IV. HASIL
1. P o s t u l a t Koch
Kerbau KPIH, se ja k t i b a d i kompleks l a b o r a t o r i u m s e l a l u g e l i s a h dan k e t a k u t a n d a n s e l a l u menguak ( m e n g e l u a r k a n s u a r a memanggil). S e t e l a h berkumpul dengan k e r b a u
KP2P
i a menjadi. l e b i h t e n a n g t e t a p i s a n g a t k e t a k u t a n b i l a d i p i s a h k a n . S e m e n t a r a i t u k e r b a uKPZP
d a n k e r b a uKKH,
y a n g t e r a k h i r b e r a d a d i l u a r kompleks, r e l a t i f t e n a n g.
Pada h a r i p e n y u n t i k a n ( H o ) , suhu badan k e r b a u
KPIH
: 3 9 , 5 OC; k e r b a u KP2P : 3 9 , 3 OC d a n k e r b a uK M
: 3 8 , 5 OC.P a d a H16
,
k e r b a u KPIH menun jukkan g e j a l a b e r u p a k e r a t i t i s r i n g a n d i i k u t i p e n g e l u a r a n c a i r a n d a r i mata s e b e l a h k i r i d a n s u h u badan n a i k m e n j a d i 4 0 , 3 OC t e t a p i n a f s u makan t e t a p b a i k . Sedangkan keadaan k e r b a u KPZP dan KKH t i d a k b e r u b a h dengan suhu badan masing-masing 3 9 , 3 OC d a n 3 8 , 4 OC. I s o l a s i v i r u s d a r i l e u k o s i t , a i r mata, i n g u s d a nc a i r a n p r e p u t i u m ( k e t i g a k e r b a u a d a l a h j a n t a n ) d a r i k e t i g a k e r b a u a d a l a h n e g a t i f .
Pada H z 7 kedua mata k e r b a u KPIH mengalami k e r a t i t i s b a g i a n p i n g g i r d i s e r t a i p e n g e l u a r a n a i r mata d a n s u h u badan n a i k m e n j a d i 4 0 "C t e t a p i n a f s u makan masih b a i k ; s e m e n t a r a k e r b a u KPZP mengalami k o n j u n g t i v i t i s r i n g a n d i s e r t a i p e n g e l u a r a n c a i r a n d a r i k e d u a mata dengan s u h u badan 3 9 , 7 OC d a n n a f s u makan b a i k . Sedangkan k e r b a u KKH
Isolasi v i r u s d a r i k e t i g a e k o r k e r b a u a d a l a h n e g a t i f . Gejala k l i n i s i n i t i d a k b e r u b a h sampai H30 k e c u a l i suhu *badan k e r b a u KPIH t u r u n men j a d i 3 9 , 8 OC,
KPZP
: 39.1 OCd a n
KKH:
3 8 , 5 OC d a n i s o l a s i v i r u s t e t a p n e g a t i f .Sampai t i t e r a n t i b o d i k e t i g a k e r b a u masih sama d e n g a n keadaan sebelum d i t u l a r i y a i t u <2.
Pada HS9, k e r b a u KPIH d a n KPZP memperlihatkan k e n a i k a n s u h u badan y a i t u 4 0 , 8 OC d a n 4 0 , l OC sedangkan
KKH masih d a l a m keadaan normal 3 8 , 2 OC, namun i s o l a s i v i r u s t i d a k b e r h a s i l .
H a r i - h a r i s e l a n j u t n y a t i d a k a d a p e r u b a h a n yang mencolok d a n suhu badan n a i k - t u r u n a n t a r a 39 d a n 41 OC p a d a k e r b a u KPIH, 39 d a n 4 0 , 7 OC p a d a k e r b a u KP2P s e r t a 3 8 , 4 OC p a d a k e r b a u k o n t r o l .
Pads HlO8, b e r h a s i l d i i s o l a s i v i r u s d a r i l e u k o s i t k e r b a u KPIH, t i t e r a n t i b o d i n a i k menjadi 1 : 2 dan n a f s u makan b e r k u r a n g (Gambar 1 ) . Pada H13i, k e r b a u KPIH mengeluarkan i n g u s d a n a i r mata l e b i h banyak, k o n j u n g t i v i t i s r i n g a n , l e s u , n a f s u makan k u r a n g b a i k d a n s u h u badan 3 9 , 2 OC ( T a b e l 1 ) . I s o l a s i v i r u s d a r i l e u k o s i t p o s i t i f dan t i t e r a n t i b o d i n a i k menjadi 1 : 6 4 ; s e d a n g k a n k e r b a u KP2P d a n k e r b a u k o n t r o l , i s o l a s i v i r u s n e g a t i f dan a n t i b o d i 1: <2 ( T a b e l 2 ) .
Pada HI3z, k e r b a u KPIH menunjukkan g e j a l a k l i n i s MCF y a n g k h a s , y a i t u l e s u , k e l u a r n y a i n g u s dan a i r mata yang mukopurulen, s u h u badan 41
" c ,
kon j u n g t i v i t i s , kekeruhankornea, mengeluarkan bau busuk yang khas, 1 imf adenopati umum dan nafsu makan hilang (Gambar 2, 3, 4). Virus MCF yang identik dengan K6/AP dan WCll berhasil diisolasi dari leukosit dan ingus (Gambar 5, 6) dan titer antibodi adalah
1:64 (Tabel 2). Pada hari yang sama titer antibodi
kerbau KP2P meningkat menjadi 1:2, meskipun isolasi
virus belum berhasil.
T a b e l 1. P e r k e n b a n g a n g e j a l a k l i n i s k e r b a u KPIH y a n g d i t u l a r i d e n g a n v i r u s Kb/AP p a s a s e k e t i g a d a n k e r b a u KP2P y a n g d i t u l a r i d e n g a n v i r u s Kb2LP p a s a s e k e d u a s e r t a k e r b a u K K H y a n g d i s u n - t i k d e n g a n PBS ( k o n t r o l ) . G e j a l a k l i n i s H a r i s e s u d a h
...
d i t u l a r i K P 1 KPZP K K H ( d i t u l a r i Kb/AP) ( d i t u l a r i Kb2LP) ( k o n t r o l )...
H~ S u h u 3 9 , 5 OC S u h u 3 9 , 3 OC S u h u 3 8 . 5 O C 1 6 S u h u 4 0 , 3 O C S u h u 3 9 , 3 OC S u h u 3 8 , 4 O C Ada k e r a t i t i s d a n k e r a k d i m a t a s e b e l a h k i r i I n g u s e n c e r N a f s u makan b a i k "27 S u h u 4 0 OC S u h u 3 9 , 7 O C S u h u 3 8 , b O C K e r a t i t i s K o n j u n g f i v i t i s d a n Kedua n a t a b e r a i r a i r r a t a l n g u s e n c e r I n g u s e n c e r N a f s u n a k a n b a i k Naf s u makan b a i k H 3 0 S u h u 3 9 , 8 OC S u h u 3 9 , l O C S u h u 3 8 , s O C ( i n o k u l a s i I 1 S d a ( i n o k u l a s i I I d e n g a n d e n g a n K6/AP) Kb2LP) s d a H 5 9 S u h u 4 0 , 8 O C S u h u 4 0 , l O C S u h u 3 9 , 2 O C s d a s d a H 1 0 8 S u h u 3 9 , 2 O C , N a f s u s d a makan k u r a n o b a i k .L a n j u t a n T a b e l 1.
...
G e j a l a k l i n i s H a r i sesudah...
. ' d i t u l a r i KP H KP2P KKH ( d i t u l a r i Kb/AP) ( d i t u l a r i Kb2LP) ( k o n t r o l ) H131 Suhu 39,2 O Suhu 3 9 , l OC I n q u s l e b i h banyak sd a K o n j u n q t i v i t i s Lesu, n a f s u r a k a n h i 1 anqSuhu 41 O C Suhu 39 O C Suhu 38,4 OC H132 G e j a l a k l i n i k k h a s sd a tlCF H133 M a t i Suhu 38,8 O C Suhu 3 8 , l ' O C Suhu 3 9 , s O C Suhu 38 O C Kekeruhan k o r n e a pa- l i n g j e l a s d i b a g i a n k a u d a l k o r n e a ( s i n e t - r i s ) . C a i r a n e n c e r , d a r i mata dan h i d u n g Suhu 39,4 O C Suhu 38,4 O C G e j a l a k l i n i s k h a s HCF D i p o t o n g
...
Kerbau
KPIH
mati dua hari kemudian, yaitu pada H I 3 ~dan virus dapat diisolasi dari leukosit, ingus, air
mata dan cairan preputium. Dalam otopsi, yang khas
adalah limfadenopati umum dan peradangan selaput
lendir. Isolasi virus dari limpa dan simpul limfe
memberikan hasil positif (Tabel 3) dan pemeriksaan
histopatologik memperlihatkan adanya vaskulitis pada
hati, paru-paru, gin jal, otak dan jantung (Gambar 7)
KPBP
berhasil pula diisolasi virus yang identik dengan virus MCF K6/AP dan W C l l dan antibodi naik menjadi 1:8Gejala klinis khas MCF pada kerbau
KP2P
terjadi pada (Tabel 1) dan virus berhasil diisolasi dari leukosit, ingus dan cairan preputium sedangkan titer antibodi naiklagi menjadi 1: 16 (Tabel 2). Ingus dan air mata
mukopurulen terjadi dua hari kemudian yaitu pada HIs8
l a b e l 2; I s o l a s i v i r u s dan t i t e r antibodi kerbau KPIH, kerbau KP2P dan kerbau KKH (kontroll pada percobaan postulat Koch v i r u s Kb1RP dan Kb2LP.
