Teknik Perbanyakan DNA Secara In Vitro (PCR)

Polymerase Chain Reaction (PCR)

TEKNI K

Dosen Pengampu: DRS. REFAI, M.KES

Pembahasan

1

6 5

4

3 MACAM-MACAM

2 PCR

7

DEFINISI PCR

APLIKASI PCR

KOMPONEN PCR KEUNTUNGAN &

KETERBATASAN TAHAPAN

PROSES PCR

FUNGSI PCR

Reaksi Polimerase Berantai atau dikenal sebagai Polymerase Chain Reaction (PCR) merupakan suatu

proses sintesis enzimatik untuk melipatgandakan suatu sekuens nukleotida tertentu secara in

vitro.

PCR merupakan suatu teknik atau metode perbanyakan (replikasi) DNA secara enzimatik

tanpa menggunakan organisme.

Definis PCR

Fungsi PCR

Saat ini PCR sudah digunakan

secara luas untuk berbagai macam kebutuhan, diantaranya:

1. Isolasi Gen

2. DNA Sequencing

3. Identifikasi Forensik

4. Diagnosa Penyakit

Macam-Macam PCR

1. Conventional PCR 2. Multiplex PCR

3. Nested PCR

4. Touchdown PCR 5. Hot Star PCR

6. PCR

7. Inverse PCR

Tahapan Proses PCr

Denaturasi Penempelan Primer

(Annealing)

Reaksi

Polimerisasi (Extension)

1 2 3

Denaturasi

DNA untai ganda akan membuka menjadi dua

untai tunggal. Hal ini disebabkan karena suhu denaturasi yang

tinggi menyebabkan putusnya ikatan

hidrogen diantara basa-basa yang

komplemen.

Denaturasi biasanya dilakukan antara suhu

90 – 95^O C

Penempelan Primer (Annealing)

Ikatan hidrogen akan

terbentuk antara primer dengan urutan

komplemen pada

templat. Proses ini

biasanya dilakukan

pada suhu 50 - 60

^O

C.

Reaksi Polimerisasi (Extension)

Terjadi pada suhu 72^O C.

Primer yang telah menempel tadi akan mengalami

perpanjangan pada sisi 3‟nya dengan penambahan dNTP yang komplemen dengan

templat oleh DNA polimerase^.

Selain ketiga proses tersebut, secara umum PCR didahului dan diakhiri

oleh tahapan berikut

Predenaturasi Final

Elongasi Bertujuan memastikan

bahwa DNA template sepenuhnya

terdenaturasi dan siap untuk berikatan dengan

primer pada tahapan berikutnya. Ini sangat

penting untuk

memastikan efisiensi dan akurasi reaksi PCR.

untuk memastikan bahwa setiap utas tunggal yang tersisa

sudah diperpanjang secara sempurna.

Proses ini dilakukan setelah siklus

PCR terakhir^.

DNA Target

Komponen PCR

Primer Enzim DNA polimerase

Deoxynucleoside triphosphates

(dNTPs) Bufer Reaksi

Dapat digunakan untuk menganalisis

perubahan tingkat ekspresi gen pada

tumor, mikroba, atau keadaan penyakit

lainnya.

Keuntungan

Keuntungan &

Keterbatasan

Hanya digunakan untuk

mengidentifikasi ada atau tidaknya

patogen atau gen yang diketahui

^.

Keterbatasan

1 2 3

PCR dapat diterapkan di banyak bidang

Aplikasi PCR

Aplikasi Diagnostik

Kedokteran

Ilmu Forensik

5 4

Virologi

Penelitian Tanaman

Terima Kasih

Apakah ada Pertanyaan?