다발성 골수종 세포가 수집되는 골수 환경에서 이들 세포는 세포 접착 단백질의 접착 반응으로 인해 많은 신호를 교환합니다. 이러한 신호를 기반으로 다발성 골수종 세포는 세포 사멸을 회피하고 약물 저항성을 나타냅니다. hPBMC에서 이러한 세포 접착 분자의 발자국이 우선적으로 나타납니다.
또한, Del-1 단백질을 사용하였을 때 세포접착단백질의 발현 차이가 어떻게 다른지 알아보기 위한 실험을 진행하였다. 인간 다발성 골수종 세포주에서 세포 부착 분자의 발현. 골수종은 항체를 생산하는 B세포에서 발생하는 혈액학적 악성종양이다.1 뚜렷한 원인은 없으며 주로 노년층에서 발생하는 것으로 알려져 있다.
정상 B 세포의 경우 골수(BM)에서 생산되어 말초 림프 기관에서 성숙되는 반면, 수명이 긴 혈장 B 세포는 골수로 돌아갑니다. 다발성 골수종 세포도 같은 운명을 겪고 골수에 집중되어 있습니다. 현재 골수 내 골수 미세환경의 영향을 크게 받습니다.3. 골수 세포외 기질(ECM; 세포외 기질)은 주로 피브로넥틴, 히알루로난 및 콜라겐으로 구성됩니다.
내피 세포에서 분비되는 Del-1(내피 발달 유전자좌-1, EDIL3)은 52 kD 당단백질입니다.
Materials & Methods
CD38 antibody및 IgG adding
FACS analysis
CFSE를 사용한 세포 증식 관찰
Results
- Human multiple myeloma cell lines에서 세포 부착분자들의 발현 확인
- human immune cell lines에서 세포 부착분자들의 발현 확인
- Del-1 treatment후 multiple myeloma cell에서의 integrin expression확인
- α-CD38 treatment후 multiple myeloma cell에서의 integrin expression확인 Target cell line에서 발현하고 있는 세포 부착 분자들이 CD38 antibody의 처리 후
Daratumumab 및 Del-1로 세포주를 공동 처리한 후의 세포 접착 분자. 발현량은 유세포분석으로 확인하였다. 다발성 골수종 세포를 Del-1로 처리한 후 접착 분자의 발현 변화.
접착 분자의 발현량은 유세포 분석법으로 분석됩니다. 다라투무맙(항-CD38)/IgG로 다발성 골수종 세포를 치료한 후 접착 분자 발현 변화 확인. Daratumumab과 Del-1 치료 후 시간 경과에 따른 접착 분자 발현의 변화.
daratumumab과 Del-1 병용치료 후 접착분자 발현의 변화. 다라투무맙과 Del-1을 순차적으로, 함께 투여했을 때 세포 증식의 차이가 관찰되었습니다. CFSE로 염색된 세포에 daratumumab과 Del-1을 처리한 후 세포를 증식시켰다.
Discussion
현재 Del-1 및 CD38 항체 처리 전후의 접착 분자 발현 패턴이 안정적으로 재현되지 않아 수치 구축 및 추가 실험을 진행하기가 어렵습니다. 실험자의 기술적 오류가 있는지 확인하기 위해 모든 실험은 Postdoc으로 진행하였고, 세포 활성화를 위해 다발성 골수종 세포를 활성화시키는 TNF-α와 PMA로 실험을 진행하였으나 수치의 변화는 없었다. 실험 기간 동안 FACS 기계의 형광 검출 능력이 감소했습니다.
CFSE는 Jurkat T 세포 여부를 판단하는 데 사용되며, 실험에 사용된 세포의 생존성에 대한 우려를 없애기 위해 초기 계대 세포 스톡을 사용하고, 해동 후 하나의 스톡에 대해 3회 이상 실험을 실시하지 않습니다. 발현 수준에 변화가 발생하지 않도록 주의를 기울였습니다. 실험에 사용된 모든 항체는 적절한 온도에서 보관되었으며 Del-1 단백질의 분해도 고려되었지만 분취량은 얼음과 ep의 분취량에서 수행되었습니다.
악화될 가능성이 거의 없습니다. 실험과 직접적으로 관련된 오류는 발견되지 않았습니다. 또한 다발성 골수종 세포를 Daratumumab과 Del-1로 치료하여 Del-1이 현재 사용되는 약물 및 칵테일 요법과 함께 사용될 수 있는지 확인했습니다.
표면 접착 분자의 발현 수준의 증가와 감소도 관찰되었습니다. 그 결과, 두 가지를 동시에 투여한 경우에 비해 다라투무맙을 투여한 후 Del-1을 투여한 경우 표면접착분자의 발현이 감소하는 것으로 나타났다. 앞으로는 환자 시료를 이용한 연구와 면역 결핍 마우스를 이용한 실험을 통해 세포 부착 분자가 다발성 골수종에 미치는 영향에 대한 추가 연구가 진행될 예정이다.
Abstract
