1
هیزجت و لیلحت یکیتنژ و
یکیتنژولیف هیحان
مورکوتیس نزوگ b
زمرق
لایل هدازاقآ
1
، *
دیعس کین
2نیب
، دازرف ییازریم
، 2
تمعن تیاده قیرویا
2
1 - يوجشناد عطقم
یسانشراک دشرا
کیتنژ و حلاصا داژن
،ماد هورگ مولع
،یماد هاگشناد ققحم یلیبدرا
2 -
،رايداتسا هورگ مولع
،یماد هاگشناد ققحم ا یلیبدر
لیميا*
هدنسيون لوئسم [email protected] :
هصلاخ رد نيا قیقحت تیعمج ياه نزوگ زمرق )لارام( ناريا و
رياس هنوگ اه و هنوگريز ياه نآ رد رياس اهروشک ( 04
هنومن زا یمامت تیعمج اه ) دروم هنومن رب يراد رارق تفرگ و سپ زا جارختسا زاDNA
هنومن ياه
،ناوختسا
،تفاب نوخ و وم
کي تفج رميارپ یصاصتخا يارب
ریثکت هعطق 1104 تفج زاب زا هیحان مورکوتیس b
مDNA يردنکوتی یيا
، یحارط ديدرگ .
سپس هیحان فده طسوت ریثکتPCR
و لوصحم هلصاح دروم یلاوت یباي رارق تفرگ . جياتن یلاوت رد اه نيا قیقحت ناشن داد
هک رد نیب هنوگ ياه فلتخم
،نزوگ لارام نيرتمک هلصاف
،یکیتنژ هک لداعم 474401.0 تسا
ار اب هنوگ Cervus
elaphus maral Bako (
نزوگ زمرق یيایسآ )
،دراد رد یلاح هک نيرتشیب هلصاف
یکیتنژ لارام اب Cervus elaphus
Canadensis USA (
نزوگ زمرق ياکيرمآ ی ) لداعم 47490.00 یم
دشاب . نینچمه جياتن
نومزآ یکیتنژولیف اب
هدافتسا زا
شور Neighbor-Joining
ناشن داد هک نزوگ زمرق
،یناريا طلاتخا یکیتنژ اب نزوگ ياه رياس اهروشک هتشادن و نيا
تیعمج صلاخ و ازجم زا رياس تیعمج ياه دروم یسررب یم دشاب .
دیلک هژاو - نزوگ زمرق اريا
،ین هیحان مورکوتیس
، b عونت
،یکیتنژ صولخ یتیعمج
1 . همدقم
لارام اي نزوگ زمرق اي واگ یهوک ( Cervus elaphus )
یکي زا گرزب نيرت عاونا نزوگ تسا هک یموب
،اپورا يایسآ
،ریغص برغ ایسآ و يایسآ هنایم و لامش اقيرفآ یم دشاب . ات لاس 0440 یتیپاو اي کلِا ( Cervus canadensis )
نزوگ یموب
قرش ایسآ و ياکيرمآ یلامش یکي زا عاونا لارام بوسحم یم دش . نيا رواب رب ساسا هگرود ياه يروراب هک زا شزیمآ نيا ود
روناج رد تراسا هب تسد هدمآ
،دوب ذاختا هدش
،دوب یلو تاعلاطم یکیتنژ ریخا رب يور اهدص هنومن زا هنوگريز ياه فلتخم
لارام و کلا و نینچمه د
رگي هنوگ ياه هداوناخ نزوگ ياه Cervus صخشم
هدرک هک نيا ود هنوگ ياه یلقتسم هب رامش
یم دنور [.
