i B A B III
M E T O D E P E N E L I T I A N
1. R a n c a n g a n P e n e l i t i a n
Penelitian ini m e r u p a k a n penelitian e k s p e r i m e n t a l murni y a n g jnggunakan analisis k e m a k n a a n Mann-Whitney d e n g a n m e m a n f a a t k a n }gram S P S S 11.5 for v/indows.
!. Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian d e n g a n h e w a n c o b a dilaksanakan di r u m a h h e w a n {animal use) Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. P e r i a k u a n teriiadap h e w a n 3a dimulai sejak tangga! 2 2 J u l i 2 0 0 6 s a m p a i d e n g a n 2 2 S e p t e m b e r 2 0 0 6 . mbuatan preparat jaringan dilakukan di laboratorium Histologi dan Patologi atomi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. P r e p a r a t d i b a c a d a n diambii Dnya di B a g i a n Histologi d a n Patologi A n a t o m i F a k u l t a s Kedokteran iversitas Indonesia.
Sampel
m Subjek penelitian a d a l a h tikus S p r a g u e D a w l e y jantan d e n g a n berat badan 150-160 g r a m s e b a n y a k 4 5 ekor, y a n g ditentukan b e r d a s a r k a n m m u s ^ n e l i t i a n e k s p e r i m e n t a l (Frederer).
^ t ( n - 1 ) > 1 5 y
t = j u m l a h p e r i a k u a n
n = j u m l a h subjek d a l a m satu kelompok f 9 ( n - 1 ) > 1 5 - 9 n - 9 > 1 5
It
9 n > 15 + 9 I f * ' 11 • < 1 ^ - 9 n > 2 4 ' I n > 2 4 / 9n > 2,67 diputuskan jumlah tikus peri<elompok periakuan a d a l a h 5
it:-p . ekor.
P e n g a m b i l a n s a m p e l dilakukan s e c a r a simple random sampling. Tikus [jantan y a n g telah ditimbang s e b e l u m n y a s e b a n y a k 4 5 ekor diletakkan di d a l a m J<andang b e s a r . D i s e d i a k a n 9 k a n d a n g yang u k u r a n n y a lebih kecil dan s e b u a h gelas berisi g u l u n g a n kertas y a n g dituliskan n a m a - n a m a kelompok d i s e d i a k a n . K a n d a n g kecil juga diberi k o d e n a m a p e r i a k u a n . P e n e m p a t a n kelompok tikus jditentukan d e n g a n m e n g o c o k gulungan kertas d a l a m g e l a s .
r
Tikus dibagi menjadi s e m b i l a n k e l o m p o k p e r i a k u a n d e n g a n m a s i n g -[iriasing kelompok berjumlah lima ekor. P e m b a g i a n k e l o m p o k b e r d a s a r k a n ^ e r l a k u a n n y a dijelaskan p a d a t a b e l 3.3 poin periakuan terhadap hewan coba.
IKelompok IX VIII VII
0
0
^ 1 Tidak diberi periakuan apa-apa
^ Rokok
1^ Aqua destilata
if^^ Larutan teh hijau 270 mgAg bb
Lamtan teh hijau 330 mgAg bb
i/-? Laartan asam askorbat 20 mgAg bb
feambar 3.1. Skema periakuan terhadap tlap kelompok terhadap ban
W.4. Sistematika Kerja
•3.4.1. Alat dan Bahan
'Alat dan b a h a n y a n g a k a n d i p e r g u n a k a n s e l a m a penelitian a d a l a h :
I-I 1. Bubuk teh hijau dari teh hijau a l a m i y a n g d i h a l u s k a n r
3. S o n d e 2,5 c c untuk a s u p a n larutan teh hijau d a n a s a m askorbat 4. A q u a d e s t i l a t a untuk melarutkan teh hijau d a n a s a m askorbat 5. R o k o k kretek (non-filter) d a n pemantik api
6. K a n d a n g k h u s u s untuk p e n g a s a p a n ( p e m a p a r a n a s a p rokok) 7. Larutan formal salin untuk f i k s a s i jaringan paru
8. Pot p e n y i m p a n a n jaringan s e t e l a h difiksasi 9. P e r a l a t a n b e d a h minor
10. G e l a s objek d a n g e l a s penutup 11. P e w a r n a M a s s o n trikrom
3.4.2. Penentuan Dosis dan Preparasi
pembuatan lamtan,teh hijau
mkl, 1 gram teh hijau m e n g a n d u n g 1 0 % s a m p a i d e n g a n 3 0 % E G C G . D a l a m
p)enelitian ini diambii p e r s e n t a s e t e r e n d a h , s e h i n g g a 1 g teh hijau m e n g a n d u n g ^ 0 0 mg E G C G . D e n g a n berat b a d a n tikus u s i a 10 minggu rata-rata 150 g r a m ^0,15 kg) m a k a ditentukan b e b e r a p a d o s i s s e s u a i d e n g a n k e l o m p o k merlakuannya.
