Kesesuaian Nilai Rata-Rata Eritrosit Hasil Pemeriksaan Flow Cytometer Dengan Gambaran Populasi Eritrosit Pada Sediaan Apus Darah Tepi.

(1)

KESESUAIAN PERHITUNGAN NILAI RATA-RATA ERITROSIT FLOW CYTOMETER DENGAN GAMBARAN POPULASI ERITROSIT PADA

PEMERIKSAAN SEDIAAN APUS DARAH TEPI

Vivin Maria, 2006, Pembimbing I : Penny Setyawati M, dr., Sp.PK., M.Kes. Pembimbing II : Lisawati Sadeli, dr.

Nilai rata-rata eritrosit adalah parameter hematologi yang dipakai untuk menentukan ukuran dan kandungan hemoglobin eritrosit. Nilai rata-rata eritrosit terdiri dari Volume Eritrosit Rata-rata (VER), Konsentrasi Hemoglobin Rata-rata (KHR) dan Konsentrasi Hemoglobin Eritrosit Rata-rata (KHER). Seiring penggunaan cell counter atau alat penghitung sel otomatik yang luas, nilai rata eritrosit secara rutin dianalisis pada setiap sampel yang diperiksa. Nilai rata-rata eritrosit umum digunakan sebagai sarana diagnosis dan klasifikasi anemia. Pemeriksaan Sediaan Apus Darah Tepi (SADT) adalah pemeriksaan hematologi yang penting untuk evaluasi penyakit hematologi termasuk anemia. Tujuan penelitian ini adalah membandingkan hasil perhitungan nilai rata-rata eritrosit metode flow cytometri dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT.

Penelitian ini merupakan uji diagnostik. Subjek penelitian ini adalah 100 pasien Rumah Sakit Immanuel Bandung yang diperiksa darahnya menggunakan alat penghitung sel otomatik dengan metode flow cytometri dan dibuat SADT. Bahan pemeriksaan adalah darah vena pasien Rumah Sakit Immanuel Bandung yang telah dicampur antikoagulan EDTA dan diperiksa menggunakan flow

cytometer.

Hasil penelitian ini secara statistik tidak ada perbedaan bermakna antara nilai rata-rata eritrosit dengan gambaran morfologi eritrosit pada SADT, dengan nilai p=0,143 (p<0,05) untuk ukuran eritrosit dan p=0,059 (p<0,05) untuk kromasi eritrosit. Secara klinis terdapat perbedaan bermakna antara nilai rata-rata eritrosit dengan morfologi eritrosit pada SADT, ditemukan 16% perbedaan pada ukuran eritrosit dan 25% perbedaan pada kromasi eritrosit.

Kesimpulan: penghitungan nilai rata-rata eritrosit flow cytometer tidak sepenuhnya sesuai dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT.

(2)

Significancy of Red Blood Cell Indices with the Morphology of Red Blood Cells Population in Blood Smear

Vivin Maria, 2006, Tutor I : Penny Setyawati M, dr., Sp.PK., M.Kes. Tutor II : Lisawati Sadeli, dr.

The red blood cell indices are used to define the size and hemoglobin content of the red blood cells. They consist of the Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) and Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC). With the widespread use of automated cell counters that routinely determine the red blood cell indices on each blood sample tested, the red blood cells indices are commonly used as an aid in diagnosing and differentiating anemias. A blood smear is an important part of the evaluation of hematologic diseases, includes anemia. The aim of this study is to know the significancy correlation between red blood cell indices and red blood cells population in blood smear.

This is a diagnostic test study. The blood sample of a hundred patients were analyzed by automated cell counter with flow cytometer and made the blood smear with Romanowsky staining. The sample was blood from Immanuel Hospital Bandung patients that have been added with EDTA anticoagulant. The red blood cell indices was compared with the population of red blood cells in the blood smear.

The result of this study: statistically there was no difference between red cell indices with red blood cell morphology in blood smear with p-value 0,143 (p<0,05) for red cell’s size and 0,059(p<0,05) for red cell chromation. Clinically there were differences between red cell indices with red blood cell morphology in blood smear, 16% in sizes and 25% in red cell chromation.

The conclusion of this study : the red blood cells indices that been examined with flow cytometer was not absolutely significant with the morphology of red blood cells population in blood smear.

(3)

Halaman

LEMBAR PERSETUJUAN ... ii

SURAT PERNYATAAN ... iii

ABSTRAK... iv

ABSTRACT... v

KATA PENGANTAR... vi

DAFTAR ISI ... viii

DAFTAR TABEL ... xi

DAFTAR GAMBAR... xii

DAFTAR LAMPIRAN ... xiii

BAB I PENDAHULUAN 1.1Latar Belakang... 1

1.2Identifikasi Masalah ... 3

1.3Maksud dan Tujuan Penelitian ... 3

1.3.1 Maksud ... 3

1.3.2 Tujuan... 4

1.4Manfaat Penelitian ... 4

1.5Kerangka Pemikiran... 4

1.6Metode Penelitian ... 5

1.7Lokasi dan Waktu ... 5

1.7.1 Lokasi ... 5

1.7.2 Waktu ... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Eritrosit... 6

2.1.1 Morfologi Eritrosit ... 6

2.1.2 Eritropoesis ... 6

(4)

