ESCHERICHIA COLI, STAPHYLOCOCCUS, Dan METODE MPN
D I S U S U N OLEH:
Nama : Akhtar Gee NIM :210209005
Kelas: 2A TLM DOSEN PENGAMPU Dr. dr. Lia, Sp. MK, Phd
FAKULTAS PENDIDIKAN VOKASI SARI MUTIARA INDONESIA
TP. 2023
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan atas segala rahmat-Nya sehingga makalah ini dapat tersusun hingga selesai dengan judul “ Escherichia Coli, Staphylococcus, dan Metode MPN, guna memenuhi tugas Dr. dr. Lia, Sp. MK, Phd pada mata kuliah Bakteriologi II di Universitas Sari Mutiara Indonesia. Tugas yang diberikan ini dapat menambah wawasan dan pengetahuan terkait bidang yang ditekuni penulis.
Penulis menyadari banyak kekurangan dalam makalah ini, oleh sebab itu, kritik dan saran sangat dibutuhkan demi kesempurnaan makalah ini.
Medan, 11 maret 2023 Penulis
Akhtar Gee
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR...2
DAFTAR ISI...3
BAB I...4
PENDAHULUAN...4
1.1 Latar belakang...4
1.2 Rumusan Masalah...4
1.3 Tujuan...4
BAB II...5
ISI...5
2.1 ESCHERICHIA COLI...5
MORFOLOGI DAN SIFAT ESCHERICHIA COLI...5
2.2 Staphylococcus...7
Identifikasi Stafilokokus di laboratorium Klinis...8
2.3 Metode MPN...11
METODE...13
BAB III...15
PENUTUP...15
3.1 Kesimpulan...15
3.2 Saran...15
DAFTAR PUSTAKA...16
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang
Escherichia coli adalah nama yang tidak asing lagi bagi orang yang berkecimpung dalam bidang mikrobiologi, karena E. coli atau Bacterium coli commune adalah sebuah nama bakteri yang diambil dari nama orang yang menemukannya yaitu Theodor Escherich. Pada tahun 1907 Massini memberi nama E. coli sebagai Bacterium coli mutabile.
Staphylococcus adalah patogen pada manusia dan mamalia lainnya. Secara tradisional, mereka dibagi menjadi dua kelompok berdasarkan kemampuannya untuk membekukan plasma darah (reaksi koagulase).
Most Probable Number (MPN) merupakan uji yang mendeteksi sifat fermentatif Coliform dalam sampel. Uji MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumptive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test).
1.2 Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah diantaranya yaitu 1. Apa yang dimaksud dengan E. Coli?
2. Apa saja morfologi dan sifat Escherichia Coli?
3. Apa yang dimaksud dengan Staphylococcus?
4. Identifikasi apa saja yang dilakukan pada Stafilokokus di laboratorium Klinis?
5. Apa yang maksud dengan MPN?
6. Apa saja Metode pada Uji MPN?
1.3 Tujuan
2. Untuk mengetahui pengertian dan pembahasan tentang E.Coli, Staphylococcus,dan Metode MPN.
3. Untuk mengetahui Uji yang dilakukan pada metode MPN.
BAB II ISI
2.1 ESCHERICHIA COLI
dalam kehidupan manusia Escherichia coli adalah nama yang tidak asing lagi bagi orang yang berkecimpung dalam bidang mikrobiologi, karena E. coli atau Bacterium coli commune adalah sebuah nama bakteri yang diambil dari nama orang yang menemukannya yaitu Theodor Escherich. Pada tahun 1907 Massini memberi nama E. coli sebagai Bacterium coli mutabile. E.
coli praktis selalu ada dalam saluran pencernaan hewan dan manusia karena secara alamiah Escherichia coli merupakan salah satu penghuni tubuh. Penyebaran E. coli dapat terjadi dengan cara kontak langsung ( bersentuhan, berjabatan tangan dan sebagainya ) kemudian diteruskan melalui mulut, akan tetapi E.coli pun dapat ditemukan tersebar di alam sekitar kita. Penyebaran secara pasif dapat terjadi melalui makanan atau minuman. Di dalam uji analisis air, E. coli merupakan mikroorganisme yang dipakai sebagai indikator untuk menguji adanya pencemaran air oleh tinja. Di dalam kehidupan kita E.coli mempunyai peranan yang cukup penting yaitu selain sebagai penghuni tubuh ( di dalam usus besar) juga E. coli menghasilkan kolisin yang dapat melindungi saluran pencernaan dari bakteri patogenik. Escherichia coli akan menjadi patogen bila pindah dari habitatnya yang normal kebagian lain dalam inang, misalnya, bila E.
