EFEKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN Psidium
guajava L TERHADAP PENYEMBUHAN STOMATITIS
AFTOSA REKUREN (SAR) TIPE MINOR DAN
PENGARUHNYA TERHADAP PENINGKATAN
SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) SALIVA
T E S I S
AIDA FADHILLA DARWIS
NIM 137028003
PROGRAM MAGISTER (S-2) ILMU KEDOKTERAN GIGI
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
M E D A N
ABSTRAK
Stomatitis Aftosa Rekuren (SAR) tipe minor atau yang dikenal dengan sariawan merupakan penyakit mulut yang sering terjadi. SAR ditandai dengan ulser, berbentuk oval dengan diameter kurang dari 1 cm dan dikelilingi eritema halo serta gejala rasa sakit selama 3-10 hari yang mengganggu aktivitas sehingga hal tersebut mendorong penderita mencari obat untuk meredakan gejala-gejala tersebut.Etiologi SAR belum diketahui dengan pasti, beberapa penelitian menghubungkannya dengan radikal bebas. Daun jambu biji/ Psidium guajava L memiliki keunggulan karena kandungan bioaktifnya yang berkhasiat analgesik, antiinflamasi, antimikroba/ antidiare, hepatoprotektif dan antioksidan. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efektivitas antioksidan daun Psidium guajava L terhadap Stomatitis Aftosa Rekuren (SAR) tipe minor dengan parameter ukuran kadar antioksidan saliva serta pengurangan diameter ulser, rasa sakit dan eritema halo. Penelitian uji klinis ini menggunakan metode single-blindrandomized pretest posttest control group. Ekstrak etanol diperoleh dengan metode maserasi dan pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH (dipheniyl picrylhidrazil). Penelitian ini melibatkan 30 orang subjek penderita SAR tipe minor dengan 15 orang mendapatkan gel ekstrak daun Psidium guajava L 3% sebagai kelompok perlakuan dan 15 orang lainnya mendapatkan plasebo (basis gel) sebagai kelompok kontrol. Penelitian ini menunjukkan hasil ekstrak etanol daun Psidium guajava L memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat dengan nilai IC50 22,39 ppm dan kadar flavonoid total yang tinggi 28,07 mg/g
QE (2,81%). Gel ekstrak memberikan pengaruh bermakna terhadap penyembuhan SAR secara statistik dalam pengurangan diameter ulser dengan p 0,007 berdasarkan uji Annova repeated, pengurangan skor rasa sakit dengan p < 0,001 berdasarkan uji
Friedman serta eritema halo dengan p < 0,001 berdasarkan uji Mc Nemar. Ekstrak daun P guajava L juga memberikan pengaruh bermakna terhadap peningkatan SOD saliva sesudah dilakukan perawatan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol dengan nilai p 0,005 berdasarkan uji T berpasangan. Kesimpulan, terdapat hubungan radikal bebas dengan SAR karena kandungan antioksidannya yang tinggi efektif dalam meningkatkan SOD saliva serta efektif mempercepat penyembuhan dengan pengurangan diameter ulser, rasa sakit dan eritema halo yang signifikan.
