BAHAN DAN PERALATAN LABORATORIUM ... - Spada UNS

(1)

BAHAN

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

(2)

Procedure to obtain microbial culture Isolation

• the separation of a particular microorganism from the mixed populations that exist in nature

Cultivation

• the growth of microbial populations in artificial environments (culture media) under laboratory conditions.

(3)

BAHAN

 Media

Pertumbuhan

 Larutan Pengencer

 Media

Pertumbuhan

 Larutan

Pengencer

(4)

Media

 Medium : suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat gizi yang digunakan menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya.

 Medium juga dapat dipergunakan untuk : - isolasi

- perbanyakan

- pengujian sifat fisiologis

- perhitungan jumlah mikroorganisme

 Komponen penyusun media pertumbuhan : air, sumber karbon, sumber energi, mineral, faktor pertumbuhan, maupun konsentrasi ion hidrogen (pH).

 Contoh ; NA/NB, PDA/PDB, PCA, MRSA, EMBA, LB

 Medium : suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi atau zat-zat gizi yang digunakan menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya.

 Medium juga dapat dipergunakan untuk : - isolasi

- perbanyakan

- pengujian sifat fisiologis

- perhitungan jumlah mikroorganisme

 Komponen penyusun media pertumbuhan : air, sumber karbon, sumber energi, mineral, faktor pertumbuhan, maupun konsentrasi ion hidrogen (pH).

 Contoh ; NA/NB, PDA/PDB, PCA, MRSA, EMBA, LB

(5)

Culture media

A culture medium is a solid or liquid preparation used to grow, transport, and store microorganisms

Suitable culture medium  need for microbial growth and maintenance in laboratory

Isolation and identification need special media  identification microorganism in water and food, industrial microbiology, testing for antibiotic sensitivity

Although all microorganisms need sources of energy, carbon, nitrogen, phosphorus, sulfur, and various minerals, the precise composition of a satisfactory medium will depend on the species  because nutritional requirements vary so greatly.

Knowledge of a microorganism’s normal habitat often is useful in selecting an appropriate culture medium  nutrient requirements reflect it’s natural surrounding

(6)

Defined medium

Medium that all components are known

Many

chemoorganotrophic heterotrophs also can be grown in defined media  glucose ac carbon source and ammonium salt as nitrogen source

Widely use in research

(7)

Complex medium

 Media that contain some ingredients of unknown chemical composition

 This media is useful as a single complex medium

 sufficiently rich and complete to meet nutritional requirements of many different microorganisms

 complex media often are needed because the nutritional requirements of a particular microorganism are unknown, and thus a defined medium cannot be constructed

(8)

Media

 Dari segi nutriennya/susunan kimianya, media pertumbuhan dibedakan menjadi dua yaitu :

 media kompleks/ non sintetik

 media sintetik (defined media).

 Media semi sintetik

Media kompleks kaya akan nutrien (macam nutriennya banyak dan konsentrasinya tinggi), akan tetapi macam dan konsentrasi nutriennya tidak diketahui.

Media sintesis terbuat dari bahan kimia murni dengan konsentrasi yang terukur dan dilarutkan dalam air murni.

Media semi sintetik : campuran dari media sintetik dan non sintetik

(9)

Type of media

enriched

• General purpose fortified by special nutrient to encourage the fastidious heterotroph

• Ex: Blood agar

selective

• favor the growth of particular

microorganisms

• For isolation specific mikroorganism

• Ex: Endo agar, eosin methylene blue agar, and MacConkey agar

differential

• Media that use for distinguish between different group of bacteria

• permit tentative identification of microorganisms based on their biological

characteristics

• MacConkey agar is both

• differential and

selective.  contains lactose and neutral red dye, lactose- fermenting colonies appear pink to red in color and are easily distinguished from colonies of non fermenters.

(10)

Bentuk Media ; konsistensi media



Media Cair

^

Media Padat (Media Agar)

Nutrient Broth (NB)

Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

Terdapat AGAR sebagai bahan pemadat

Panas = cair ; dingin 43C

= padat

Agar tegak / agar miring Nutrient Agar (NA)

Plate Count Agar (PCA)

(11)

Media dan cara penyiapannya



Media harus disimpan dengan kondisi tertutup rapat dan pada kondisi (suhu) yang sesuai



Perhatikan masa kadaluwarsa media



Sendok yang digunakan untuk menimbang harus kering dan bersih, hindari

tercampurnya bahan-bahan penyusun

media

(12)

Cara Pembuatan Media

(13)

LARUTAN PENGENCER



Larutan pengencer dibutuhkan untuk mengencerkan

kultur yang mempunyai

konsentrasi tinggi.



Mengandung bufer untuk menjaga

keseimbangan ion mikroba



Jenis



Bufer fosfat



Larutan garam fisiologis (NaCl 0,85%)



Pepton dilution fluid (pepton 0,2%)

9 ml (1:10); 1 ml sampel + 9 ml pengencer ; 99 ml (1:100); 1 ml sampel + 99 ml

pengencer

(14)

Perhitungan Kebutuhan Bahan



media pektin sitrus cair : yeast ekstrak 1g/L; Na

₂

HPO

₄

0,9 g/L; KH

₂

PO

₄

1g/L;

MgSO

₄

.7H

₂

O 0,5 g/L;

KCl 0,2 g/L; dan pektin sitrus 1g/L)

