4. Pemeriksaan Glukosa Metode
GOD-PAD
Prinsip Metode
Glukosa ditentukan setelah oksidasi enzimatik dengan adanya oksidasi glukosa. Hidrogen peroksida yang terbentuk bereaksi dalam katalisis peroksidase dengan fenol dan 4-aminophenazone warna merah-violet quinoneimine sebagai indikator.
Prinsip Reaksi
Glukosa + O2 + H2 O Glukonic acid + H2O2
2 H2O2 + 4-aminophhenazone + phenol quinoneimine + 4 H2O2
RGT enzimatik reagent
Buffer posfat (pH 7.5) 100 mmol/I
4-Aminophenazone 0,25mmol/I
Fenol 0,75mmol/I
Peroksida .15 KU/I Mutarotase .2.0 KU/I Natrium azide 0.095 Stabilizers STD standar Glukosa 100 mg/I Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk digunakan
Stabilitas Reagen
Reagen tetap stabil setelah dibuka sampai dengan tanggal kadaluarsa. Bila disimpan pada suhu 2-8 ℃ . Hindari kontaminasi. Pada suhu 15..25 ℃ rgt stabil selama 2 minggu
Spesimen Serum, Plasma .
Glukosa stabil selama 24 jam pada suhu 2-8 ℃ . Pada serum atau plasma dalam waktu 30 menit. Setelah diperiksa.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : Hg 546 nm
Suhu : 20…25 ℃ atau 37 ℃
Pengukuran : terhadap blanko reagen hanya satu blanko reagen digunakan untuk satu kali seri pemeriksaan.
Skema pemipetan Pipet kedalam tabung
Makro Reagen blanko Standar Sampel
serum - - 20 ml
STD - 20 ml
-RGT 2000 ml 2000 ml 2000 ml
Mikro Reagen blanko Standar Sampel
serum - - 10 ml
STD - 10 ml
-RGT 1000 ml 1000 ml 1000 ml
Campur, inkubasi selama 10 menit, pada suhu 20-25 ℃ atau 5 menit pada
suhu 37 ℃ . Absorben standar dan sampel terhadap blanko reagen dalam waktu 60 menit.
Perhitungan
C = ||SpSt| X C. St (100 mg/dl)|
C = ||Sp|St| X C. St (5,55 mmol/L)
Tes linear glukosa pada konsentrasi glukosa 400mg / dl atau 22,2 mmol / I. encerkan sampel 1 + 2 dengan aquadest. konsentrasi sample diatas batas limit kalikan dengan 3.
Nilai Normal
Serum, plasma : 75-115 mg/dl atau 4.2 – 6.4
5. PEMERIKSAAN UREA
Metode
Enzymatic kolorimetri dengan modifikasi berthelot
Prinsip
Urea dihidrolisis dengan adanya air dan urease untuk menghasilkan amonia dan karbon dioksida. Dengan modifikasi Berthelot ion amonium direaksikan dengan hipoklorit dan salisilat untuk yang berwarna hijau. Peningkatan absorbansi pada panjang gelombang 546 nm atau 578 nm sebanding dengan kadar urea dalam sampel.
Komposisi Reagen RGT1 Reagen 1
Fosfat buffer (pH 7.0) 120 mmol/l
Natrium salisilat 60 mmol/l
Natrium nitroprusside 5 mmol/l
EDTA 1 mmol/l
Fosfat buffer (pH < 13) 120 mmol/l
Hipoklorit 0.6 g/l cl
Iritasi mata dan kulit. jauhkan dari jangkauan anak-anak. setelah kontak dengan mata, bilas dengan air dan berkonsultasi dengan dokter.
ENZ Enzym
Urease > 500 KU/l
STD Standar
Urea 80 mg/dl atau 13.3 mmol/l
Setara dengan BUN 37.28 mg/dl atau 6.2 mmol/dl
Natrium azida 0.095 %
Persiapan Reagen
RGT2 dan STD siap pakai.
Enzim reagen 1a campuran dari isi botol ENZ dengan botol RGT1:
Contoh: 1 ml ENZ + 100 ml RGT1 atau 1000 μl ENZ + 100.000 μl RGT1 100 μl ENZ + 10.000 μl RGT1 10 μl ENZ + 1000 μl RGT1 Stabilitas Reagen
Reagen stabil sampai pada masa expayer dengan penyimpan pada suhu 2...8oC. RGT1, RGT2, dan ENZ stabil setelah dibuka selama 6 minggu pada 2...8oC atau 2 minggu di 15...25oC.