Tabel 3.1 D o s i s teh hijau b e r d a s a r k a n E G C G per hari 1 Dosis
I*-'- (mg/ kg BB)
Kebuluhan E G C G * (mg/ hari)
Kebuluhan teh hijau (mg/ hari) i r V 270 330 40 50 400 500 pembulatan 39
T e h hijau s e b a n y a k 1 g r a m dilarutkan d a l a m air s e b a n y a k 5 ml s e h i n g g a P menjadi larutan 200 m g / ml. S e h i n g g a didapatkan d o s i s p e m b e r i a n teh hijau
berdasarkan kelompok p e r i a k u a n .
Tabel 3.2 K e b u t u h a n larutan teh hijau per hari
Dosis Kebutuhan teh hijau (mg/ kg BB) (ml/ hari)
270 2
330 2,5
' S e l a m a 10 hari p e r t a m a , 1 kelompok tikus m e m b u t u h k a n teh hijau / s e b a n y a k 4 0 0 m g / hari/ individu dan 1 kelompok lagi m e m b u t u h k a n 500 mg/hari/
>
pndividu. S e h i n g g a setiap hari dibutuhkan 4 , 5 g r a m teh hijau y a n g d i s e d u h 'dengan 22,5 ml air hangat. Untuk 10 hari k e d u a , dibutuhkan 9 g r a m teh hijau ^ n t u k diseduh d e n g a n air hangat s e b a n y a k 4 5 ml. L a r u t a n kental teh tersebut "disaring m e n g g u n a k a n kain k a s a sehingga d i d a p a t k a n larutan yang b i s a
I
i d i a s p i r a s i d e n g a n s o n d e .
^'Pembuatan larutan asam askorbat ft.'
• A s a m askorbat dipilih s e b a g a i kontrol periakuan k a r e n a pelamt a s a m I askorbat s a m a d e n g a n pelarut teh hijau, yakni a q u a destilata, s e h i n g g a memperkecil bias. D o s i s a s a m askorbat adalah 10-30 m g / k g B B . D a l a m [. penelitian ini diambii d o s i s 2 0 m g / k g B B . Untuk tikus d e n g a n berat badan rata-ls
r
t
'a 150 g (0,15 kg) m a k a d o s i s yang dibutuhkan a d a l a h 3 m g / hari. J u m l a h .£,oJm askorbat yang dibutuhkan ditimbang d e n g a n timbangan obat dan .^larutkan ad 2 ml. Larutan dibuat s e g e r a pada saat a k a n d i g u n a k a n .IV.
| . 4 . 3 . P e r i a k u a n T e r h a d a p H e w a n C o b a
Tikus c o b a dibagi menjadi 9 kelompok. S e t e l a h d i p i s a h k a n k a n d a n g n y a dilakukan akiimatisasi s e l a m a kurang lebih 1 minggu untuk a d a p t a s i . S e l a m a akiimatisasi s e m u a kelompok tikus c o b a diberi pelet d a n air minum. S e t e l a h masa akiimatisasi, m a s i n g - m a s i n g kelompok diberi periakuan seperti yang tertera p a d a tabel di b a w a h ini.