2.2.2 Etiologi Anemia ... 9

2.2.3 Klasifikasi Anemia ... 9

2.2.3.1 Anemia Hipokromik Mikrositik ... 10

2.2.3.2 Anemia Makrositik ... 11

2.2.3.3 Anemia Normositik... 13

2.2.4 Diagnosis Anemia ... 14

2.3 Pemeriksaan Hematologi Rutin ... 15

2.3.1 Hemoglobin... 15

2.3.2 Hematokrit ... 15

2.3.3 Hitung Jumlah Eritrosit, Leukosit, Trombosit ... 16

2.3.4 Mean Corpuscular Volume (MCV)... 17

2.3.5 Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) ... 17

2.3.6 Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC)... 18

2.4 Pemeriksaan Sediaan Apus Darah Tepi (SADT)... 19

2.4.1 Tujuan Pembuatan SADT... 19

2.4.2 Teknik Pembuatan SADT... 19

2.4.3 Pewarnaan SADT ... 21

2.4.4 Nilai Rujukan Normal ... 21

2.5 Flow Cytometri ... 23

2.5.1 Sejarah Perkembangan Flow Cytometer... 23

2.5.2 Prinsip Kerja Flow Cytometer ... 24

2.5.2.1 Prinsip Impedansi Listrik (electrical impedance) ... 24

2.5.2.1 Prinsip Pendar Cahaya (light scattering) ... 25

2.5.3 Sysmex XS – 1000i/ XS – 800i ... 26

2.5.3.1 Prinsip Kerja Sysmex XS – 1000i / XS – 800i... 26

2.5.3.2 Spesifikasi Sysmex XS – 1000i / XS – 800i ... 29

(5)

3.2 Batasan Operasional... 31

3.3 Ukuran Sampel ... 32

3.4 Cara Pengumpulan Subjek Penelitian ... 33

3.5 Baku Emas... 33

3.6 Alur Penelitian ... 34

3.7 Bahan Pemeriksaan, Reagen dan Alat-Alat ... 34

3.7.1 Pemeriksaan Flow Cytometer ... 35

3.7.2 Pembuatan SADT ... 35

3.8 Prosedur Penggunaan Flow Cytometer (Sysmex XS)... 36

3.9 Prosedur Pembuatan SADT dengan Pewarnaan Giemsa ... 38

3.9.1 Prosedur Pembuatan SADT ... 38

3.9.2 Pewarnaan Giemsa ... 40

3.10 Hipotesis ... 40

3.11 Analisis Data... 41

3.12 Lokasi dan Waktu Penelitian ... 41

3.12.1 Lokasi Penelitian ... 41

3.12.2 Waktu Penelitian ... 42

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Penelitian ... 43

4.2 Pembahasan ... 46

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan... 48

5.2 Saran... 48

DAFTAR PUSTAKA... 49

LAMPIRAN ... 53

(6)

Halaman

Tabel 2.1 Tabel Spesifikasi Sysmex XS – 1000i ... 29

Tabel 2.2 Tabel Spesifikasi Sysmex XS – 800i ... 30

Tabel 4.1 Deskripsi Hasil Pengukuran Variabel Penelitian ... 43

Tabel 4.2 Tabulasi Silang Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 44

Tabel 4.3.Tabulasi Silang Hasil Pemeriksaan Berdasarkan Flow Cytometer dan

(7)

Halaman

Gambar 2.1 Eritrosit Matur ... 6

Gambar 2.2 Kurva Afinitas Hb terhadap O2... 8

Gambar 2.3 Gambaran SADT pada Anemia Defisiensi Fe ... 11

Gambar 2.4 Gambaran SADT pada Anemia Megaloblastik... 13

Gambar 2.5 Gambaran SADT Normokromik Normositik... 14

Gambar 2.6 Teknik Pembuatan SADT ... 20

Gambar 2.7 SADT yang Baik (good) & yang Buruk (bad) ... 21

Gambar 2.8 Gambaran SADT Eritrosit Matur ... 22

Gambar 2.9 Prinsip Impedansi Listrik ... 25

Gambar 2.10 Prinsip Pendar Cahaya ... 26

Gambar 2.11 Hydro Dinamic Focusing... 27

(8)

Halaman

Lampiran 1 Hasil Penelitian Perbandingan Ukuran Eritrosit... 53

Lampiran 2 Hasil Penelitian Perbandingan Kromasi Eritrosit ... 56

Lampiran 3 Tabel Hasil Tabulasi Silang Dua Jenis Pemeriksaan... 59

Lampiran 4 Tabel 3 x 3 untuk Nilai Proporsi... 61

Lampiran 5 Tabel Tabulasi Silang Proporsi Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 63

Lampiran 6 Perhitungan nilai θ1, θ2 Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 64

Lampiran 7 Perhitungan Koefisien Kesesuaian Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT ... 65

Lampiran 8 Perhitungan Standar Error Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 66

Lampiran 9 Perhitungan Nilai Z Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 67

Lampiran 10 Tabel Interpretasi Hasil Perhitungan Koefisien Kappa... 68

Lampiran 11 Tabel Tabulasi Silang Proporsi Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT ... 69

Lampiran 12 Perhitungan nilai θ1, θ2, Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 70

Lampiran 13 Perhitungan Koefisien Kesesuaian Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT ... 71

Lampiran 14 Perhitungan Standar Error Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 72

Lampiran 15 Perhitungan Nilai Z Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan Flow Cytometer dan Gambaran SADT... 73

(9)

Lampiran 1

Hasil Penelitian Perbandingan Ukuran Eritrosit Hasil Perhitungan Flow Cytometer dan

Gambaran SADT

Nama RBC HGB HCT MCV MCH MCHC interpretasi SADT 1 4.99 14.6 43.4

87 29.3 33.6 normositik normositik 2 4.36 12.3 37.7 86.5 28.2 32.6 normositik normositik 3 5.13 14.7 43.7 85.2 28.7 33.6 normositik normositik 4 4.83 12.8 40.1