STD stabil sampai pada masa expayer.
Enzim reagen 1a stabil setelah dibuka selama 4 minggu pada suhu 2...8oC atau 2 minggu di 15...25oC.
Hindari kontaminasi setelah dibuka.
Serum, plasma, plasma heparin, dan urin. Urin encer 1 + 100 dengan aqua bidest.. Jangan menggunakan serum lipemic.
Serum atau plasma dapat disimpan sampai 3 hari pada suhu 4oC, untuk waktu yang lama mereka harus terus dibekukan pada suhu -20oC.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : Hg 578 nm,
Celah optic : 1 cm
Suhu : 20-25oC atau 37 oC
Pengukuran : Terhadap blanko reagen. Hanya menggunakan satu blanko reagen untuk satu seri pemeriksaan.
Skema Pemipetan
Pipet ke dalam tabung reaksi
Blanko Standar Sampel
Serum --- --- 10 μl
Standar --- 10 μl
---Enzim reagen 1a 1000 μl 1000 μl 1000 μl
Campur dan inkubasi selama 5 menit. pada 20-250C atau selama 3 menit pada 370C
RGT2 1000 μl 1000 μl 1000 μl
Campur, inkubasi selama 10 menit. pada 20-250C atau 5 menit. di 370C. Mengukur absorbansi sampel dan STD terhadap reagen blanko dalam waktu 60 menit.
Perhitungan Urea Dan Konsentrasi BUN C = AsampelASTD × faktor
Faktor Konversi Untuk BUN, Urea C (BUN) = 0.466 × C (urea) C (Urea) = 2.14 × C (BUN)
Karakteristik Kinerj a Linearitas
serum/plasma : sampai 400 mg/dl atau 6.66 mmol/l (urea) Urin : sampai 400 g/l atau 6600 mmol/l (urea)
Sampel dengan pengenceran tertinggi harus diencerkan 1 + 1 dengan aqua bidest. Hasil kalikan dengan 2.
Nilai Normal
Serum (urea) : 10 – 50 mg/dl atau 1.7 – 8.3 mmol/l Urin (urea) : 20 – 35 g/l atau 333 – 583 mmol/24 h
7. PEMERIKSAAN ASAM URAT
Metode PAP
Tes enzim koorimetri asam urat dengan factor pembersih lemak Prinsip Metode
Penentuan asam urat oleh reaksi dari uricase bereaksi dengan H2O2 bereaksi di bawah katalis peroksidase dengan 3,5 dikloro – 2 hidroxy benzene-sulfat (DCHBS) dan 4 aminopherazone (PAP) untuk memberikan warnah merah-pink dengan pewarna quinoneimine sebagai indikator.
Asam urat + O2 + 2 H2O uricase allantion + CO2 + H2O2
2 H2O2 + DCHBS + PAP peroksidase quinoneimine + HCL + 4H2O
Komposisi Reagen
RGT : 4 x 30 ml atau 4 x100 reagen enzim
Phosphate buffer 50 mmol/liter
4 aminophenazone 0,3 mmol/liter
DCHBS 4 mmol/liter
Uricase 200 u/liter
Peroxidase 1000 u/liter
STD : 3 ml standar
Asam urat 8 mg/liter atau 476 mmol/liter
Sodium azide 0,095 %
Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk digunakan. Stabilitas Reagen
Reagen stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal kadaluarsa dinyatakan bila disimpan pada suhu 2-80C. Kontaminasi reagen harus benar-benar dihindari. Disimpan pada suhu 15-25oC. RGT stabil selama 2 minggu.
Spesimen
Serum, plasma EDTA, plasma heparin, urine Encerkan urine 1:10 dengan aqua bidest.
Catatan : specimen lofomic biasanya menghasilkan kekeruhan campuran reagen yang mengarah kehasil palsu melalui faktor pembersih lemak tersebut akan menghasilkan kekeruhan yang disebabkan oleh kekeruhan lipemik.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : Hg 546 nm
Celah optic : 1 cm
Suhu : 20-25oC atau 37oC
Pengukuran : terhadap reagen kosong per seri yang diperlukan. Skema Pemipetan
Blanko Standar Sampel
Serum - - 20ul
Standar - 20ul
-RGT 1000ul 1000ul 1000ul
Campurkan, inkubasi 10 menit dengan suhu 20-25oC, dan 5 menit dengan suhu 37oC.