K e l o m p o k kontrol d i p i s a h k a n dari k e l o m p o k p e r i a k u a n d a n tidak dit>eri Deriakuan.apa-apa. T i k u s y a n g diberi pajanan a s a p rokok dipindahkan d a l a m i i a n g a n terpisah. P e n g a s a p a n dilakukan s e l a m a 90 menit setiap hari. S e t e l a h neiakukan p e n g a s a p a n , tikus-tikus c o b a d i k e m b a l i k a n lagi ke d a l a m ;andangnya . m a s i n g - m a s i n g . P e m b e r i a n antioksidan dilakukan d e n g a n nenggunakan s o n d e s e s u a i d e n g a n d o s i s yang s u d a h ditentukan.
/lakanan dan minuman diberikan a d libitum.
S e m u a kelompok y a n g m e n d a p a t k a n d u a periakuan (pajanan a s a p rokok Ian larutan teh hijau, a q u a destilata, atau a s a m askortaat), diberikan larutan sriebih dahulu baru dilakukan p e n g a s a p a n .
Isabel 3.3 Pembagian k e l o m p o k hewan c o b a berdasarkan p e r i a k u a n
'Ke'.ompok Keterangan Periakuan Jumlah
(ekor)
1 Kontrol 1 Tidak dilakukan periakuan 5
II Kontrol 2 Asap rokok selama 20 hari 5
III Kontrol 3 Aqua destilata 20 hari, asap rokok sejak 10 hari kedua 5 IV Periakuan 1 Larutan teh hijau 2 ml/ hari selama 20 hari, asap 5
rokok sejak 10 hari kedua
V Periakuan 2 Larutan teh hijau 2,5 ml/ hari selama 20 hari, asap 5 rokok sejak 10 hari kedua
VI Periakuan 3 Larutan asam askorbat selama 20 hari, asap rokok 5 sejak 10 hari kedua
Vll Periakuan 4 A s a p rokok selama 20 hari, larutan teh hijau 2 ml/ hari 5 sejak 10 hari kedua
VIII Periakuan 5 A s a p rokok selama 20 hari, larutan teh hijau 2,5 ml/ 5 hari sejak 10 hari kedua
IX Periakuan 6 A s a p rokok selama 20 hari. larutan asam askorbat 5 sejak 10 hari kedua
P e n g a s a p a n dilakukan d e n g a n 3 batang rokok setiap k e l o m p o k s e l a m a 90 menit setiap tiari, 10 hari atau 2 0 hari berturut-turut, tergantung jenis
periakuan kelompoknya. R a t a - r a t a 1 batang rokok a k a n h a b i s d a l a m waktu 30 menit, m a k a p e n g a s a p a n p e r t a m a dilakukan d e n g a n m e m b a k a r 1 batang lebih dulu untuk satu kelompok (3 kali 3 0 menit). M e t o d e ini merujuk p a d a cara yang dilakukan Cavan-a et. al (2001).
I P a d a hari ke-21 s e m u a tikus c o b a d i a n e s t e s i d e n g a n eter kemudian F
dilakukan p e m b e d a h a n untuk m e n g a n g k a t jaringan paru. J a r i n g a n yang diambii Jifiksasi dalam lamtan fonnal salin s e b e l u m diproses lebih lanjut.
j3,5. Isolasi Jaringan Paru
K e l o m p o k tikus y a n g a k a n diambii jaringan parunya d i m a s u k k a n ke dalam fsungkup tertutup. K e d a l a m s u n g k u p d i m a s u k k a n k a p a s y a n g sudah dibasahi Iter. S e t e l a h s e m u a tikus l e m a s dan s u d a h terbius, satu persatu diambii secara
bergantian d a n diletakkan di a t a s p a p a n untuk dilakukan p e m b e d a h a n .