coli di dalam usus masuk ke dalam saluran kandung kemih kelamin dapat menyebabkan sistitis, yaitu suatu peradangan pada selaput lendir organ tersebut. Escherichia sekarang dianggap sebagai genus dengan hanya satu species yang mempunyai beberapa ratus tipe antigenik. Tipe- tipe ini dicirikan menurut kombinasi yang berbeda-beda antara antigen 0 (antigen lipoporisakaride somatik di dalam dinding sel ), K ( antigen polisakaride kapsul) dan H (antigen protein flagela). tambahan pula antigen K dibagi menjadi antigen L, A atau B berdasarkan pada ciri fisiknya yang berbeda-beda. Galurgalur tertentu dari E. coli mampu menyebabkan gastroenteristis taraf sedang sampai parah pada manusia dan hewan.
MORFOLOGI DAN SIFAT ESCHERICHIA COLI
Meskipun E. coli merupakan mikroorganisma indikator yang dipakai di dalam analisis air untuk menguji adanya pencemaran oleh tinja, tetapi pemindah sebarannya tidak selalu melalui air, melainkan dipindah sebarkan melalui kegiatan tangan ke mulut atau dengan pemindahan pasif melalui makanan atau minuman.
Tanda tanda umum E. coli
- Bentuk bulat cenderung ke batang panjang -Bentuk batang, biasanya berukuran 0,5 x 1 - 3 µ
-Terdapat sendiri sendiri, berpasang-pasangan dan rangkaian pendek - Bergerak atau tidak bergerak
- bergerak dengan menggunakan flagella peritrik - biasanya tidak berbentuk kapsul
- Tidak membentuk spora - Gram negatif
- Aerob, anaerob fakultatif.
Sifat sifat khusus E. coli antara lain :
- Merupakan parasit dalam saluran pencernaan makanan manusia dan hewan berdarah panas.
- Pada manusia kadang kadang menyebabkan penyakit enteritis, peritonitis, cistitis dan sebagainya.
- Hasil uji methil red positif. keluarga dari species ini memfermentasikan laktosa dan glukosa dengan menghasilkan asam dan gas.
- Menghasilkan asam dalam jumlah yang banyak dari glukosa tetapi acethyl methyl carbinol tidak dihasilkan.
- CO2 dan H2 kira kira dihasilkan dalam volume yang sama dalam glukosa.
- Pada umumnya asam uric tidak dapat dipakai sebagai satusatunya sumber nitrogen.
- Ditemukan dalam faeces.
- Hasil uji Eykman.
- Asam sitrat dan garam dari asam sitrat tidak dapat dipakai sebagai satu-satunya sumber karbon.
Reproduksi
Pada umumnya bakteri hanya mengenal satu macam pembiakan yaitu dengan cara seksual atau vegetatif. Pembiakan ini berlangsung cepat, apabila faktor-faktor luar menguntungkan bagi dirinya.
2.2 Staphylococcus
Bakteri dalam genus Staphylococcus adalah patogen pada manusia dan mamalia lainnya.
Secara tradisional, mereka dibagi menjadi dua kelompok berdasarkan kemampuannya untuk membekukan plasma darah (reaksi koagulase). Stafilokokus koagulase-positif merupakan spesies S aureus yang paling patogen. Stafilokokus koagulase-negatif (CNS) sekarang diketahui terdiri dari lebih dari 30 spesies lainnya. CNS adalah komensal yang umum pada kulit, meskipun beberapa spesies dapat menyebabkan infeksi. Sekarang jelas bahwa pembagian stafilokokus menjadi koagulase positif dan negatif adalah artifisial dan memang menyesatkan dalam beberapa kasus. Koagulase adalah penanda untuk S aureus tetapi tidak ada bukti langsung bahwa itu adalah faktor virulensi. Selain itu, beberapa isolat alami S aureus tidak memiliki koagulase.
Namun demikian, istilah ini masih digunakan secara luas di kalangan ahli mikrobiologi klinis.