Baca absorben sampel dan standar terhadap blanko reagen dengan panjang gelomabng 546 nm.
Perhitungan
C : Abs Sampel x C.Standar (8 mg/dl) Abs standar
C: Abs sampel x C. standar (476 Mmol/liter)
Urin
C : Abs sampel x C. Standar (88 mg/dl) Abs standar
C : Abs sampel x C.standar (5235 mg/Mmol/liter Abs standar
Karakteristik Kinerja
Linearitas: tes linearty ini sampai dengan konsentrasi asam urat 20mg/liter atau 1190 mmol/liter. Encerkan sampel sampai dengan konsentrasi yang lebih tinggi 1:1 dengan garam fisiologis (NaCl 0,9%).
Nilai Rujukan
Laki-laki : 3,4-7,0 mg/liter atau 200-400 Mmol/liter Perempuan : 2,4-5,7 mg/liter atau 140-340 Mmol/liter
Urin : 250-750 mg/liter atau 1,5-4,5 Mmol/24 jam
8. Pemeriksaan Bilirubin Metode
Metode jendrassik
Untuk direct (D) dan total bilirubin
Prinsip Metode
Billirubin bereaksi dengan diazotigasi asam sulphanilic untuk menghasilkan warna merah azo. Absorbansi pewarna ini 546 nm berbanding lurus dengan konsentrasi billirubin dalam sampel. Reaksi Glucuronies billirubin larut dalam air bereaksi secara langsung dengan DSA sedangkan albumin billirubin tidak langsung terkonjugasi hanya akan bereaksi dengan DSA dengan akselerator :
Total bilirubin = direct + indirect billirubin
Prinsip reaksi
Asam sulphanilic + natrium nitric DSA
Billirubin + DSA direct Azobillirubin
Billirubin + DSA + Accelerator total azobillirubin Komposisi Reagen
1 X 100 ML (Total Billirubin reagent) - Asam sulphanilic = 14 mmol /L
- Asam klorida = 300 mmol/L
- Kafcin (Akselerator) = 200 mmol/L - Natrium benzoate = 420 mmol/L
1 x 9 ml (Total- Nitrit reagent ) = 390 mmol/L ,untuk menentukan total billirubin natrium nitric ( Xn , R 22)
1 x 100 ml ( Direct billirubin reagen )
TB
TN DB
- Asam sulphanilic = 14 mmol/L
- Asam klorida = 300 mmol/L
1 x 9 ml ( Direct-Nitrik reagen )
Untuk penentuan direct bilirubin natrium nitrit.
Persiapan Reagen dan Stabilitas
Kedua reagen dan solusi nitric siap untuk digunakan stabil, bahkan setelah pembukaan, naik tanggal kadaluwarsa diberikan bila disimpan pada suhu 15-25°C. Hindari kontaminasi
Spesimen
Serum atau plasma heparin Menghindari hemolitik dan sampel lipemic harus dilindungi dari cahaya langsung.
Stabilitas : Billirubin stabil selama 3 hari bila disimpan cahaya di proteksi pada suhu 2-8°C
Pemeriksaan
Panjang gelombang : 546 nm
Celah optic : 1 cm
Suhu : 20-25 °C
Pengukuran : terhadap blanko sampel Prosedur
Total bilirubin
Pipet ke dalam kuvet Blanko sampel Sampel
TBR TNR 1000 µl ----1000 µl 1 tetes Campur secara menyeruruh , inkubasi selama 5 menit
sampel 100 µl 100 µl
Campuran , inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Mengukur absorbansi sampel terhadap metode blanko sampel ( A 546 )
1 Tetes = 40 µl
Direct bilirubin
Pipet ke tabung Sampel kosong Sampel
DBR DNR 1000 µL ----1000 µL 1 Tetes
Campuran secara menyeluruh, inkubasi sampel dalam waktu 2 menit
Sampel 100 µl 100 µl
Campuran , inkubasi pada suhu kamar secara tepat 5 menit . mengukur absorbansi sampel terhadap blanko sampel .