Tikus dianestesi inhalasi Pembedahan ikus -> / Jaringan paru diambii X PC Fiksasi jaringan dengan formol salin J aringan^tfiproses secara histoteknik (dehidrasi pembeningan.impregnansi, blok parafin, pengirisan,
pewamaan)
Pemeriksaan histologi jaringan
.Gambar 3.2. Skema isolasi jaringan paru
P e m b e d a h a n d i l a k u k a n d e n g a n menggunting dinding perut teriebih ;dahulu, dilanjutkan d e n g a n menggunting tulang rawan iga kiri-kanan. S e t e l a h itu ;sternum disingkap, s a l u r a n nafas dipotong s a m p a i batas trakea dan aorta 'abdominalis digunting. S e m u a isi mediastinum dikeluarkan d a n dicuci d e n g a n
dimasukkan ke d a l a m pot y a n g berisi larutan f o r m o l s a l i n d a n diberi kode n a m a Icelompok.
S e b e l u m dilanjutkan d e n g a n p e m b u a t a n preparat, jaringan d i r e n d a m 'dalam larutan ini s e l a m a minimal 24 j a m .
3.5.1. Fiksasi (Fixating)^
J a r i n g a n p a m tikus difiksasi d a l a m larutan formol salin d e n g a n c a r a fiksasi rendam (immersed fixation). F o n n u l a p e m b u a t a n larutan ini a d a l a h :
L a m t a n formalin (formaldehida 4 0 % ) 100 ml Natrium klorida 9 g r a m Aquadestilata 9 0 0 ml
3.5.2. Dehidrasi (DehidratJng) 34
Dehidrasi dikerjakan d e n g a n m e m i n d a h k a n jaringan dari larutan formol salin ke d a l a m alkohol serial d e n g a n g r a d a s i m e n i n g k a t Dari larutan formalin, [jaringan dipindahkan ke d a l a m larutan alkohol 7 0 % s e l a m a 3 hari (setiap hari di ganti), kemudian ke d a l a m alkohol 9 5 % s e l a m a 3 hari (setiap hari diganti), d a n ke d a l a m alkohol absolut s e l a m a 3 hari juga (setiap hari di ganti).
3.5.3. Pembeningan (Clearing)^
P e m b e n i n g a n dilakukan d e n g a n m e n g g u n a k a n lamtan xylol, jaringan direndam s e l a m a kurang lebihi 1 j a m .
3.5.4. Pembenaman (Embedding) 34
J a r i n g a n diangkat dari xylol d a n d i b e n a m k a n ke d a l a m parafin cair s e l a m a 5 j a m d a l a m o v e n d e n g a n s u h u 5 6 ° C .
I 3.5.5. Pembuatan Blok Parafin (Blocking) 34
r P e m b u a t a n blok m e n g g u n a k a n tiistoplate plastik y a n g diisi d e n g a n
I parafin. ; Jaringan diletakkan dl tengah-tengah histoplate. K e m u d i a n dibiari^an 1
I
I
r m e m b e k u .
-I 3.5.6. Pengirisan Jaringan (Cutting)
I Blok y a n g dipilih untuk m e m b u a t preparat a d a l a h blok yang m e n g a n d u n g i lobus tengah paru. H a l ini dilakukan a g a r m e n d a p a t k a n hasil p e r c o b a a n y a n g [ paling nyata k a r e n a lobus tengah paru yang paling dekat d e n g a n hilus, s e h i n g g a
paling banyak terpapar a s a p rokok. A s u m s i ini diambii b e r d a s a r k a n literatur
/yang menyatakan b a h w a C a p a m terbanyak a d a l a h akibat rokok dan 9 5 % dari ^eluruh insiden C a paru primer a d a l a h karsinoma bronkogenik.^
Jaringan diiris d e n g a n mikrotom s e t e b a l 5 m i k r o n . Irisan jaringan fdimasukkan ke d a l a m waterbath (suhu 37°C), k e m u d i a n diambii d e n g a n fmenggunakan g e l a s objek y a n g telah diberi o l e s a n putih telur.