Kata Kunci: Stomatitis Aftosa Rekuren (SAR) tipe minor, Ekstrak etanol daun
ABSTRACT
RIWAYAT HIDUP
A. Identitas Diri
Nama : Aida Fadhilla Darwis
Alamat Tempat Tinggal : Jln. Karya Bakti-1 No. 31 Medan Polonia
Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
No. Kontak : 085296038585
Nama Ayah : Alm. H. Darwis Habib
Nama Ibu : Hj. Nursyam
Nama Suami : Armia Syahputra, drg.,Sp.Perio Nama Anak : 1. Fathimah Alya
2. T. Ali Pasha
Pekerjaan : PNS Dosen Departemen Ilmu Penyakit Mulut Fakultas Kedokteran Gigi USU
2008- 2010 : Pendidikan Profesi Dokteran Gigi FKG USU, Medan
C. Riwayat Publikasi Ilmiah
1. Penatalaksanaan Lesi Oral Eritema Multiforme Mayor Karena Alergi Makanan pada Prosiding Temu Ilmiah Forum Dies 53 FKG Univeritas Padjadjaran 7-8 Desember 2012
2. Pengenalan Lesi Oral Tuberkulosis Membantu Menegakkan Diagnosis Tuberkulosis
pada Prosiding Seminar lmiah Nasional Oral Medicine “Oral Medicine in Daily Practice” Ikatan Penyakit Mulut Indonesia 6-7 September 2013
3. Aktivitas Anti Virus pada Pemeriksaan Saliva Pasien HIV-AIDS pada Proceeding Book 2nd Medan Esthetic Dentistry Seminar and exhibition 7-8 Februari 2014
(RDM&E VI).“ Updated Holistic Dental Science and Technology “ 4-6 Desember 2014
5. Aktivitas Antioksidan Saliva: Menjaga Kesehatan Rongga Mulut pada Prosiding
Seminar Kedokteran Gigi “Tantangan dalam Penegakkan Diagnosa Tumor pada
rongga Mulut” 27-28 Mei 2016
6. Penceramah singkat: Penatalaksanaan Eritema Multiform Minor yang Diinduksi oleh Obat-obatan (Laporan Kasus) pada Oral Medicine Conference, Seminar Ilmiah Nasional Oral Medicine (SINOM 2017) 20-21 Januari 2017
Puji dan syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah memberikan rahmat,
hidayah dan inayahNya yang dengan karuniaNya turunlah segala kebaikan,
rahmatNya menyempurnakan kebaikan juga dengan taufikNya tercapailah segala
tujuan. Hanya Allah yang menjadi tujuan sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis
ini. Shalawat beriring salam untuk Rasulullah Shallallahu‘alaihiwasallam beserta
keluarga dan sahabat beliau. Tesis ini berjudul “Efektivitas Antioksidan Daun
Psidium Guajava Linn Terhadap Antioksidan Saliva dan Penyembuhan Stomatitis
Aftosa Rekuren (SAR) Tipe Minor” dalam rangka memenuhi kewajiban penulis
sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Magister Kedokteran Gigi di
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.
Penyelesaian tesis ini telah melewati berbagai jalan yang penuh cerita,
kenangan, rintangan dan ujian yang dilalui dengan penuh keikhlasan. Namun, penulis
menyadari bahwa tugas akhir ini tidak dapat dilalui tanpa bantuan berbagai pihak.
Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terimakasih dengan ketulusan hati
kepada yang terhormat:
1. Ibu Dr. Trelia Boel, drg., M.Kes., Sp.RKG(K) selaku Dekan Fakultas
Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan penulis
kesempatan dan fasilitas untuk menempuh pendidikan Magister
2. Bapak Prof. Nazruddin,drg.,C.Ort.,Ph.D.,Sp.Ort selaku Ketua Program Studi
S2/S3 Ilmu Kedokteran Gigi yang baru saja dilantik dan Ibu Dr. Ameta Primasari,
drg.,MDSc.,M.Kes sebagai Ketua Program Studi S2/S3 Ilmu Kedokteran Gigi
sebelumnya serta merangkap Ketua Penguji yang secara berekesinambungan
memberikan dukungan, saran dan motivasi selama penulis mengikuti proses
pendidikan.
3. Ibu Dr. Wilda Hafni Lubis, drg.,M.Si sebagai pembimbing utama yang telah
memberikan motivasi akademik dan spiritual, pikiran, tenaga dan waktu yang
secara ikhlas dengan penuh kesabaran membimbing dan mendidik sehingga tesis ini
dapat terselesaikan. Penulis bersyukur dapat diberikan bimbingan oleh Ibu yang dapat
menjadi panutan baik sebagai Ibu di keluarga maupun sebagai seseorang yang
4. Ibu Prof. Dr. Dra. Rosidah, M.Si.,Apt sebagai pembimbing anggota yang juga
terus menerus memberi masukan, bimbingan dan pengajaran tentang pentingnya
aspek dalam kehidupan sehingga penulis menjadi lebih banyak belajar tentang
obat-obatan tradisional. Beberapa hari kebersamaan dalam perjalanan yang dilalui dengan
Ibu sungguh memberikan penulis banyak cerita indah menambah makna kelimuan,
berkeluarga dan bermasyarakat. Semoga Allah memberikan kesempatan untuk kali
yang berikutnya.