Perhitungan
Menghitung konsentrasi total dan langsung bilirubin dengan menggunakan factor 13.0 konsentrasi bilirubin (mg/dl)= A546 X 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (µmol/L). Konsentrasi Bilirubin total = absorbansi sampel X F (13,O mg/dl )
Bilirubin direct =absorbansi sampel X F (13.0 mg/dl )
Bilirubin indirect = absorbansi sampelabsorbansi sampel X F (13.0 mg/dl)
Linearitas
Linearitas : pengujian kadar logam adalah linear hingga 25 mg/dl. Konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl. Encerkan sampel 1:4 dengan fisiologis (0.9 %) dan ulangi pengujian tersebut. Kalikan hasilnya dengan 5.
Nilai normal
Total bilirubin (mg/dl) ( µmol/I)
bayi baru lahir berusia 5 hari berusia 1 bulan orang dewasa 5 12 1.5 1.1 85.5 205.0 25.6 18.8 Bilirubin direct Dewasa 0.25 4.3
9.
PEMERIKSAAN KOLESTEROL
MetodeCHOD-PAP (Kolesterol Oxidase posfat Amino Penazon)
Tes kolometri enzimatik untuk kolesterol dengan faktor kliring lipid Prinsip Metode
Kolesterol ditentukan setelah hidrolisis enzimatik dan oksidase indikator quinoneimine terbentuk dari hidrogen peroksida dan 4 eminophenazone dengan adanya fenol dan peroksidase.
Prinsip Reaksi
CHE (Cholestreol esterase)
Cholesterolester + H2 O cholesterol + fatty Acid
CHO (Cholesterol Oxidase)
POD (Posfat Oxidase)
2 H2O2 + 4-amino cholesterol + 4 H2 O Phenazone + phenol
Komposisi Reagen
RGT 4x30 ml, 3x250 ml atau 4x100, ml reagen enzim
Buffer posfat 100 mmol/l
4-aminophenazone 0,3 mmol/l Fenol 5 mmol/l Peroksidase >5 KU/l Cholesterolesterase >150 U/l Cholesteroloxidase >100 U/l Natrium oxida 0,05 % STD 3 ml standar
Cholesterol 200 mg/dl atau 5,17 mmol/l Persiapan Reagen
RGT dan STD siap untuk dipakai. Stabilitas Reagen
Reagen yang stabil setelah dibuka di buka dan sampai dengan masa expayer bahkan setelah pembukaan, disimpan pada 2- 8o C. Reagen yang telah dibuka
akan stabil selama 2 minggu disuhu 15- 25o . Hindari kontaminasi.
Spesimen
Serum, plasma heparinist, atau EDTA plasma
Catatan : serum lipemic jika menghasilkan kekeruhan dari campuran sampel/larutan reagen yang mengarah ke hasil palsu meningkat. Tes koleterol
liquicolor menghindari peningkatan hasil ketinggian palsu melalui built-in faktor kliring lipid (LCF) . LCF membersihkan secara total kekruhan yang disebabkan oleh spesimen lipemic dapat dihindari.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : Hg 546 nm Celah optik : 1 cm
Suhu : 20... 25o / 37o C
Pengukuran : dengan blanko reagen, hanya satu blanko reagen untuk 1 seri pemeriksaan.
Skema Pemipetan
Pipet kedalam tabung reaksi
Pipet ke kuvvets Blanko Standar Sampel Sampel ... ... 10 ml Standar ... 10 ml ...
RGT 1000 ml 1000 ml 1000 ml
Perhitungan Konsentrasi Kolesterol Dengan faktor
Panjang Gelombang C (mg / dl) C (mmol/l)
Hg 546 840 x A 21,7 x A
500 nm 553 x A 14,3 x A
Hanya standar yang direkomendasikan oleh manusia (tertutup dalam kit / tersedia secara terpisah, REF 10015) harus digunakan.
Absorbance sampel C = x C ( Standar 200 mg/dl) Absorbance standar Absorbance sampel C = x C ( Standar 5,17 mmol/l) Absorbance standar Karakteristik Kerja Linearitas
Tes linear sampai dengan konsentrasi kolesteroldari 750 mg/dl (19,3 mmol/l), sampai diencerkan dengan ketinggian konsentrasi kolesterol 1+2 dengan garam physiogical (NaCl 0,9 %) dan ulangi determnasi. Hasilnya dikalikan 3.