[Gelas objek yang telah ditempeli jaringan diletakkan p a d a hotplate bersuhu 5v
'40°C, lalu dibiari<an s e l a m a 2 j a m .
(2.5.7. Pewarnaan (Staining) 34,35
P e w a m a a n preparat y a n g digunakan a d a l a h trikrom M a s s o n untuk imelihat jaringan ikat p a d a preparat, k h u s u s n y a untuk m e m p e r m u d a h a d a mdaknya fibrosis p a d a p a r u . P a d a p e w a m a a n ini, j a r i n g a n ikat a k a n tampak
lijau, inti s e l b e r w a m a coklat tua atau kehitaman, d a n s i t o p l a s m a a k a n tampak [kemerahan.
Cara pembuatan lamtan trikrom M a s s o n I. E i s e n h e m a t o k s i l i n W E I G E R T a . Hematoksilin 1 gram A l k o h o l 1 0 0 % 10 ml A l k o h o l 9 5 % 90 ml Feriklorida 2 9 % 4 ml b. A s a m klorida 2 5 % 1 ml Aquadetilata 9 5 ml
II. M a s s o n G o l d n e r I P o n c e a u d e Xylidin 0,1 gram A s a m F u c h s i n 0,1 gram A s a m A s e t a t 0 , 6 ml A q u a d e s t i l a t a 100 ml III. M a s s o n G o l d n e r II Ptiosphiotungsic a c i d 4 g r a m O r a n g e G 2 g r a m A q u a d e s t i l a t a 100 ml IV. M a s s o n G o l d n e r III Light G r e e n 0,1 g r a m A s a m A s e t a t • 0,2 ml A q u a d e s t i l a t a 100 ml a p e m u l a s a n : ' >
' Preparat d i c e i u p k a n k e d a l a r f i xylol I, II, alkohol 1 0 0 % , alkohol 9 5 % , alkohol 70%) s e c a r a bertumt-turut n i a s i n g - m a s i n g 5 menit.
Lalu d i c e i u p k a n ke d a l a m lamtan E i s e n h e m a t o x y l i n Weigert s e l a m a 5 menit Preparat dibilas d e n g a n air l e d e n g s e l a m a 3 menit, lalu dibilas d e n g a n a q u a d e s
Dilanjutkan d e n g a n larutan M G I s e l a m a 5 menit, lalu dibilas d e n g a n a s a m asetat 1% 1 menit
Preparat diceiupkan ke d a l a m M G II s e l a m a 5 menit, dibilas lagi d e n g a n a s a m asetat 1 % 1 menit
Kemudian diceiupkan ke d a l a m lamtan M G III s e l a m a 5 menit dan dibilas [ lagi dengan lamtan a s a m asetat 1% s e l a m a 1 menit
Preparat dikeringkan
^ Terakhiir diceiupkan ke d a l a m xylol I dan II
; Preparat ditutup d e n g a n k a c a penutup y a n g diberi e n t e l l a n .
3. Pembacaan Preparat
i Pembacaan preparat dilakukan dengan cara single blind. P a d a saat I
mbuatan preparat, k o d e ( n a m a kelompok) telati dituliskan p a d a g e l a s objek.
i
da s a a t p e m b a c a a n , s e m u a k o d e kelompok tersebut ditutup d e n g a n label
I
tih untuk menghindari bias p e m b a c a a n . K e m u d i a n preparat diacak d a n diberi je b a m (nomor 1 s a m p a i 4 5 ) . H a s i l p e m b a c a a n ditulis s e s u a i kode b a m sebut. Setelah s e m u a preparat d i b a c a , k o d e - k o d e b a m tersebut dilepas. liulisan hasil p e n g a m a t a n mikroskopik k e m u d i a n d i s u s u n kembali dan
p-
f-elompokkan s e s u a i d e n g a n k o d e n a m a kelompok.