5. Bapak Prof.Dr. Urip Harahap, Apt dan sebagai tim penguji anggota yang
telah memberikan saran dan bimbingan dalam keilmuan terutama di bidang ilmu
farmasi untuk kesempurnaan tesis ini. Alhamdulillah penulis telah diberikan
kesempatan untuk bertemu, berdiskusi dan mengenal Bapak.
6. Bapak dr. T. Ibnu Alferraly, M.Ked(PA).,Sp.PA.,D.Bioet sebagai tim penguji
yang juga telah memberikan saran dan koreksi untuk kesempunaan tesis ini.
Terimakasih untuk semua kebaikan, kesediaan dan banyak pengajaran yang telah
Bapak diberikan.
7. Ibu Dr. Ir. Erna Mutiara, S.KM sebagai rujukan analisis statistik yang telah
meluangkan waktu dan pikirannya dalam menelaah, merumuskan dan menyimpulkan
hasil penelitian ini. Pengenalan biostatistik melalui Ibu dalam kehidupan penulis
menjadikan penulis bersemangat dalam melakukan penelitian.
8. Laboratorium Farmakognosi Fakultas Farmasi USU yang telah memberikan
kesempatan kepada penulis untuk menggali ilmu pembuatan obat herbal sebagai
bahan percobaan pada penelitian tesis. Terimakasih secara khusus penulis sampaikan
kepada Denny Satria, S.Farm.,M.Si.,Apt atas seluruh sumbangsih ilmu, pikiran,
tenaga dan waktu yang telah diberikan kepada penulis sehingga pembelajaran tentang
obat herbal dan farmasi diterima dengan baik. Tak luput pula para tim Farmakognosi
yang sentiasa memberikan semangat dan dukungan penuhnya bagi penulis Marito
Aisyah, S.Farm dan Nadya serta Nevi dan Hendra terimakasih penulis ucapkan
dengan penuh ketulusan hati.
9. Laboratorium Terpadu FK USU, Ibu kepala Laboratorium Mutiara Indah Sari,
penelitian tesis ini. Terkhusus untuk tim terpadu Ibu Mardiyah Nasutian, ST,
Lavarina Winda, S.Si, M.Si dan Elliwati Hasibuan, S.Si., M.Si, yang dengan penuh
kesabaran mengajari, membimbing dan membantu penulis saat melakukan pekerjaan
laboratorium terkait penelitian ini.
10.Departeman Ilmu Penyakit Mulut RSGMP FKG USU, Bapak Kepala
Departemen Sayuti Hasibuan, drg., Sp.PM atas kesempatan, perijinan, saran dan
masukan Bapak selama penulis menjalani penelitian serta dukungan agar penulis
segera menyelesaikan karya ilmiah dalam bentuk tesis ini.
11.Seluruh Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara
pengampu kuliah selama di pendidikan, para undangan Nurdiana, drg., Sp.PM, dan
Yumi Lindawati, drg., MDSc, yang bersedia meluangkan waktu menghadiri seminar
proposal dan hasil penelitian untuk memberikan saran yang membangun dalam
penyelesaian tesis ini. Pocut Astari, drg yang telah memberikan semangat dan
motivasi agar penulis segera menyelesaikan tesis ini.
12.Staf pegawai Program Studi S2/S3 Ilmu Kedokteran Gigi Annisah Sitompul,
SE dan Deswika Handayani, SE atas bantuan, semangat dan dukungan baik tenaga
dan pikirannya dalam rangka menyelesaikan tesis ini.