Interpretasi Hasil (Nilai Normal)
Diduga Kelebihan 220 mg/dl 5,7 mmol/l
Peningkatan Kelebihan 260 mg/dl 6,7 mmol/l
10. PEMERIKSAAN TRIGLISERIDA Metode
Trigliserida dutentukan setelah hidrolisis enzimatik dengan lipases. Idikatornya adalah quinoneimine yang terbentuk dari hydrogen peroksida, 4-amino-antipirin dan 4-klorophenol dibawah pengaruh katalitas dari peroksidasi.
Prinsip Kerja
Gliserol + ATP GK Gliserol-3-pospat + ADP
Gliserol-3-pospat-O2 GPO dihidroksiaton pospat + H2O2
H2O2 + 4-aminoantipirin POD quinoneimine + HCl + H2O2 + 4-Klorophenol
Komposisi Reagen
15 ml; 100 ml atau 250 ml monoreagen
PIPES buffer (pH 7,5) 50 mmol/l
4-klorophenol 5 mmol/l
4-aminopenazone 0,25 mmol/l
Ion magnesium 4,5 mmol/l
ATP 2 mmol/l
Lipases ≥ 1300 U/l
Peroksidase ≥ 500 U/l
Gliserol kinase ≥ 400 U/l
Gliserol-3-pospat oksidase ≥ 1500 U/l
Sodium azide 0,05%
3 ml standar
Trigliserida 200 mg/dl atau 2,28 mmol/l
Persiapan Reagen dan Stabilitas
RGT dan STD siap untuk digunakan. Reagen tetap stabil setelah dibuka, sampai penentuan tanggal kedaluarsa bila disimpan pada suhu 2-8°C. Pada suhu 20-25°C RGT stabil dalam waktu 4 minggu
Pencemaran Yang Harus Dihindari: Melindungi dari cahaya.
Spesimen
Serum, Plasma heparin atau Plasma EDTA. Keseimbangan: 3 hari pada 2-8°C
4 bulan pada suhu -20°C RGT
Catatan: Lipemic specimen biasanya menghasilkan kekeruhan dari campuran reagen dan sampel yang memimpin untuk menghasilkan hasil yang sangat baik. Pemeriksaan trigliserida diuji untuk memastikan bahwa pemeriksaan ini menghasilkan hasil yag sangat baik sampai selesai, itu dibentuk didalam Lipid Clearing Factor (LCF). LCF membersihkan total kekeruhan yang disebabkan dari spesime lipemic.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : 500 nm, Tinggi 546 nm Garis batas pegelihatan : 1 cm
Suhu : 20-25°C atau 37°C
Ukuran : Berbeda dengan reagen blanko (RB). Hanya satu
reagen blanko per rankaian yang diperlukan. Pemipetan
Silahkan gunakan HUMAN standar trigliserida yang tersedia dengan syarat digunakan per kotak atau terpisah: REF 10163
Dipipet kedalam kuvet RB Sampel atau STD
Sampel/STD --- 10 ul
RTG 1000 ul 1000 ul
Campur dan inkubasi 10menit pada suhu 20-25°C atau 5 menit pada suhu 37°C. Ukur absorban dari sampel (∆Asampel) dan standar (∆Astandar) berbeda dengan reagen blanko dalam 60 menit.
Perhitungan Konsentrasi Trigliserida:
C = 200 x ∆ A standar [mg/dl] atau C = 2,28 x ∆ A sampel ∆ A standar [mmol/l]∆ A sampel
Sifat Linearitas
Uji linearitas adalah uji untuk menguji kenaikan konsentrasi trigliserida dari 1000 mg/dl atau 11,4 mmol/l. Sampel degan kosentrasi tinggi memiliki kelemahan 1+4 dengan garam fisiologi (0,9%) dan retested. Mengalihkan hasil yang mendekati 5.
Interpretasi Klinis Untuk Kemungkinan Atheoscleoritik Dicurigai : diatas 100 mg/dl atau 1,71 mmol/l
Meningkat : diatas 200 mg/dl atau 2,28 mmol/l.