S aureus mengekspresikan berbagai protein ekstraseluler dan polisakarida, beberapa di antaranya berkorelasi dengan virulensi. Virulensi dihasilkan dari efek gabungan banyak faktor yang diekspresikan selama infeksi. Antibodi akan menetralkan racun dan enzim stafilokokus, tetapi vaksin tidak tersedia. Pengobatan antibiotik dan drainase bedah sering kali diperlukan untuk menyembuhkan abses, bisul besar, dan infeksi luka. Stafilokokus adalah penyebab umum infeksi yang terkait dengan perangkat medis yang tinggal. Infeksi ini sulit diobati dengan antibiotik saja dan sering kali memerlukan pengangkatan perangkat. Beberapa jenis yang menginfeksi pasien rawat inap resisten terhadap sebagian besar antibiotik yang digunakan untuk mengobati infeksi, vankomisin adalah satu-satunya obat yang tersisa yang tidak mengalami resistensi.
Taksonomi
Hibridisasi DNA-ribosomal RNA (rRNA) dan analisis oligonukleotida komparatif 16S rRNA telah menunjukkan bahwa stafilokokus membentuk kelompok yang koheren pada tingkat genus. Kelompok ini berada dalam kelompok Bacillus-Lactobacillus-Streptococcus yang luas, yang mendefinisikan bakteri Gram-positif dengan kandungan DNA G + C yang rendah.
Setidaknya 30 spesies stafilokokus telah dikenali melalui analisis biokimia dan khususnya dengan hibridisasi DNA-DNA. Sebelas di antaranya dapat diisolasi dari manusia sebagai komensal. S aureus (nares) dan S epidermidis (nares, kulit) adalah komensal yang umum dan juga memiliki potensi patogenik terbesar. S saprophyticus (kulit, kadang-kadang) juga
merupakan penyebab umum infeksi saluran kemih. S haemolyticus, S simulans, S cohnii, S warneri dan S lugdunensis juga dapat menyebabkan infeksi pada manusia.
Identifikasi Stafilokokus di laboratorium Klinis
Struktur
Stafilokokus adalah kokus Gram positif yang berdiameter sekitar 0,5-1,0 μm. Mereka tumbuh dalam kelompok, berpasangan dan kadang-kadang dalam rantai pendek. Kelompok- kelompok ini muncul karena stafilokokus membelah menjadi dua bidang. Konfigurasi kokus membantu membedakan mikrokokus dan stafilokokus dari streptokokus, yang biasanya tumbuh berantai. Pengamatan harus dilakukan pada kultur yang ditumbuhkan dalam kaldu, karena streptokokus yang ditumbuhkan pada media padat dapat muncul sebagai gumpalan. Beberapa bidang harus diperiksa sebelum memutuskan apakah ada gumpalan atau rantai.
Uji Katalase
Tes katalase penting dalam membedakan streptokokus (katalase-negatif) dengan stafilokokus yang katalase positif. Tes ini dilakukan dengan membanjiri agar miring atau kultur kaldu dengan beberapa tetes hidrogen peroksida 3%. Kultur yang positif katalase akan menggelembung sekaligus. Tes ini tidak boleh dilakukan pada agar darah karena darah itu sendiri akan menghasilkan gelembung.
Isolasi dan Identifikasi
Keberadaan stafilokokus pada lesi mungkin pertama kali dicurigai setelah pemeriksaan pewarnaan Gram langsung. Namun, sejumlah kecil bakteri dalam darah menghalangi pemeriksaan mikroskopis dan memerlukan kultur terlebih dahulu.