13.Teman-teman seperjuangan Program Magister Ilmu Kedokteran Gigi Program
Magister Ilmu Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera
Utara, drg, Desy Purnama Sari, drg., MDSc, drg. Dewi Kartika, drg. Maria Novita
Helena, kak Saufi Khairani drg., Sp.Perio, kak Herniza Yusdani, drg., MDSc, kak
Aisyah Hanim, drg., MDSc dan kak Ika Devi Adiana, serta teman-teman lainnya
yang belum semuanya penulis sebutkan satu persatu, atas doa, informasi, semangat
dan dukungan yang diberikan kepada penulis selama menyelesaikan tesis ini. Secara
khusus, rasa terima kasih penulis sampaikan kepada Indri Lubis, drg yang selalu
memberikan ketenangan dan kesejukan di tengah rintangan juga rasa kasih, sayang,
duka dan ceria bersama yang senantiasa mewarnai langkah kita dalam rangka
menyelesaikan tesis ini, syukur kepada Allah atas anugerah kebersamaan dan
14.Para mahasiswa dan sukarelawan yang senantiasa menyemangati dan
memberikan dukungan tenaga dan waktu dalam menyelesaikan penelitian ini.
15.Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman dan Obat Tradisional
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI dalam
program RISTOJA 2016 atas dukungan dan motivasi, baik dalam hal penambah ilmu,
pengalaman maupun finansial atas terlaksananya penelitian tesis ini.
Akhirnya dengan penuh hormat, tesis ini penulis persembahkan kepada seluruh
keluarga: suami terkasih Armia Syahputra, drg.,Sp.Perio dengan rahmat Allah,
penuh cinta, kasih dan sayang penulis ucapkan terimakasih teramat dalam karena
menjadi imam terbaik dalam kehidupan; kedua orang tua penulis dan suami,
Ayahanda Alm. H. Darwis Habib dan Ibunda tersayang Hj. Nursyam juga Ayahanda
Alm. H. Muhammad Jamil dan Ibunda Hj. Syamsidar yang telah melahirkan serta
membesarkan kami, memberikan motivasi terbaik, melalui doa-doa dan restu
kalianlah kami menjadi pribadi yang lebih baik, semoga Allah membalas semua
kebaikan yang telah kalian berikan; ananda sholehah Fathimah Alya dan sholeh T.
Ali Pasha yang senantiasa menyemangati umi semoga senantiasa menjadi penyejuk
hati dan pandangan keluarga. Terimakasih atas segala doa, kasih sayang dan
dukungan baik moril maupun materiil kepada abang dan kakak: Mohd. Fadhly
Darwis, ST., Hilda Sayahfitri, Sp.,MP., Mohd. Rafiqi Darwis, ST., Mohd. Faisal
Darwis., SE juga Wiwik Adriyanti, Muhammad Ridwan, ST., Yasofa,SE., Rizka
Neldi.
Penulis sangat menghargai semua saran dan kritik mengenai penulisan tesis ini
sebagai bahan penyempurnaan di masa mendatang. Semoga Allah SWT memberikan
balasan terbaik atas setiap kebaikan yang telah diberikan oleh berbagai pihak kepada
penulis selama ini, serta senantiasa memberikan Rahmat dan Hidayah-Nya kepada
Medan, Maret 2017
Penulis
(Aida Fadhilla Darwis)
NIM. 137028003
HALAMAN PENGESAHAN JUDUL ...