11. PEMERIKSAAN LDL- CHOLESTEROL
Tujuan
Parameter pemeriksaan LDL Cholesterol adalah pemeriksaan enzymatic homogeny langsung untuk pengukuran kuantitatif LDL- Cholesterol (LDL). LDL dianggap sebagai komponen lemak yang menaikkan resiko terhadap jantung coroner (CHD).
Metode
Test mengkombinasi 2 langkah :
1. Dalam langkah pertama chylomicrons, VLDL, dan HDL cholesterol dihilangkan secara khusus melalui reaksi enzymatic
2. Dalam langkah kedua LDL- cholesterol yang tertinggal diukur melalui reaksi enzymatic khusus, juga memakai surfactants specific untuk LDL. Kombinasi ini membuat pemeriksaan ini lebih spesifik untuk LDL dari pada metoda lain.
Prinsip Reaksi Langkah Pertama
CHE + CHO
HDL, VLDL dan chylomicrons --- > cholestenone + H2O2
Kondisi Khusus
2 H2O2 --- > 2 H2O + O2
Langkah kedua
LDL --- > cholestenone + H2O2 Surfactant khusus
Peroxidase
2H2O2 + chromogen --- > zat warna qulnone
Isi, Komposisi reagen dalam test
R1 1 × 60 ml Enzyme (tutup merah) 50 mmol/l
Buffer Goods, pH 7,0 (250 C) 600 U/l
Cholesterol esteruse 500U/l
Cholesterol oxidase 400 Uml
Katalase
N-
(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-5-Dimethoxyaniline (HDAOS) 0,56 mmol/l
Deterjen 0,3 % w/v
Pengawet 0,1 % w/v
R2 1 ×20 ml substrat (tutup biru)
Peroxidase 4000 U/l
4- Aminoantipyrin (4- AA) 4 mmol/l
Buffer good’s , pH 7,0 (250C) 50 mmol/l
Natrium azida 0,09%
Deterjen > 1 % w/v
3 1 × 4 ml Calibrator Cholesterol
Persiapan Reagen dan Stabilitas
R1 dan R2 siap pakai
Stabilitas : setelah reagen dibuka stabil sampai 1 bulan bila disimpan pada 2-80C. Hindari kontaminasi. Jangan dibekukan
Tutup jangan terbuka
Calibrator
Rekonstitusi isi vial dengan 4 ml tempat air suling segar bebas germ,tutup vial dan putar hati-hati untuk melarutkan semua lyophilisat. Hindari buih. Biarkan selama 30 menit sebelum digunakan.
Stabilitas : 10 hari pada 2-8oC. Bila perlu, calibrator segar yang dibuat dapat dibagi dalam beberapa bagian dan disimpan beku pada suhu 20oC selama 30 hari. Membekukan dan mencairkan hanya sekali, campur dengan hati-hati selalu mencairkan.
Spesimen
Serum, plasma
Stabilitas : Dianjurkan untuk memeriksa langsung setelah sampling. Serum dapat disimpan pada suhu 2-8oC sampai 5 hari
Dalam plasma, konsentrasi anti koagulan berikut tidak boleh lebih : 1. EDTA -2 Na < 200 mg/dl;
2. Na- sitrat < 1000 mg/dl; 3. Heparin < 50 mg/dl; 4. NaF < 2000 mg/dl
Tidak dipengaruhi trygliserida sampai 1000 mg/dl, hemoglobin sampai 500 mg/dl, bilirubin sampai 30 mg/dl, asam askorbat sampai 50 mg/dl dan sampel yang agak keruh. Sampel dengan triglyserida yang melebihi 1000 mg/dl di encerkan dengan garam fisiologis (0,9 %) 1:1 dan kalikan hasil dengan 2.
Pemeriksaan
Panjang Gelombang : Hg 578 nm
Celah Optik : 1 cm
Suhu : 37oC
Pengukuran : terhadap blanko reagen (RB) cukup 1 blanko per seri
Prosedur (manual)
Hangatkan reagen dan cuvet sampai 37oC. Suhu harus dijaga konstan (0,5 oC) selama test.
Pipet kedalam cuvet Blanko Standar Sampel
Aquabidess Sampel Standar R1 10 μl ---750 μl ---10 μl 750 μl ---10 μl
---Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 5 menit tepat pada suhu 37oC .