KPlH KPZP KKH (kontroll Hari sesudah
...
inokul asi SDP Inys Rr Cp Rb SDP Inys A8 Cp Ab SDP Ings I r Cp Ab
...
Hfo
-
-
- -
1:(2- - - -
1:(2- -
- -
1:(2 (inoku asi 11) H59-
-
- ' - 1:(2- -
-
-
1:(2- -
- -
1:(2 "133 t t t t t d p t - - - 1 : ~-
-- -
\:(2 r a t i H15b t t - t 1:fb-
-
- -
1:(2 H158 dipotonq 1:lb dipotong 1:(2...
Keteranqan : SDP = leukosit; Ings = ingus; A8 = a i r aata;
Tabel 3. Isolasi virus
MCF
dari limpa dan simpul limfekerbau
KPIH,
KPZP danKKH
(kontrol) pada perco-baan postulat Koch virus K6/AP dan
Kb2LP.
' N o . Kode kerbau Limpa Simpul limfe
KKH
-
-
(kontrol)
...
Kerbau KPZP dan kerbau kontrol dipotong pada
HIS*
dandiotopsi. Kerbau KPZP memperlihatkan limfadenopati umum
dan peradangan selaput lendir
,
sedangkan kerbau kontroltidak memperlihatkan perubahan. Selanjutnya dari limpa
dan simpul limfe berhasil diisolasi virus
MCF,
sedangkanisolasi virus dari limpa dan simpul limfe kerbau kontrol,
negatif ( Tabel 3 )
.
Pada pemeriksaan histopatologik,vaskulitis terjadi pada hati kerbau
KPZP
sedangkan organkerbau kontrol semuanya negatif (Tabel
4).
T a b e l 4 . Gambaran h i s t o p a t o l o g i s o r g a n k e r b a u KPIH, KP2P d a n KKH ( k o n t r o l ) p a d a p e r c o b a a n p o s t u l a t Koch v i r u s K6/AP dan Kb2LP.
...
V a s k u l i t i s Nama k e r b a u...
H a t i Limpa L g l P a r u 6 i n j a l T r a k h e a O t a k J a n t u n g...
KP,H ( m a t i t-
-
t t-
t t KP2P ( d i p o - t-
--
-
--
- t o n g pada HlS8 ( d i p o t o n g p a d a H 1 5 8 )...
2. S i f a t - s i f a t v i r u s MCF
a. Sifat kehidupan
S u p e r n a t a n d a r i sel GFS t e r t u l a r v i r u s MCF i s o l a t : K3/AP, KS/AP, K6/AP ( d a r i k e r b a u ) ; Sb3/AP d a n SbS/AP ( d a r i sapi b a l i ) ; d a r i p a s a s e s e l p e r t a m a s e t e l a h d i i n o k u l a s i k a n p a d a s e l GFS, t i d a k m e n g h a s i l k a n s i n s i s i a . Namun, s u p e r n a t a n p a s a s e kedua v i r u s Sb3/AP membentuk s i n s i s i a p a d a sel GFS d a n m e n g h a s i l k a n f l u o r e s e n s i pada FAT menggunakan k o n j u g a t K6/AP d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s MCF WCll. S e l a n j u t n y a , supematan
p a s a s e k e t i g a v i r u s Sb5/AP t e l a h menghasi l k a n s i n s i s i a p a d a s e l GFS dengan h a s i l p o s i t i f p a d a FAT menggunakan kon j u g a t K6/AP d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m sapi
t e r h a d a p v i r u s MCF WCll d a n k o n j u g a t a n t i g l o b u l i n G s a p i .
B e r l a i n a n dengan v i r u s yang b e r a s a l d a r i s a p i b a l i , s u p e r n a t a n v i r u s d a r i k e r b a u m e n g h a s i l k a n s i n s i s i a p a d a s e l GFS d a n b e r p e n d a r h i j a u muda dalam FAT s e t e l a h d i w a r n a i dengan k o n j u g a t K6/AP dan IFAT menggunakan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s MCF Wel1, y a k n i p a s a s e k e
11 p a d a v i r u s K6/AP; p a s a s e k e 16 p a d a v i r u s K3/AP d a n pasase k e 1 8 p a d a v i r u s K5/AP ( T a b e l 5 ) . Dengan p e r k a t a a n l a i n , v i r u s MCF i s o l a t : Sb3/AP; Sb5/AP; K6/AP; K3/AP dan K5/AP men j a d i v i r u s b e b a s p a d a pasase kedua, k e t i g a , k e
11, k e 16 d a n k e 1 8 .
D a r i s u d u t l a i n d a p a t d i a r t i k a n bahwa v i r u s MCF b e r a s a l d a r i s a p i b a l i a d a l a h v i r u s t e r i k a t sel d a r i
p a s a s e pertama sampai pasase kedua, sedangkan v i r u s
MCF
a s a l kerbau adalah v i r u s t e r i k a t s e l , d a r i pasase pertama sampai pasase ke 1 1 .
Tabel 5 . H a s i l pemeriksaan supernatan sel GFS t e r t u l a r v i r u s
MCF
i s o l a t kerbau dan s a p i b a l i ....
No. kode v i r u s
Pasase ke
...
b . P e n g a r u h s u h u
V i r u s Kb5LP d a n v i r u s Db5LP yang d i i s o l a s i d a r i a s u p e r n a t a n i n g u s kambing d a n domba l a p a n g a n a d a l a h
v i r u s b e b a s .
V i r u s b e b a s K5/W,
KB/AP,
Kb5LP dan Db5LP, yang d i s i m p a n p a d a s u h u kamar masih m e n g h a s i l k a n s i n s i s i a d a n h a s i l p o s i t i f dalam FAT menggunakan k o n j u g a t K6/AP d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s MCF WCIl d a n k o n j u g a t a n t i i m u n o g l o b u l i n G s a p i pada h a r i p e r t a m a d a n k e d u a , t e t a p i n e g a t i f p a d a h a r i k e t i g a . Dengan d e m i k i a n , d a y a t a h a n v i r u s b e b a s p a d a suhu kamar a d a l a h d u a h a r i ( T a b e l 6 ) .Penyimpanan v i r u s p a d a s u h u 4 O C , -10 OC,
-20
OC dan-48 OC yang d i p e r i k s a s e t i a p minggu, t e r n y a t a masih tumbuh p a d a s e l GFS y a n g d i t a n d a i dengan adanya s i n s i s i a d a n t i m b u l n y a f l u o r e s e n s i p a d a FAT menggunakan k o n j u g a t K6/AP, IFAT menggunakan a n t i s e r u m t e r h a d a p v i r u s MCF WCll s e j a k minggu p e r t a m a sampai minggu k e 1 6 . Hal i n i menggambarkan bahwa v i r u s b e b a s K5/AP, K6/AP,
Kb5LP
d a n Db5LP, d a p a t h i d u p p a d a s u h u 4 OC, -10 OC, -20 OC dan -48 OC, l e b i h d a r i 1 6 minggu ( T a b e l 6 ) .S e l a n j u t n y a , penanaman s u p e r n a t a n b e r i s i v i r u s b e b a s KS/AP, K6/AP, Kb5LP dan Db5LP p a d a s e l l e s t a r i MDBK t i d a k menimbulkan CPE p a d a p e m e r i k s a a n dibawah mikroskop b i a k a n
sel d a n s i n s i s i a p a d a pewarnaan Giemsa. Demikian p u l a h a s i 1 p e m e r i k s a a n dengan FAT menggunakan k o n j u g a t K6/AP
d a n IFAT menggunakan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s
MCF
WCll dengan k o n j u g a t a n t i i m o n o g l o b u l i n G s a p i , t i d a k menghasilkan f l u o r e s e n s i .T a b e l 6 . D a a t a h a n v i r u s MCF bebas pada suhu kamar, 4 C, -10 OC, -20 OC d m -48 OC.
...
Suhu penyimpanan dan lama h i d u p Nama v i r u s...
Suhu kamar 4 OC -lQ OC -20 OC -48 OC
( h a r i ) (minggu) (minggu) (minggu) (minggu)
...
c . Pengaruh e t e r
Pada pemeriksaan dengan pewarnaan G i e m s a d i p e r o l e h h a s i l bahwa v i r u s
K6/AP
bebas yang d i p e r l a k u k a n dengan PBS( k o n t r o l ) menimbulkan s i n s i s i a p a d a sel GFS d i empat
0
l u b a n g p e l a t mikro pada p e n g e n c e r a n v i r u s 1 0 sampai
S e l a n j u t n y a , hanya t i g a l u b a n g yang menunjukkan s i n s i s i a p a d a pengenceran d i s u s u l dengan d u a lubang p a d a p e n g e n c e r a n s a t u l u b a n g pada pengenceran lo-*, s e d a n g k a n p a d a pengenceran
lo-'
danlo-"
t i d a k a d a pertumbuhan v i r u s (Lampiran 1 ) .Sementara i t u , v i r u s bebas
K6/AP
yang d i p e r l a k u k a n dengan e t e r , t e r d a p a t t i g a l u b a n g p e l a t mikro d i b a r i s p e r t a m a ( ~ e n ~ e n ~ e r n n 1no\
---1: 1- -I.- . -l u b a n g pada p e n g e n c e r a n
lo-',
s a t u l u b a n g p a d a p e n g e n c e r a nlo-'.