83 26.5 31.9 normositik normositik 5 4.95 14.1 42.4 85.7 28.5 33.3 normositik normositik 6 5.37 15.9 47.2 87.9 29.6 33.7 normositik normositik 7 5.28 6.5 20.4 89.5 28.5 31.9 normositik normositik 8 3.99 12.6 39.4 98.7 31.6 32.0 normositik normositik 9 4.69 13.6 41.4 88.3 29.0 32.9 normositik normositik 10 4.94 13.2 37.7 76.3 26.7 35.0 mikrositik normositik 11 5.21 13.7 41.2 79.1 26.3 33.3 mikrositik normositik 12 5.32 14.2 44.9 84.4 26.7 31.6 normositik normositik 13 4.86 15.0 42.4 87.2 30.9 35.4 normositik normositik 14 3.82 11.5 34.2 89.5 30.1 33.6 normositik normositik 15 4.74 8.9 28.1 59.3 18.8 31.7 mikrositik normositik 16 5.18 15.4 45.7 88.2 29.7 33.7 normositik normositik 17 5.19 16.1 46.9 90.4 31.0 34.3 normositik normositik 18 3.99 12.2 35.6 89.2 30.6 34.3 normositik normositik 19 3.06 9.3 26.1 85.3 30.4 35.6 normositik normositik 20 5.38 12.9 38.3 71.2 24.0 33.7 mikrositik normositik 21 3.91 10.9 33.3 85.2 27.9 32.7 normositik normositik 22 3.67 11.6 32.3

88 31.6 35.9 normositik normositik 23 4.23 12.4 37.1 87.7 29.3 33.4 normositik normositik 24 4.14 12.5 37.4 90.3 30.2 33.4 normositik normositik 25 4.55 12.8 36.5 80.2 28.1 35.1 normositik normositik 26 4.71 12.3 36.8 78.1 26.1 33.4 mikrositik normositik 27 4.79 12.8 37.5 78.3 26.7 34.1 mikrositik normositik 28 4.73 12.1 36.8 77.8 25.6 32.9 mikrositik normositik 29 4.66 13.2 37.8 81.1 28.3 34.9 normositik normositik 30 5.31 15.9 45.4 85.5 29.9 35.0 normositik normositik 31 3.93 11.8 35.2 89.6 30.0 33.5 normositik normositik 32 6.34 13.3 41.3 65.1 21.0 32.2 mikrositik mikrositik 33 3.22 10.8 32.3 100.3 33.5 33.4 makrositik normositik 34 4.85 13.2 40.8 84.1 27.2 32.4 normositik normositik 35 4.43 13.3 38.6 87.1 30.0 34.5 normositik mikrositik 36 2.88 8.1 24.0 83.3 28.1 33.8 normositik normositik 37 4.24 12.9 38.1 89.9 30.4 33.9 normositik normositik 38 3.21 12.4 37.4

113 37.5 33.2 makrositik makrositik 39 5.10 13.4 39.7 77.8 26.3 33.8 mikrositik normositik 40 4.37 12.8 38.8 88.8 29.3 33.0 normositik normositik 41 3.96 11.4 32.9 83.1 28.8 34.7 normositik normositik 42 4.92 14.0 41.3 83.9 28.5 33.9 normositik normositik 43 4.22 12.2 38.0

90 28.9

(10)

44 4.01 11.4 36.7

92 28.5 31.2 normositik normositik 45 4.70 12.3 39.7

85 25.8 30.5 normositik mikrositik 49 4.66 13.1 41.6

79 24.2 30.6 mikrositik normositik 52 4.05 12.1 38.4

88 27.5 31.4 normositik normositik 59 4.81 14.4 39.7 82.5 29.9 36.3 normositik normositik 60 5.44 14.2 43.2 79.4 26.1 32.9 mikrositik normositik 61 4.21 11.8 34.8 82.7 28.0 33.9 normositik mikrositik 62 5.03 14.5 43.0 85.5 28.8 33.7 normositik normositik 63 4.74 13.7 43.5

89 27.7 31.1 normositik normositik 65 4.62 14.5 43.2 93.5 31.4 33.6 normositik normositik 66 4.52 14.0 40.2 88.9 31.0 34.8 normositik normositik 67 2.41 7.1 22.9

95 29.5 31.0 normositik mikrositik 68 5.34 14.1 46.0

(11)

85 6.03 18.2 54.5 90.4 30.2 33.4 normositik normositik 86 4.72 13.5 43.0

113 37.3 33.2 makrositik makrositik 94 5.26 14.1 44.6

(12)

Lampiran 2

Hasil Penelitian Perbandingan Kromasi Eritrosit Hasil Perhitungan Flow Cytometer dan

Gambaran SADT

Nama RBC HGB HCT MCV MCH MCHC interpretasi SADT 1 4.99 14.6 43.4

87 29.3 33.6 normokromik normokromik 2 4.36 12.3 37.7 86.5 28.2 32.6 normokromik normokromik 3 5.13 14.7 43.7 85.2 28.7 33.6 normokromik normokromik 4 4.83 12.8 40.1

83 26.5 31.9 normokromik hipokromik 5 4.95 14.1 42.4 85.7 28.5 33.3 normokromik normokromik 6 5.37 15.9 47.2 87.9 29.6 33.7 normokromik normokromik 7 5.28 6.5 20.4 89.5 28.5 31.9 normokromik hipokromik 8 3.99 12.6 39.4 98.7 31.6 32.0 normokromik normokromik 9 4.69 13.6 41.4 88.3 29.0 32.9 normokromik normokromik 10 4.94 13.2 37.7 76.3 26.7 35.0 normokromik normokromik 11 5.21 13.7 41.2 79.1 26.3 33.3 normokromik normokromik 12 5.32 14.2 44.9 84.4 26.7 31.6 normokromik normokromik 13 4.86 15.0 42.4 87.2 30.9 35.4 normokromik normokromik 14 3.82 11.5 34.2 89.5 30.1 33.6 normokromik hipokromik 15 4.74 8.9 28.1 59.3 18.8 31.7 normokromik hipokromik 16 5.18 15.4 45.7 88.2 29.7 33.7 normokromik normokromik 17 5.19 16.1 46.9 90.4 31.0 34.3 normokromik normokromik 18 3.99 12.2 35.6 89.2 30.6 34.3 normokromik normokromik 19 3.06 9.3 26.1 85.3 30.4 35.6 normokromik normokromik 20 5.38 12.9 38.3 71.2 24.0 33.7 normokromik normokromik 21 3.91 10.9 33.3 85.2 27.9 32.7 normokromik normokromik 22 3.67 11.6 32.3