. Pengumpulan dan Pengolahan Data
Data yang dikumpulkan a d a l a h data primer, yakni dari hasil periakuan i a tikus coba s e l a m a 2 0 hari yang diambii p a r u n y a d a n dibuat preparat tologi. Kriteria penilaian data yang digunakan a d a l a h skoring terbuka, hasil igamatan preparat k e l o m p o k kontrol dibandingkan d e n g a n hasil pengamatan
J^eparat kelompok p e r i a k u a n . Inti dari penilaian a d a l a h m e m b a n d i n g k a n tingkat j ^ a r a h a n tiap kelompok akibat pajanan a s a p rokok.
^ a y a n g dikumpulkan a d a l a h :
t
1. J u m l a h rata-rata g r a n u l o m a p a d a tiap l a p a n g a n p a n d a n g b e s a r (pembesaran 100 kali, yakni p e m b e s a r a n objektif 10 kali dan okuler 10 kali)
2. J u m l a h rata-rata sel r a d a n g p a d a g r a n u l o m a y a n g d i t e m u k a n , dinilai p a d a lapangan p a n d a n g kecil ( p e m b e s a r a n 4 0 0 kali).
3. J u m l a h sel datia d a l a m l a p a n g a n p a n d a n g kecil (pemt>esaran 4 0 0 kali). 4 . A d a tidaknya fibrosis p a d a preparat y a n g dinilai. F i b r o s i s tampak p a d a
preparat yang d i w a m a i d e n g a n p e w a m a a n trikrom ini s e b a g a i p u l a s a n V b e r w a m a bim k e h i j a u a n .
15. Keutuhan silia b r o n k u s . P e n i l a i a n diambii d e n g a n c a r a menilai persentase rerata keutuhan silia dari tiap bronkus y a n g ditemukan.
: 6. J u m l a h skoring dari m a s i n g - m a s i n g poin di atas.
9.-1^ Ketentuan skoring a d a l a h s e b a g a i t>erikut: iC J u m l a h g r a n u l o m a / Ipb
i ^ = 0
ti 2 = 0 , 2 - 1 • 3 = > 1
J u m l a h makrofag aktif/ s e l epiteloid/ Ipk 1 = 1 - 3 2 = 3 - 5 3 = > 5 J u m l a h sel r a d a n g / Ipk 1 = 0 - 2 0 2 = 20-40 3 = > 4 0 K e b e r a d a a n fibrosis 1 = Tidak a d a 3 = A d a ,D, K e u t u h a n silia bronkus 1 = < 7 5 % ;8.13 i-> 7 5 % P e n i l a i a n skoring a d a l a h s e b a g a i berikut:
Hasil penjumlahan skoring 5 s a m p a i 7 dikategorikan d a l a m r u s a k ringan; skoring ^ s a m p a i 10 m a s u k d a l a m kategori m s a k s e d a n g ; d a n j u m l a h skoring y a n g lebih jdari 10 a d a l a h m s a k berat.
| r S k o r i n g dibuat b e r d a s a r k a n hasil penelitian pre-eliminary, paru tikus yang | l i b e r i rokok tampak b a n y a k s e k a l i gejala p e r a d a n g a n d i b a n d i n g k a n d e n g a n paru •jtikus kontrol. P a d a preparat paru tikus periakuan ini dicari gejala p e r a d a n g a n
I
^nelitian. G e j a l a yang menonjol a d a l a h peningkatan jumlah s e l radang yang
i
jj^'embentuk g r a n u l o m a , d i t e m u k a n n y a s e l datia, a d a n y a fibrosis, d a n k e r u s a k a n j ^ k t u r silia bronkus.