S e l a n j u t n y a d a r i p e n g e n c e r a n d a n s e t e r u s n y a t i d a k t e r d a p a t l a g i l u b a n g p e l a t m i k r o yang memperlihatkan s i n s i s i a p a d a s e l GFS (Lampiran 1 ) .Dari d a t a t e r s e b u t p a d a Lampiran 1 , s e t e l a h d i h i t u n g m e n u r u t metode p e r h i t u n g a n Reed d a n Muench, t i t e r v i r u s
KG/AP p a d a p e r l a k u a n d e n g a n PBS ( k o n t r o l ) a d a l a h l o 7 , O T C I D ~ ~ p e r 0 , l ml, s e d a n g k a n t i t e r v i r u s s e t e l a h d i p e r l a k u k a n dengan e t e r a d a l a h 10" O T C I D ~ ~ p e r 0 , l m l . Hal i n i menunjukkan bahwa v i r u s t i d a k t a h a n t e r h a d a p e t e r .
d. P e n g a r u h k l a r a f o r r
Hasil pengamatan d a r i p e r l a k u a n v i r u s MCF b e b a s KG/AP d e n g a n k l o r o f o r m a d a l a h s a t u l u b a n g p a d a p e n g e n c e r a n 10' m e m p e r l i h a t k a n s i n s i s i a p a d a s e l GFS. Sedangkan v i r u s y a n g d i p e r l a k u k a n dengan PBS ( k o n t r o l ) keempat lubang p e l a t mikro m e m p e r l i h a t k a n s i n s i s i a p e n g e n c e r a n v i r u s d a r i 10' sampai 1 , 0 - ~ . Pada p e n g e n c e r a n t e r d a p a t t i g a d a n p a d a p e n g e n c e r a n t e r d a p a t s a t u l u b a n g s e l GFS yang m e m p e r l i h a t k a n s i n s i s i a . S e l a n ju t n y a , m u l a i pada p e n g e n c e r a n d a n s e t e r u s n y a t i d a k a d a lagi l u b a n g yang menun jukkan s i n s i s i a (Lampiran 2 ) .
B e r d a s a r k a n p e r h i t u n g a n menurut metode Reed d a n Muench, d i p e r o l e h h a s i l bahwa p e r s e d i a a n v i r u s MCF b e b a s KG/AP sebelum d i p e r l a k u k a n dengan k l o r o f o r m b e r i s i v i r u s
dengan k l o r o f o r m t i t e r v i r u s a d a l a h
<
1 0 OJ TCID50 p e r 0 , l m l . H a l i n i menun jukkan bahwa v i r u sMCF
i s o l a t $ i d & t a h a n t e r h a d a p k l o r o f o r m .e. P e n g a r u h pH
V i r u s b e b a s
K6/AP
t e r n y a t a t i d a k t a h a n t e r h a d a p p H r e n d a h . P a d a p e r l a k u a n v i r u s t e r h a d a p pH 7,2, s e lGFS
p a d a empat l u b a n g p e l a t mikro menunjukkan adanya s i n s i s i a sampai p e n g e n c e r a n Sedangkan p a d a p e n g e n c e r a nlo-'
d a n 1 0 - l o t e r j a d i n y a s i n s i s i a rnulai menurun y a i t u t i g a , d u a d a n s a t u l u b a n g p e l a t m i k r o . P a d a p e r l a k u a n dengan pH 3 , 0 , t i t e r v i r u s s a n g a t menurun, s i n s i s i a r a n g l e n g k a p p a d a empat l u b a n g t e r j a d i h a n y a sampai p e n g e n c e r a n v i r u s s e l a n j u t n y a menurun y a i t u p a d a p e n g e n c e r a n d a n s i n s i s i a t e r j a d i p a d a d u a d a n s a t u l u b a n g p e l a t m i k r o , sedangkan p a d a p e n g e n c e r a n den s e t e r u s n y a , t i d a k a d a lagi s e l GFS yang m e m p e r l i h a t k a n s i n s i s i a .Pada p e r l a k u a n dengan pH 4,O s i n s i s i a l e n g k a p p a d a empat l u b a n g t e r j a d i sampai p e n g e n c e r a n
lo-',
t e t a p i p a d a p e r l a k u a n p H 5 , O d a n pH 6,O v i r u s l e b i h t a h a n y a i t u b e r t a h a n sampai p e n g e n c e r a n d a n S e m e n t a r a i t u , v i r u s t e r n y a t a d a p a t tumbuh dengan b a i k pada pH 7 , 0 d a n k u r a n g b a i k p a d a keadaan agak b a s a y a i t u pH 8 , O (Lampiran 3 ) .Dengan p e r h i t u n g a n menurut metode Reed d a n Muench, t i t e r v i r u s MCF b e b a s
KG/AP
p a d a p e r l a k u a n pH 7 , 2 ; 3,O;4 , O ; 5,O; 6,O; 7,O; d a n 8 , O a d a l a h TCIDSO;
l o z a 0
TCIDSO;lo4,
TCIDSO;lo6'
TCIDSO;lo8'
O T C I D ~ ~lo9*
Od a n TCIDSO, masing-masing dalam 0 , 1 m l s u p e r n a t a n . H a l i n i menggambarkan bahwa v i r u s MCF t i d a k t a h a n t e r h a d a p pH asam d a n pertumbuhan v i r u s yang p a l i n g b a i k a d a l a h p a d a p H d i s e k i t a r 7,O.
f. P e r l a k u a n dengan I U D R
V i r u s b e b a s MCF K6/AP p a d a p e r l a k u a n dengan IUDR t e r n y a t a mengalami hambatan pertumbuhan. V i r u s yang d i p e r l a k u k a n dengan PBS, tumbuh dengan b a i k sampai
p e n g e n c e r a n sedangkan yang d i p e r l a k u k a n dengan IUDR tumbuh pada keempat l u b a n g p e l a t mikro, hanya sampai p a d a p e n g e n c e r a n Mulai p a d a p e n g e n c e r a n
s i n s i s i a hanya t e r b e n t u k p a d a t i g a l u b a n g , d u a l u b a n g p a d a p e n g e n c e r a n 1 0 dan h a n y a s a t u l u b a n g p a d a p e n g e n c e r a n
(Lampiran 4 ) .