88 31.6 35.9 normokromik normokromik 23 4.23 12.4 37.1 87.7 29.3 33.4 normokromik normokromik 24 4.14 12.5 37.4 90.3 30.2 33.4 normokromik normokromik 25 4.55 12.8 36.5 80.2 28.1 35.1 normokromik normokromik 26 4.71 12.3 36.8 78.1 26.1 33.4 normokromik normokromik 27 4.79 12.8 37.5 78.3 26.7 34.1 normokromik normokromik 28 4.73 12.1 36.8 77.8 25.6 32.9 normokromik normokromik 29 4.66 13.2 37.8 81.1 28.3 34.9 normokromik normokromik 30 5.31 15.9 45.4 85.5 29.9 35.0 normokromik normokromik 31 3.93 11.8 35.2 89.6 30.0 33.5 normokromik normokromik 32 6.34 13.3 41.3 65.1 21.0 32.2 normokromik hipokromik 33 3.22 10.8 32.3 100.3 33.5 33.4 normokromik normokromik 34 4.85 13.2 40.8 84.1 27.2 32.4 normokromik normokromik 35 4.43 13.3 38.6 87.1 30.0 34.5 normokromik hipokromik 36 2.88 8.1 24.0 83.3 28.1 33.8 normokromik hipokromik 37 4.24 12.9 38.1 89.9 30.4 33.9 normokromik normokromik 38 3.21 12.4 37.4

113 37.5 33.2 normokromik normokromik 39 5.10 13.4 39.7 77.8 26.3 33.8 normokromik normokromik 40 4.37 12.8 38.8 88.8 29.3 33.0 normokromik normokromik 41 3.96 11.4 32.9 83.1 28.8 34.7 normokromik normokromik 42 4.92 14.0 41.3 83.9 28.5 33.9 normokromik normokromik 43 4.22 12.2 38.0

(13)

44 4.01 11.4 36.7

92 28.5 31.2 normokromik normokromik 45 4.70 12.3 39.7

80 24.6 30.8 hipokromik normokromik 48 4.93 12.7 41.7

85 25.8 30.5 hipokromik hipokromik 49 4.66 13.1 41.6

88 27.5 31.4 normokromik normokromik 59 4.81 14.4 39.7 82.5 29.9 36.3 hiperkromik normokromik 60 5.44 14.2 43.2 79.4 26.1 32.9 normokromik normokromik 61 4.21 11.8 34.8 82.7 28.0 33.9 normokromik normokromik 62 5.03 14.5 43.0 85.5 28.8 33.7 normokromik normokromik 63 4.74 13.7 43.5

89 27.7 31.1 normokromik hipokromik 65 4.62 14.5 43.2 93.5 31.4 33.6 normokromik normokromik 66 4.52 14.0 40.2 88.9 31.0 34.8 normokromik normokromik 67 2.41 7.1 22.9

95 29.5 31.0 normokromik hipokromik 68 5.34 14.1 46.0

86 26.5 30.7 hipokromik hipokromik 69 5.12 13.8 44.6

(14)

85 6.03 18.2 54.5 90.4 30.2 33.4 normokromik normokromik 86 4.72 13.5 43.0

94 29.6 31.6 normokromik hipokromik 92 5.18 14.2 44.8

(15)

Lampiran 3

Tabel 1 Tabel Hasil Tabulasi Silang Dua Jenis Pemeriksaan

Pemeriksaan I

Positif

Netral

Negatif

Total

Positif

A

b

c

a + b + c

Netral

D

e

f

d + e + f

Negatif

G

h

i

g + h + i

Pemeriksaan

II

Total

a + d + g b + e + h c + f + i

n

Dengan :

a

:

jumlah subjek yang diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan i dan juga diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan ii

b

:

jumlah subjek yang diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan i tetapi diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan ii

c

jumlah subjek yang diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

d

:

pemeriksaan i tetapi diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan ii

e

:

jumlah subjek yang diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan i dan juga diidentifikasi netral oleh

(16)

f

:

pemeriksaan i tetapi diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan ii

g

:

pemeriksaan i tetapi diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

h

:

pemeriksaan i tetapi diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

i

:

pemeriksaan i dan juga diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

a + d + g

:

pemeriksaan i

b + e + h

:

pemeriksaan i

c + f + i

:

jumlah subjek yang diidentifikasi negatifoleh

pemeriksaan i

a + b + c

:

pemeriksaan ii

d + e + f

:

pemeriksaan ii

g + h + i

:

pemeriksaan ii

(17)

Lampiran 4

Tabel 2 Tabel 3 x 3 untuk Nilai Proporsi

Pemeriksaan I

Positif

Netral

Negatif

Total

Positif

P

11

P

12

P

13

P

1o

Netral

P21

P22

P23

P2o

Negatif

P31

P32

P33

P3o

Pemeriksaan II

Total

Po1

Po2

Po3

Poo

Dengan :

n a P11 =

: proporsi subjek yang diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan i dan juga diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan ii

n b P12 =

: proporsi subjek yang diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan ii

n c

P₁₁ = : proporsi subjek yang diidentifikasi negatif oleh pemeriksaan i tetapi diidentifikasi positif oleh

pemeriksaan ii

n d

P₂₁ = : proporsi subjek yang diidentifikasi positif oleh pemeriksaan i tetapi diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan ii

n e

P₂₂ = : proporsi subjek yang diidentifikasi netral oleh pemeriksaan i dan juga diidentifikasi netral oleh