R2 250 μl 250 μl 250 μl
Campur dengan hati-hati, inkubasi pada suhu 37oC dan baca absorbans
Test dapat dijalankan dalam mode kinetic fixed time pada analiser.
Perhitungan
Hitung konsentrasi sampel sebagai berikut :
∆ A sampel
Csampel = --- × C (131,6 mg/dl) ∆ A standar
Faktor konversi : C (mg/dl) × 0,02586 = C (mmol/l)
Linearitas
Sampai LDL-cholesterol 1000 mg/dl (prosedur manual).
Bila digunakan analiser, batas linearitas tergantung pada pemakaian. Jika konsentrasi LDL melebihi range pengukuran, encerkan sampel 1+1 dengan saline (0,9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 2.
Nilai Rujukan
Laki-laki Wanita
Resiko menurun untuk CHD < 50 mg/dl < 63 mg/dl
Resiko meningkat untuk CHD > 172 mg/dl > 16si, tiap laboratorium 7 mg/dl
Range ini diberikan hanya sebagai orientasi, tiap laboratorium harus membuat range rujukan sendiri, Sex, diet, umur, lokasi geografi dan factor lain mempengaruhi nilai yang diharapkan.
Kontrol kualitas
Semua serum manusia berdasarkan serum control dengan kadar LDL-cholesterol yang diukur dengan metoda ini dapat dipakai.
12. PEMERIKSAAN HDL – Kolesterol
PRINSIP METODE
Kilomikron, VLDL (Veri low density lipoproteins) dan LDL (low density lipoproteins) di endapkan dengan penambahan asam fostotungstat dan magnesium klorida. Setelah disentrifuge cairan supernatan mengandung HDL (High density lipoprotein).bagian, dengan pengujian dengan kolesterol HDL dan tes kit.
PRINSIP REAGEN
Isi, komposisi reagen
PREC 4 x 80ml dasar
Asam fosfotungstat 0,55 mmol/l Magnesium klorida 25,00 mmol/l STD 1 x 3 ml standar
Kolesterol 50 mg/dl or 1,29 mmol/l Preparasi reagen
- Dasar untuk uji makro Gunakan PREC murni - Dasar untuk uji semi – mikro
Encerkan 1 botol PREC dengan 20ml aquabides atau encerkan 4 bagian dalam botol dengan satu bagian aquadest (4 + 1).
STD
STD siap untuk digunakan dan dapat dikerjakan secara langsung dalam tes / uji. Yang dibutuhkan adalah tidak adanya pengendapan. Factor dari kalkulasi terdiri dari pengenceran rasio.
Stabilitas Reagen
PREC stabil / tidak berubah, meskipun setelah dibuka, hingga sampai pada tanggal kadaluwarsa bila disimpan pada suhu 2 – 25oC. di hindarkan dari kontaminasi SPESIMEN
Serum, plasma heparin atau plasma EDTA
PENGUKURAN
Lihat kit kolesterol 1. Pengendapan
Pipet ke dalam tabung sentrifuge makro Semi-mikro Serum Prec a Prec b 500µl 1000µl ….. 200µl ….. 500µl
Campur, inkubasi selama 10 menit pada suhu kamar. Di sentrifuge sekurang-kurangnya 2 menit jika 10000 gram, dan kemungkinan lain 10 menit jika 4000 gram.
Setelah di sentrifuge, pisahkan supernatant dari endapan dan setelah 1 jam dan gunakan konsentrasi kolesterol untuk pemeriksaan HDL kolesterol dengan reagen kolesterol.