10 ] لارام هب ياهروشک يرگيد
نوچ
،نیتناژرآ ایلارتسا
و دنليزوین مه دراو هدش و هب تهج یبیسآ هک هب ششوپ
2
یهایگ و تایح شحو یموب نيا قطانم دراو هدرک رد تسرهف نيرتدب 144 هنوگ مجاهم ایند رارق هتفرگ تسا [ . 10 ] لارام و
نيرتگرزب نزوگ
یموب ناريا تسا و اب نيا هک رد هتشذگ تیعمج رایسب يدايز رد بلغا یحاون یلگنج لحاوس يايرد
،رزخ
تاعافترا زربلا
و هنماد ياه سرگاز
،تشاد هزورما اهنت رد یخرب زا تاعافترا رود
زا سرتسد زربلا يزکرم و یقرش ادیپ
یم دوش و تیعمج نآ هب زرط يریگمشچ شهاک
هتفاي تسا . [ 10 ]
اب نيا دوجو ، یط لاس ياه ریخا لارام رد ناريا وزج هنوگ ياه تيامح و تظافح هدش و هتبلا رد ضرعم رطخ
يدوبان رارق هتفرگ تسا . اب هجوت هب نیعم ندوبن قیقد هنوگ
،نآ شهاگياج رد
تسیل نامزاس نیب یللملا تظافح زا تعیبط
و عبانم یعیبط (
1IUCN ) زونه صخشم تسین . زا نيا تباب یياسانش قیقد
نيا هنوگ رد تهج تظافح زا نآ رایسب زئاح
تیمها تسا . ات نونک چیه هعلاطم یکیتنژ رب يور لارام تروص هتفريذپن
،تسا نيا رد یلاح یم دشاب هک رد ياهروشک
رگيد شور ياه یفلتخم يارب یسررب یکیتنژ و یکیتنژولیف گ
هنو ياه فلتخم نزوگ
، زا یسررب ميازولآ
0اه هتفرگ [ 10 ات ]
هدافتسا زا ياهرکرام ،RFLP
هراوهامزير
3اه و یلاوت یباي یيايردنکوتیمDNA
ماجنا هدش تسا . هزورما شور ياه
،یلوکلوم
دننام یلاوت یباي مونژ يردنکوتیم یکي
زا يدربراک نيرت شور اه يارب نییعت هطبار یکیتنژولیف نیب
ج تیعم اه و هنوگ ياه
کيدزن هب مه بوسحم یم
دوش [ 3 ].
( یيايردنکوتیمDNA mtDNA
) صیخشت هنوگ
اه و میسرت هطبار ژولیف یکیتن ياراد
،یيايازم زا هلمج دادعت یپک رتلااب رد ره
،لولس هزادنا رتکچوک
،نآ تثارو يريذپ
،يردام دیئولپاه
،ندوب مدع دوجو
،یبیکرتون دوجو
یحاون تظافح هدش و دوجو یحاون تظافح هدشن يا دننام هیحان D-Loop يارب
تاعلاطم یلماکت
-هنوگ
ياه هتسباو یم دشاب [ 0 ].
فده زا نيا هعلاطم یسررب و هيزجت و لیلحت یکیتنژ و یکیتنژولیف هیحان
مورکوتیس زاb
DNA
یيايردنکوتیم لارام
و نییعت هاگياج لارام رد نیب هنوگ ياه فلتخم نزوگ دوب .
re وEtto ناراکمه ( 0444 ) رد یقیقحت هک ماجنا
،دنداد یلاوت قطانم لرتنک لماک يردنکوتیم ار 0
يارب یپ ندرب
هب طباور لماکت يداژن رد 09 هنوگ نزوگ راکب دندرب . هداوناخ Cervus هب
ود هورگ میسقت دندش هک ات يدودح اب هنوگ ياه
یلعف راگزاسان یم دشاب Cervus دوخ
لماش ود هورگ لتخم ف هک دنترابع زا هنوگ elaphus (
نزوگ یياپورا elaphoid )
و
هنوگ canadensis (
نزوگ ایسآروا و ياکيرمآ یلامش wapitoid )
یم دشاب . Cervus Nippon قلعتم
هب نزوگ ياکوش نپاژ
و هراق یياه کيدزن ناويات تسا . نزوگ زمرق یياپورا و یناريا ، هنوگ ياه یکیتنژ ادج و يزيامتم دنتسه
. ط لو یلاوت ياه
ماجنا هدش رب يور mtDNA توافتم
هدوب یلو دادعت شهج ياه يرارکت رد ريز هنوگ ياه فلتخم لارام تباث هدنام تسا و
یم دناوت هب ناونع کي رکرام یصیخشت يارب
هنوگريز ياه نآ هدافتسا یم دوش . عونت یلاوت رد هیحان یلرتنک يردنکوتیم
يارب نییعت هنوگ و زرم هنوگريز و يارب ناکم یباي ءاشنم یيایفارغج هنوگ
ياه هک رد تراسا ریثکت هدش دنا يواح تاعلاطا
يدیفم تسا . تیعمج ياه یعیبط و یشرورپ یضعب زا هنوگ اه اقیمع طسوت تيريدم یناسنا تحت ریثات رارق هتفرگ دنا و
تظافح زا تیعمج نزوگ هک یم یتسياب اب یياسانش بسانم
توافت ياه یلماکت و او ياهدح هقبط يدنب یتیعمج هب
نآ
کمک درک . [ 9 ]
یخرب عبانم رب ساسا نیمه تاعلاطم یکیتنژ لارام ار کي
« هورگ هنوگ يا
» ( و هن کي هنوگ لقتسم ) لماش هنوگ ياه
فلتخم لارام و یتیپاو بوسحم هدرک
،دنا اما رد دروم دادعت هنوگ ياه دوجوم رد نيا هورگ هنوگ يا قافتا يرظن دوجو درادن .