(18)

n d

P₂₃ = : proporsi subjek yang diidentifikasi negatif oleh pemeriksaan i tetapi diidentifikasi netral oleh

pemeriksaan ii

n g

P₃₁ = : proporsi subjek yang diidentifikasi positif oleh pemeriksaan i tetapi diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

n h

P₃₂ = : proporsi subjek yang diidentifikasi netral oleh pemeriksaan i tetapi diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii

n i P31 =

: proporsi subjek yang diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan i dan juga diidentifikasi negatif oleh

pemeriksaan ii n g d a Po1 + +

= : proporsi subjek yang diidentifikasi positif oleh pemeriksaan i n h e b Po2 + +

= : proporsi subjek yang diidentifikasi netral oleh pemeriksaan i n i f c

P_o3 = + + : proporsi subjek yang diidentifikasi negatifoleh pemeriksaan i n c b a

P_1o = + + : proporsi subjek yang diidentifikasi positif oleh pemeriksaan ii n f e d

P_2o = + + : proporsi subjek yang diidentifikasi netral oleh pemeriksaan ii n i h g

(19)

Lampiran 5

Tabel Tabulasi Silang Proporsi Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow

Cytometer

dan Gambaran SADT

SADT

makrositik normositik mikrositik

Total

makrositik 0,021 0,010 0,000 0,031

normositik 0,000 0,784 0,041 0,825 interpretasi

mikrositik 0,000 0,113 0,031 0,144

(20)

Lampiran 6

Perhitungan nilai

θ

1,

θ

2 Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer

dan Gambaran SADT

33 22 11 ii

1

P

θ

=

∑

=

+

= 0,021 + 0,784 + 0,031 = 0,863

o3 3o o2 2o o1 1o oi i0

2

P

θ

=

∑

=

+

= (0,031 x 0,021) + (0,825 x 0,907) + (0,144 x 0,072)

= 0,00065 + 0,748275 + 0,020368

(21)

Lampiran 7

Perhitungan Koefisien Kesesuaian Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer

dan Gambaran SADT

2 2 1

θ

1

θ

κ

ˆ

−

=

0,759293

1

0,759293

0,863

−

(22)

Lampiran 8

Perhitungan Standar Error Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow

Cytometer

dan Gambaran SADT

(

i0 oi

)

1o o1

(

1o o1

)

2o o2

(

2o o2

)

3o o3

(

3o o3

)

oi

i0P P P P P P P P P P P P P P P

P + = + + + + +

∑

= (0,031 x 0,021)(0,031+0,021)+(0,825 x 0,907)(0,825+0,907) +

(0,144 x 0,072) (0,144+0,072)

= 1,29829

( )

(

)

2

(

)

(23)

Lampiran 9

Perhitungan Nilai Z Hasil Pemeriksaan Ukuran Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer

dan Gambaran SADT

( )

0,081716186 0,431

κ

ˆ

Se

κ

ˆ

(24)

Lampiran 10

Tabel Interpretasi Hasil Perhitungan Koefisien Kappa (Landis, Koch, 1977)

Value of K Strength of agreement

< 0.20 Poor (rendah)

0.21 – 0.40 Fair (sedang)

0.41 – 0.60 Moderate (layak)

0.61 – 0.80 Good (baik)

(25)

Lampiran 11

Tabel Tabulasi Silang Proporsi Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan

Flow

Cytometer

dan Gambaran SADT

SADT

hipokromik normokromik hiperkromik

Total

Hipokromik 0,031 0,062 0,000 0,093

Normokromik 0,144 0,732 0,000 0,876

Hiperkromik 0,000 0,031 0,000 0,031 interpretasi

(26)

Lampiran 12

Perhitungan nilai

θ

1,

θ

2, Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan

Flow

Cytometer

dan Gambaran SADT

33 22 11 ii

1

P

θ

=

∑

=

+

= 0,031 + 0,732 + 0,000 = 0,763

o3 3o o2 2o o1 1o oi i0

2

P

θ

=

∑

=

+

= (0,093 x 0,175) + (0,876 x 0,825) + (0,031 x 0,175)

= 0,016275 + 0,72270 + 0,005425

(27)

Lampiran 13

Perhitungan Koefisien Kesesuaian Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer

dan Gambaran SADT

2 2 1

θ

1

θ

κ

ˆ

−

=

0,74440

1

0,74440

0,763

−

(28)

Lampiran 14

Perhitungan Standar Error Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan

Flow

Cytometer

dan Gambaran SADT

(

i0 oi

)

1o o1

(

1o o1

)

2o o2

(

2o o2

)

3o o3

(

3o o3

)

oi

i0

P

+

=

+

∑

=

(0,093 x 0,175) (0,093 + 0,175) + (0,876 x 0,825)(0,876+ 0,825) +

(0,031 x 0,175) (0,031 + 0,175)

= 1,23479

( )

(

)

2

(

)

2 oi i0 oi i0 2 2 2 1 P P P P

κ

ˆ Se

θ

−

+

−

+

=

∑

n

( )

(

)

7932 , 24 06374136 , 0 0,0,74440 1 97 1,23479 0,74440 0,74440

κ

ˆ Se ₂ 2

=

−

+

(29)

Lampiran 15

Perhitungan Nilai Z Hasil Pemeriksaan Kromasi Eritrosit Berdasarkan

Flow Cytometer

dan Gambaran SADT

( )

0,05070425 072 0,

κ

ˆ

Se

κ

ˆ

(30)

Lampiran 16

FORMULIR PERNYATAAN PERSETUJUAN KLINIK

(INFORMED CONSENT)

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS KRISTEN MARANATHA

SURAT PERNYATAAN PERSETUJUAN KLINIK

Yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama : ... Status : ... Usia : ... Alamat : ... Pekerjaan : ... No. KTP/identitas lain : ... No. Urut : ...