M e l a l u i p e r h i t u n g a n dengan metode Reed dan Muench, v i r u s yang d i p e r l a k u k a n dengan PBS mempunyai t i t e r s e b e s a r
lo8'
TCIDSO p e r 0 , l ml, s e d a n g k a n p a d a p e r l a k u a n dengan I U D R t i t e r v i r u s t u r u n m e n j a d ilo4#
TCIDS0 p e r 0 , l m l . Hal i n i menunjukkan bahwa I U D R menghambat pertumbuhan v i r u s MCF.g . N e t r a l i s a r i v i r u s
V i r u s MCF b e b a s KG/AP yang d i n e t r a l i s a s i dengan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s MCF WCll, t i d a k
m e m p e r l i h a t k a n a d a n y a s i n s i s i a p a d a semua p e n g e n c e r a n v i r u s . S e m e n t a r a i t u , v i r u s yang d i n e t r a l i s a s i dengan .PBS, tumbuh dengan b a i k sampai p e n g e n c e r a n (Lampiran 5 ) . A p a b i l a d i h i t u n g dengan metode Reed d a n Muench, t i t e r v i r u s yang d i n e t r a l i s a s i dengan a n t i s e r u m s a p i t e r h a d a p v i r u s MCF WCll a d a l a h
<
lo0n5o
TCIDSO p e r 0 , l ml, s e d a n g k a n t i t e r v i r u s yang d i n e t r a l i s a s i dengan PBS a d a l a hl o 8 , 33 TCIDSO p e r 0, 1 m l . H a l i n i menun jukkan bahwa a n t i s e r u m sapi t e r h a d a p v i r u s MCF WCll m e n e t r a l i s a s i v i r u s
Mm
b e b a s K6/AP.h . U j i filtrasi
P e n y a r i n g a n v i r u s b e b a s MCF K6/AP dengan f i l t e r b e r b a g a i u k u r a n d i a m e t e r , menunjukkan b e r b a g a i s i f a t pertumbuhan. V i r u s yang d i s a r i n g dengan f i l t e r b e r d i a m e t e r 450 nm tumbuh dengan b a i k sampai p e n g e n c e r a n
hampir sama dengan pertumbuhan v i r u s yang t i d a k d i s a r i n g y a i t u sampai p e n g e n c e r a n Demikian p u l a p e n y a r i n g a n dengan f i l t e r b e r d i a m e t e r 200 nm, v i r u s tumbuh p a d a keempat l u b a n g p e l a t m i k r o sampai p e n g e n c e r a n T e t a p i , p a d a p e n y a r i n g a n menggunakan f i l t e r dengan u k u r a n d i a m e t e r 1 0 0 nm, v i r u s hanya d a p a t tumbuh p a d a s e l GFS d a l a m t i g a l u b a n g p e l a t m i k r o p a d a v i r u s yang t i d a k d i e n c e r k a n ; d u a l u b a n g p a d a p e n g e n c e r a n
lo-',
s a t u p a d a p e n g e n c e r a nlo-'
d a n t i d a k a d a pertumbuhan m u l a i p a d a p e n g e n c e r a n (Lampiran 6 ) . B i l a d i h i t u n g denganf i l t e r b e r d i a m e t e r 100 nm a d a l a h lo1, TCIDSO d a l a m O J 1 rnl, s e d a n g k a n p a d a p e n y a r i n g a n d e n g a n f i l t e r b e r d i a m e t e r 200 nm d a n 450 nm t i t e r v i r u s a d a l a h 1 0 7 ~ 0 TCIDJOJ d a n
l o B J
O TCIDSOJ s e d a n g k a n t i t e r v i r u s yang t i d a k d i s a r i n g a d a l a h TCIDSO, masing-masing d a l a m O , 1 m l s u p e r n a t a n . H a l i n i menunjukkan bahwa v i r u s MCF b e b a s K6/AP b e r d i a m e t e r a n t a r a > I 0 0 d a n > Z O O nm t e t a p i l e b i h k e c i l d a r i 450 nm. i. Asam n u k l e a tV i r u s MCF i s o l a t K5/APJ K6/APJ Sb5/APJ S30, Kb5LP d a n Db5LP yang d i w a r n a i dengan AO, d a l a m p e n y i n a r a n dengan s i n a r u l t r a v i o l e t d i a t a s b i d a n g g e l a p memancarkan warna h i j a u - k u n i n g i n t r a n u k l e a r ( T a b e l 7 ) . Warna h i j a u - k u n i n g t e r d a p a t d a l a m b e n t u k badan i n k l u s i yang memenuhi s e l u r u h a t a u s e b a g i a n i n t i s e l (Gambar 9 , 1 0 ) . T a b e l 7 . S i f a t pewarnaan A 0 v i r u s i s o l a t d a r i k e r b a u , s a p i b a l . i J kambing d a n domba. Kepekaan Kepekaan N a m a v i r u s Pewarnaan d e n g a n A 0 DNAase R N A a s e K5/AP h i j a u - k u n i n g
+
- K6/AP h i j a u - k u n i n g+
- Sb5AP h i j a u - k u n i n g+
- S30 h i j a u - k u n i n g+
- Kb5LP h i j a u - k u n i n g t - Db5LP h i j a u - k u n i n g+
-Dengan a d a n y a warna h i jau-kun i n g menun jukkan adanya e n s i m DNA yang b e r a r t i s e d a n g t e r j a d i s i n t e s i s DNA dalam i n t i s e l
GFS.
j. Antigenisitas
. V i r u s b e b a s MCF K6/AP yang d i l e m a h k a n (BL), pada H l g *
t e l a menimbulkan a n t i b o d i p a d a kelompok kambing I, dengan GMT 1 : 5 , 6 6 , t e t a p i t u r u n men j a d i 1 : 2,83 p a d a H22 Namun, s e t e l a h d i b e r i d o s i s kedua p a d a ~ 2 7 , GMT a n t i b o d i m e n i n g k a t t a j a m menjadi 1 : 4 0 , 3 p a d a H36 y a k n i s e m b i l a n h a r i p a s c a p e n y u n t i k a n k e d u a , bahkan p a d a Hq4 y a i t u d e l a p a n h a r i s e s u d a h d i t a n t a n g , GMT a n t i b o d i t e r u s n a i k men j a d i 1: 45,O.
Kelompok kambing I1 yang d i s u n t i k dengan a n t i g e n BTL, menunjukkan GMT a n t i b o d i 1 : 6 , 9 6 p a d a Hi3, n a i k menjadi
1 : 9 , 5 0 p a d a H Z 7 . S e l a n j u t n y a , s e t e l a h mendapat s u n t i k a n k e d u a , GMT a n t i b o d i n a i k men j a d i 1: 2 5 , 4 p a d a H36 d a n n a i k
l a g i m e n j a d i 1 : 6 4 , 0 s e t e l a h d i t a n t a n g ( T a b e l 8 ) .
Agak b e r l a i n a n dengan v i r u s yang d i i n a k t i f k a n , v i r u s d i m a t i k a n (BM) menimbulkan a n t i b o d i dengan GMT 1 : 4 , 0 pada Hi3, d a n n a i k m e n j a d i 1: 16,O pada H27. S e l a n j u t n y a t i d a k l a g i mengalami k e n a i k a n . Keadaan yang hampir sama t e r d a p a t p a d a kelompok kambing I V yang d i s u n t i k dengan a n t i g e n BTM ( T a b e l 8 ) .
Kelompok kambing V yang mendapat s u n t i k a n v i r u s t e r i k a t s e l ( T S ) , t e r b e n t u k j u g a a n t i b o d i t e t a p i r e n d a h
Hal ini menunjukkan bahwa virus MCF yang dilemahkan mempunyai antigen yang dapat membentuk antibodi, sedangkan
4
virus yang dimatikan membentuk antibodi dengan titer lebih rendah dan umurnya lebih pendek. Sementara, virus terikat s a j a , mempunyai kemampuan membentuk antibodi dengan titer yang rendah.
Tabel 8. Perkembangan titer antibodi dalam pengenceran kelipatan dua yang dinyatakan dalam GMT pada lima kelompok kambing yang disuantik dengan lima antigen dari virus K6/AP dan kelompok kontrol, selama 44 hari. ---.--- GMT antibodi, 1 : Kelom- Antigen --- P O ~ HO
*
H13 H2 7**
"3 6***
H4 4I
Virus bebas dilemahkan (BL)<
2 5 , 6 6 2 , 8 3 40,3 45 , OI 1 Virus bebas dan virus terikat sel
dilemahkan (BTL) < 2 6,96 9 , 5 2 5 , 4 6 4 , O
I11 Virus bebas dimati- kan dengan 0,l per-
sen formalin (BM)
<
2 4 , O 16,O 8 , o 880I V Virus bebas dan virus terikat sel dimat i kan dengan
0 , l persen forma-
l i n (BTM)
<
2 4 , 5 9 1 8 , 4 8 ~ 0 8 , oV Virus terikat sel
(TS) < 2 < 2
<
2 2 2PBS (kontrol) ( 2 < 2
<
2 i 2<
2 ---*
= hari penyunt ikan pertama*'
= hari penyuntikan keduaPada p e n g u j i a n s e l T, t e r n y a t a pada Hz, kelima a n t i g e n mengakibatkan kenaikan p o p u l a s i s e l T (Gambar 1 0 ) ; Yang p a l i n g t i n g g i t e r j a d i pada kelompok kambing I dan I1 y a i t u yang d i s u n t i k dengan a n t i g e n BL dan BTL. H a s i l yang d i p e r o l e h pada H2 sesudah kambing d i s u n t i k a n t i g e n BL a d a l a h 7 0 , 1 5 p e r s e n s e d i k i t menurun pada H5 dan t u r u n t a j a m pada H I 3 . Kelompok kambing I1 yang mendapat s u n t i k a n a n t i g e n BTL menunjukkan kenaikan p e r s e n t a s e sel T rata-rata 66,51 p e r s e n pada H2, n a i k l a g i men j a d i 80,07 p e r s e n pada H5. S e l a n j u t n y a sama dengan kelompok kambing I p e r s e n t a s e s e l T mulai menurun pda H I 3 . P o l a yang sama t e r d a p a t pada kelompok kambing I 1 1 dan I V yang d i s u n t i k dengan v i r u s yang d i m a t i k a n , s e r t a pada kelompok V yang d i s u n t i k dengan v i r u s t e r i k a t ( T a b e l 9 ) .
k. I m u n c ~ g e n i s i t a s
Delapan h a r i sesudah d i t a n t a n g dengan v i r u s KG/AP d a r i p a s a s e rendah ( p a s a s e k e t i g a )
,
kambing dipotong, t i g a e k o r s e t i a p kelompok termasuk kelompok k o n t r o l .I s o l a s i v i r u s d a r i organ l i m f o i d , menunjukkan h a s i l bahwa simpul l i m f e dan limpa k e t i g a kambing d a r i kelompok I dan kelompok 11, t i d a k mengandung v i r u s MCF. Sementara pada kelompok 111 dan I V masing-masing t e r d a p a t s e e k o r kambing yang simpul limfenya mengandung v i r u s . Sedangkan limpa dua e k o r kambing d a r i kelompok 111 dan t i g a d a r i kelompok I , juga mengandung v i r u s MCF (Tabel 1 0 ) .
Perubahan histologis adalah adanya vaskul it is pada seekor kambing dari masing-masing kelompok V dan kontrol
T a b e l 9. R a t a - r a t a p o p u l a s i p e r s e n s e l T d a r i l i r a kelompok k a r b i n g yang d i s u n t i k dengan l i n a a n t i g e n d a r i v i r u s K6/AP dan k e l o n p o k kambing k o n t r o l . H a r i s e t e l a h p e n y u n t i k a n ( p e r s e n ) K e l om- A n t i gen
...
P 0 k 0*
2 5 13 27** 29 3 1 33 36...