2.1.1 Sistematika Tanaman Jambu Biji ………. 9
2.1.2 Deskripsi Tanaman ………... 9
2.1.3 Kandungan ……… 11
2.1.4 Manfaat ……… 11
2.2 Stomatitis Aftosa Rekuren (SAR) ………... 12
2.2.1 Defenisi SAR ………. 12
2.2.2 Epidemiologi ………... 12
2.2.3 Etiologi ……… 13
2.2.4 Patogenesis ……….. 15
2.2.5 Klasifikasi dan Gambaran Klinis ………... 15
2.2.6 Diagnosa ……….. 17
2.2.7 Perawatan ……… 18
2.3 Oksidan dan Antioksidan ………... 19
2.3.1 Senyawa Oksigen Reaktif (SOR) ………... 19
2.3.2 Stres Oksidatif dan Penyakit ………. 20
2.3.3 Antioksidan ………. 21
2.3.3.1 Klasifikasi Antioksidan ………... 21
2.3.3.2 Antioksidan Saliva ……… 22
2.3.3.3 Superoksida Dismutase (SOD)………. 23
2.3.3.4 Faktor-Faktor yang Memengaruhi Level Antioksidan……… 24
2.4.1 Pelarut ………. 25
2.4.2 Spektrofotometri Uv-Visible ……….. 26
2.5 Kerangka Teori……….. 28
2.6 Kerangka Konsep……….. 29
2.7 Hipotesis Penelitian………... 29
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ………. 30
3.1 Jenis Penelitian ………. 30
3.4 Kriteria Inklusi dan Eksklusi ……… 33
3.4.1 Kriteria Inklusi ………... 33
3.7.1 Prosedur Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Daun Psidium guajava L……….. 40
3.7.2 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Daun Psidium guajava L ……… 42
3.7.3 Pemeriksaan Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun Psidium guajava L ……… 44
3.7.4 Prosedur Pembuatan Gel Ekstrak Daun Psidium guajava Linn……… 46
3.7.5 Prosedur Pengambilan Data ……….. 47
3.7.5.1 Pengumpulan Daya Orientasi Gel ekstrak DJB ………. 47
3.7.5.2 Pengumpulan Data Subjek Penelitian ………. 48
3.7.5.3 Prosedur Laboratorium ……….. 50
3.8 Etika Penelitian ………... 57
3.9 Analisis Data ……….. 58
BAB 4 HASIL PENELITIAN ……….. 60
4.1 Identifikasi Tanaman ………. 60
guajava L.………... 61
4.4 Karakteristik Subjek Penelitian……… 64
4.5 Hasil Pemeriksaan Diameter Ulser, Skor Rasa Sakit dan Eritema Halo 66 4.6 Hasil Pemeriksaan SOD Saliva………... 70
BAB 5 PEMBAHASAN ……… 73
5.1 Identifikasi Tanaman ………. 73
5.2 Orientasi Penelitian Penentuan Presentasi (%) Gel Ekstrak... 74
5.3 Karakteristik, Skrining dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun P. guajava L.………... 74
5.4 Karakteristik Subjek Penelitian……… 77
5.5 Hasil Pemeriksaan Diameter Ulser, Skor Rasa Sakit dan Eritema Halo 79 5.6 Hasil Pemeriksaan SOD Saliva………... 82
BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN ………..……… 86
DAFTAR PUSTAKA ……….... 87
LAMPIRAN ……….. 93
DAFTAR TABEL
4.1 Analisis Pengurangan Diameter Ulser Perbandingan Antar Kelompok Penelitian
Orientasi ……… 61
4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ………….. 62
4.3 Skrinning Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun P. guajava L …….. 62
4.4 Analisis Aktivitas Antioksidan Menurut Molyneux (2004) ………….. 63
4.5 Analisis Uji Mc Nemar Karakteristik Subjek Berdasarkan Jenis Kelamin Antara Dua
Kelompok ………. 65
4.6 Analisis Uji t Karakteristik Subjek Berdasarkan Usia Antara Dua
Kelompok………. 65
4.7 Analisis Uji Two Sample Kolmogorov-Smirnov Karakteristik Subjek Berdasarkan
Lokasi Terjadinya SAR Antara Dua Kelompok ……… 66
4.8 Hasil Pengukuran Rata-rata Diameter Ulser pada Saat Base line,
Kontrol-1 dan Kontrol-2 Antar kelompok ………. 67
4.9 Hasil Uji Friedman Pemeriksaan Skor Rasa Sakit pada Tiga Waktu
Pengamatan Antar Kelompok ……… 69
4.10 Hasil Uji Mc Nemar Pemeriksaan Eritema halo pada Tiga Waktu
Pengamatan Antar Kelompok ……….. 69
4.11 Nilai Absorbansi Standar SOD ………. 70
4.12 Nilai Rata-rata SOD Saliva Sebelum Diberikan Perawatan pada
Masing-masing Kelompok……….. 71
4.13 Nilai rata-rata SOD Saliva Setelah Perawatan pada Hari Keenam … 72
4.14 Perbandingan SOD Saliva Sebelum dan Sesudah Perawatan pada
Kelompok Perlakuan………... 72
Gambar Judul Halaman
2.1 (A). Pohon P. guajava L; (B). buah P. guajava L. dan (C) Daun P.