Setelah mendapat penjelasan selengkapnya dan menyadari maksud, tujuan dan manfaat penelitian tersebut di bawah ini yang berjudul:

KESESUAIAN PERHITUNGAN NILAI RATA-RATA ERITROSIT FLOW

CYTOMETRI DENGAN GAMBARAN POPULASI ERITROSIT PADA

PEMERIKSAAN SEDIAAN APUS DARAH TEPI

Maka saya/keluarga saya bersedia berperan serta dalam penelitian tersebut di atas sebagai subyek penelitian dan bersedia dilakukan pemeriksaan nilai rata-rata eritrosit dengan flow cytometri dan pemeriksaan sediaan apus darah tepi.

Demikian surat pernyataan ini saya buat dengan penuh kesadaran, penuh tanggung jawab tanpa paksaan pihak manapun.

Bandung, ...2006

Peneliti

(Vivin Maria)

Yang Membuat Pernyataan,

(31)

(32)

1.1 Latar Belakang

Sel darah merah atau eritrosit merupakan sel yang paling sederhana yang ada

di dalam tubuh. Eritrosit tidak memiliki nukleus dan merupakan sel terbanyak

dalam darah. Eritrosit mengandung hemoglobin, yaitu protein yang mengandung

besi, berperan dalam transpor oksigen dan karbondioksida di dalam tubuh. Oleh

karena itu eritrosit sangat diperlukan dalam proses oksigenasi organ tubuh.

Dengan mengetahui keadaan eritrosit, secara tidak langsung dapat diketahui juga

keadaan organ tubuh seseorang (Brown, 1993; Hoffbrand, Petit; 1996; Gaspard,

1998; Uthman, 2000; Perkins, 2003).

Beberapa pemeriksaan yang dapat menggambarkan parameter penting dari

fungsi dan struktur eritrosit di dalam tubuh antara lain hitung eritrosit, hemoglobin

dan hematokrit. Hitung eritrosit atau red blood cell count (RBC) adalah

menghitung jumlah total eritrosit dalam darah. Nilai rujukan normal eritrosit

adalah 4-5 juta/mm3. Hemoglobin (Hb) adalah protein dalam eritrosit yang

bertugas mengangkut oksigen. Hematokrit (Ht) adalah jumlah eritrosit dalam 100

ml darah (Perkins, 2003). Ketiga parameter di atas biasa digunakan untuk

menegakkan adanya anemia (Glader, 2003).

Anemia secara fungsional didefinisikan sebagai penurunan massa eritrosit

dengan akibat oksigenasi jaringan tidak dapat terpenuhi (Evatt et al, 1992;

Gaspard, 1998; Glader, 2003; Perkins, 2003; Syafrizal Syafei, 2004). Secara

praktis ada 3 parameter untuk menegakkan adanya anemia yaitu: kadar

hemoglobin, hematokrit dan jumlah eritrosit. Dari perhitungan ketiga parameter

tersebut dapat diperoleh nilai rata-rata eritrosit. Nilai rata-rata eritrosit terdiri dari

Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) dan Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC) (Evatt et al, 1992; Desai,

Isa-Pratt, 2000; Davey & Elghetany, 2001; Glader, 2003; Perkins, 2003;

(33)

Pemeriksaan laboratorium merupakan pemeriksaan penunjang yang

diperlukan oleh dokter untuk membantu menegakkan diagnosis. Salah satu

pemeriksaan laboratorium yang sering dilakukan adalah pemeriksaan darah.

Darah mempunyai peran penting dalam tubuh manusia. Hasil pemeriksaan darah

secara tidak langsung dapat memantau keadaan dalam tubuh. Pemeriksaan darah

atau pemeriksaan hematologi secara umum dapat dibedakan menjadi dua yaitu

pemeriksaan hematologi rutin dan hematologi lengkap (Brown,1993).

Pemeriksaan hematologi rutin terdiri dari hemoglobin, hematokrit, hitung

jumlah eritrosit, hitung jumlah leukosit, hitung jenis leukosit, hitung jumlah

trombosit dan nilai-nilai rata-rata eritrosit. Pemeriksaan hematologi lengkap

(complete blood count) terdiri dari pemeriksaan darah rutin ditambah pemeriksaan

morfologi sel (ukuran, kandungan hemoglobin, anisositosis, poikilositosis,

polikromasi). Pemeriksaan hematologi lengkap penting untuk mengetahui

morfologi dan fungsi dari berbagai sel yang ada di dalam darah, contohnya sel

darah putih yang berperan dalam imunitas tubuh dan sel darah merah yang

berperan dalam oksigenasi tubuh (Brown, 1993, Perkins 2003;

Adamson, Longo, 2005).

Seiring dengan kemajuan teknologi, alat-alat yang dipakai dalam pemeriksaan

hematologi juga semakin berkembang. Para peneliti mengembangkan alat untuk

menganalisa populasi sel darah secara otomatik. Alat ini dapat digunakan untuk

pemeriksaan hitung eritrosit, hitung leukosit, Hb, Ht, platelet dan nilai-nilai

rata-rata eritrosit. Metode yang banyak dipakai pada alat-alat untuk pemeriksaan

hematologi adalah metode flow cytometri (Kearns & LaMonica, 2001;

Koeswardani dkk., 2001).

Pemeriksaan hematologi dengan metode flow cytometri sekarang sudah

popular dilakukan. Metode flow cytometri memiliki prosedur yang relatif mudah

dan hasilnya dapat diperoleh dalam waktu yang singkat. Namun, menurut Perkins

metode ini mempunyai tingkat false positive yang cukup tinggi, yaitu 10-25%.

Pemeriksaan hematologi lain yang cukup sering dilakukan adalah pembuatan

Sediaan Apus Darah Tepi (SADT). SADT atau blood smear adalah salah satu

(34)

lainnya. Pada SADT dapat diketahui morfologi sel-sel darah yaitu ukuran, bentuk,

kesan jumlah, apakah ada sel-sel muda dan sebagainya. SADT dapat digunakan

sebagai kontrol terhadap pemeriksaan hematologi lain seperti nilai rata-rata

eritrosit, Hb, dan lain-lain (Kearns & LaMonica, 2001; Wyrick-Glatzel, Hughes,

2001).

