).
Results : The results estrogenic activity EC50 17-β-estradiol YES-hERα was no response, where as in the YES-hERβ is 2,0094x109M. EC50 of genistein YES-hERα is 7,8219x10-17M, where as in the YES-hERβ is no response. EC50 of estrogenic activity of ethyl acetate fraction of the YES-hERα was 335.9 μg/ml and the ethyl acetate fraction of the YES-hERβ was 1943 μg/ml. The water fraction of the YES-hERα was 764 μg/ml and the water fraction of the YES-hERβ was 0.0 μg/ml or no response. The compounds contained in the ethyl acetate fraction of jeruju include tannins, alkaloids, flavonoids, saponins and terpenoids while the water fraction contained the alkaloids, flavonoids and tannins.
Conclusion :Ethyl acetate fraction flower jeruju has greater estrogenic activity than water fractions of jeruju flower determined by YES-hERα or YES-hERβ.
PRAKATA
Segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis mampu menyelesaikan skripsi yang berjudul “Penentuan Aktivitas Estrogenik Fraksi Air dan Fraksi Etil Asetat Bunga Jeruju (Acanthus ilicifolius L.) Menggunakan Metode
YES Assay”. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat dalam memperoleh gelar sarjana (S-1) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Pada kesempatan ini penulis mengucapkan banyak terimakasih yang sebesar-besarnya kepada ibu Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt dan Susanti, M.Phil.,Apt yang senantiasa memberikan bimbingan, bantuan, serta arahan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Ucapan terimakasih juga penulis sampaikan kepada :
1. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt sebagai dekan dari Fakultas Farmasi. 2. Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt dan Susanti, M.Phil.,Apt selaku pembimbing
skripsi.
3. Bapak dan ibu dosen Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberikan ilmu yang bermanfaat.
4. Laboran Biologi Farmasi dan Instrumen Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
5. Keluarga dan Dinar Kussetiawati tercinta terima kasih atas dukungan dan doanya.
6. Teman-teman Fakultas Farmasi angkatan 2010 dan semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi
. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan baik.
Purwokerto, Agustus 2014
RIWAYAT HIDUP
Nama : Hari Johari
NIM/Angkatan : 1008010025/2010
Tempat/Tanggal Lahir : Kuningan/1 November 1992 Jenis Kelamin : Laki-laki
Agama : Islam
Alamat : Jalan Anggrek 2 Dusun II RT/RW 004/002 Desa Panawuan Kecamatan Cigandamekar Kabupaten Kuningan Jawa Barat
Riwayat Pendidikan :
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto Angkatan 2010.
2. SMA/Tahun lulusan : SMF Muhammadiyah 1 Cirebon tahun 2010. 3. SMP/Tahun lulusan : SMP Negeri 1 Cilimus tahun 2007.
4. SD/Tahun lulusan : SD Negeri 1 Panawuan tahun 2004. Organisasi :
1. Anggota Badan Eksekutif Mahasiswa (BEM) Fakultas Farmasi tahun 2011.
Purwokerto, Agustus 2014
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
HALAMAN PERSETUJUAN ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
PERNYATAAN KEASLIAN PENELITIAN ... iv
PERSEMBAHAN ... v
B. Uji Hayati untuk Penentuan Aktivitas Estrogenik ... 6
BAB III. METODE PENELITIAN... 10
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 10
B. Variabel Penelitian ... 10
C. Definisi Variabel Operasional ... 10
D. Waktu dan Tempat Penelitian ... 11
E. Alat dan Bahan ... 11
1. Alat ... 11
2. Bahan ... 12
F. Cara Penelitian ... 12
1. Pembuatan ekstrak etanol bunga jeruju ... 12
2. Pembuatan fraksi air dan fraksi etil asetat bunga jeruju ... 12
3. Konsentrasi larutan uji estradiol dan genistein... 13
4. Pembiakan kultur YES-hERα dan YES-hERβ ... 13
5. Penanaman kultur YES-hERα dan YES-hERβ ... 13
6. Uji aktivitas estrogenik menggunakan metode YES ... 13
7. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Preparatif ... 14
G. Analisis Hasil ... 16
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 17
A. Pembuatan fraksi air dan fraksi etil asetat bunga jeruju ... 17
B. Uji aktivitas estrogenik menggunakan metode YES ... 18
C. Identifikasi senyawa pada fraksi air dan fraksi etil asetat bunga Jeruju (Acanthus ilicifolius L.) dengan KLT ... 23
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 34
A. Kesimpulan ... 34
B. Saran ... 34
DAFTAR PUSTAKA ... 35
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
DAFTAR GAMBAR
Gambar ... Halaman
1. Tanaman Jeruju Acanthus ilicifolius ... 4
2. Prinsip metode YES Assay ... 7
3. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan β-galaktosidase unit 17-β-estradiol terhadap YES-hERα dan YES-hERβ ... 19
4. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan β-galaktosidase unit genisteinn terhadap YES-hERα dan YES-hERβ ... 20
5. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan β-galaktosidase unit fraksi etil asetat bunga jeruju terhadap YES-hERα dan YES-hERβ ... 22
6. Grafik hubungan antara log konsentrasi dengan β-galaktosidase unit fraksi air bunga jeruju terhadap YES-hERα dan YES-hERβ ... 23
7. Kromatogram pada optimasi fase gerak ... 24
8. KromatogramKLT preparatif fraksi air bunga jeruju ... 25
9. Kromatogram KLT preparatif fraksi etil asetat bunga jeruju ... 26
10. KromatogramKLT fraksi air setelah di semprot dengan amoniak (NH3) .. 27
11. KromatogramKLT fraksi air setelah di semprot pereaksi dragendroff ... 28
12. KromatogramKLT fraksi air setelah di semprot pereaksi FeCl3 ... 29
13. KromatogramKLT fraksi etil asetat setelah di semprot dengan amoniak (NH3) ... 30
14. KromatogramKLT fraksi etil asetat setelah di semprot dengan FeCl3 (besi (III) Klorida) ... 31
15. KromatogramKLT fraksi etil asetat setelah di semprot dengan pereaksi Lieberman Burchard... 31
16. KromatogramKLT fraksi etil asetat setelah di semprot dengan pereaksi dragendroff ... 32
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Komposisi Media Synthetic complete (SC) dan dropout mixture ... 38
2. Komposisi Media Synthetic dextrose minimal (SD) ... 38
3. Komposisi 0,1 M Phosphate buffer pH 7,0 ... 38
4. Komposisi Z-buffer ... 38
5. Pembuatan Larutan Uji Fraksi Etil Asetat dan Air Bunga Jeruju ... 39
6. Foto YES-hERβ dalam medium SC ... 39
7. Foto YES-hERα dalam medium SC ... 39
8. Foto YES dalam medium SD ... 39
9. Foto Alat Sinar UV ... 40
10. Foto Elisa Reader ... 40
11. Foto 96-well microplate ... 40
12. Foto Ekstrak bunga Jeruju ... 40
13. Foto Fraksi Air bunga Jeruju ... 40
14. Foto Fraksi etil asetat bunga jeruju ... 40
15. Foto larutan uji KLT ... 40
16. Foto Hasil residu KLT Preparatif fraksi etil asetat bunga jeruju ... 41
17. Foto Hasil residu KLT Preparatif fraksi air bunga jeruju ... 41