I V i r u s bebas d i l e m a h k a n ( E L ) 2,5 70,15 66,46 8,25 0,83 0 0 0 0 I 1 V i r u s bebas dan v i r u s t e r i k a t s e l d i lemahkan (BTL) 0 66,51 B0,07 11,54 0 0,77 0 1,6 3,33 I 1 1 V i r u s bebas d i m a t i - kan dengan 0 , l p e r - sen f o r m a l i n (EN) 2,s 3 2 , l l 56,27 8,57 1,85 2,13 1,0B 0 , l 0,00 I V V i r u s bebas dan v i r u s t e r i k a t s e l d i m a t i k a n dengan 0 , l p e r s e n f o r m a - l i n (BTM) 5,32 39,14 71,29 3,67 1,64 2,01 0,48 0 1,51 V V i r u s t e r i k a t s e l (TS) 0 33,B4 49 4,45 0,6 1,96 0,69 0,13 0 K o n t r o l 0 0 0 0 0 0 0 0 0*
= h a r i p e n y u n t i k a n p e r t a n a**
= h a r i p e n y u n t i k a n keduaTabel 10. Isolasi virus dari lima kelompok kambing (tiga ekor setiap kelompok) yang disuntik dengan lima antigen dari virus K6/AP dan kelompok kambing kontrol (tiga ekor), delapan hari sesudah di- tantang.
- - - . - - -
Hewan Jumlah
Ke 1 om- perco- yang di- Simpul
pok Antigen baan periksa linfe Limpa
(ekor
I
Virus bebasdilemahkan
( B L )
Kambing 3 0 0I
I
Virus bebas dan virus terikat sel di lemahkanf
BTL)
Kambing 3I I I Virus bebas di- matikan dengan
0 , l persen
formalin
( E M )
Kambing 3IV Virus bebas dan virus terikat sel dimatikan dengan 0 , l per- sen formalin ( R T M ) Kambi ng 3 1 3 V Virus terikat sel (TS) Kambing 3 Kontrol Kambi ng 3 3 3
...
3. Gambaran virus HCF dalam pemeriksaan dengan
ME
Partikel yang dapat dalam supernatan K5/AP, K6/AP
dan Kb2LP mempunyai inti yang dikelilingi oleh suatu
massa dan di bagian paling luar dikelilingi lagi oleh suatu lapisan lain. Bentuk partikel adalah bermacam- kacam ada yang bulat dan ada yang lonjong (polymorph).
Lapisan paling luar, meskipun t-idak rata tapi tidak
t e r l i h a t mengandung spike dan aglutinin h y a l o r u n i d a s e
(Gambar 1 1 ) . Gambar t.ernyata kurang baik karena pada
ME
yang digunakan sulit membuat. gambar yang tajam.
Tahel 1 1 . Gambaran histopatologis kambing yang disuntik dengan lima antigen dari v i r u s K6/AP dan kambing
. kontrol yang kemudian ditantang dengan virus
KG/AP dari pasase rendah.
---
Hewan Jumlah Vaskulitis
Kelom- perco- yang di- ---
P O ~ Antigen baan peri ksa Hati Otak
(ekor)
...
I
Virus hebasdilemahkan ( B L ) Kambing 3 0 0
I
I Virus bebas dan virus terikat sel di lemahkan(BTL Kambi ng 3
I 1 1 Virus bebas di- matikan dengan 0 , l ' p e r s e n
formalin ( B M ) Kambing 3
IV Virus bebas dan virus terikat sel dimatikan dengan 0 , 1 per- sen formalin ( B T M ) Kambi ng 3 V Virus terikat sel ( T S ) Kambing 3 Kontrol Kambi ng ~., 2
4 . Reservoar v i r u s
MCF
a. E k s i s t e n s i v i r u s MCF p a d a k a m b l n y l a p a r i g a n
Kambing y a n g t e r p i l i h d a r i l o k a s i yang endemik MCF d i Kecamatan Lubukpakam, K a b u p a t e n D e l i S e r d a n g d a n d i Kecamatan B e l a n g k e j e r e n , K a b u p a t e n Aceh T e n g g a r a mengandung v i r u s MCF y a n g mempunyai i d e n t i t a s s a m a d e n g a n v i r u s MCF K6/AP d a n j u g a sama d e n g a n v i r u s MCF WCll. E k s i s t e n s i t e r t i n g g i t e r d a p a t p a d a l e u k o s i t d i B e l a n g k e j e r e n y a i t u d e l a p a n d a r i 10 e k o r , d i s u s u l o l e h Lubukpakam I , I1 d a n Lubukpakam I1 I masing-masing t i g a d a r i
10 e k o r . S e l a n j u t n y a , v i r u s I B R d a n P I - 3 t i d a k t e r d a p a t p a d a semua kambing y a n g d i a m a t i ( T a b e l 1 2 ) .
S e m e n t a r a i t sernua kambing yang d i a m a t i t i d a k memperl i h a t k a n g e j a l a k l i n i s MCF d a n t i d a k p e r n a h d i la p o r k a n a d a n y a k e m a t i a n d e n g a n g e j a l a MCF. S e l a i n i t u , kambing-kambing t e r s e b u t d i p e l i h a r a d i d a e r a h y a n g p e r n a h t e r j a d i MCF, b e r d e k a t a n d e n g a n k e r b a u d a n s a p i b a i k k a n d a n g maupun t e m p a t p e n g g e m b a l a a n . Kambing mempunyai a r t i y a n g p e n t i n g d i d a e r a h k e j a d i a n p e n y a k i t , urnumnya d i p e l i h a r a u n t u k d a g i n g n y a . B i a s a n y a kambing j a n t a n d i j u a l b i l a p e m i l i k rnemerlukan u a n g , s e d a n g k a n y a n g b e t i n a h i a s a n y a d i p e l i h a r a l e b i h lama
u n t ~ r k d i j a d i k a n i n d u k . Dengan dernlkiari karnbing mernpunyai
kesernpatan s e b a g a i r e s e r v o a r v i r u s MCF. Namun, karnbing
y a n g d i b a w a k e l u a r d a r i s u a t , ~ ~ d e s a , b i a s a n y a unt,uk
Yang m e n a r i k i a l a h bahwa v a g i n a d a n p r e p u t i u m kambing j u g a mengandung v i r u s MCF, t e t a p i t i d a k a d a t a n d a - t a n d a c a g i n i t i s a t a u b a l a n i t i s .
l a b e l 12. Eksistensi v i r u s E F , IBR dan PI-3 pada karbing d i l o k a s i yang enderik penyakit llCF d i Kecamatan Lubukpakar, D e l i Serdanq dan d i Kecaratan Belanqkejeren, llceh Tenggara.
Hasil I s o l a s i Virus HCF
...
Lokasi Banyaknya Cairan vaginal
Penpamat an karbinq Leukosi t I n q u s Air r a t a preputi u r
(ekor) ---
---
---
---
HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3Lubukpakar I 10 3 0 0 3 0 0 2 0 0 2 0 0 Lubukpakar I1 10 3 0 0 5 0 0 3 0 0 4 0 0 Lubukpakar 111 10 3 0 0 1 0 0 2 0 0 1 0 0 k l a n g k e j e r e n 10 8 0 0 6 0 0 3 0 0 2 0 0 ... J u r l ah 40 1 7 0 0 1 5 0 0 1 0 0 0 9 0 0
...
T a b e l 13. E k s i s t e n s i v i r u s MCF p a d a v a g i n a d a n p r e p u t i u m kambing d i l o k a s i y a n g endemik p e n y a k i t MCF d i Kecarnatan Lubukpakam, D e l i S e r d a n g d a n d i Keca- matan B e l a n g k e j e r e n , Aceh T e n g g a r a . H a s i l i s o l a s i Banyaknya v i r u s MCF L o k a s i kambing B e t i n a J a n t a n --- Pengamatan ( e k o r ) ( e k o r ) ( e k o r ) V a g i n a P r e p u t i u m ... Lubukpakam I 10 8 2 2 0 Lubukpakam I1 1 0 8 2 3 1 Lubukpakam I11 10 1 0 0 1 0 B e l a n g k e j e r e n 1 0 8 2 2 0b . E k s i s t e n s i v i r u s HCF p a d a d o m b a l a p a n g a n
Domba yang d i a m a t i b e r a d a d a l a m s a t u l o k a s i dengan .kambing ( I V . 4 . a ) , y a i t u d i enam d e s a s e k i t a r k e j a d i a n MCF
d a l a m Kecamatan Lubukpakam d a n d i t i g a d e s a dalam Kecamatan B e l a n g k e j e r e n . Domba d i p i l i h s e c a r a a c a k .
Pengamatan spesimen t a h a p p e r t a m a b e r a s a l d a r i d u a d e s a yang d i s e b u t Lubukpakam I ; d a r i 1 0 domba t e r d a p a t d u a e k o r yang l e u k o s i t n y a mengandung v i r u s MCF d a n m e l a l u i pengamatan FAT d a n IFAT i d e n t i k dengan v i r u s MCF KGYAP d a n dengan v i r u s MCF WCll ( T a b e l 1 4 ) .
Pada pengambilan s p e s i m e n t a h a p kedua d i d u a d e s a yang d i s e b u t Lubukpakam 11; d u a d a r i 1 0 domba mengandung v i r u s dalam l e u k o s i t . V i r u s i n i i d e n t i k dengan v i r u s KG/AP dalam FAT dan j u g a i d e n t i k dengan v i r u s MCF WCll
d a l a m IFAT.