Hasil pemeriksaan nilai rata-rata eritrosit dengan flow cytometer apakah sama

atau tidak dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT belum diketahui

dengan pasti. Maka dengan penelitian ini penulis ingin mengetahui sejauh mana

kesesuaian hasil pemeriksaan nilai rata-rata eritrosit dengan flow cytometer

dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT. Berbagai jenis anemia juga dapat

diketahui lebih pasti melalui kedua pemeriksaan tersebut.

1.2 Identifikasi Masalah

• Apakah hasil pemeriksaan nilai rata-rata eritrosit dengan flow cytometer sesuai dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT?

1.3 Maksud dan Tujuan Penelitian

1.3.1 Maksud Penelitian

Penelitian ini bermaksud ingin mengetahui apakah nilai rata-rata eritrosit hasil

pengukuran flow cytometer sesuai dengan gambaran populasi eritrosit pada

SADT.

1.3.2 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan membandingkan hasil pemeriksaan flow cytometer

dengan gambaran eritrosit pada SADT, yang pada akhirnya dapat diketahui

apakah pemeriksaan nilai rata-rata eritrosit dengan flow cytometer dan gambaran

(35)

1.4 Manfaat Penelitian

Penulisan karya tulis ini diharapkan dapan memberikan informasi tentang

apakah ada kesesuaian antara hasil perhitungan nilai rata-rata eritrosit

menggunakan flow cytometer dengan gambaran populasi eritrosit yang sebenarnya

pada SADT. Hal ini dapat membantu para klinisi untuk menegakkan diagnosis

anemia.

1.5 Kerangka Pemikiran

Nilai rata-rata eritrosit merupakan parameter penting untuk diagnosis anemia.

Nilai rata-rata eritrosit terdiri dari MCV, MCH dan MCHC. Perhitungan nilai

rata-rata eritrosit diperoleh melalui perhitungan matematik dari

parameter-parameter seperti Hb, Ht dan jumlah eritrosit. Gambaran populasi eritrosit yang

diperoleh melalui perhitungan tersebut berupa angka yang mengidentifikasi

ukuran, kromasi dan kelainan bentuk eritrosit serta jenis anemia. Gambaran

populasi eritrosit secara nyata juga dapat dilihat melalui pembuatan sediaan apus

darah tepi (SADT). Melalui gambaran SADT dapat dilihat secara langsung

keadaan populasi eritrosit (bentuk, kromasi, adanya sel-sel muda, dan lain-lain).

Gambaran populasi eritrosit yang diperoleh melalui perhitungan matematis

apakah sesuai dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT belum diketahui

dengan pasti. Peneliti ingin membandingkan hasil perhitungan MCV, MCH dan

MCHC dengan gambaran populasi eritrosit pada SADT.

1.6 Metodologi

Bentuk penelitian ini adalah uji diagnostik dengan membandingkan nilai

rata-rata eritrosit hasil pemeriksaan flow cytometer dengan morfologi eritrosit pada

(36)

1.7 Lokasi dan Waktu

• Lokasi : Laboratorium Diagnostik Rumah Sakit Imanuel Bandung;

Laboratorium Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Kristen

Maranatha

(37)

5.1 Kesimpulan

Nilai rata-rata eritrosit hasil perhitungan flow cytometer tidak sepenuhnya

sesuai dengan gambaran populasi eritrosit pada sediaan apus darah tepi.

5.2 Saran

Untuk mengetahui populasi eritrosit yang sebenarnya sebagai pemeriksaan

penunjang diagnosis anemia sebaiknya dilakukan pemeriksaan morfologi eritrosit

pada SADT karena gambaran eritrosit berdasarkan nilai rata-rata eritrosit tidak

(38)

Adamson J W, Longo L D. 2005. Anemia and Polycythemia. In L D Kasper, S A Fauci, L D Longo et al. Editors: Harrison’s Principle of Internal Medicine. Volume I. 16th ed. USA: McGraw-Hill. p.329-336

Andrews C N. 2003. Iron Deficiency and Related Disorder. In P J Greer, J Foerster, N J Lukens et al. Editors: Wintrobe’s Clinical Hematology. Volume 1A. 11th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. p.980-1004

Ann Bell. 2001. Morphology of Human Blood & Marrow Cells: Hematopoeisis. In M D Harmening. Editor: Clinical Hematology and Fundamentals of

Hemostasis. 4th ed. Philadelphia: F A Davis Company.

Anonim.2007. Gambaran SADT Eritrosit Matur.www.Bloodine.com. January 3rd, 2007

Babior B M. 1995. The Megaloblastic Anemias. In E Beutler, M A Lichtman, B S Coller, T J Kipps. Editors: Williams Hematology. 5th ed. USA: McGraw-Hill, Inc.

Bain JB. 2005. Diagnosis From The Blood Smear. New England Journal of

Medicine, 353 (5) : 498-507

Baughan A S J, Hughes A S B, Patterson G K, Stirling L. 1985. Anemia. In:

Manual of Hematology. Edinburgh London Melbourne New York: Churchill

Livingston. p3-24

_______.1985. Blood Film Abnormalities. In: Manual of Hematology. Edinburgh London Melbourne New York: Churchill Livingston. p243-7

Brown B A. 1993. Routine Hematology Procedures. In Hematology: Principles

and Procedures. 6th ed. USA: Lea & Febiger. P.83-126

Bull B S, Gorius J B. 1995. Morphology of The Erythron. In E Beutler, M A Lichtman, B S Coller, T J Kipps. Editors: Williams Hematology, 5th ed. USA: McGraw-Hill, Inc.

Burns C. 2004. Peripheral Blood Smear. In B S Mckenzie. Editor: Clinical

(39)

Cohen, J. 1960. A coefficient of agreement for nominal scales. Educational and

Psychological Measurement 20, 37-46

Craig E F. 2004. Flow Cytometri. In B S Mckenzie. Editor: Clinical Laboratory

Hematology. USA: Pearson Education Inc.