guajava L……….. 10
2.2 (A) Stomatitis Aftosa Rekuren Minor; (B). Stomatitis Aftosa
Rekuren Mayor dan (C) Stomatitis Aftosa Herpetiform …………. 17
2.3 Struktur dasar spektrofotometer ……….. 27
3.1 Bagan Rancangan Penelitian Uji Klinis ………. 30
3.2 A. Pengumpulan daun P guajava L; B. Pencucian daun ; C.
Pengeringan daun dilemari pengering ; d. Simplisia daun P guajava 41
3.3. A. Proses maserasi; B. Ekstrak kental daun P guajava L ………. 42
3.4 A. Alat dan bahan yang digunakan untuk pembuatan gel ekstrak
DJB; B. Proses pembuatan gel ekstrak dan C. Gel ekstrak diletakkan
di dalam pot opat dan diberikan nomor sesuai randomisasi ... 47
3.5 A. Menanyakan kesediaan subjek penelitian; B. Alat pengumpulan
data subjek Penelitian ………. 48
3.6 A. Pemeriksaan terhadap SAR tipe minor; B. Pengukuran diameter
ulser; C. Pengumpulan saliva; D. Penyimpanan saliva yang telah
dikumpulkan pada coolbox; E. Penyimpanan saliva pada refrigeraor
-800C. ………... 49
3.7 Spektrofotometer uv-vis ……… 54
3.8 A. Sampel dipersiapkan untuk dilakukan pengujian; B. Sentrifugasi
sampel saliva; ……….……… 56
3.8 C. Proses pipeting dengan menggunakan multichannel pipettor; D.
Mesin Spketro Uv-vis; E. Inkubasi selama 60 menit; F. Perubahan
warna sampel Saliva pada well-plate ……….……….. 57
4.1 Diagram Batang rata-rata nilai IC50 pada kuersetin dan ekstrak daun
P guajava L ……….………. 64
4.2 Grafik pengurangan diameter ulser masing-masing kelompok pada 3
waktu pengamatan yaitu: base line, kontrol-1 dan kontrol-2 ………… 67
kelompok pada 3 waktu pengamatan yaitu: base line, kontrol-1 dan
kontrol-2 ……….. 68
4.4 Kurva larutan standar SOD ………. 71
Lampiran Judul Halaman
1 Hasil Identifikasi Tanaman………..………… 95
2 Ethical Clearance……… 96
3 Izin Uji Penelitian Laboratorium Farmakognosi Fakultas
Farmasi USU………. 97
4 Izin Uji Penelitian Laboratorium Terpadu Fakultas
Kedokteran USU……….. 98
5 Izin Uji Penelitian Laboratorium Instalasi Ilmu Penyakit
Mulut RSGM-P Fakultas Kedokteran Gigi USU…………. 99
6 Surat Keterangan Telah Selesai Melakukan Penelitian di Instalasi Penyakit Mulut
RSGM-P Fakultas Kedokteran Gigi
USU……….. 100
7 Surat Keterangan Telah Selesai Melakukan Penelitian di Laboratorium Terpadu
Fakultas Kedokteran USU…………. 101
8 Lembar Penjelasan Kepada Calon Subjek Penelitian………. 102
9 Formulir Persetujuan Informed Consent……… 103
10 Rekam Medik Penelitian ……… 104
11 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak …… 106
12 Perhitungan Kandungan Flavonoid Total ……… 111
13 Pengumpulan Data Diameter Ulser dan Rasa Sakit ………... 113
14 Data SOD Saliva Sebelum Dan Sesudah Perlakuan ……….. 114
15 Hasil Analisis Statistik ……….. 115