P s d a pengambilan bahan p e m e r i k s a a n t a h a p k e t i g a , empat d a r i 1 0 e k o r domba mempunyai l e u k o s i t yang mengandung v i r u s . Sedangkan domba yang b e r a s a l d a r i B e l a n g k e j e r e n e k s i s t e n s i n y a p a l i n g t i n g g i y a i t u l i m a d a r i 1 0 e k o r ( T a b e l 1 4 ) .
Domba yang d i a m a t i , t i d a k a d a yang menunjukkan g e j a l a k l i n i s yang k h a s MCF s e l a i n d a r i adanya i n g u s yang t i d a k b e r a r t i
.
S e l a i n i t u , domba d i d a e r a h pengamatan d i p e l i h a r a b e r d e k a t a n dengan s a p i d a n k e r b a u b a i k b e r d e k a t a n kandang maupun b e r d e k a t a n d i padang rumput.l a b e l 14. Eksistensi v i r u s HCF, IBR dan PI-3 pada dorba d i l o k a s i yanp enderik penyakit K F d i Kecaratan Lubukpakar, Deli Serdang dan d i Kecaratan Belangkejeren, Aceh lenggara.
...
Hasil I s o l a s i Virus HCF
1
...
Lokasi Banyaknya Cairan vaginal
Pengaratan dorba Leukosi t I n g u s A i r r a t a preput i u r (ekor)
---
--- ---
---
HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3 HCF IBR PI-3
... Lubukpakar I 10 2 0 0 4 0 0 4 0 0 4 0 0 Lubukpakaa 11 10 2 0 0 2 0 0 3 0 0 5 0 0 Lubukpakar I 1 1 10 4 0 0 3 0 0 3 0 0 3 0 0 Belangkejeren 10 5 0 0 2 0 0 2 0 0 1 0 0 ... J u r l ah 40 15 0 0 1 1 0 0 1 2 0 0 1 3 0 0 ... Tabe 1 15. E k s i s t e n s i v i r u s MCF p a d a v a g i n a d a n p r e p u t i u m domba d i l o k a s i y a n g endemik p e n y a k i t MCF d i Kecamatan Lubukpakam, D e l i S e r d a n g d a n d i Keca-
matan B e 1 a n g k e j e r e n , Aceh T e n g g a r a . - - --- --- --- - -- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - Hasil i s o l a s i Banyaknya v i r u s MCF Lokas i domba B e t i n a J a n t a n --- - - Pengarnatan ( e k o r ) ( e k o r ) ( e k o r ) V a g i n a P r e p u t i u m - Lubukpakam I 10 9 1 3 1 Lubukpakam I 1 10 8 2 4 1 Luhukpakam I11 10 9 1 3 0 Be1 a n g k e j e r e n 10 9 1 0 1 _ _ _ _ _ _ _ _ _ J u m l a h 4 0 3' .J 5 10 3 - - - .- - .- -- - - _ - - -- - -- .- - -- -. - -- - _ _ - .- -- _ _ - _ .- - . _ _ _ - - _ _ - - _. .. _ - - . -- _ - -
c . G e j a l a k l i n i s dan s u h u b a d a n pada k a m b i n g p e r c o b a a n
Selama j a n g k a waktu p e r c o b a a n 4 , 5 b u l a n d a p a t d i a m a t i bahwa g e j a l a k l i n i s pada kambing yang d i t u l a r i dengan k r u s MCF a d a l a h b e r u p a i n g u s e n c e r , kadang-kadang b e r u b a h m e n j a d i mukopurulen (Gambar 1 2 , 1 3 ) . I n g u s e n c e r b e r l a n g s u n g rata-rata selama 1 0 , 6 7 h a r i , s e d a n g k a n i n g u s yang mukopurulen r a t a - r a t a selama 1 , 8 3 h a r i . I n g u s e n c e r , s e b a g i a n b e r u b a h menjadi mukopurulen, s e b a g i a n l a i n n y a l a n g s u n g m e n j a d i k e r i n g . Lamanya kambing t a n p a i n g u s rata- r a t a 9 , 3 9 h a r i ( T a b e l 1 6 ) . Selama j a n g k a waktu p e r c o b a a n , kambing k o n t r o l t i d a k mengeluarkan i n g u s .
Suhu badan kambing selama t a n p a i n g u s r a t a - r a t a 3 8 , 6 5 OC, s e l a m a mengeluarkan i n g u s e n c e r s e d i k i t l e b i h t i n g g i y a i t u 3 9 , 0 3 OC d a n selama mengeluarkan i n g u s mukopurulen s e d i k i t l e b i h t i n g g i l a g i y a k n i 3 9 , 2 5 OC. Selama p e r c o b a a n 4 , 5 b u l a n , r a t a - r a t a s u h u badan kambing k o n t r o l a d a l a h 3 8 , 8 1 "C ( T a b e l 1 7 ) . d . G e j a l a k l i r r i s ,dart s u h u badart d o r b a p e r c o b a a n G e j a l a k l i n i s MCF p a d a domba p e r c o b a a n a d a l a h b e r u p a p e n g e l u a r a n i n g u s e n c e r (Gambar 1 4 ) . B e r l a i n a n dengan kambing, domba t i d a k p e r n a h mengeluarkan i n g u s yang rnukopurulen. I n g u s b e r l a n g s u n g selarna r a t a - r a t a 2 5 , 4 h a r i d a n t a n p a i n g u s (Gambar 1 5 ) r a t a - r a t a 1 4 , 6 h a r j , s e l a m a p e r c o b a a n , 4 , 5 b u l a n ( T a b e l 1 6 ) . S e m e n t a r a i t u , domba k o n t r o l s e l a m a p e r c o b a a n t i d a k mengeluarkan i n g u s .
Tabel 16. Lama (rata-rata) gejala klinis pada kambing dan
domba yang ditulari dengan virus
MCF
selamapercobaan
4,5
bulan....
Ingus
Tanpa ingus Ingus encer mukupurulen
Hewan
--- --- ---
percobaan Rata-rata Rata-rata Rata-rata
(hari) (hari ) (hari)
...
Kambing 9,39 10,67 . 1,83
Domba 14,6 25,4
~ a b e l
17.
Rata-rata suhu badan waktu terjadi gejala kli-nis pada kambing dan domba selama percobaan 4,5 bulan.
...
Hewan Tanpa lngus Ingus mukopu-
Percobaan ingus (OC) encer (OC) rulen (OC)
Kambing diinfeksi 38,65 39,03 39,23
Kambing kontrol 38,81
Domba diinfeksi 39,33 38,96
Domba kontrol 39,44
...
Selama ingus dalam keadaan kering suhu badan rata-
rata 39,33
"c,
sedangkan selama menun jukkan gejala klinisrata-rata suhu badan adalah 38,96 OC. Sementara itu, suhu
badan domba kontrol selama percobaan 4,5 bulan adalah
e . Hasa i n k u b a s i HCF pada k a a b i n g dan domba
Masa inkubasi adalah sejak kambing dan domba
diinfeksi dengan virus MCF
K6/AP
sampai terjadinya gejalaI
klinis disertai dengan terdapatnya virus di dalam tubuh kedua jenis hewan.
Pada kambing, gejala klinis dan berhasilnya isolasi
virus dari leukosit rang identik dengan virus MCF
KG/AP
dalam pengujian dengan FAT, terjadi dua hari pasca
penularan pada dua ekor hewan. Selan jutnya, jumlah yang
menunjukkan gejala klinis dan isolasi positif bertambah
dan 10 hari pasca penularan semua kambing percobaan (10
ekor) sudah menunjukkan gejala klinis disertai dengan
berhasilnya isolasi virus (Tabel 18). Hal ini dapat
diartikan bahwa masa inkubasi virus MCF pada kambing
berkisar antara dua dan 10 hari.
' Gejala klinis dan isolasi virus positif dari leukosit
yang identik dengan virus KG/AP dalam pengujian dengan FAT, terjadi lima hari pasca penularan yaitu pada tiga
ekor domba. Kemudian, jumlah yang sakit bertambah dan
pada hari ke 15 semua domba percobaan sudah menunjukkan gejala klinis disertai hasil positif dari isolasi virus
(Tabel 18). Dari data tersebut dapat dinyatakan bahwa
masa inkubasi virus
MCF
pada domba berkisar antara limadan 15 hari.
f. h'ururt w a k t u k a s b i r r g s e b a g a i r e s e r v o a r v i r u s HCF
yaitu dengan melakukan isolasi virus dari leukosit. Hari- hari selanjutnya, pengukuran dilakukan setiap dua minggu
selama jangka waktu percobaan 4 , 5 bulan.
Dari
10
ekor kambing yang digunakan dalam percobaan,sembilan ekor adalah betina dan satu ekor sisanya adalah jantan.