Organisme diisolasi dengan menggoreskan bahan dari spesimen klinis (atau dari kultur darah) ke media padat seperti agar darah, agar kedelai tryptic atau agar infus jantung. Spesimen yang kemungkinan terkontaminasi dengan mikroorganisme lain dapat disepuh pada agar garam manitol yang mengandung natrium klorida 7,5%, yang memungkinkan stafilokokus yang toleran terhadap halo untuk tumbuh. Idealnya, pewarnaan Gram pada koloni harus dilakukan dan tes dilakukan untuk produksi katalase dan koagulase, yang memungkinkan S aureus yang positif koagulase untuk diidentifikasi dengan cepat. Tes lain yang sangat berguna untuk S aureus adalah produksi deoksiribonuklease termostabil. S aureus dapat dikonfirmasi dengan menguji koloni untuk aglutinasi dengan partikel lateks yang dilapisi dengan imunoglobulin G dan fibrinogen yang mengikat protein A dan faktor penggumpalan pada permukaan sel bakteri. Ini tersedia dari pemasok komersial (misalnya, Staphaurex). Tes lateks terbaru (Pastaurex) menggabungkan antibodi monoklonal terhadap polisakarida kapsuler serotipe 5 dan 8 untuk mengurangi jumlah
negatif palsu. (Beberapa isolat klinis S aureus terbaru tidak memiliki produksi koagulase dan/atau faktor penggumpalan, yang dapat menyulitkan identifikasi).
Hubungan S epidermidis (dan pada tingkat yang lebih rendah dari stafilokokus negatif koagulase lainnya) dengan infeksi nosokomial yang terkait dengan perangkat yang tinggal di dalam tubuh berarti bahwa isolasi bakteri ini dari darah kemungkinan besar penting dan bukan karena kontaminasi secara kebetulan, terutama jika kultur darah yang berurutan positif. Saat ini, identifikasi S epidermidis dan spesies Staphylococcus lainnya dilakukan dengan menggunakan kit identifikasi biotipe komersial, seperti API Staph Ident, API Staph-Trac, Vitek GPI Card, dan Microscan Pos Combo. Alat-alat tersebut terdiri dari strip yang telah dibentuk sebelumnya yang berisi substrat uji.
Manifestasi Klinis
Stafilokokus dapat menyebabkan berbagai bentuk infeksi.
1. S.aureus menyebabkan lesi kulit yang dangkal (bisul, bintil) dan abses yang terlokalisasi di tempat lain. 2.S aureus menyebabkan infeksi yang dalam, seperti osteomielitis dan endokarditis serta infeksi kulit yang lebih serius (furunkulosis).
3. S aureus adalah penyebab utama infeksi luka bedah yang didapat di rumah sakit (nosokomial) dan, dengan S epidermidis, menyebabkan infeksi yang terkait dengan perangkat medis yang menetap.
4. S aureus menyebabkan keracunan makanan dengan melepaskan enterotoksin ke dalam makanan.
5. S aureus menyebabkan sindrom syok toksik dengan melepaskan superantigen ke dalam aliran darah. 6. S saprophiticus menyebabkan infeksi saluran kemih, terutama pada anak perempuan.
7. Spesies stafilokokus lainnya (S.lugdunensis, S.haemolyticus, S.warneri, S.schleiferi, S.intermedius) merupakan patogen yang jarang terjadi.
Struktur
Stafilokokus adalah kokus Gram positif dengan diameter 1μm. Mereka membentuk gumpalan.
Klasifikasi
S aureus dan S intermedius adalah koagulase positif. Semua stafilokokus lainnya bersifat koagulase negatif. Mereka toleran terhadap garam dan sering kali bersifat hemolitik. Identifikasi membutuhkan analisis biotipe.
Habitat Alami
S aureus menjajah bagian hidung dan ketiak. S epidermidis adalah komensal kulit manusia yang umum. Spesies stafilokokus lainnya adalah komensal manusia yang jarang terjadi.
Beberapa merupakan komensal hewan lain.
Patogenesis
S aureus mengekspresikan banyak faktor virulensi potensial. (1) Protein permukaan yang mendorong kolonisasi jaringan inang. (2) Faktor-faktor yang mungkin menghambat fagositosis (kapsul, protein pengikat imunoglobulin A). (3) Racun yang merusak jaringan inang dan menyebabkan gejala penyakit. Stafilokokus koagulase-negatif biasanya kurang virulen dan mengekspresikan lebih sedikit faktor virulensi. S epidermidis mudah berkoloni pada alat yang diimplan.
Pertahanan Inang
Fagositosis adalah mekanisme utama untuk memerangi infeksi stafilokokus. Antibodi diproduksi yang menetralkan racun dan mendorong opsonisasi. Kapsul dan protein A dapat mengganggu fagositosis. Pertumbuhan biofilm pada implan tidak dapat dihambat oleh fagositosis.