2. Ukuran Kolesterol
Pipet dalam tabung Reagen Blanko Standar Sampel Aquabidest Standar HDL supernatant Reagen 100µl ….. ….. 1000µl ….. 100µl ….. 1000µl ….. …... 100µl 1000µl
Campurkan, inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC atau 10 menit pada suhu 20 –25oC. ukur
absorbance pada sampel dan standar terhadap reagen blanko sekitar 60 menit ( A)
Panjang Gelombang Makro Semi – mikro C = [mg/dl] = A x C= [mmol/l] = A x C= [mg/dl] = A x C= [mmol/l] = A x Hg 546 nm 274 7,09 320 8,2 500 nm 180 4,65 210 5,43
Kalkulasi HDL kolesterol dengan menggunakan STD
1. Metode makro
C = Abs sampel x 150 mg/dl C = Abs sampel x 3,87 mmol/l Abs standar Abs standar
2. Metode semi – mikro
C = Abs sampel x 175 mg/dl C = Abs sampel x 4,52 mmol/l Abs standar Abs standar
Kalkulasi pada LDL kolesterol
Massa LDL kolesterol ( LDL – C) adalah akumulasi dari jumlah massa kolesterol (TC). Massa HDL kolesterol (HDL-C) dan massa trigliserida (TG) menurut Friedwald et al. LDL – C = TC – HDL – C TG [mg/dl] 5 LDL – C = TC – HDL – C TG [mmol/l] 5 INTERPRETASI KLINIS 1. HDL Kolesterol Pria wanita [ mg/dl] [mmol/l] [mg/dl] [mmol/l] Perkiraan Terbaik > 55 > 1,42 > 65 > 1,68 Tingkat standar resiko 35 – 55 0,9 – 1,42 45 – 65 1,16 – 1,68 Resiko indikasi < 35 < 0,9 < 45 < 1,16 2. LDL-Kolesterol Prasangka : 150 mg/dl or 3,9 mmol/l tinggi : 190 mg/dl or 4,9 mmol/l 13. PEMERIKSAAN BESI Metode
Prinsip
Besi (III) bereaksi dengan Chromazurol B (CAB) dan cetyltrimethylammonium bromide (CTMA) untuk membentuk warna kompleks dengan absorbance maksimum 623 nm. Intensitas warna yang diproduksi sebanding dengan konsentrasi zat besi dalam sampel. Tes ini juga dapat digunakan dalam kombinasi dengan TIBC kit untuk menentukan TIBC.
Komposisi
2x30 ml atau 2x100 ml reagen CAB
CAB 0,18 mmol/l
CTMA 2,2 mmol/l
Guanidinium chloride 2,6 mmol/l
Buffer Sodium Asetat(pH 4,7) 45 mmol/l 5 ml standar
Besi 100 μg/dl
Atau 17,9 μmol/l
Persiapan Reagen
Dan siap untuk digunakan
Stabilitas Reagen
Stabil bahkan setelah dibuka sampai tanggal kadaluarsa bila disimpan pada suhu 2…25oC. kontaminasi reagen benar-benar harus dihindari.
Spesimen RG T STD ST D RG T RG T
Serum, plasma heparin
Jangan menggunakan plasma EDTA, plasma sitrat atau serum hemilotik.
Catatan : Specimen lipemic biasanya menghasilkan kekeruhan campuran reagen sampel yang mengarah kehasil palsu tinggi.
Tes liquicolor besi menghindarkan dari hasil palsu tinggi dengan lipid factor kliring (LCF). LCF membersihkan kekeruhan yang disebapkan oleh specimen liemic selama inkubasi.
Pemeriksaan
Panjang gelombang : Hg 623 nm
Suhu : 20…25 oC
Pengukuran : terhadap blanko reagen (Rb). Cukup menggunakan satu blanko utuk satu seri.
Skema Pemipetan
Blanko Standar Sampel
Serum - - 50 μl
Standar - 50 μl
-Aquabidest 50 μl -
-RGT 1000 μl 1000 μl 1000 μl
Campur dengan hati-hati, inkubasi selama 15 menit pada suhu 20…25 oC. Ukur absorbance sampel (ΔAsampel) dan standar (ΔASTD) terhadap reagen blanko selama 60 menit.
Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan Factor
Panjang gelombang Besi [μg/dl] Besi [μmol/l]
Hg 623nm 830 x ΔAsampel 149 x ΔAsampel
Perhitungan Kosentrasi Besi Dengan Standar
Jika panjang gelombang yang berbeda (620-640 nm) akan digunakan untuk pengukuran standar yang disediakan dengan kit harus digunakan untuk perhitungan.
C = Δ A sampelΔ A STD x 100 [μg/dl]
C = Δ A sampelΔ A STD x 17,9 [μmol/l] Linearitas
Tes linearitas sampai kosentrasi 500 μg/dl atau 89,5 μmol/l Nilai Rujukan
Laki-laki : 59-148 μg/dl atau 10,6-28,3 μmol/l Perempuan : 37-145 μg/dl atau 6,6-26 μmol/l