Pada HZ3, dua ekor kambing mati, dan meskipun dari simpul limfe dan limpa kedua hewan dapat diisolai virus
MVF yang identik dengan virus MCF K6/AP dalam pengujian
dengan FAT, penyebab kematian adalah timpani. Kes impulan
ini diambil berdasarkan hasil pemerkksaan klinik yang
menunjukkan bahwa kedua kambing pada hari kematiannya
mengalami kegembungan, pada ha1 sehari sebelumnya kambing berada dalam kondisi baik, nafsu makan baik serta suhu
badan masing-masing 39,8 OC dan 39,3 OC. Lagi pula, tiga
hari sebelumnya yaitu pada minggu ketiga
(M3)
dari keduakambing berhasil juga diisolasi virus
MCF
(Tabel 19).Dari isolasi virus diperoleh hasil bahwa setiap pengambilan bahan pemeriksaan yang dilakukan setiap dua
minggu ternyata leukosit mengandung virus
MCF
yang identikdengan virus- K6/AP dalam pengujian FAT. Eksistensi virus
pada leukosit selama percobaan yakni 4,5 bulan, berkisar
TabeL 18. Hari timbul gejala klinis dan hasil isolasi virus positif'dari leukosit 10 ekor kambing dan
10 ekor domba percobaan pasca penularan dengan
virus MCF.
...
" Banyaknya hewan percobaan yang menun-
Hari pasca jukkan gejala klinis dan isolasi virus
penu laran positif
...
Kambing Domba
...
Selan jutnya diperoleh hasil bahwa kambing tidak
memperlihatkan konjungtivitis dan tidak terjadi vaginitis atau ballanitis. Mata tetap normal tanpa keratitis.
Tabel
19.
Eksistensi virusMCF
pada kambing selama perco- baan 4,5 bulan. I s o l a s i v i r u s HCF yang p o s i t i f ( p e r s e n ) B,ahan p e n e -...
R a t a - r i k s a a n "3 "5 "7 "9 '"11 "13 "15 '"17 "19...
. L e u k o s i t 40 100 62,s 100 100 62,5 100 87,s 75 85,56 A i r n a t a 50 100 8 7 , 5 100 62,s 87,5 8 7 , s 3 7 , s 87,s 77,78 C a i r a n v a g i - n a / p r e p u t i u m 30 100 62,5 100 8 7 , s 75 75 75 50 7 2 , 7 8 "3 = minggu k e t i g a p a s c a p e n u l a r a n . M5-MI9 = i s o l a s i v i r u s s e t i a p dua a i n g g u . g, Kurun w a k t u d n s b a s e b a g a i r e s e r v o a r v i r u s HCfHewan yang digunakan dalam percobaan ini adalah 10 domba yang terdiri dari sembilan ekor betina dan satu ekor jantan.
Pada minggu ketiga sesudah diinfeksi dengan virus
MCF
KG/AP,
seperti pada kambing percobaan, eksistensi viruspada domba mulai ditentukan melalui isolasi virus dari leukosit.
Dari isolasi virus ini diperoleh hasil bahwa
eksistensi virus
MCF
dalam leukosit domba selama masapercobaan, berkisar antara 50 dan 100 persen (Tabel 20).
Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa virus
MCF
hidupdalam tubuh domba setidak-tidaknya selama 4,5 bulan
Tabel
20.
Eksistensi virus MCF pada dombaselama
perco- baan4,5
bulan....
I s o l a s i v i r u s HCF yang p o s i t i f ( p e r s e n ) Bahan p e a e -...
R a t a - fii k s a a n ti3 H5 H7 " 9 N i l n 1 3 n15 '17 M 1 9 r a t a L e u k o s i t 50 100 100 100 100 100 100 70 SO 85,56 I n g u s 00 100 90 100 80 70 80 60 80 82,22 A i r a a t a 80 100 50 100 80 90 80 40 70 82,22 C a i r a n v a g i - n a l p r e p u t i u m 50 50 70 90 80 60 100 60 50 67,78...
ti 3 = a i n g g u k e t i g a p a s c a p e n u l a r a n . H5-Ml9 = i s o l a s i v i r u s s e t i a p dua m i n g g u .Selama percobaan, meskipun tubuh domba menyimpan
virus, tidak terlihat gejala yang khas MCF misalnya
konjungtivitis dan kekeruhan kornea melainkan hanya gejala
ringan seperti dilukiskan pada
IV.
4.
c. Selain itu, tidakterjadi vaginitis atau ballanitis, meskipun virus dapat diisolasi dari cairan vagina dan preputium.
h. V i r u s HCF p a d a s i m p u l l i a f e d a n l i r p a k a m b i n g d a n domba
Dari simpul limfe dan limpa kambing dan domba
percobaan, berhasil diisolasi virus MCF pada hari terakhir
percobaan yaitu 4,5 bulan sesudah penularan. Has i 1
pemeriksaan menunjukkan bahwa 87,5 persen simpul limfe
kambing mengandung virus MCF dan juga dalam persen yang
sama terdapat dalam limpanya. Selanjutnya, domba yang
ditulari, 90 persen menyimpan virus MCF dalam simpul limfe
Sementara itu, kambing dan domba kontrol tidak memperlihatkan adanya virus baik dalam simpul limfe maupun d a l m limpa (Tabel 21).
Tabel 21. Eksistensi virus
MCF
dalam simpul limfe danlimpa kambing dan domba percobaan yang dibunuh
pada akhir pengamatan, yaitu 4 , 5 bulan pasca
penularan
.
...
Hewan percobaan Simpul limfe (persen) Limpa (persen)
...
Kambing percobaan 87,5 87,5
Domba percobaan 90 90
Kambing kontrol Domba kontrol
i. Garbaran h i s t o p a t o l o g i s o r g a n kambing dan d o r b a percubaan
Tiga ekor kambing dan tiga ekor domba dipotong pada
akhir percobaan yaitu 4,5 bulan sesudah penularan serta diperiksa adanya vaskulitis. Hasil yang diperoleh adalah
satu ekor kambing' menunjukkan gejala vaskulitis pada otak
dan satu ekor domba pada hati. Sebaliknya, tidak ada
kambing dan domba kontrol yang menunjukkan vaskulitis (Tabel 22).
Tabel 22. Gambaran h i s t o p a t o l o g i s organ kambing dan domba percobaan yang d i p o t o n g pada a k h i r pengamatan, 4 , 5 b u l a n p a s c a p e n u l a r a n .
.
...
V a s k u l i t i s Hewan percobaan Jumlah
...
( e k o r ) H a t i Otak
...
Kambing yang d i i n o k u l a s i 3 Karnbing k o n t r o l 3 Domba yang d i i n o k u l a s i 3 1 0 Domba k o n t r o l 3 0 0-
-
5. G k s i s t e n s i a n t i b o d i a . E k s i s t e n s i a n t i b o d i k a m b i n g l a p a n g a n Serum u n t u k menentukan e k s i s t e n s i a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s MCF pada kambing lapangan, d i a m b i l d a r i k e 4 0 e k o r hewan yang juga digunakan u n t u k menentukan e k s i s t e n s i v i r u s pada I V . 4 . a .E k s i s t e n s i a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s MCF d i t e n t u k a n dengan banyaknya kambing yang mengandung a n t i b o d i dibandingkan dengan jumlah yang d i u k u r , pada s u a t u waktu. Kemudian, t i t e r n y a d i u k u r s e h i n g g a d i k e t a h u i banyaknya kambing yang t e r d a p a t pada s u a t u t i n g k a t a n t i t e r a n t i b o d i . Dari h a s i l pengamatan dengan NTS d i k e t a h u i bahwa d a r i
40 e k o r kambing yang d i a m a t i t e r d a p a t 17 e k o r yang mengandung a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s MCF, dengan p e r i n c i a n , d u a e k o r kambing b e r a d a pada t i n g k a t a n t i t e r a n t i b o d i 1 : 2 ,
tujuh pada tingkatan 1:4, lima pada tingkatan 1:8, satu pada tingkatan 1:16 dan dua pada tingkatan titer antibodi
Dari 17 ekor kambing yang mengandung antibodi, yang terbanyak adalah pada tingkatan titer 1:4 yaitu tujuh ekor, disusul pada tingkatan 1:8 yaitu lima ekor (Tabel
TabeP 23. Eksistensi antibodi terhadap virus
MCF
padakambing di lokasi yang endemik
MCF
di KecamatanLubukpakam, Deli Serdang dan di Kecamatan
Belangke jeren, Aceh Tenggara.
...
' Banyak- Banyaknya kambing yang mengandung
C o k a s i nYa Yan9 a n t i b o d i ( e k o r ) p e n q a a a t a n d i u j i
...
( e k o r 1 1:<2 1:2 1:4 1:8 1 1 6 1:32 1:64 1:128...
Cubukpakam I 10 8 0 0 2 0 0 0 0 Lubukpakam 11 10 7 2 1 0 0 0 0 0 Cubukpakam I 1 1 10 5 0 4 0 0 1 0 0 B e l a n g k e j e r e n 10 3 0 2 3 1 1 0 0...
Juml ah 4 0 23 2 7 5 1 2 0 0...
b. E k s i s t e n s i a n t i b o d i p a d a d o r b a l a p a n g a nUntuk menentukan eksistensi antibodi terhadap
MCF
pada domba di lapangan, serum darah diambil dari
40
ekordomba yang juga dipakai untuk menentukan eksistensi virus
MCF
pada domba,IV.
4. b.Ukuran eksistensi antibodi, sama halnya dengan ukuran
eksistensi antibodi pada kambing pada
IV.