P a d a awalnya peneliti ingin m e m b e d a k a n leukosit d a n m e l a k u k a n (ji'ferensiasi sel-sel radang. N a m u n d e n g a n k e t e r b a t a s a n alat yang tersedia saat ini dan diferensiasi sel m e m b u t u h k a n ketelitian y a n g tinggi d a n tingkat k e s a l a h a n
prig
kecil, s e h i n g g a peneliti kesulitan m e l a k u k a n n y a .P e n e n t u a n nilai skoring dilakukan sendiri oleh peneliti k a r e n a belum a d a S^ndar skoring baku y a n g dipublikasikan untuk menilai tingkat p e r a d a n g a n / ^ m s a k a n jaringan p a m akibat rokok.
3.8. Parameter Penelitian
•3.8.1 Granuloma
G r a n u l o m a m e m p a k a n m a s s a atau nodul jaringan granulasi seperti tumor ^ n g a n fibroblas d a n kapiier y a n g tumbuh aktif, terdiri atas kumpulan makrofag p m o d i f i k a s i yang m e n y e m p a i s e l epitel (sel epiteloid), y a n g dikelilingi oleh ^ngkaran s e l mononuklear t e o i t a m a limfosit d a n k a d a n g - k a d a n g s e k e l o m p o k s e l
raksasa berinti banyak (sel datia) yang m e r u p a k a n p e n y a t u a n dari b e b e r a p a s e l gpiteloid. 12.1^.15.1*= ( G a m b a r 3.3 dan 3.4)
Menurut b e b e r a p a ahli patologi anatomi, suatu nodul iritan sudah dapat ^disebut granuloma w a l a u p u n belum terdapat sel datia d a n hanya ditemukan s c l
| l radang mononuklear, multinuklear, dan atau sel-sel epiteloid saja. Hal ini ^ a i t dengan pengertian granuloma itu sendiri yang artinya tumor yang Jrbentuk dari sel-sel granul (sel-sel radang). Sedangkan pembentukkan sel '^tia sangat berkaitan dengan faktor waktu, yakni lamanya iritasi terjadi dan ^ o r intensitas iritan. Granuloma yang telah mengalami proses degenerasi f ibat hipovaskularisasi di bagian sentralnya akan mengalami degenerasi sentral
I
yan kondisi ini akan digantikan oleh jaringan fibrosis.
Untuk kepentingan penelitian, peneliti memutuskan untuk menilai ipnuloma yang sudah mengandung sel-sel epiteloid.
V
I
gambar 3.3. Tampak kumpulan sel-sel radang yang disebut granuloma pada irisan jaringan ^nj, di sekitar bronkus yang terdiri dan sel-sel mononuklear di bagian tepi dan sel- sel datia di
•Gambar 3.4. Granuloma (tanda 'i^)yang ditemukan pada preparat jaringan pam tikus kelompok fAR20 (yang diberi aqua destilata dan asap rokok) tampak di sekitar bronkus, sel mononuklear 'berada di tepi (panah merah), dan sel datia berkumpul di bagian inti granuloma (panah kuning)
3.8.2 Sel Datia
S e l datia atau giant cell a d a l a h s e l r a k s a s a y a n g b e r a s a l dari p e n y a t u a n beberapa s e l epiteloid, t a m p a k s e b a g a i s e l y a n g s i t o p l a s m a n y a b e s a r d a n berinti ^ a n y a k . S u m b e r lain m e n g a t a k a n , s e l datia a d a l a h setiap makrofag Rermodifikasi y a n g s a n g a t b e s a r , multinuklear, y a n g d a p a t terbentuk dari B e n g g a b u n g a n s e l epiteloid atau dari p e m b e l a h a n inti t a n p a p e m b e l a h a n p t o p l a s m a dari monosit. •'^••'^-le ( G a m b a r 3.5 d a n 3.6)
Gambar 3.5. Sel datia dengan pewamaan HE tampak sebagai sel raksasa berinti banyak, ^merupakan penyatuan dari beberapa sol epiteloid sebagai reaksi tertiadap benda asing '(www.medlib.med.utah.edu)
Gambar 3.6. Sel-sel epiteloid yang mulai menyatu dan akan membentuk sel datia, ditemukan pada preparat tikus periakuan
Gambar 3.7. Panah merah pada gambar A adalah sel datia, tampak sel besar dan sitoplasma 'dominan berisi multinuklear. Panah merah pada gambar B menunjukkan granuloma, panah hijau frnenunjukkan sel neutrofil, dan panah biru menunjukkan makrofag aktif Gambaran ini
^menunjukkan bahwa granuloma tidak hanya terdiri dari sel radang kronik tetapijuga sel radang \akut.