زا هنوگ ياه یلقتسم هک يارب نآ داهنشیپ
؛هدش نزوگ يایسآ
،يزکرم نزوگ
،یسرُک نزوگ يروچنم و نزوگ یتبت تسا . رب
نيا ساسا نزوگ يایسآ يزکرم لماش
« لارام يدنکراي
» yarkandensis و
« لارام یخلب
» bactrianus و
دياش
« لارام
يریمشک
» hanglu یم
دوش . یخرب رگيد زین
« لارام يربرب
» ( یموب لامش اقيرفآ ) barbarus و
« لارام یسرک
»
1 International Union for Conservation of Nature
2 Allozymes
3 Microsatellites
4 mtDNA CR
3
corsicanus ار
کي هنوگ لقتسم اب مان نزوگ يربرب و لارام وسناگ kansuensis و
لارام ناوچیس macneilli رد
تبت و
زکرم نیچ ار مه هنوگ لقتسم يرگيد اب مان C. wallichii و
لارام ياه یموب قرش رود هیسور و لامش قرش نیچ ار مه
نوگ ه لقتسم يرگيد اب مان C. xanthopygus بوسحم
یم دننک . اب نتفريذپ نيا
میسقت يدنب لارام یلصا طقف لماش
لارام ياه یموب ياپورا هراق
،يا
،یلوتانآ زاقفق و ناريا یم دوش و یتیپاو مه لماش نزوگ ياه یموب ياکيرمآ یلامش یم دشاب .
[ . و 10 ] Chikuni و
شناراکمه رد
لاس 1000 اب ت یلاو یباي کي هعطق 000 تفج يزاب زا نژ مورکوتیس قفوم b
هب
یياسانش هنوگ
ياه نزوگ زمرق و یضعب زا ناگدنرپ هیبش نیچردلب و
کشجنگ یگناخ
دندش . [ 0 ] يارب یياسانش نزوگ
زمرق
زا نزوگ درز و اکوش کي هعطق 002 تفج يزاب زا نژ مورکوتیس قفوم b
هب یياسانش و
زيامت رد نایم تاناویح روکذم
دندش . [ 2 ] دنچ یلکش ياه نژ مورکوتیس ار b
يارب یياسانش داوم
یکيژولویب (
لماش
،تسوپ
،نوخ هنومن ياه تشوگ و
ناوختسا کف
و نادند ) هب تسد هدمآ هنوگزا ياه فلتخم لماش واگ
،يریش
،دنفسوگ
،زب نزوگ و نزوگ زمرق دروم هعلاطم
رارق دنداد . جياتن نيا قیقحت ناشن داد هک نيا شور وتیم دنا يارب یياسانش عيرس
و زيامت نيدنچ هنوگ زا نارادناتسپ اب
هدافتسا زا شور یکيژولویب دروم
هدافتسا رارق دریگ . [ 14 ] و Ludt ناراکمه لاس رد ش 0440
یلاوت لماک نژ مورکوتیس b
رد 91 تیعمج لارام یيایسآ و یياپورا یسررب هدرک و اب بسک تاعلاطا دیفم زا طباور یکیتنژ یپ دندرب لارام زا هطقنم