Pengobatan
Infeksi yang didapat di luar rumah sakit biasanya dapat diobati dengan β-laktam yang resisten terhadap penisilinase. Infeksi yang didapat di rumah sakit sering kali disebabkan oleh strain yang resisten terhadap antibiotik dan hanya dapat diobati dengan vankomisin.
Resistensi Antibiotik
Resistensi antibiotik ganda semakin sering terjadi pada S aureus dan S epidermidis.
Resistensi metisilin merupakan indikasi resistensi ganda. S aureus yang resisten terhadap metisilin (MRSA) menyebabkan wabah di rumah sakit dan dapat menjadi epidemi.
Epidemiologi
Penelusuran epidemiologi S aureus secara tradisional dilakukan dengan pengetikan fag, tetapi memiliki keterbatasan. Metode pengetikan molekuler sedang diuji secara eksperimental.
Diagnosis
Diagnosis didasarkan pada tes yang dilakukan dengan koloni. Tes untuk faktor penggumpalan, koagulase, hemolisin, dan deoksiribonuklease termostabil secara rutin digunakan
untuk mengidentifikasi S aureus. Tes aglutinasi lateks komersial tersedia. Identifikasi S epidermidis dikonfirmasi dengan kit biotipe komersial.
2.3 Metode MPN
Most Probable Number (MPN) merupakan uji yang mendeteksi sifat fermentatif Coliform dalam sampel. Uji MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumptive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Masing – masing uji tersebut menggunakan media LBSS, LBDS dan BGLB dengan volume antara 5 ml – 10 ml.
Adanya variasi volume media ini apakah akan mempengaruhi nilai positivitas dan nilai MPN dari Coliform Merupakan permasalahan yang dijawab dalam penelitian ini. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui adanya pengaruh variasi volume media terhadap hasil uji hitung bakteri Coliform metode MPN ragam 5 1 1. Volume media yang divariasikan adalah media LBSS dan LBDS dengan variasi volume 4 m, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen di laboratorium. sampel yang digunakan adalah dari suspense bakteri Escherichia coli yang setara dengan standar 0,5 Mc. Farland dan diencerkan 1000 ml dengan aquadest steril, data hasil berupa nilai MPN yang diperoleh diuji dengan analisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari volume media LBDS dan LBSS 4 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml, yang direplikasikan 5 kali didapatkan hasil positif pada semua tabung 5 1 1 dengan nilai MPN >265/100 ml. Kesimpulan dari penelitian ini adalah volume media LBSS dan LBDS tidak mempengaruhi nilai positifitas dan nilai MPN Coliform
Makanan dan minuman merupakan sesuatu yang dibutuhkan oleh manusia untuk senantiasa hidup yang berasal dari hewan, tumbuhan, mineral, maupun dari zat-zat kimia sintetik. Pada umumnya makanan dan minuman tersebut, diproduksi oleh industri secara besar- besaran dan biasanya memakan waktu yang cukup lama dalam produksi, penyimpanan, distribusi
dan akhirnya sampai ke tangan konsumen. Jadi kemungkinan dapat terjadi pertumbuhan mikroba di dalamnya (Fardiaz S, 1992). Coliform merupakan suatu grup bakteri yang digunakan sebagai indicator adanya polusi kotoran dan kondisi yang tidak baik terhadap air, makanan, susu dan produk-produk susu. Coliform sebagai suatu kelompok dicirikan sebagai kelompok bakteri berbentuk batang, gram negatif, tidak membentuk spora, aerobilik fakultatif yang memfermentasi lactose dengan menghasilkan asam dan gas dalam waktu 48 jam suhu 370C . adanya bakteri coliform dalam makanan dan minuman menunjukkan kemungkinan adanya mikroba enteropatogenik dan toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan (Widianti dan Ristianti, 2004). .Standar Air Minum dan makanan, menurut standar WHO semua sampel tidak boleh mengandung Escherichia coli dan sebaiknya juga bebas dari bakteri Coliform. Standar WHO dalam setiap tahun, 95% dari sampel-sampel tidak boleh mengandung Coliform dalam 100 ml, tidak ada sampel yang mengandung Escherichia coli dalam 100 ml, Tidak ada sampel yang mengandung coliform lebih dari 10 dalam 100 ml, tidak boleh ada coliform dalam 100 ml dan dua sampel yang berurutan (Broks et al, 2005). Perhitungan jumlah mikroba dapat dilakukan dengan uji hitung jumlah bakteri dengan beberapa metode : Metode Plate Count, Penentuan volume total, Metode turbidometri, Metode MPN (Most Probable Number), Metode perhitungan cawan ( Pratiwi, Sylvia T. 2008).