5. a, ditentukanjumlah yarig d i u k u r pada s u a t u waktu. S e l a n j u t n y a t i t e r a n t i b o d i d i u k u r untuk mengetahui banyaknya domba dalam s u a t u t i n g k a t a n t i t e r a n t i b o d i .
Dari h a s i l p e n g u j i a n dengan NTS d i p e r o l e h h a s i l bahwa d a r i 40 ekor domba yang d i a m a t i t e r d a p a t 20 ekor yang mengandung a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s
MCF.
S a t u d i a n t a r a n y a mengemdung a n t i b o d i dengan t i t e r p a l i n g t i n g g i y a i t u1:32, s i s a n y a sebanyak 19 e k o r b e r k i s a r a n t a r a 1 : 2 dan 1 : Pada t i n g k a t a n t i t e r a n t i b o d i 1:16, t e r d a p a t jumlah domba p a l i n g banyak y a i t u t u j u h e k o r , d i s u s u l dengan t i n g k a t a n t i t e r 1:8, y a i t u empat e k o r ( T a b e l 2 4 ) .
Tabel 24. E k s i s t e n s i a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s
MCF
pada domba d i l o k a s i endemik MCF d i Kecamatan Lubuk-pakam, D e l i Serdang dan d i Kecamatan Belang- k e j e r e n , Aceh Tenggara.
...
Banyak- E a n y a k n y a kambinq yang r e n g a n d u n g
L o k a s i nYa Yang a n t i b o d i ( e k o r ) p e n g a m a t a n d i u j i
...
( e k o r 1 1:12 1 : 2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128...
r. Lubukpakam I 10 7 0 2 CI 1 0 0 0 Lubukpakan 11 10 4 4 0 2 0 0 0 0 L u b u k p a k a n 111 10 4 1 0 1 3 1 0 0 B e l a n g k e j e r e n 10 5 0 1 1 3 0 0 0 ---,,---'--- Juml ah 4 0 20 5 3 4 7 1 0 0...
c . Perkembangan t i t e r v i r u s dart t i t e r a n t i b n d i pada k a n b i n g
I s o l a s i v i r u s d a r i ingus kambing selama 25 h a r i dengan s e l a n g empat h a r i , y a i t u h a r i ke : 59, 63, 67, 71,
75,
79
dan 83 dari kambing percobaan, memberikan hasilbahwa ingus kambing mengandung virus
MCF.
Setelahqihitung, terlihat bahwa titer virus di dalam ingus cenderung naik-turun. Titer rata-rata virus paling rendah
adalah 1 0 TCID50 per ~ ~ ~
0,l
~ml yaitu pada HS9 dantertinggi adalah 10 3 1 58 TCID50 yakni pada Hgg (Tabel 25).
Tabei
'25.
Perkembangan rata-rata titer virusMCF
dalamingus kambing percobaan selama 25 hari (Hsg
-
Hs3 )
...
Kambing yang
No..
Nari setelah ditulari Kambing kontrolurut penularan (titer per 0,l ml) (titer per 0,l ml)
...
1. H59 10'. 9 4 TCIDSO 0
Selanjutnya, pada hari-hari yang sama, dengan uji NTS diperoleh gambaran bahwa antibodi juga mengalami kenaikan
dan penurunan. Titer rata-rata (GMT) antibodi paling
rendah adalah 1:4 pada HB3 dan rata-rata paling tinggi
Tabel 26. Perkembangan rata-rata titer (GHT) antibodi
terhadap virus
MCF
pada kambing percobaanselama 25 hari
[Hgg
-
HB3).
...
No.
Hari sesudah Kambing yang Kambing;rut penularan ditulari kontrol
Gambaran naik-turunnya titer virus dalam ingus selama
25 hari tersebut lebih jelas bila diamati dalam grafik
(Gafik 1 ) . Naik turunnya titer virus dalam ingus
cenderung berlawanan dengan naik-turunnya titer antibodi.
Pada waktu titei- antibodi naik, titer virus turun,
sebaliknya bila titer antibodi mengalami penurunan, titer virus cenderung meningkat. Hal ini dapat dibandingkan
antara grafik titer virus dalam ingus (Grafik 1 ) dengan
grafik titer antibodi (Grafik 2). Kecuali antara
H67
danH71, terdapat hubungan yang terbalik antara naik-turunnya
t.iter virus dalam ingus dengan naik-turunnya titer
Sementara i t u t i t e r v i r u s dan t i t e r a n t i b o d i pada kambing k o n t r o l , masing-masing a d a l a h 0.
d . Perkerbangan t i t e r v i r u s dan t i t e r a n t i b o d i pada d o r b a I s o l a s i v i r u s d a r i i n g u s domba percobaan d i l a k u k a n bersamaan waktunya dengan i s o l a s i v i r u s d a r i i n g u s kambing seperti t e r t e r a pada I V . 5. c.
Hasil i s o l a s i dan p e r h i t u n g a n t i t e r v i r u s dalam i n g u s domba, s e p e r t i h a l n y a pada kambing, cenderung mengalami k e n a i k a n dan penurunan. T i t e r v i r u s t e r e n d a h a d a l a h
1 0 ~ . 25 TCIDS0 p e r 0 , l m l b e r t e p a t a n pada H83, sedangkan yang t e r t i n g g i a d a l a h 1 0 3a 33 TCIDS0 b e r t e p a t a n pada H 7 i
( T a b e l 2 7 ) .
Tabel 27. Perkembangan r a t a - r a t a t i t e r v i r u s MCF dalam i n g u s domba percobaan s e l a m a 25 h a r i
(Hgg
-
Hs3)
...
Domba yangNo. Hari s e t e l a h d i t u l a r i Domba k o n t r o l u r u t p e n u l a r a n ( t i t e r p e r 0 , 1 m l ) ( t i t e r p e r 0 , l m l )
Pengukuran titer antibodi dari domba dilakukan pada hari yang sama dengan pengukuran titer virus dalam ingus. Hasil yang diperoleh menunjukkan gambaran yang naik-turun.
Titer paling rendah terjadi pada
H67,
sebesar 1 : 4 , 9 2 danyang paling tinggi terjadi pada
H71
,
H75
danH83
yakniTabel 28. Perkembangan rata-rata titer (GMT) antibodi
terhadap .virus
MCF
pada dornba percobaanselama 2 5 hari
(Hgg
-
He3).
...
No. Hari sesudah Domba yang Domba
urut penularan ditulari kontrol
...
1 . H 5 9 1 : 8,57 1 : < 2
Hubungan nai.k-turunnya virus dalam ingus dengan titer
ant-ibndi domba menjadi lebih jelas bila diperhatikan
grafik titer virus (Grafik 3 ) dan grafik titer antibodinya
(Grafik 4 ) .
Dari kedua grafik nampak bahwa kecenderungan naik- turunnya titer antibodi berlawanan dengan naik turunnya
t i t e r a n t i b o d i c e n d e r u n g d i i k u t i dengan penurunan t i t e r v i r u s , d e m i k i a n juga s e b a l i k n y a k e c u a l i a n t a r a H63 d a n H67, s e r t a a n t a r a HZ5 d a n H83, t i t e r a n d i b o d i d a n t i t e r v i r u s sama-sama menurun. S e m e n t a r a i t u t i t e r v i r u s d a l a m i n g u s d a n t i t e r a n t i b o d i domba k o n t r o l a d a l a h 0 dan 6 . Penularan virus
MCF
a. Pelepasan v i r u s HCF dari k a a b i n gI n g u s , a i r mata dan c a i r a n v a g i n a / p r e p u t i u m kambing yang d i a m b i l d a r i l a p a n g a n , t e r n y a t a bahwa d a r i 40 e k o r y a n g d i a m a t i t e r d a p a t 15 e k o r yang mengandung v i r u s MCF dalam i n g u s , 1 0 e k o r dalam a i r mata dan s e m b i l a n e k o r dalarn c a i r a n v a g i n a / p r e p u t i u m n y a . V i r u s yang d i i s o l a s i i d e n t i k dengan v i r u s
K6/AP
d a n t i d a k b e r e a k s i dengan a n t i b o d i t e r h a d a p v i r u s I B R d a l a m p e n g u j i a n dengan FATs e r t a n e g a t i f d a l a m u j i h e m a d s o r p s i ( T a b e l 1 2 ) .
C a i r a n v a g i n a kambing yang mengandung v i r u s MCF t e r d a p a t p a d a d e l a p a n d a r i 34 e k o r b e t i n a dan dalam c a i r a n p r e p u t i u m t e r d a p a t pada s a t u e k o r d a r i enam. e k o r j a n t a n
( T a b e l 1 3 ) .
H a l i n i memberi a r t i bahwa kambing r e s e r v o a r d a p a t melepaskan v i r u s MCF m e l a l u i i n g u s , a i r mata d a n c a i r a n v a g i n a dan p r e p u t i u m , k a r e n a d a r i l e u k o s i t kambing yang
M59 H 6 3 HE3 H?* H?F. H 7 9 HBS H a r i G r a f i k 1 . G r a f i k t.it.er v i r u s d a l a m i n g u s k a m b i n g p e r c o b a a n s e l a m a 25 h a r i (HS9 - H g 3 ) H 5 9 H 6 3 HE? H71 H 7 5 H 7 9 YBS H a r i
G r a f i k 3. G r a f i k t i t e r v i r u s dalam i n g u s domba p e r c o b a a n