ناتسزیقرق ینایم
و لامش دنه تأشن هتفرگ تسا . [ 0 ] نزوگ زمرق هدرتسگ نيرت نزوگ رد ناهج یم دشاب و هزورما شیب زا
00 ريز هنوگ هتخانش هدش تسا . [ 0 ، 13 و 19 ]
2 . داوم و شور اه
رد نيا
،هعلاطم تیعمج ياه نزوگ زمرق دوجوم رد قطانم سلگ قرق نات و نارايز نيوزق و نینچمه اب
هدافتسا زا
یلاوت ياه دوجوم رد تياس درومNCBI
یسررب یکیتنژ رارق تفرگ . اب هجوت هب نيا هک هنومن ياه دوجوم لماش نوخ و تفاب
،دوب اذل زا تیک ياه Exgene تکرش
ll A روشک Gene هرک يارب جارختسا زا DNA
9نوخ و يارب جارختسا DNA
،ناوختسا تفاب
و وم زا شور یتسد [ 1 ] هدافتسا ديدرگ . هب روظنم یسررب و هعلاطم یکیتنژ تیعمج ياه تحت
،هعلاطم زا
هاگياج یيايردنکوتیم مورکوتیس
هدافتساb ديدرگ و اب هدافتسا زا ياهرگزاغآ یصاصتخا
هب لوط bp 1104 لماش رگزاغآ
تفر 5'-GAAAAACCATCGTTGTCATTCA -3'
و رگزاغآ تشگرب
5'-
GGAGGTTGGTAGCTCTCCTTTT -3' ریثکت
ديدرگ [ . 11 ]
سپ زا هنیهب يزاس طيارش مکاح PCR
رب هاگياج زا ظاحل تظلغ داوم تکرش هدننک رد شنکاو هب بیترت 0 / 1
رميارپ رتیلورکیم
،F 0 / 1 رتیلورکیم رميارپ
،R 1 / 0 رتیلورکیم
،بآ 9 / 10 رتیلورکیم Master
و 0 رتیلورکیم DNA
هدافتسا دش . خرچ ه یترارح يارب ریثکت نژ هب
؛بیترت هتشرساو يزاس
هیلوا
° هب 95C تدم 9
،هقیقد 33 هبترم هتشرساو
°يزاس هب94C تدم 34
،هیناث لاصتا رگزاغآ
° هب 64C تدم 34
،هیناث طسب رگزاغآ
° هب 72C تدم 1
،هقیقد طسب
یياهن رگزاغآ C72° هب تدم 14 هقیقد میظنت و ماجنا دش . هنومن اه یلاوت یباي هدش و هیلک یلاوت اه اب هدافتسا زا مرن رازفا
5 GeneAll® Exgene™ Blood SV mini
4
Bioedit 7
بترم و توافت اه صخشم دش و سپس اب هدافتسا زا مرن رازفا DanSP 5 ياهزیلانآ
طوبرم یلپ مسیفروم ماجنا
و
رد تياهن اب هدافتسا زا مرن رازفا Mega 5.0 هب
شور Neighbor-Joining اب
رارکت 1444 توب پرتسا تخرد لیف کیتنژو
میسرت ديدرگ و لصاوف یکیتنژ اب شور Maximum Composite Likelihood هبساحم
دش .