Salah satu metode yang digunakan adalah metode MPN (Most Probable Number), dalam metode MPN digunakan medium cair di dalam tabung reaksi , dalam hal ini perhitungan dilakukan berdasarkan jumlah tabung positif. Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat dengan mengamati timbulnya kekeruhan, atau terbentuknya gas di dalam tabung durham untuk bakteri pembentuk gas. Umumnya untuk setiap pengenceran digunakan 3 atau 5 seri tabung.
Makin banyak tabung yang digunakan dalam perhitungan nilai MPN, akan menunjukkan tingkat ketelitian yang lebih tinggi. Metode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah bakteri di dalam contoh berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih dahulu disuspensikan dengan perbandingan 1 : 10 dari contoh tersebut dalam buffer. Kelompok bakteri yang dapat dihitung dengan metode MPN juga bervariasi bergantung pada media yang digunakan untuk pertumbuhannya ( Supardi I & Sukamto, 1999). Metode Most Probable Number (MPN) mempunyai beberapa kelebihan, salah satunya pada volume media LBSS dan LBDS menggunakan 10 ml dan 5 ml. Pemeriksaan kehadiran bakteri coli dari air dilakukan berdasarkan penggunaan media kaldu laktosa yang ditempatkan di dalam tabung reaksi berisi tabung durham (tabung kecil yang letaknya terbalik, digunakan untuk menangkap gas yang terjadi akibat fermentasi laktosa menjadi asam dan gas). Tergantung kepada kepentingan, menggunakan ragam 5 1 1 , 5 ml media LBDS pada 5 tabung dan 5 ml media LBSS pada 2 tabung (PDAM, 2015). Sampel ditumbuhkan pada seri tabung 5 atau ragam 5 1 1. Media pada tabung adalah Lactose Broth yang diberi indikator perubahan pH dan ditambah tabung durham. Pemberian sampel pada tiap seri tabung berbeda-beda. Untuk sampel sebanyak 10 ml ditumbuhkan pada media LBDS (Lactose Broth Double Strength) dengan volume media 10 ml.
Untuk sampel 1 ml dan 0,1 ml dimasukkan pada media LBSS (Lactose Broth Single Strength) dengan volume media 10 ml (Lay B W , 1992).
METODE
Rancangan penelitian ini merupakan penelitian eksperimen dilaboratorium, dengan 5 perlakuan variasi volume media LBSS dan LBDS, variasi volume media LBDS dan LBSS dengan komposisi beef extract, lactose, pepton, aquadest yang sudah dilarutkan dan disterilisasi kemudian dimasukkan ke dalam tabung dengan volume 4 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml dan 12 m. Setiap perlakuan dilakukan replikasi 5 kali, sehingga besar unit eksperimen adalah 25 unit. Populasi dan Sampel dari penelitian ini adalah suspensi bakteri Escherichia coli 0,5 Unit Mc. Farland dengan jumlah sel bakteri 0,15 x 109 /ml. Metode pemeriksaan yang digunakan dalam uji hitung bakteri coliform adalah metode Most Probable Number (MPN), dengan langkahlangkah sebagai berikut : Persiapan sampel, mencari nilai MPN sampel, menghitung hasil dan mengolah data.
Variable bebas dari penelitian ini adalah variasi volume media LBSS dan LBDS, Variable terikat : hasil uji MPN ragam 5 1 1. Hasil uji MPN adalah pembacaan hasil uji dari suspensi bakteri Escherichia coli standar 0,5 Mc farland setelah dilanjutkan dari media LBDS , LBSS ke media BGLB dengan membaca adanya gelombang gas. Data yang dikumpulkan dari penelitian ini adalah hasil uji hitung bakteri coliform metode MPN dengan volume media LBDS, LBSS yang di variasikan dari 4 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml. Alat penelitian : Tabung durham, Tabung reaksi, Rak tabung, Ose, Autoclave, Beaker glass, Incubator, Lampu spritus, Pipet ukur 10 ml, Batang pengaduk, Plate, Neraca analitik, Hot plate, Erlenmeyer,Kapas,Tissue. Bahan :Suspensi bakteri Escherichia coli, Aquadest, Alcohol 70%. Media dan Reagensia : Lactose Broth Double Strength (LBDS), Lactose Broth Single Strength (LBSS), Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) dan Nutrient Broth NB).