3.8.3 Fibrosis
K e r u s a k a n jaringan akibat radang kronik m e l i b a t k a n s e l epitel d a n jaringan ikat p a r u . J i k a p e r b a i k a n tidak d a p a t t e r c a p a i s e p e n u h n y a oleti tegenerasi sel s e p t a (pneumosit tipe II), m a k a p e r g a n t i a n n y a a k a n m e l i b a t k a n
aringan fibrosis. S a a t itu y a n g teriihat a d a l a h p e n e b a l a n dinding alveoli d a n j u g a penebalan dinding p e m b u l u h d a r a h y a n g b e r a d a di d e k a t n y a . ^^•'^'^-''^ ( G a m b a r ^.'O d a n 3.9)
J a r i n g a n fibrosis a d a l a h t a h a p a n terakhir dari s u a t u p r o s e s p e r a d a n g a n , ^ i m a n a p e n y e m b u h a n tidak b i s a terjadi s e m p u r n a . D a l a m penelitian ini fibrosis ^ a n g dinilai d a l a m preparat a d a l a h jaringan fibrosis y a n g terdapat d a l a m 'granuloma, hal ini m e n i n g k a t k a n s p e s i f i k a s i tingkat k e r u s a k a n akibat partikel
I
asap rokok. if
•Gambar 3.8. Fibrosis jaringan paru di sel<itar bronkus dengan pewamaan Masson thchrome 'tampak berwama bim cerah (panah kuning). Di sekitamya banyak sebukan sel-sel radang dan }^el datia (panah merah) (www.catholic, ac.kr)
[Gambar 3.9. Fibrosis yang tampak pada jaringan pam tikus periakuan (U), terjadi di sekitar bronkus, dan tampak granuloma di dekatnya (')
1^.8.4 Silia Bronkus
L a p i s a n teratas dari s e l epitel s a l u r a n n a f a s b a w a h y a n g m e n g h a s i l k a n s e l •goblet. Silia berfungsi m e n y a p u m u k u s y a n g d i h a s i l k a n s e l goblet k e l u a r dari saluran nafas. K e r u s a k a n silia m e n a n d a k a n a d a n y a k e r u s a k a n jaringan p a r u . ^•^^•^^ ( G a m b a r 3.10 d a n 3.11)
Gambar 3.10. Gambaran bronkus dan silia. Gambar A menunjukkan bronkus normal, dengan silia yang masih utuh, tampak seperti bulu sikat pada puncak sel epitel torak (panah biru). Sedangkan gambar B, pada puncak sel-sel epitel torak tidak tampak ada silia, menunjukkan adanya kenisakan struktursel (gambar A diambii dari www.lumen.luc.edu dan gambar B dari www.med.cmu.ac.th)
B
Gambar 3.11. Gambaran bn^nkus dan silia preparat paru tikus periakuan, gambar A
pienunjukkan silia yang masih utuh diatas lipatan mukosa seperti bulu sikat, sedangkan gambar B memperlihatkan lipatan mukosa yang kehilangan silia (panah merah)
f3.9. Dokumentasi
I
P e n g a m b i l a n foto preparat m e n g g u n a k a n k a m e r a N i k o n fx-35dx, mikroskop mikrofotografi N i k o n Optiphot-2. Pemt>esaran y a n g d i g u n a k a n untuk p e n g a m b i l a n g a m b a r a d a l a h 50 kali d a n 2 0 0 kali.