Department of Pathology University of Virginia Health System. 2006. Red Blood

Cells Basic. http://www.med-ed.virginia.edu/ courses/ path/ innes/ nh/

normbasics2.cfm, January 3rd, 2007

Desai S P, Isa-Pratt S. 2000. Clinician’s Guide to Laboratory Medicine. Hudson, Ohio: Lexi-Comp, Inc.

Elghetany M T, Davey F R. 2001. Erythrocytic Disorders. In J B Henry. Editor:

Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 20th ed. Philadephia: W B Saunders Company.

Evatt L B, Gibbs N W, Lewis S M, McArthur R J. 1992. Fundamental Diagnostic

Hematology Anemia. 2nd ed. Atlanta, Georgia: U. S Department of Health and Human Services ; Geneva: World Health Organization.

Fairbanks V F, Beutler E. 1995. Iron deficiency. In E Beutler, M A Lichtman, B S Coller, T J Kipps. Editors: Williams Hematology. 5th ed. USA: McGraw-Hill, Inc.

Gandour M D. 2001. Applications of Flow Cytometry to Hematology and Hemostasis. In M D Harmening. Editor: Clinical Hematology and

Fundamentals of Hemostasis. 4th ed. Philadelphia: F A Davis Company. Gaspard K J. 1998. The Red Blood Cell and Alternations in Oxygen Transport. In

C M Porth. Editor: Pathophysiology Concept of Altered Health States. 5th ed. Philadelphia: Lippincott-Raven Publishers.

Glader B. 2003. Anemia: General Consideration. In P J Greer, J Foerster, N J Lukens, M G Rodgers, F Paraskevas, B Glader. Editors: Wintrobe’s Clinical

Hematology. Volume 1A. 11th ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. P.947-975

Guyton & Hall. 1997. Sel-sel darah, Imunitas dan Pembekuan Darah. Dalam Buku

(40)

_______. 1997. Pernapasan. Dalam Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 9. Jakarta: EGC.

Hillman R S, Ault K A. 1995. Hematology in Clinical Practice: A Guide to

Diagnosis and Management. 1st ed. USA: McGraw-Hill Company. Hoffbrand A V, Petit J E. 1996. Haematologi. cetakan ke-6. Jakarta: EGC.

Hubbard J. 2004. The Erythrocyte. In S B McKenzie. Editor: Clinical Laboratory

Hematology. 1st ed. New Jersey: Pearson Education, Inc.

Idaningroem Sjahid. 2002. Kelainan Morfologi Sel-sel Darah. Dalam Kursus

Penyegar Pemeriksaan Morfologi Sediaan Hapus Darah Tepi dan Sumsum Tulang. Indonesia.

Kearns H E, LaMonica A L. 2001. Principles of Automated Differential Analysis. In M D Harmening. Editor: Clinical Hematology and Fundamentals of

Hemostasis. 4th ed. Philadelphia: F A Davis Company. P. 594-603

Koeswardani R, Boentoro, Budiman. 2001. Flow Cytometri dan Aplikasi Alat

Hitung Sel Darah Otomatik Technicon H-1 dan H3. Malang: Laboratorium

Patologi Klinik FK Unibraw RSUD Dr. Syaiful Anwar.

http://www.tempo.co.id/medika/arsip/082001/hor-1.htm, January 3rd, 2007

Landis, J.R. and Koch, G.G. 1977. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics 33, 159-74.

Lee G R, Herbert V. 1999. Nutritional Factors in The Production and Function of Erythrocytes. In G R Lee, J Foerster, J Lukens, F Paraskevas, J P Greer, G M Rodgers. Editors: Wintrobe’s Clinical Hematology. 10th ed. Maryland: Lippincott Williams & Wilkins.

Northington W. 2000. Anemia: Diagnosis and Classification. USA: Murray State

University.http://campus.murraystate.edu/ academic/ faculty/ wade.

northington/ anemia.htm, January 3rd, 2007

(41)

Rachmawati A M, Mansyur Arief, Hardjoeno. 2003. Pemeriksaan Anemia. Dalam H Hardjoeno. Editor: Interpretasi Hasil Pemeriksaan Laboratorium

Diagnostik. Cetakan ke-3. Makassar: Lembaga Penerbitan Universitas

Hassanudin (Lephas).

RADIL University of Missouri. 2007. RADIL Standard Operating Procedure for Making Blood Smear. http://www.radil.missouri.edu/ info/ teaching/ MakingBloodSmear. asp. January 3rd, 2007

Simmer M. 2003. Flow Cytometry : A Technology to Count and Sort Cells. The Science Creative Qurterly. http://www.scq.ubc.ca/?p=277. January 3rd, 2007

Sudigdo Sastroasmoro, Sofyan Ismael. 1995. Dasar-dasar Metodologi Penelitian Klinis. Jakarta: Binarupa Aksara.

Sysmex Corporation. 2006. http://www.sysmex.co.jp/sysmex/history/img/xs-1000i.jpg. January 3rd, 2007

Sysmex Corporation. 2006. Instruction for use Sysmex XS – 1000i / XS – 800i. Japan: Sysmex Corporation.

Tagliasacchi D, Carboni G. 1997. Blood Cells., http://www.funsci.com/ fun3_en/ blood/ blood.htm#3, January 3rd, 2007

Uthman O E. 2000. Understanding Anemia. USA: University Press of Mississipi. http://web2.airmail.net/ uthman/ anemia/ anemia.html, January 3rd, 2007

Wallach J B. 2000. Interpretation of Diagnostic Pemeriksaants. 7th ed. Brooklyn, New York: A Wolter Kluwer Company.

WHO. 2001. The clinical use of blood in medicine, obstetrics, paediatrics,

surgery & anaesthesia, trauma & burns. WHO blood transfusion safety.

Geneva.