Cara Kerja penelitian meliputi :
1. Pembuatan sampel : Suspensi Escherichia coli dengan kepekatan sel bakteri 0,5 unit Mc.
Farland dibuat dalam media BHI (seperti terlihat pada gambar 1). Jika kepekatan sudah sama dengan standar 0,5 Mc farland, lalu masukkan 1 ml dari media BHI tersebut ke dalam 1000 ml aquadest steril (sebagai sampel air uji).
2. Uji pendugaan (Presumptive test) : Disiapkan media LBSS dan LBDS sesuai dengan dasar MPN yang digunakan ragam 5 1 1, selanjutnya disiapkan 5 deret tabung reaksi sesuai jumlah volume media yang divariasikan 12, 10, 8 , 6 , 4 ml, dengan jumlah tabung reaksi dalam 1 deret 7 tabung,dimasukkan tabung durham ke semua tabung dengan posisi terbalik, dimasukkan media LBDS pada 5 tabung pertama disemua deret tabung sesuai volume media yang divariasikan, dimasukkan media LBSS pada 2 tabung dari semua deret tabung variasi sesuai volume media yang di variasikan. Dimasukkan 10 ml sampel pada 5 tabung dari semua deret tabung variasi, kemudian 2 tabung yang berisi media LBSS dimasukkan 1 ml sampel pada satu tabung dan 0,1 ml pada tabung sisanya. Dan dialkukan inkubasi pada suhu 370C selama 48 jam. Hasil positif apabila terjadi terdapat gas dalam tabung durham.
3. Uji penegas (Confirmed test) : Disiapkan tabung reaksi sesuai jumlah tabung yang positf pada uji penduga. Setiap tabung diisi 10 ml media BGLB , dan masukka 1 ose dari tabung positif uji penduga, masukkan tabung durham ke semua tabung. Inkubasi pada suhu 370C selama 48 jam. Hasil positif apabila terdapat gas dalam tabung durham (seperti terlihat pada gambar 2). Hasil dibacal dengan mencocokan pada tabel MPN 5-1-1 Formula Thomas seperti terlihat pada tabel 1.
BAB III PENUTUP
3.1 Kesimpulan
1. E.coli mempunyai peranan yang cukup penting yaitu selain sebagai penghuni tubuh ( di dalam usus besar) juga E. coli menghasilkan kolisin yang dapat melindungi saluran pencernaan dari bakteri patogenik. Escherichia coli akan menjadi patogen bila pindah dari habitatnya yang normal kebagian lain dalam inang,
2. Stafilokokus koagulase-positif merupakan spesies S aureus yang paling patogen.
Stafilokokus koagulase-negatif (CNS) sekarang diketahui terdiri dari lebih dari 30 spesies lainnya. CNS adalah komensal yang umum pada kulit, meskipun beberapa spesies dapat menyebabkan infeksi.
3. Ada 3 uji dalam metode MPN yaitu: Uji penduga, Uji penegak dan Uji pelengkap
3.2 Saran
Saran yang bisa penulis berikan yaitu perlu dilakukan suatu kegiatan berupa praktikum agar dapat menerapkan metode MPN serta dapat mengetahui morfologi dari E.Coli dan Staphylococcus.
DAFTAR PUSTAKA
Bhakdi S, Tranum-Jensen J. Alpha-toxin of Staphylococcus aureus. Microbiol Rev.
1991;55:733. [PMC free article] [PubMed]
Breed R. E., E.G.D. Murray & N. R. Smith. 1957. Bergey s manual of Determinative Bacteriology. Seventh Edition.Baltimore. The Williams & Wilkins company Brooks, Geo F, Butel, Janet S, Morse, Stephen A, et al. 2005. Mikrobiologi Kedokteran
(edisi 1). Jakarta : Salemba Medika.
Clifton C. E. 1958. Introduction to the Bacteria. Second Edition. MC
Supardi ,M dan sukamto , 1999. Mikrobiologi dalam pengolahan dan keamanan pangan , penerbit alumni Bandung .