3 . هجیتن يریگ و ثحب
یبايزرا ياه یفیک هدش جارختساDNA
رگناشن بسانم تیفیک هنومن
اه .دوب زروفورتکلا لوصحم
هدمآ تسدبPCR
دوجو کي دناب یصاصتخا 1104bp
ار ناشن داد . لوصحم 04 PCR
هنومن دروم هعلاطم تهج یلاوت یباي لاسرا ديدرگ . دعب
زا تفايرد هجیتن یلاوت اب هدافتسا زا ياهرادومن هطوبرم
تیفیک یلاوت اه دروم یسررب و لرتنک رارق تفرگ . سپس اب هدافتسا
زا زا مرن رازفا Mega 5.0 بترم
هديدرگ و یياهدیتوئلکون هک
ياراد تیفیک نیياپ دندوب زا ادتبا و ياهتنا یلاوت ياه یتفايرد
فذح دندش . ناياپ رد کي هعطق اب لوط 1104 دیتوئلکون دروم
هيزجت و لیلحت رارق تفرگ . رد همادا یلاوت تسدب هدمآ اب
یلاوت ياه دوجوم رد تياس هسياقمNCBI
و صخشم ديدرگ هک نازیم یناشوپمه و
يژولوموه رایسب
لااب ( یناشوپمه 144
،دصرد يژولوموه 144
رد دص ) هدوب و نيا نادب موهفم تسا هک شخب یلاوت یباي هدش زا هیحان مورکوتیس ردb
نيا قیقحت اب
رياس قیقحت ياه ماجنا هدش یناوخمه دراد
. اذل يارب هسياقم
،کینژولیف نيا
یناشوپمه 1104
يدیتوئلکون بسانم
هدوب و
دروم هدافتسا رارق تفرگ . 0.
یلاوت طوبرم هب هداوناخ هديورس زا س تيا جارختسا NCBI
و 13 یلاوت طوبرم هب هیلک
تیعمج ياه دوجوم رد ناريا دروم یسررب رارق دنتفرگ هک یلاوت اه اب هدافتسا زا مرن رازفا Bioedit 7
بترم و توافت اه
صخشم دش و سپس اب هدافتسا زا مرن رازفا DanSP 5 ياهزیلانآ
طوبرم یلپ مسیفروم ماجنا
و رد تياهن اب هدافتسا ا ز مرن رازفا
Mega 5.0 هب
شور Neighbor-Joining اب
رارکت 1444 توب پرتسا تخرد کیتنژولیف میسرت
ديدرگ لکش(
1 ) و لصاوف
یکیتنژ اب شور Maximum Composite Likelihood هبساحم
دش و روطنامه هک رد لودج 1 هظحلام یم ددرگ جياتن
نيا قیقحت ناشن داد هک رد نیب هنوگ ياه فلتخم زوگ
،ن لارام نيرتمک هلصاف
،یکیتنژ هک لداعم 474401.0 تسا
ار اب
هنوگ Cervus elaphus maral Bako (
نزوگ زمرق یيایسآ )
،دراد رد یلاح هک نيرتشیب هلصاف
یکیتنژ لارام اب Cervus
elaphus Canadensis USA )یياکيرمآ زمرق نزوگ(
لداعم 47490.00 یم
دشاب . تخرد کیتنژولیف یمیسرت
زین ديوم
نيا بلطم یم دشاب هک نزوگ زمرق یناريا طلاتخا یکیتنژ و ديربیه اب نزوگ ياه رياس اهروشک هتشادن و نيا تیعمج صلاخ
و لاماک یناريا یم دشاب .
5
لودج 1 لصاوف یکیتنژ نیب نزوگ زمرق یناریا اب ریاس نزوگ اه Cervus elaphus maral Iran
0.006179 Cervus elaphus maral Bako
0.054756 0.057690
Cervus elaphus sibericus Chaina
0.057708 0.017883
0.016975 Cervus elaphus hippelaphus Poland
0.002642 0.057756
0.017897 0.016988
Cervus elaphus spanish
0.022464 0.020605
0.058690 0.020617
0.019704 Cervus elaphus barbarus Africa
0.059742 0.058805
0.058757 0.004411
0.055795 0.058739
Cervus elaphus canadensis USA
0.000878 0.060747
0.059809 0.059760
0.005299 0.056792
0.059742 Cervus elaphus Canadensis USA
لکش 1 : تخرد کیتنژولیف
4 . عبانم
1. Bailes, S.M. Devers, J.J. Kirby, J.D. and Rhoads, D.D. 2007. An Inexpensive, Simple Protocol for DNA Isolation from Blood for High-Throughput Genotyping by Polymerase Chain Reaction or Restriction Endonuclease Digestion. Poultry Science 86:102–106.
2. Bellagamba, F. Moretti, V.M. Comincini, S. Valfare, F. 2001. Identification of species in animal feedstuffs by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism analysis of mitochondrial DNA. Journal of Agricultural and Food Chemistry 49: 3775-3781.
3. Bruford, M. Bradley, D. Luikart, G. 2003. DNA markers reveal the complexity of livestock domestication. Nature Reviews Genetics 3: 900-910.
4. Chikuni, K. Tabata, T.S. Saito, M. and Manma, M. 1994. Sequencing of mitochondrial cytochrome b genes for the identification of meat species. Animal Science and Technology. 65: 571-579.
5. Ettore Randi, N.M. Françoise Claro-Hergueta, Amélie Bonnet and Emmanuel J.P. Douzery. 2000. A mitochondrial DNA control region phylogeny of the Cervinae: speciation in Cervus and implications for conservation. Animal Conservation The Zoological Society of London, .Vol. 4, pp. 10.
6. Geist, V. 1991. Bones of contention revisited: did antlers enlarge with sexual selection as a consequence of neonatal security strategies? Appl. Anim. Behav. Sci. 29, 453–469.
6
7. Hmwe, S.S. Zachos, F.E. Eckert, I. Lorenzini, R. Fico, R. Hartl, G.B. 2006. Conservation genetics of the endangered red deer from Sardinia and Mesola with further remarks on the phylogeography of Cervus elaphus corsicanus. Biological Journal of the Linnean Society. 88 (88): 691–701. doi:10.1111/j.1095-8312.2006.00653.x . 8. Kitano, T. Umetsu, K.S. Lockley, A.K. and Osawa, M. 2007. Two universesal primer sets for species Identification
amang vertebrates. International Journal of Legal Medicine. 121. 5: 16-20.
9. Ludt, C.J. Schroeder, W. Rottmann, O. Kuehn, R. 2004. Mitochondrial DNA phylogeography of red deer (Cervus elaphus). Molecular Phylogenetics and Evolution 31: 1064-1083.
10. Natonek-Wisnievska, M.N. Slota, E. and Kalisz, B. 2010. Use of cytochrome b polymorphism for species identification biological material derived from cattle, sheep, goqt, deer and red deer. Folia biologica. 58: 47-50.
11. Saiki, R.K. Scharf, S. Faloona, F. 1985. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science 230, 1350–1354.
12. The Illustrated Encyclopedia of North American Mammals. 2008. MobileReference .
13. Trense, W. 1989. The Big Game of the World. Paul Parey. Hamburg. Vrba, A. Schaller, G.B. 2000. Antelopes, Deer, and Relatives. Fossil Record, Behavioral Ecology, Systematics, and Conservation. Yale University Press.
14. Vassart, M. Granjon, L. Greth, A. Catzeflis, F.M. 1994. Genetic relationships of some Gazella species. An allozyme survey. Zeitschrift fur saugetierkunde 59: 236-245.
15. Whitehead, G.K. 1972. The Deer of the World. Constable, London. KIABI, B.H. 1978. Ecology and management of Maral (Cervus elaphus maral) in Northern Iran. 1976-78. – Ph.D. Dissertation, Michigan State University, 83 pp.
16. Wikipedia contributors, "Red Deer," Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2010.
http://en.wikipedia.org/w/index.php?title=Red_Deer&oldid=358072320 (accessed April 24, 2010)
7
Genetic and phylogenetic analysis of Cytochrome b region in Red Deer
, Saeid Nikbin2
*1
Leila Aghazadeh
1-Msc Student, Animal Science Department, Mohaghegh University of Ardabil 2-Associate Professor, Animal Science Department, Mohghegh University of Ardabil
*Corresponding author:[email protected]
ABSTRACT
In this research, the Persian Red Deer (Maral) populations and other species and subspecies of Cervus (40 samples of all populations) were studied. The genomic DNA was extracted from bone, tissue, blood and hair samples. The specific primers were used to amplify Cytochrome B region the mitochondrial DNA (mtDNA). The fragment (1140 bp) was amplified by PCR, and the PCR products were sequenced. Analysis of the fragment sequences revealed that among the different studied species, the Persian Maral has the least genetic distance with Cervus elaphus maral Bako (0.006179), while it showed the most genetic distance with Cervus elaphus Canadensis (0.059742).
The results of phylogenetic analysis using the Neighbor-Joining method showed that the Persion Red Deer has not mixed genetically with the other deer populations.
Keywords: Maral, Cytochrome B, genetic diversity, mtDNA
